專利名稱:無氰化物的溶解劑組合物及其用于血紅蛋白和白血球測定的方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及溶解劑組合物及其用于測定血樣中的總血紅蛋白濃度和白血球的方法。
背景技術(shù):
總血紅蛋白的測定可以指示全血的載氧能力。通過對具有臨床癥狀的病人的檢査和 通過臨床正常人群的電泳分析調(diào)查,發(fā)現(xiàn)了超過300種的異常血紅蛋白。這些異常血紅蛋白 中的許多會導致臨床病變,其中血紅蛋白水平發(fā)生改變或血紅蛋白結(jié)合氧的能力被改變。這 些疾病中有鐮狀細胞貧血、a和e-地中海貧血、以及血紅蛋白M。
對血樣中的血紅蛋白(Hgb)進行測定的能力是診斷分析的基本部分,并且對監(jiān)控治療反應也是重要的,這些治療用于治療影響血紅蛋白的疾病、以及用于治療對血紅蛋白的數(shù) 量具有不良副作用的其他疾病。
在普通主體的外周血中的白血球包括5種類型,即淋巴細胞、單核細胞、嗜中性白 細胞、嗜曙紅血球和嗜堿細胞。后三種白血球總起來被稱為粒細胞。計算并區(qū)分血樣中的白 血球的不同類型為臨床診斷提供了有價值的信息。
白血球的分類和計算最常用也稱為手工方法的差異分析方法進行。自動血液分析儀 也常用于計算白血球,使用溶解劑以溶解紅血球,然后測定殘留的白血球。已經(jīng)開發(fā)出更復 雜的裝置用于計算不同類型的包括單核細胞、淋巴細胞和粒細胞的白血球(差異分析)。理 想地,人們希望在單個自動化步驟中能完成多重診斷分析,比如血紅蛋白測定和計算白血球 的數(shù)目、或白血球亞群的差異分析。
在許多用于血紅蛋白測定的眾所周知的方法中,血液學標準化國際委員會(the International Committee for Standardization in Hematology)已將氰化物血紅蛋白方法推薦為標 準。該方法經(jīng)Matsubara和Okuzono改進后已寬泛地用于臨床實驗。在該方法中,用赤血鹽 將所有形式的紅血球的各種血紅蛋白形式中血紅素基團的鐵離子氧化成高鐵血紅蛋白。然后 將高鐵血紅蛋白與對血紅素基團的鐵離子具有很高親合性的氰化物陰離子復合,從而形成氰 化高鐵血紅蛋白色原。該非常穩(wěn)定的色原在540nm處具有最大吸收峰,可通過分光光度計人 工測定。
雖然通過標準的氰化高鐵血紅蛋白方法和其改進的自動化方法形成了穩(wěn)定的色原, 但試劑廢料因氰化鉀的使用而導致巨大的環(huán)境問題。在過去的二十年中,人們進行了不懈的 努力,試圖開發(fā)出不用氰化物的自動化血紅蛋白分析方法。 Oshiro等在文獻C//".歷oc/ze附.1583 (1982)中公開了一種用于血紅蛋白分析的試劑 的用途,該試劑包括十二垸基硫酸鈉(SLS)和中性pH (7.2)的曲拉通X-100 (TritonX-100, 非離子表面活性劑)。SLS被用于溶解紅血球,人們相信其還產(chǎn)生了在539nm處具有最大吸 收峰并在572nm處具有峰肩的SLS-血紅蛋白復合體。反應在5 10分鐘內(nèi)完成,于是可定 量測定總血紅蛋白。然而,如隨后在美國專利號5,242,832 (Sakata)中所述的,用Oshiro的 方法不可能同時分析白血球和進行血紅蛋白測定。美國專利號5,242,832 (Sakata)公開了一種無氰化物的溶解試劑,用于計算血樣中的 白血球和測定血樣中的血紅蛋白濃度。