葎草藥材hplc指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥藥材的質(zhì)量控制方法，具體涉及潷草藥材高效液相色譜法指紋圖 譜的構(gòu)建方法和標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
【背景技術(shù)】
[0002] 薄草為?？票〔輰僦参锉〔軭umulusscandens(Lour. )Merr.的全草。甘、苦，寒。 功效清熱解毒，利尿消腫。用于肺結(jié)核潮熱，腸胃炎，痢疾，感冒發(fā)熱，小便不利，腎盂腎炎， 急性腎炎，膀胱炎，泌尿系結(jié)石；外用治癰癤腫毒，濕瘆，毒蛇咬傷。用潷草外洗方法治療嬰 幼兒腹瀉86例，痊愈85例（癥狀和體征消失，大便1次，質(zhì)成形）。此外，潷草口服可以治 療痢疾，沐足可以治療慢性結(jié)腸炎。潷草目前的研宄與開發(fā)，在化學(xué)成分主要集中黃酮類成 分及多糖類成分的提取、分離方面，在開發(fā)方面主要集中在飼料添加劑的開發(fā)方面。為保證 和提高藥材質(zhì)量，促進(jìn)中藥標(biāo)準(zhǔn)化，應(yīng)該對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行提高，建立多成分控制的指紋圖譜 技術(shù)控制藥材質(zhì)量，為臨床用藥的安全、有效提供準(zhǔn)確可靠的依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種潷草藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，為潷草藥材的 質(zhì)量控制和真?zhèn)舞b別提供一個(gè)新的方法，通過建立潷草藥材指紋圖譜的方法，并由此方法 得到潷草藥材共有模式的指紋圖譜。
[0004] 為達(dá)到本發(fā)明的目的所采用的技術(shù)方案是：一種潷草藥材HPLC指紋圖譜的建立 方法，其特征在于包括如下步驟：
[0005] ①對(duì)照品溶液的制備取大波斯菊苷對(duì)照品、牡荊素對(duì)照品、木犀草素對(duì)照品、芹菜 素對(duì)照品，精密稱定，加甲醇制成各對(duì)照品的混合溶液；
[0006] ②供試品溶液的制備精密稱定潷草藥材粉末，精密加入70%乙醇，搖勻，濾過，作 為供試品溶液；
[0007] ③測(cè)定精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液，分別注入高效液相色譜儀，按照高效液 相色譜法測(cè)定，得到指紋圖譜，其中測(cè)定使色譜條件為：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠 為填料，采用梯度洗脫，流動(dòng)相為甲醇-磷酸組成的梯度洗脫液，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為300? 370nm〇
[0008] 所述的步驟①中，取大波斯菊苷對(duì)照品、牡荊素對(duì)照品、木犀草素對(duì)照品、芹菜素 對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lmL含大波斯菊苷對(duì)照品0. 0169mg、牡荊素對(duì)照品 0. 00836mg、木庫草素對(duì)照品0. 01032mg、序菜素對(duì)照品0. 00904mg的混合溶液。
[0009] 所述的步驟②中，取潷草藥材粉末1. 0g，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加 入70%乙醇20mL，稱定重量，超聲提取30min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重 量，搖勻，濾過，用0. 22ym微孔濾膜濾過，作為樣品溶液；
[0010] 所述的步驟③中，色譜條件為：AgilentHCC18(250_X4. 6mm，5ym)色譜柱；流 動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為0. 2%磷酸溶液，進(jìn)行梯度洗脫條件；檢測(cè)波長(zhǎng)為340nm，流速為 1.OmL?mirT1，柱溫為 35°C，進(jìn)樣量 10yL。
[0011] 所述的梯度洗脫條件為：
[0012] Omin時(shí)，流動(dòng)相A:流動(dòng)相B= 10:90
[0013] 5min時(shí)，流動(dòng)相A:流動(dòng)相B= 25:75
[0014] 15min時(shí)，流動(dòng)相A:流動(dòng)相B= 30:70
