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      用中藥指紋圖譜技術鑒別朝鮮淫羊藿藥材的方法

      文檔序號:6102417閱讀:145來源:國知局
      專利名稱:用中藥指紋圖譜技術鑒別朝鮮淫羊藿藥材的方法
      技術領域
      本發(fā)明屬于一種中藥材的鑒別方法,具體是用中藥指紋圖譜技術鑒別朝鮮淫羊藿的方法。
      背景技術
      《中國藥典》2000版收載的淫羊藿為小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim、箭葉淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim、柔毛淫羊藿Epimediumpubescens Maxim、巫山淫羊藿Epimedium wushanense T.S.Ying、或朝鮮淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥地上部分。由于受品種、氣候、產地和生態(tài)環(huán)境等因素的影響,不同種、不同產地的淫羊藿藥材所含黃酮類成分差異很大,因此,目前僅針對某種藥材的某個有效成分或指標進行定性、定量分析,實踐證明并不能有效的控制其產品質量。而中藥指紋圖譜技術就是借鑒了在“共性”中尋找“惟一”的特征相比原理,將中藥原料藥材、飲片、半成品、成品等經適當處理后,采用一定的分析手段,得到能夠標示其特性的共有峰的圖譜,借以辨別真?zhèn)巍⒃u價原料藥材、半成品以及成品質量的均一性和穩(wěn)定性。因此,將這一技術應用在中藥材的鑒別上對甑別藥材產地、固定原料來源、提高并穩(wěn)定產品質量有十分重要的意義。

      發(fā)明內容
      本發(fā)明的目的就是提出一種用中藥指紋圖譜技術鑒別朝鮮淫羊藿藥材的方法。
      本方法包括下述步驟第一步,建立朝鮮淫羊藿藥材對照指紋圖譜①標準品溶液的制備取淫羊藿苷標準品適量,用70%甲醇制成每1mg/ml的溶液,即得;②對照品溶液的制備取經鑒定為朝鮮淫羊藿藥材的粉末1.0g,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇10ml,超聲提取30min,過濾,濾液用0.45μm微孔濾膜精濾,即得;③色譜條件色譜柱Hypersil C18柱4.6×250mm,5μm,理論塔板數按淫羊藿苷計,應不低于3000;流動相 乙腈—水為流動相梯度洗脫,在保留時間為0min、5min、60min、75min時,乙腈與水的體積比分別為2∶98,2∶98,40∶60,40∶60;流速1.0ml/分鐘檢測波長272nm柱溫30℃④主要儀器與試藥色譜儀 瓦里安公司儀器(230泵330檢測器7725i手動進樣器AT-830柱溫箱)試藥甲醇 天津產 優(yōu)級純異戊醇 天津產 分析純乙腈USAJ.T.Baker色譜純水 樂百氏純凈水一次蒸餾朝鮮淫羊藿藥材樣品 遼寧恒仁⑤檢測分別精密吸取對照品溶液及標準品溶液各10μl注入液相色譜儀,照《中國藥典》2000版一部附錄高效液相色譜法測定,得朝鮮淫羊藿藥材對照指紋圖譜及標準品指紋圖譜;所述朝鮮淫羊藿藥材對照指紋圖譜中,共有19個特征峰,其中13號峰為淫洋羊藿苷,與標準品指紋圖譜一致,10~14號峰呈五指狀,18號為一組弱吸收;朝險鮮淫羊藿藥材對照指紋圖譜的建立,使產品的質量控制有了非常明確、直觀、易于操作的標準,使用時只需將檢測結果與之進行比較即可得出結論。
      第二步,建立朝鮮淫羊藿藥材指紋圖譜共有模式圖譜對所收集并經鑒定為朝鮮淫羊藿藥材的10批樣品按對照品溶液的制備方法制備供試品溶液,按上述標準品溶液制備方法制備標準品溶液,并逐一按上述相同方法檢測,分別得到各批朝鮮淫羊藿藥材相應的指紋圖譜和標準品指紋圖譜;經計算機輔助相似性評價系統(tǒng)進行計算,即可得出朝鮮淫羊藿藥材指紋圖譜的共有模式圖譜;建立共有模式圖譜的作用一是可以將朝鮮淫羊藿藥材檢測結果輸入計算機計算供試品與共有模式圖譜之間的相關系數,從理論上考察供試品與共有模式圖譜之間的相似度,從而使質量的判別標準更客觀、更科學;二是方便不同產地、不同品種、不同生態(tài)環(huán)境下各品種之間進行甑別比較,以考察產品的均一性和穩(wěn)定性,確保為消費者提供優(yōu)質的產品。