該溶解試劑包括至少一種為季銨鹽的第一表面活性劑、 至少一種包括陽離子和兩性表面活性劑的第二表面活性劑、和至少一種血紅蛋白穩(wěn)定劑,該 穩(wěn)定劑選自于包括試鈦靈(1,2-二羥基苯-3,5-二磺酸鈉)、8-羥基喹啉、二吡啶、1-10-菲咯啉、 酚類化合物、雙酚、吡唑和其衍生物、第二苯基5-吡唑啉酮和其衍生物、苯基3-吡唑啉酮、 以及咪唑和其衍生物的組。Sakata指出,只有通過使用至少兩種合適的表面活性劑和通過嚴 格控制表面活性劑的濃度才能實現(xiàn)將白血球劃分成兩個或三個種群,包括淋巴細胞的聚集物、 單核細胞、嗜曙紅血球和嗜堿細胞的聚集物、以及嗜中性白細胞的聚集物。Sakata還指出, 該溶解試劑的pH優(yōu)選為5.0 8.0。如果pH值為3.0或以下,那么增加了對白血球的破壞, 從而使白血球的測定較難,如果pH為9.0或以上,那么血紅蛋白的穩(wěn)定性隨時間而降低。
PCT/US95/02897 (Kim)公開了一種無氰化物的試劑用于確定全血樣中的血紅蛋白。 試劑包括選自于由咪唑和其衍生物、N-羥基乙酰胺、H-羥胺、吡啶、惡唑、噻唑、吡唑、 嘧啶、嘌呤、喹啉和異喹啉所構(gòu)成的組的配體;和選自于由十二烷基二甲胺氧化物和辛基苯 氧基聚乙氧基乙醇所構(gòu)成的組、具有較強紅細胞溶解能力的表面活性劑。該分析方法較快, 不到10秒。然而,試劑僅在極端堿性條件即pH為11 14下進行。此外,如Kim所述,該 試劑不能計算白血球或區(qū)分白血球亞群。美國專利號5,763,280和5,882,934 (Li等)公開了包含有機配體的無氰化物的試劑, 用于測定血樣中的血紅蛋白和白血球。該有機配體可以是三唑及其衍生物、四唑及其衍生物、 1,4,5,6-四氫-4,6-二氧-1,3,5-三嗪-2-羧酸的堿金屬鹽、蜜胺、苯胺-2-磺酸、喹啉-2-羧酸、2-氨 基-l,3,4-噻二唑、三嗪及其衍生物、尿唑、DL-哌啶酸、異尼古丁酰胺、氨基苯甲腈、6-氮雜
-2-硫代胸腺嘧啶、腺嘌呤、3- (2-噻吩基)丙烯酸、苯甲酸、苯甲酸的堿金屬鹽或銨鹽、或
吡嗪及其衍生物。 美國專利號6,740,527 (Wong等)公開了無氰化物的試劑,用于測定血樣中的血紅蛋 白和白血球。該試劑包含至少一種選自于由鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、及其它酸性鹽所構(gòu)成 的組的羥胺鹽。人們一直需要一種包含配體的無氰化物溶解劑,該溶解劑價格便宜,并且在常規(guī)血液 分析儀上相對較大的消耗下對環(huán)境是友好的。
發(fā)明內(nèi)容
—方面,本發(fā)明的目的在于提供一種無氰化物的溶解劑組合物。該無氰化物的溶解
劑組合物包含如下物質(zhì)的水溶液由如下分子結(jié)構(gòu)表示的季銨表面活性劑<formula>formula see original document page 9</formula>
其中R1是具有10 18個碳原子的垸基、烯基或炔基;R2、 R3和R4是具有1 4個碳
原子的烷基,X—是氯化物或溴化物;該季銨表面活性劑的含量足以溶解紅血球并釋放血紅蛋
白;和含量足以與血紅蛋白形成穩(wěn)定的色原的配體,該配體選自于由草酸、蘋果酸、丙二酸、
