專利名稱：：化妝品中氯氟舒松的定量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種化妝品中糖皮質(zhì)激素——氯氟舒松定量檢測的方法。
背景技術(shù)：
：氯氟舒松(Halcinonide)為一種糖皮質(zhì)激素類藥物，臨床研究發(fā)現(xiàn)，氯氟舒松跟卡泊三醇聯(lián)合外用可以有效治療局限性慢性濕疹，總有效率達(dá)到88.9%;氯氟舒松與卡泊三醇聯(lián)合應(yīng)用，對治療尋常型銀屑病具有顯著療效，銀屑病區(qū)嚴(yán)重度指數(shù)(PASI)平均變化率明顯高于兩者單用組。同時，氯氟舒松單獨使用治療化療滲漏性損傷，具有良好的療效?？傊确嫠稍谥委熴y屑病和臨床常見皮膚病方面具有良好的療效?；瘖y品與人們的日常生活密切相關(guān)，近年來隨著我國人民生活水平的提高，化妝品已經(jīng)成為人們必不可少的消費品之一。2004年，我國化妝品銷售額達(dá)到850億元人民幣，并以每年15%的幅度增長。與此同時，化妝品的安全性己經(jīng)日益成為廣大消費者關(guān)注的問題?；瘖y品中所添加的化學(xué)物質(zhì)對人體健康具有潛在的危害。糖皮質(zhì)激素外用可降低毛細(xì)血管的通透性，減少滲出和細(xì)胞浸潤，具有抗炎、抗過敏、抗休克、免疫抑制等多種作用，臨床應(yīng)用廣泛。但長期接觸糖皮質(zhì)激素易導(dǎo)致皮膚變薄、發(fā)紅、發(fā)癢，出現(xiàn)血糖升高、高血壓、骨質(zhì)疏松、胎兒畸形、免疫功能下降等副作用。短時間使用含糖皮質(zhì)激素的化妝品可抑制皮膚發(fā)炎，恢復(fù)皮膚彈性，減少皺紋或治療粉刺，促進(jìn)毛發(fā)生長；但長期使用含有糖皮質(zhì)激素的化妝品就可導(dǎo)致各種副作用，產(chǎn)生激素依賴性，甚至可導(dǎo)致癌癥。因此我國化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)、化妝品衛(wèi)生規(guī)范以及歐盟化妝品規(guī)程中都明確規(guī)定糖皮質(zhì)激素為化妝品中的禁用物質(zhì)。近年來，關(guān)于在化妝品中檢測到糖皮質(zhì)激素以及產(chǎn)生毒副作用的報道層出不窮，因此建立靈敏、準(zhǔn)確、可靠的化妝品中糖皮質(zhì)激素檢測方法是深入研究化妝品中激素毒副作用機(jī)理的重要手段。現(xiàn)有的一種檢測氯氟舒松的方法------紫外分光光度計方法，其具有測試結(jié)果準(zhǔn)確的特點；可是其存在著以下不足之處-1.檢測靈敏度低紫外分光光度計的檢測限一般在毫克級別；2.紫外分光光度計無分離功能，化妝品中雜質(zhì)干擾較嚴(yán)重。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種化妝品中氯氟舒松的定量檢測方法，采用該方法檢測氯氟舒松具有準(zhǔn)確性高的優(yōu)點。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種化妝品中氯氟舒松的定量檢測方法，包括以下步驟1)、在色譜甲醇中加入純度為100%的氯氟舒松和白術(shù)內(nèi)酯11，均勻混合后成對照品；氯氟舒松在對照品中的濃度為0.110嗎/mL，白術(shù)內(nèi)酯II在對照品中的濃度為812|ag/mL;2)、在干燥帶塞離心管中加入作為內(nèi)標(biāo)物的白術(shù)內(nèi)酯II甲醇溶液0.2mL，吹干離心管，然后將待測化妝品0.2mL加入吹干后的離心管中；白術(shù)內(nèi)酯II在白術(shù)內(nèi)酯II甲醇溶液中的濃度等于白術(shù)內(nèi)酯II在對照品中的濃度；3)、在上述步驟2)所得的離心管中加入4.55.5mL的提取試劑；4)、將步驟3)所得的離心管振蕩混勻后以400010000r/min進(jìn)行離心，獲取全部有機(jī)相溶解物；并對所獲取的有機(jī)相溶解物進(jìn)行干燥處理；5)、將