      第三步,供試品檢測①供試品溶液的制備以上述相同方法制備朝鮮淫羊藿藥材供試品溶液;②以上述相同方法制備標準品溶液;③以上述相同方法測定待測的標準品和供試品;④結果分析判定色譜圖中應檢出與對照指紋圖譜相同的19個(組)特征峰,其中13號峰為淫羊藿苷,應與標準品指紋圖譜一致;10~14號峰呈五指狀,18號為一組弱吸收;將供試品指紋圖譜與相應的共有模式圖譜經計算機輔助相似性評價系統(tǒng)進行計算,相關系數應大于0.9000;本發(fā)明的原理是基于朝鮮淫羊藿藥材中主要含有黃酮苷類成分,包括淫羊藿苷A、大花淫羊藿苷C、淫羊藿定B、淫羊藿定C、淫羊藿苷等,由于其成分在紫外區(qū)有強吸收,因此,采用紫外法對其黃酮類物質群進行檢測,從整體上、宏觀上對產品質量進行控制;在研究過程中還分別對提取方法、檢測方法、色譜條件與系統(tǒng)適應性進行考察,同時滿足精密性、穩(wěn)定性、重現性等要求,將所采集的并經專家鑒定的樣品作為對照品,其所得出的指紋圖譜作為朝鮮淫羊藿藥材對照指紋圖譜;根據所采集10批樣品的指紋圖譜經藥典委員會推薦的由湖南中南大學中藥現代化研究中心開發(fā)的計算機輔助相似性評價系統(tǒng)進行計算,建立了朝鮮淫羊藿藥材指紋圖譜的共有模式圖譜,并確定供試品指紋圖譜與相應的共有模式圖譜之間的相應系數為0.9000;因此,利用本方法能方便的對朝鮮淫羊藿藥材進行鑒別。


      圖1是朝鮮淫羊藿藥材對照指紋圖譜;圖2是朝鮮淫羊藿藥材指紋圖譜共有共有模式圖譜;圖3是淫羊藿苷標準品指紋圖譜;圖4是編號為20040816 20041007 20041203淫羊藿藥材的指紋圖譜相似度評價結果圖;圖5是編號為2004-4-8淫羊藿藥材指紋圖譜。
      具體實施例方式實施例1 淫羊藿藥材的鑒別1、藥材來源 遼寧恒仁2、樣品編號 200408163、供試品溶液的制備以上述相同方法制備淫羊藿藥材供試品溶液;4、以上述相同方法制備標準品溶液;5、以上述相同方法測定待測的標準品和供試品溶液;6、結果判定色譜圖中檢出了與朝鮮淫羊藿藥材對照指紋圖譜相同的19個(組)特征峰,其中13號峰為淫羊藿苷,與標準品指紋圖譜一致;10~14號峰呈五指狀,18號為一組弱吸收;供試品指紋圖譜與朝鮮淫羊藿藥材指紋圖譜共有模式圖譜經計算機輔助相似性評價系統(tǒng)進行計算,相關系數為0.9529,大于0.9000;因此,可以判定本供試品為朝鮮淫羊藿。
      實施例2 淫羊藿藥材的鑒別1、藥材來源 遼寧恒仁2、樣品編號 200410073、供試品溶液的制備以上述相同方法制備淫羊藿藥材供試品溶液;4、以上述相同方法制備標準品溶液;5、以上述相同方法測定待測的標準品和供試品溶液;6、結果判定色譜圖中檢出了與朝鮮淫羊藿藥材對照指紋圖譜相同的19個(組)特征峰,其中13號峰為淫羊藿苷,與標準品指紋圖譜一致;10~14號峰呈五指狀,18號為一組弱吸收;供試品指紋圖譜與朝鮮淫羊藿藥材指紋圖譜共有模式圖譜經計算機輔助相似性評價系統(tǒng)進行計算,相關系數為0.9547,大于0.9000;因此,可以判定本供試品為朝鮮淫羊藿。
      實施例3 淫羊藿藥材的鑒別1、藥材來源 遼寧恒仁2、樣品編號 200412033、供試品溶液的制備以上述相同方法制備淫羊藿藥材供試品溶液;4、以上述相同方法制備標準品溶液;5、以上述相同方法測定待測的標準品和供試品溶液;6、結果判定色譜圖中檢出了與朝鮮淫羊藿藥材對照指紋圖譜相同的19個(組)特征峰,其中13號峰為淫羊藿苷,與標準品指紋圖譜一致;10~14號峰呈五指狀,18號為一組弱吸收;供試品指紋圖譜與朝鮮淫羊藿藥材指紋圖譜共有模式圖譜經計算機輔助相似性評價系統(tǒng)進行計算,相關系數為0.9737,大于0.9000;因此,可以判定本供試品為朝鮮淫洋羊藿。