乙二胺、N,N-二乙基乙二胺、N,N'-二乙基乙二胺、二亞乙基三胺、四亞乙基五胺、1,6-己二 胺、1,3-戊二胺、2-甲基戊二胺、1,2-二氨基環(huán)己烷、4-氨基苯乙酮、雙六甲撐三胺、噠嗪、 和3,6-二羥基噠嗪所構(gòu)成的組。溶解劑組合物的pH值為約3 約10。優(yōu)選季銨表面活性劑是 十二烷基三甲基氯化銨。在另一實施方式中,溶解劑組合物還可包括第二季銨表面活性劑。優(yōu)選第二季銨表 面活性劑為十四烷基三甲基溴化銨、或十六烷基二甲基乙基溴化銨。 另一方面,本發(fā)明致力于提供一種使用溶解劑組合物測定血樣中的總血紅蛋白濃度 的方法。該方法包括如下步驟用血液稀釋劑稀釋血樣以形成稀釋樣;將稀釋樣與溶解劑組 合物混合以形成試樣混合物,該溶解劑組合物的量足以溶解紅血球從而在試樣混合物中形成
穩(wěn)定的血紅蛋白色原;測定試樣混合物中的血紅蛋白色原在預定波長處的吸光度;根據(jù)吸光
度確定血樣中的總血紅蛋白濃度;以及報告血樣中的總血紅蛋白濃度。優(yōu)選在約510nm 560 nm之間測定吸光度。此外,該方法還包括如下步驟使用第一直流(DC)阻抗測量法在自動血液分析儀
上計算試樣混合物中的白血球數(shù);和報告血樣中的白血球的數(shù)目。此外,該方法還包括如下
步驟用第二DC阻抗測量法在自動血液分析儀中對試樣混合物中的白血球的大小進行測定, 從而獲得白血球的大小分布直方圖;根據(jù)該分布直方圖區(qū)分白血球亞群,并報告白血球亞群。
以下結(jié)合相關(guān)附圖,對優(yōu)選實施方式進行詳細說明,以便更好地理解本發(fā)明和其各 種優(yōu)點。 圖1所示為按照實施例2中的步驟使用具有配方C的溶解劑組合物處理過的血樣的 一系列吸收光譜。 圖2所示為使用配方A獲得的血紅蛋白濃度結(jié)果與在參照儀器上獲得的血紅蛋白濃 度結(jié)果之間的相關(guān)性。 圖3所示為使用配方A獲得的白血球計數(shù)結(jié)果(以10"PL計的WBC)與在參照儀 器上獲得的白血球計數(shù)結(jié)果(以10"uL計的WBC)之間的相關(guān)性。 圖4A和4B所示為分別在使用配方A的儀器上和參照儀器上獲得的一個血樣中的白 血球分布直方圖。在一種實施方式中,本發(fā)明提供一種無氰化物的溶解劑組合物,用于測定血樣中的 總血紅蛋白濃度,以及進一步用于測定血樣中的白血球。該無氰化物的溶解劑組合物包括如 下物質(zhì)的水溶液
(i)由如下分子結(jié)構(gòu)表示的季銨表面活性劑<formula>formula see original document page 10</formula>
其中R1是具有10 18個碳原子的垸基、烯基或炔基;R2、 R3和R4是具有1 4個碳 原子的垸基,X—是氯化物或溴化物陰離子;和
(ii)含量足以與血紅蛋白形成穩(wěn)定的色原的配體,該配體選自于由如下物質(zhì)所構(gòu)成的組:
(a)草酸,
具體實施例方式
(b) 蘋果酸,
(c) 丙二酸,
(d) 乙二胺,
(e) N,N-二乙基乙二胺,
(f) N,N'-二乙基乙二胺,
(h) 二亞乙基三胺,
(i) 四亞乙基五胺 (j) 1,6-己二胺, (k) 1,3-戊二胺, (1) 2-甲基戊二胺, (m) 1,2-二氨基環(huán)己烷, (n) 4-氨基苯乙酮,
(o)雙六甲撐三胺,
(p)噠嗪,以及
(r) 3,6-二羥基噠嗪。 該溶解劑組合物的pH值為約3 約10。
