專利名稱：快速檢測氯胺酮的膠體金試紙的制作方法
技術領域：
本發(fā)明是一種利用膠體金免疫分析方法來檢測氯胺酮(Ketamine)的試紙。
背景技術：
氯胺酮，英文名為Ketamine，俗稱“K”粉，外觀為純白色晶體，形似可卡因，能溶于水。氯胺酮為一種非巴比妥類靜脈麻醉劑，常用于外科手術。氯胺酮自上世紀七十年代初作為麻醉藥用于臨床。在美國，大約90％的氯胺酮用于獸醫(yī)使用。
氯胺酮可產(chǎn)生感覺與意識分離狀態(tài)、夢境和幻覺，故又稱為″分離麻醉劑″。作為一種″舞會藥″，濫用后可產(chǎn)生幻覺、譫妄、遺忘、運動功能障礙、抑郁和潛在致命呼吸障礙。美國急診室報告近年來濫用氯胺硐中毒死亡案例也呈逐年上升勢頭。氯胺酮的濫用情況多見為用作搖頭丸的添加劑，也有單獨濫用的情況。屬于國家毒品行列。
目前，對氯胺酮(Ketamine)快速檢測的方法和儀器較多，主要是依靠氣相色譜(GS)、高效液相色譜(HPLC)、質譜(MS)和毛細管電泳等方法進行檢測，但存在儀器昂貴、檢測時間太長，并且需要專業(yè)的技術人員進行操作，因此急需一種能快速、準確、方便的檢測方法。
膠體金試紙的原理是利用抗原抗體的特異結合反應和免疫層析技術，利用特定的顯色反應在試紙上準確的顯示測試的結果，具有靈敏度高，特異性強，重復性好，精確度高，操作簡單，檢測快速準確的特點，無須復雜的設備。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的在于提供了一種利用膠體金免疫分析方法來檢測氯胺酮(Ketamine)的試紙。為了達到所述目的，本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的在氯胺酮(Ketamine)檢測試紙底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條氯胺酮(Ketamine)合成免疫原試驗線和一條抗鼠多克隆抗體控制線，在底板一端端頭為吸水層，另一端端頭為玻璃纖維樣品層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水層和抗氯胺酮(Ketamine)單抗金標墊相互交疊連接，在抗氯胺酮(Ketamine)單抗金標墊上壓有玻璃纖維樣品層。
把氯胺酮(Ketamine)檢測試紙的樣品層放入被檢測尿液中(液面不得超過MAX線)由于毛細管作用樣品將沿著試紙條向吸水層端移動，當移動至抗氯胺酮(Ketamine)單抗金標墊時，樣品中的氯胺酮(Ketamine)與抗氯胺酮(Ketamine)金標探針發(fā)生特異反應，當移動至固定有氯胺酮(Ketamine)合成免疫原試驗線時，由于抗氯胺酮(Ketamine)單抗金標墊中的抗體會與樣品中氯胺酮(Ketamine)結合而失去其與氯胺酮(Ketamine)合成免疫原結合位點，因此其膠體金不能滯留于試驗線上；相反，如果樣品中沒有與抗氯胺酮(Ketamine)單抗金標墊中的抗體結合的氯胺酮(Ketamine)，抗氯胺酮(Ketamine)單抗金標探針就會與試驗線上的氯胺酮(Ketamine)合成免疫原發(fā)生特異結合，使膠體金滯留于試驗線上，這就是免疫競爭法原理。所以試驗線的顏色深淺與樣品中氯胺酮(Ketamine)含量高低成反比。設定界限值為25ng/ml，出現(xiàn)兩條紅線代表尿樣中氯胺酮低于25ng/ml，為陰性；出現(xiàn)一條紅線表示尿樣中氯胺酮超過界限值25ng/ml，為陽性。
當移動至抗鼠多克隆抗體控制線時，無論樣品中氯胺酮(Ketamine)含量多少，金標探針都會與已包被在硝酸纖維素膜上的鼠IgG結合滯留，使控制線顯示紅色。因此控制線無色帶產(chǎn)生則代表操作有誤(檢測時，樣品液面超過MAX線)或試紙已經(jīng)過期。
在用試紙檢測尿液后，將其試驗線與檢測色標進行比色，按顏色深淺判斷為陽性，可疑或陰性，進而確定所測尿液中氯胺酮(Ketamine)含量是否超標。用含氯胺酮(Ketamine)對照品得尿液檢測，設定界限值25ng/ml。
由于采用上述技術方案，本發(fā)明所提供的檢測氯胺酮(Ketamine)的試紙及其檢測方法具有這樣的有益效果，即特異性強，靈敏度高，易儲存，無須專門技術人員操作，不需要儀器設備，而且結果易讀。


圖一為氯胺酮(Ketamine)檢測試紙的主視結構圖。
圖二為氯胺酮(Ketamine)檢測試紙的俯視剖視結構圖。
圖三為氯胺酮(Ketamine)檢測試紙應用于測試時顯示為陽性結果圖。