      實施例4 淫羊藿藥材的鑒別1、藥材來源 湖南沅陵2、樣品編號 2004-4-83、供試品溶液的制備以上述相同方法制備淫羊藿藥材供試品溶液;4、以上述相同方法制備標準品溶液;5、以上述相同方法測定待測的標準品和供試品溶液;6、結果判定所得供試品指紋圖譜與朝鮮淫羊藿藥材對照指紋圖譜相差較大,缺少在保留時間50分鐘左右的朝鮮淫羊藿藥材所具有的“五指峰”;且供試品指紋圖譜與朝鮮淫羊藿藥材指紋圖譜共有模式圖譜經計算機輔助相似性評價系統(tǒng)進行計算,相關系數僅為0.4430,小于0.9000;可以判定本供試品不是朝鮮淫羊藿。
      權利要求
      1.用中藥指紋圖譜技術鑒別朝鮮淫羊藿藥材的方法,包括以下步驟第一步,建立朝鮮淫羊藿藥材對照指紋圖譜①標準品溶液的制備取淫羊藿苷標準品適量,用70%甲醇制成每1mg/ml的溶液,即得;②對照品溶液的制備取經鑒定為朝鮮淫羊藿藥材的粉末1.0g,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇10ml,超聲提取30min,過濾,濾液用0.45μm微孔濾膜精濾,即得;③色譜條件色譜柱Hypersil C18柱4.6×250mm,5μm,理論塔板數按淫羊藿苷計,應不低于3000;流動相乙腈-水為流動相梯度洗脫,在保留時間為0min、5min、60min、75min時,乙腈與水的體積比分別為2∶98,2∶98,40∶60,40∶60;流速1.0ml/分鐘檢測波長272nm柱溫30℃④檢測分別精密吸取對照品溶液及標準品溶液各10μl注入液相色譜儀,照高效液相色譜法測定,得朝鮮淫羊藿藥材對照指紋圖譜及標準品指紋圖譜;第二步,建立朝鮮淫羊藿藥材指紋圖譜共有模式圖譜對所收集并經鑒定為朝鮮淫羊藿藥材的10批樣品按對照品溶液的制備方法制備供試品溶液,按上述標準品溶液制備方法制備標準品溶液,并逐一按上述相同方法檢測,分別得到各批朝鮮淫羊藿藥材相應的指紋圖譜和標準品指紋圖譜;經計算機輔助相似性評價系統(tǒng)進行計算,即可得出朝鮮淫羊藿藥材指紋圖譜的共有模式圖譜;第三步,供試品檢測①供試品溶液的制備以上述相同方法分別制備朝鮮淫羊藿藥材供試品溶液;②以上述相同方法分別制備標準品溶液;③以上述相同方法測定待測的標準品和供試品;④結果分析判定色譜圖中應檢出與對照指紋圖譜相同的19個(組)特征峰,其中13號峰為淫羊藿苷,應與標準品指紋圖譜一致;10~14號峰呈五指狀,18號為一組弱吸收;供試品指紋圖譜與相應的共有模式圖譜經計算機輔助相似性評價系統(tǒng)進行計算,相關系數應大于0.9000。
      2.根據權利要求1所述的用指紋圖譜技術鑒別朝鮮淫羊藿的方法,其特征在于所述計算機輔助相似性評價系統(tǒng)系由藥典委員會推薦的由湖南中南大學中藥現代化研究中心開發(fā)。
      全文摘要
      本發(fā)明公開了一種用中藥指紋圖譜技術鑒別朝鮮淫羊藿藥材的方法,本方法包括以下幾個步驟,第一步,建立朝鮮淫羊藿藥材對照指紋圖譜;第二步,建立朝鮮淫羊藿藥材指紋圖譜共有模式圖譜;第三步,供試品檢測;將所測得的供試品圖譜與對照指紋圖譜進行比較,并輸入計算機輔助相似性評價系統(tǒng)進行相似度計算,得出相關系數,便可作出鑒別結論;本方法具有以下特點①可以從整體上、宏觀上表征朝鮮淫羊藿藥材的質量;②明確、直觀,具有較好的專屬性和特征性,重現性好;可操作性強;③可用于鑒別朝鮮淫羊藿藥材的真?zhèn)巍?br> 文檔編號G01N30/60GK1991360SQ200510120578
      公開日2007年7月4日 申請日期2005年12月28日 優(yōu)先權日2005年12月28日
      發(fā)明者劉勝華, 李波, 李先芝, 屠鵬飛, 鮑忠 申請人:勁牌有限公司
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