溶解劑組合物還可包含由如上所述的分子結(jié)構(gòu)表示的第二季銨表面活性劑。在一個 優(yōu)選實施方式中,溶解劑組合物包括十二垸基三甲基氯化銨和十四垸基三甲基溴化銨的組合 物。在另一優(yōu)選實施方式中,溶解劑組合物包括十二烷基三甲基氯化銨和十六烷基二甲基乙 基溴化銨的組合物。 溶解劑組合物中的表面活性劑或表面活性劑組合物的濃度應足以溶解紅血球從而釋 放血紅蛋白,同時保留白血球用于計算和測定它們的大小或體積。溶解劑組合物中的表面活 性劑的濃度為約2 g/L 約100 g/L,優(yōu)選為約4 g/L 約60 g/L。 當將血樣與如上所述的溶解劑組合物混合時,紅血球被完全溶解,從而將血紅蛋白 釋放到試樣混合物中,該血紅蛋白與溶解劑組合物中的配體一接觸便形成穩(wěn)定的色原。通過 紫外-可見(UV-VIS)光譜可在預定波長處測定血紅蛋白色原。另一方面, 一經(jīng)血樣與溶解劑 組合物混合,白血球中的細胞膜便被透過,于是細胞質(zhì)基本上釋放出來,但細胞核仍保留著。 通過直流(DC)阻抗測量法能測定殘留的白血球,用于白血球亞群的計數(shù)或差異分析。
在溶解紅血球時釋放的血紅蛋白包括各種形式,比如氧合血紅蛋白、脫氧血紅蛋白、 高鐵血紅蛋白、碳氧血紅蛋白等。為使測定定量和精確,需要形成的色原在測定的時間周期 內(nèi)是穩(wěn)定的。將血紅蛋白轉(zhuǎn)換成穩(wěn)定的色原的最有效的方法是提供對血紅素鐵具有較高親合 性的配體,從而形成穩(wěn)定的血紅蛋白復合體。這已被氰化高鐵血紅蛋白方法成功地證明,其 中氰化物陰離子對血紅素鐵具有極高的親合性。術(shù)語"血紅蛋白復合體"和"血紅蛋白色原" 在此可交互使用。通常,當缺少較高親合性的配體時,形成的血紅蛋白色原并非足夠穩(wěn)定。 色原的吸光度發(fā)生變化,在大多數(shù)情況下隨時間衰減。在此條件下,即使反應動力學得到較 好地監(jiān)控和校正,分析方法也是不可靠的,這是因為色原對各種環(huán)境因素,比如溫度和試樣 制備條件是非常敏感的。當一種合適的血紅蛋白配體被提供時,血紅蛋白的轉(zhuǎn)化能被量化, 于是通過形成的穩(wěn)定的血紅蛋白色原能確保對血樣中的血紅蛋白濃度進行可靠的測定。
研究發(fā)現(xiàn),如上所述的配體能有效地將血紅蛋白轉(zhuǎn)變成在血液分析儀上常用的時間期內(nèi)保持穩(wěn)定的色原。溶解劑組合物中的配體的濃度應足以形成穩(wěn)定的血紅蛋白色原。其濃 度隨使用的特定的配體而改變,取決于配體對血紅蛋白的親合性。如果溶解劑組合物中的配 體的含量不足,那么形成的血紅蛋白色原可能是不穩(wěn)定的。本發(fā)明的溶解劑組合物中的配體的濃度為約0.3 g/L 約25.0 g/L,優(yōu)選為約5.0 g/L 約20.0 g/L。
如上所述的溶解劑組合物中的表面活性劑和配體的濃度是這樣一種濃度,其中血紅 蛋白和白血球的測定伴隨著在樣品制備中使用合適的血液稀釋劑。然而,如上所述的這些組 分的濃度可以調(diào)整,這取決于溶解劑組合物和用于制備試樣混合物的稀釋劑之間的體積比。
此外,如果血液分析儀使用未用血液稀釋劑預稀釋的單一溶解劑組合物,那么可以 降低溶解劑組合物中的表面活性劑和配體的濃度,從而調(diào)節(jié)溶解劑組合物的電導率以使其能 用于阻抗測量??赏ㄟ^添加適量的堿金屬鹽來調(diào)節(jié)電導率。在這類單一試劑方法中,溶解劑 組合物中的表面活性劑和配體的濃度應與在稀釋劑和溶解劑組合物均被使用時包含在最終的 試樣混合物中的濃度相同。
還可在本發(fā)明的溶解劑組合物中包含一定濃度的可選擇的添加劑,它們應與溶解劑 組合物的主要功能組分相容。這些添加劑是防腐的,它們具有抗氧化性以增加組合物的貯藏 期限,以及具有抗微生物性。
實施例1給出了本發(fā)明的無氰化物的溶解劑組合物的兩個例子。