[0015] 20min時(shí)，流動(dòng)相A:流動(dòng)相B= 33:67
[0016] 28min時(shí)，流動(dòng)相A:流動(dòng)相B= 35:65
[0017] 30min時(shí)，流動(dòng)相A:流動(dòng)相B= 40:60
[0018] 42min時(shí)，流動(dòng)相A:流動(dòng)相B= 42:68
[0019] 47min時(shí)，流動(dòng)相A:流動(dòng)相B= 45:55
[0020] 80min時(shí)，流動(dòng)相A:流動(dòng)相B= 45:55。
[0021] 所述的指紋圖譜標(biāo)記出15個(gè)峰，其中7號(hào)峰為牡荊素峰，11號(hào)峰為大波斯菊苷峰 并記為參照峰（S)，14號(hào)峰為木庫草素峰，15號(hào)峰為序菜素峰。
[0022] 由上述建立方法得到的潷草藥材HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
[0023] 所述的潷草藥材HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜應(yīng)用于潷草藥材的真?zhèn)舞b別、基源鑒別。
[0024] 本發(fā)明的有益效果如下：
[0025] (1)用本發(fā)明所提供的方法所建立的HPLC指紋圖譜，能有效地表征潷草藥材的質(zhì) 量，有利于全面監(jiān)控藥材的質(zhì)量。同時(shí)本發(fā)明具有方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好等優(yōu) 點(diǎn)。
[0026] (2)綜合運(yùn)用了指紋圖譜的共有峰比較、聚類分析和特有峰分析等方法對(duì)三個(gè)品 種潷草HPLC指紋圖譜進(jìn)行鑒別，實(shí)現(xiàn)對(duì)潷草藥材的基源鑒別，為潷草藥材的質(zhì)量控制、臨 床正確使用提供依據(jù)，為建立規(guī)范化的潷草種植基地提供有效的質(zhì)量控制和品種選育手 段。
【附圖說明】
[0027] 圖1是本發(fā)明潷草的HPLC指紋圖譜；
[0028] 圖2是本發(fā)明對(duì)照品溶液HPLC色譜圖；
[0029] 圖3是本發(fā)明10批潷草藥材的指紋圖譜；
[0030]圖4是本發(fā)明潷草藥材指紋圖譜共有模式。
【具體實(shí)施方式】
[0031] 為能進(jìn)一步了解本發(fā)明的特征、技術(shù)手段以及所達(dá)到的具體目的、功能，解析本發(fā) 明的優(yōu)點(diǎn)與精神，藉由以下結(jié)合附圖與【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明的詳述得到進(jìn)一步的了解。
[0032] 本發(fā)明是一種潷草藥材HPLC指紋圖譜的建立方法，其包括如下步驟：
[0033] ①對(duì)照品溶液的制備取大波斯菊苷對(duì)照品、牡荊素對(duì)照品、木犀草素對(duì)照品、芹菜 素對(duì)照品，精密稱定，加甲醇制成各對(duì)照品的混合溶液。優(yōu)選的，加甲醇制成每lmL含大波 斯菊苷對(duì)照品0. 〇169mg、牡荊素對(duì)照品0. 00836mg、木庫草素對(duì)照品0. 01032mg、序菜素對(duì) 照品0. 00904mg的混合溶液。
[0034]②供試品溶液的制備精密稱定潷草藥材粉末，精密加入70%乙醇，搖勻，濾過，作 為供試品溶液。優(yōu)選的，取潷草藥材粉末1. 〇g，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入 70%乙醇20mL，稱定重量，超聲提取30min，放冷，再稱定重量，用70 %乙醇補(bǔ)足減失的重 量，搖勻，濾過，用0. 22ym微孔濾膜濾過，作為樣品溶液；
[0035] ③測(cè)定精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液，分別注入高效液相色譜儀，按照高效液 相色譜法測(cè)定，得到指紋圖譜，其中測(cè)定使色譜條件為：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠 為填料，采用梯度洗脫，流動(dòng)相為甲醇-磷酸組成的梯度洗脫液，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為300? 370nm。優(yōu)選的色譜條件為：AgilentHCC18(250mmX4.6mm，5iim)色譜柱；流動(dòng)相A為甲醇， 流動(dòng)相8為0.2%磷酸溶液，