圖四為氯胺酮(Ketamine)檢測試紙應用于測試時顯示為陰性結果圖。
具體實施方式
1.應用活化脂法，將半抗原氯胺酮(Ketamine)結合牛血清白蛋白(BSA)制備氯胺酮(Ketamine)合成免疫原。
2.抗氯胺酮(Ketamine)單克隆抗體的制備。
(1)將制備的氯胺酮(Ketamine)-BSA免疫小鼠。
(2)提取小鼠腹水，分離純化以得到抗氯胺酮(Ketamine)單克隆抗體。
3.膠體金的制備及與抗氯胺酮(Ketamine)單克隆抗體的結合。
(1)10％氯化金(0.5ml)+10％檸檬酸三鈉(0.75ml)+去離子水(500ml)→膠體金。
(2)膠體金500ml+0.1M磷酸緩沖液pH7.4(50ml)+抗氯胺酮(Ketamine)單克隆抗體→抗氯胺酮(Ketamine)單抗膠體金。
(3)抗氯胺酮(Ketamine)單抗膠體金+吸水紙→金標記抗體吸附吸水紙上備用。
4.選擇硝酸纖維素膜做為底物覆著處，利用毛細管原理使膠體金朝向底物處移動。
5.特種制膜機制膜機器特制，利用電腦控制傳動速度，保證每單位膜上包被的抗體量相等。
控制線選用羊抗鼠IgG，濃度2-10mg/ml試驗線選用氯胺酮(Ketamine)合成免疫原，濃度2-10mg/ml6.組合(1)塑料條+薄膜+膠體金墊(2)切條7.使用方法(1)除去外包裝，取出試劑條。將試劑條插入尿樣中，尿液界面物超過紙條上的“Max”線。如為試劑盒，則將尿液滴入樣品孔中。
(2)15秒后取出試紙條或繼續(xù)插在尿液中，5分鐘時觀察結果；如為試劑盒，則在5分鐘后直接在觀察孔中觀察結果。
(3)結果判斷僅在控制區(qū)出現(xiàn)一條紅色線為陽性；如在檢測區(qū)及控制區(qū)出現(xiàn)兩條紅色線，則為陰性?？刂茀^(qū)未出現(xiàn)紅色線，表面試紙無效。
8.注意事項(1)僅供定性篩檢。
(2)稀釋及不潔凈的尿樣或操作不當，均可產(chǎn)生錯誤結果。
(3)密封保存，在有效期12個月內使用。
權利要求1.一種快速檢測氯胺酮的膠體金試紙，其特征在于是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纖維素膜(2)、氯胺酮單抗金標墊(5)、玻璃纖維樣品吸液層(6)組成；底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條試驗線(4)和一條羊抗鼠多克隆抗體控制線(3)，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標墊上壓有樣品吸液層。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種快速檢測氯胺酮的膠體金試紙，其特征在于控制線是由羊抗鼠多克隆抗體包被制成。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種快速檢測氯胺酮的膠體金試紙，其特征在于試驗線是由氯胺酮合成免疫原包被制成。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種快速檢測氯胺酮的膠體金試紙，其特征在于金標墊是由氯胺酮單克隆抗體作為膠體金標記。
5.根據(jù)權利要求1所述的試紙條，其特征在于吸水紙用雙層吸水紙。
專利摘要本實用新型涉及一種快速檢測氯胺酮(Ketamine)的試紙，屬于膠體金免疫檢測領域。試紙是由底板、吸水板、硝酸纖維素膜、單抗金標墊、玻璃纖維樣品吸液層組成，是一種用于檢測氯胺酮(Ketamine)的試紙。底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有氯胺酮(Ketamine)合成免疫原試驗線和一條多克隆抗體控制線，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標墊上壓有樣品吸液層，通過膠體金免疫競爭方法制成試紙。其原理是利用抗原抗體的特異結合反應和免疫層析技術，在試紙上出現(xiàn)特定的顯色結果。具有靈敏度高，特異性強，重復性好，精確度高，操作簡單，檢測快速準確的特點，無須復雜的設備。
文檔編號G01N33/544GK2914093SQ20062000431
公開日2007年6月20日 申請日期2006年2月22日 優(yōu)先權日2006年2月22日
發(fā)明者萬志靜, 萬志強 申請人:萬華普曼生物工程有限公司