在另一實施方式中,本發(fā)明提供一種使用如上所述的無氰化物的溶解劑組合物的方法,用于測定血樣中的總血紅蛋白濃度。該方法包括如下步驟用血液稀釋劑稀釋血樣以形成稀釋樣;將稀釋樣與溶解劑組合物混合以形成試樣混合物并且溶解紅細胞,從而在試樣混合物中形成穩(wěn)定的血紅蛋白色原;在預定波長處測定試樣混合物中的血紅蛋白色原的吸光度;根據(jù)獲得的吸光度確定血樣中的總血紅蛋白濃度;以及報告血樣中的總血紅蛋白濃度。在約 510 nm 約560 nm之間測定血樣的吸光度。
在優(yōu)選實施方式中,該方法還包括在自動血液分析儀上使用DC阻抗測量法計算白血 球的數(shù)量、和區(qū)分試樣混合物中的白血球亞群。
美國專利號2,656,508中對通過裝有DC阻抗測量裝置的血液分析儀來計算白血球的 檢測方法進行了一般的說明,其中全部內(nèi)容引入本文以作參考。美國專利號4,485,175和 4,528,274對使用DC阻抗測量法區(qū)分白血球亞群的方法進行了說明,其中全部內(nèi)容引入本文 以作參考。
在此對使用本發(fā)明的溶解劑組合物測定血樣中的總血紅蛋白的工藝進行一般說明, 之后在實施例2中作進一步詳細的說明。用合適的血液稀釋劑稀釋抗凝結(jié)的血樣,接著通過 手工混合或機械混合將如上所述足夠量的溶解劑組合物與稀釋樣混合以形成試樣混合物。血 液的稀釋比為約125:1 約500:1,即總的試劑體積與血樣的比。在添加溶解劑組合物后的約 10 60秒內(nèi),在光譜儀上或在配有光電探測器的自動血液分析儀上對試樣混合物在預定波長 處的吸收進行光度測定。血液分析儀還可配備DC阻抗測量裝置以計算白血球的數(shù)量,或以 獲得的種群分布直方圖為基礎(chǔ)進一步區(qū)分白血球亞群。就后者而言,白血球被區(qū)分為兩個或 更多個亞群,包括淋巴細胞、單核細胞和粒細胞。
可以與本發(fā)明的溶解劑組合物一起使用的血液稀釋劑是常用在商品用血液分析儀上 用于稀釋血樣的等滲稀釋齊IJ。合適的例子包括,但不限于,在美國專利號4,521,518、4,528,274、 5,935,857和6,706,526中描述的稀釋劑,其中全部內(nèi)容引入本文以作參考。
圖1所示為血樣的一系列吸收光譜,其中按照實施例2中的步驟使用實施例2中具 有配方C的溶解劑組合物、禾口 COULTER ISOTON②3E (位于佛羅里達州邁阿密市的貝克曼 考爾特(Beckman Coulter)公司制造的商品用血液稀釋劑)作為稀釋劑,對該血樣進行處理。 圖1顯示了在添加溶解劑組合物后的12 132秒內(nèi)每隔IO秒獲得的總共12個光譜。該血紅 蛋白色原的光譜非常穩(wěn)定,在120秒的測試期內(nèi)沒有偏移或衰減。
通過使用如上所述的具有配體的本發(fā)明的溶解劑組合物所形成的大多數(shù)色原在約 510nm 約560nm之間具有最大吸收峰。于是,可以通過將商業(yè)上最常用的血液分析儀與特 定色原的吸光系數(shù)相結(jié)合來測定色原。
本發(fā)明的溶解劑組合物和使用該溶解劑組合物的方法提供了精確的血紅蛋白測定和 白血球的精確計數(shù)。圖2顯示,在使用傳統(tǒng)的溶解劑的COULTER LH750血液分析儀(位于 佛羅里達州邁阿密市的貝克曼考爾特公司的產(chǎn)品)上獲得的血紅蛋白濃度與使用實施例1中 的配方A獲得的血紅蛋白濃度之間具有出色的線性相關(guān)性。圖3表明,在使用傳統(tǒng)的溶解劑 的COULTER LH750血液分析儀上獲得的白血球計數(shù)與在相同的儀器上使用實施例1中的配 方A獲得的結(jié)果之間具有出色的相關(guān)性。
如下實施例用于說明本發(fā)明,伹不應解釋為是對如權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明保護 范圍的限定。實施例l
制備如下溶解劑組合物。 配方A1,2-二氨基環(huán)己烷 10.0 g十二垸基三甲基氯化銨(50%的溶液)35.6 g十六烷基二甲基乙基溴化銨1.25 g調(diào)節(jié)至1升的蒸餾水pH5.5 配方B3,6-二羥基噠嗪 10.0 g十二烷基三甲基氯化銨(50%的溶液)50.0 g 十四垸基三甲基溴化銨3.5 g 調(diào)節(jié)至1升的蒸餾水 pH 6.0實施例2配方C1,2-二氨基環(huán)己垸 16.8 g 十二烷基三甲基氯化銨(50%的溶液)35.5 g 十六烷基二甲基乙基溴化銨2.0 g 調(diào)節(jié)至1升的蒸餾水 pH5.5
用2500 ^的ISOTON 3E稀釋11.6 pl的全血試樣,接著將具有配方C的403 pl的 溶解劑組合物與預稀釋的試樣手工混合在一起。緊接著在Beckman DU 7500分光光度計上對 試樣混合物的吸收光譜進行測定。圖1所示為按照如上所述步驟使用配方C處理過的血樣的 總共12個光譜。在添加溶解劑組合物后從第12秒開始每隔IO秒進行測定而獲得該光譜。
實施例3
在除了溶解劑用配方A替代之外具有標準儀器構(gòu)造、經(jīng)校準的COULTER LH750儀器上,對lll個血樣、其在6 17g/dL范圍內(nèi)的血紅蛋白濃度和在1,000/^iL 40,000/pL范圍內(nèi)的白血球數(shù)進行了分析。還在另一使用LYSE S III diff作為溶解劑的參照LH750儀器上對這些試樣進行分析。超過50%的試樣是包括各種臨床條件的臨床試樣。
圖2所示為使用配方A獲得的血紅蛋白濃度結(jié)果與在參照儀器上獲得血紅蛋白濃度結(jié)果之間的相關(guān)性。圖3所示為使用配方A獲得的白血球計數(shù)結(jié)果(以103 L計的WBC)與在參照儀器上獲得的白血球計數(shù)結(jié)果(以103&L計的WBC)之間的相關(guān)性。
圖4A和4B所示為分別在使用配方A的儀器上和參照儀器上獲得的一個血樣中的白血球分布直方圖。如圖所示,使用配方A獲得的白血球分布類似于使用參照試劑LYSES⑧mdiff獲得的白血球分布,白血球被區(qū)分成淋巴細胞、單核細胞和粒細胞。
雖然本發(fā)明己被詳細說明并用附示,但這些不應被看作是對本發(fā)明的保護范圍的限定,而應作為其優(yōu)選實施方式的例證。然而,顯而易見,在如上述說明書所述的和如附后的權(quán)利要求書及其等效法條所限定的本發(fā)明的實際宗旨和范圍內(nèi),可以進行各種變更和修改。
權(quán)利要求
1.一種無氰化物的溶解劑組合物,包括如下物質(zhì)的水溶液(i)由如下分子結(jié)構(gòu)表示的季銨表面活性劑其中R1是具有10~18個碳原子的烷基、烯基或炔基;R2、R3和R4是具有1~4個碳原子的烷基,X-是氯化物或溴化物;所述季銨表面活性劑的含量足以溶解紅血球并釋放血紅蛋白;和(ii)含量足以與所述血紅蛋白形成穩(wěn)定的色原的配體,所述配體選自于由如下物質(zhì)所構(gòu)成的組(a)草酸,(b)蘋果酸,(c)丙二酸,(d)乙二胺,(e)N,N-二乙基乙二胺,(f)N,N′-二乙基乙二胺,(h)二亞乙基三胺,(i)四亞乙基五胺(j)1,6-己二胺,(k)1,3-戊二胺,(l)2-甲基戊二胺,(m)1,2-二氨基環(huán)己烷,(n)4-氨基苯乙酮,(o)雙六甲撐三胺,(p)噠嗪,以及(r)3,6-二羥基噠嗪。其中所述溶解劑組合物的pH為約3~約10。
2. 如權(quán)利要求1所述的溶解劑組合物,其特征在于,所述季銨表面活性劑的濃度為約4 g/L 約60g/L。
3. 如權(quán)利要求1所述的溶解劑組合物,其特征在于,所述配體的濃度為約0.3 g/L 約25.0g/L。
4. 一種使用如權(quán)利要求l所述的溶解劑組合物測定血樣中的總血紅蛋白濃度的方法,包括(a) 用血液稀釋劑稀釋所述血樣以形成稀釋樣;(b) 將所述的稀釋樣與如權(quán)利要求1所述的溶解劑組合物混合以形成試樣混合物,所述 溶解劑組合物的量足以溶解紅血球,從而在所述試樣混合物中形成穩(wěn)定的血紅蛋白色原;(C)在預定波長處測定所述試樣混合物中的所述血紅蛋白色原的吸光度;(d) 根據(jù)步驟(C)中獲得的所述吸光度確定所述血樣中的總血紅蛋白濃度;以及(e) 報告所述血樣屮的總血紅蛋白濃度。
5. 如權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,所述吸光度在約510nm 約560 nm之間測定。
6. 如權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,所述方法還包括如下步驟 使用第一直流阻抗測量法在自動血液分析儀中計算所述試樣混合物中的白血球數(shù);和 報告所述血樣中的所述白血球數(shù)。
7. —種無氰化物的溶解劑組合物,包括如下物質(zhì)的水溶液 (i)兩種由如下分子結(jié)構(gòu)表示的季銨表面活性劑其中R,是具有10 18個碳原子的烷基、烯基或炔基;R2、 R3和R4是具有1 4個碳原子的烷基,X—是氯化物或溴化物;和(ii)含量足以與所述血紅蛋白形成穩(wěn)定的色原的配體,所述配體選自于由如下物質(zhì)所構(gòu) 成的組-(a)草酸, (b)蘋果酸, (C)丙二酸,(d) 乙二胺,(e) N,N-二乙基乙二胺,(f) N,N'-二乙基乙二胺,(h) 二亞乙基三胺,(i) 四亞乙基五胺 (j) 1,6-己二胺, (k) 1,3-戊二胺, (1) 2-甲基戊二胺, (m) 1,2-二氨基環(huán)己烷, (n) 4-氨基苯乙酮, (o)雙六甲撐三胺, (p)噠嗪,以及(r) 3,6-二羥基噠嗪。其中所述溶解劑組合物的pH為約3 約10;所述表面活性劑的量足以溶解紅血球,釋 放血紅蛋白,同時保留白血球用于計數(shù)和差異分析。
8. 如權(quán)利要求7所述的溶解劑組合物,其特征在于,所述配體的濃度為約0.3 g/L 約25.0g/L。
9. 如權(quán)利要求7所述的溶解劑組合物,其特征在于,所述第一季銨表面活性劑是十二垸 基三甲基氯化銨。
10. 如權(quán)利要求9所述的溶解劑組合物,其特征在于,所述十二垸基三甲基氯化銨的濃 度為約30g/L 約60g/L。
11. 如權(quán)利要求7所述的溶解劑組合物,其特征在于,所述第二季銨表面活性劑是十四 烷基三甲基溴化銨。
12. 如權(quán)利要求7所述的溶解劑組合物,其特征在于,所述第二季銨表面活性劑是十六 烷基二甲基乙基溴化銨。
13. —種使用如權(quán)利要求7所述的溶解劑組合物測定血樣中的總血紅蛋白濃度的方法,包括(a) 用血液稀釋劑稀釋所述血樣以形成稀釋樣;(b) 將所述的稀釋樣與如權(quán)利要求7所述的溶解劑組合物混合以形成試樣混合物,所述 溶解劑組合物的量足以溶解紅血球,從而在所述試樣混合物中形成穩(wěn)定的血紅蛋白色原;(C)在預定波長處測定所述試樣混合物中的所述血紅蛋白色原的吸光度;(d) 根據(jù)步驟(C)中獲得的所述吸光度確定所述血樣中的總血紅蛋白濃度;以及(e) 報告所述血樣中的總血紅蛋白濃度。
14. 如權(quán)利要求13所述的方法,其特征在于,所述吸光度在約510 nm 約560 nm之間
15. 如權(quán)利要求13所述的方法,其特征在于,還包括如下步驟使用第一直流阻抗測量法在自動血液分析儀中計算的所述試樣混合物中的白血球數(shù);和 報告所述血樣中的所述白血球數(shù)。
16. 如權(quán)利要求15所述的方法,其特征在于,還包括如下步驟用第二直流阻抗測量法在所述自動血液分析儀中對所述試樣混合物中的所述白血球的大 小進行測定,從而獲得所述白血球的大小分布直方圖; 根據(jù)所述分布直方圖區(qū)分白血球亞群;以及 報告白血球亞群。
17. 如權(quán)利要求16所述的方法,其特征在于,所述白血球亞群是選自于由淋巴細胞、單 核細胞和粒細胞所構(gòu)成的組的兩種或更多種種群。
18. —種無氰化物的溶解劑組合物,包括如下物質(zhì)的水溶液(i)兩種由如下分子結(jié)構(gòu)表示的季銨表面活性劑<formula>formula see original document page 5</formula>其中R,是具有10 18個碳原子的垸基、烯基或炔基;R2、 R3和R4是具有1 4個碳原子的烷基,X—是氯化物或溴化物;和(ii)含量足以與所述血紅蛋白形成穩(wěn)定的色原的配體,所述配體選自于由1,2-二氨基環(huán) 己垸、和3,6-二羥基噠嗪所構(gòu)成的組;其中所述溶解劑組合物的pH為約3 約10;所述表面活性劑的量足以溶解紅血球,釋 放血紅蛋白,同時保留白血球用于計數(shù)和差異分析。
19. 如權(quán)利要求18所述的溶解劑組合物,其特征在于,所述第一季銨表面活性劑是十二 烷基三甲基氯化銨。
20. 如權(quán)利要求19所述的溶解劑組合物,其特征在于,所述第二季銨表面活性劑是十四 垸基三甲基溴化銨或十六垸基二甲基乙基溴化銨。
全文摘要
公開了一種無氰化物的溶解劑組合物和用于測定血樣中的總血紅蛋白濃度和白血球的方法。該溶解劑組合物包括用以溶解紅血球并釋放血紅蛋白的季銨表面活性劑、和用以與血紅蛋白形成穩(wěn)定的色原的配體。溶解劑組合物pH為3~10。該溶解劑組合物還包括第二季銨表面活性劑。該配體可以是蘋果酸、丙二酸、乙二胺、N,N-二乙基乙二胺、N,N′-二乙基乙二胺、二亞乙基三胺、四亞乙基五胺、1,6-己二胺、1,3-戊二胺、2-甲基戊二胺、1,2-二氨基環(huán)己烷、4-氨基苯乙酮、雙六甲撐三胺、噠嗪、或3,6-二羥基噠嗪。
文檔編號G01N33/72GK101163972SQ200680013657
公開日2008年4月16日 申請日期2006年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月4日
發(fā)明者丹尼瑟·帕拉-迪亞茲, 拉塞爾·F·朗, 芭芭拉·穆爾扎, 蘇珊娜·馬爾多納多, 路易莎·奧拉馬斯 申請人:貝克曼考爾特公司