上述干燥處理后的有機(jī)相溶解物溶解于體積比=50:50的乙腈與水組成的0.2mL流動相中，1500030000r/min離心后，獲取液體層；6)、將步驟l)所得的對照品和步驟5)所得的液體層分別進(jìn)行高效液相色譜分析，檢測條件如下以體積比=50:50的乙腈與水作為流動相，流速0.51.0mL/min、進(jìn)樣量1020pL、檢測波長為240nm、色譜柱溫度為30攝氏度；分別獲得對照品以及液體層中氯氟舒松與白術(shù)內(nèi)酯II的吸收峰面積比；7)、根據(jù)以下計算公式獲得待測化妝品中氯氟舒松的含量待測化妝品中氯氟舒松的含量^液體層中氯氟舒松與白術(shù)內(nèi)酯II的吸收峰面積比X氯氟舒松在對照品中的濃度/對照品中氯氟舒松與白術(shù)內(nèi)酯II的吸收峰面積比。作為本發(fā)明的化妝品中氯氟舒松的定量檢測方法的改進(jìn)步驟3)中的提取試劑為乙酸乙酯。作為本發(fā)明的化妝品中氯氟舒松的定量檢測方法的進(jìn)一步改進(jìn)步驟2)中于4050'C水浴中氮氣流吹干離心管。作為本發(fā)明的化妝品中氯氟舒松的定量檢測方法的進(jìn)一步改進(jìn)步驟4)中離心后，將離心后所得的上層液體倒入另一離心管內(nèi)，然后于45'C水浴中氮氣流吹干此另一離心管，得干燥處理后的有機(jī)相溶解物。作為本發(fā)明的化妝品中氯氟舒松的定量檢測方法的進(jìn)一步改進(jìn)步驟l)中白術(shù)內(nèi)酯1I在對照品中的濃度為l(Vg/mL，步驟3)中加入5mL的乙酸乙酯。當(dāng)待檢化妝品為液態(tài)或膏狀物時，采用本發(fā)明的方法能得知每mL待檢化妝品中含有多少W的氯氟舒松。當(dāng)待檢化妝品為粉狀類固體時，可以先得出每cm3(等同于每mL)待檢化妝品中含有多少叫的氯氟舒松，然后根據(jù)其比重，換算后得知每g待檢化妝品中含有多少嗎的氯氟舒松。本發(fā)明的化妝品中氯氟舒松的定量檢測方法，采用了高效液相色譜(HPLC)方法，因此能使檢測限達(dá)到微克級，完全能夠滿足國家化妝品的激素限量的檢測要求。而且高效液相色譜(HPLC)方法具有分離和分析定量的功能，能夠?qū)⒒瘖y品中激素色譜峰和雜質(zhì)干擾峰分離開，進(jìn)行定量分析，能避免了化妝品中的雜質(zhì)對檢測結(jié)果的干擾，從而確保了檢測結(jié)果的正確性。為了證明本發(fā)明方法的正確性，發(fā)明人做了如下的對比實驗選用一種已經(jīng)確定不含氯氟舒松的液體狀化妝品(例如市售的泊美)，其色譜圖如圖2所示(色譜分析檢測條件同本發(fā)明)。在該種化妝品中加入不同重量的氯氟舒松，從而形成含有不同濃度氯氟舒松的待測樣品。對上述待測樣品分別采用本發(fā)明的方法和分光光度計方法進(jìn)行檢測；結(jié)果如表l所述表l<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注表中的ND表示未檢測到。由表l可知本發(fā)明的方法相對于分光光度計方法，具有測試結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高、無雜質(zhì)干擾的優(yōu)點。下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實施方式作進(jìn)一步詳細(xì)說明。圖1是氯氟舒松和白術(shù)內(nèi)酯II(內(nèi)標(biāo))的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖；其中峰1為氯氟舒松色譜峰，峰2為內(nèi)標(biāo)白術(shù)內(nèi)酯II色譜峰；圖2是化妝品基質(zhì)的色譜圖3是實施例1所述的一種液體狀化妝品中氯氟舒松和白術(shù)內(nèi)酯I1(內(nèi)標(biāo))色譜圖；其中峰l為氯氟舒松色譜峰；峰2為內(nèi)標(biāo)白術(shù)內(nèi)酯II色譜峰。具體實施例方式實施例K一種化妝品中氯氟舒松的定量檢測方法，該待測化妝品為液態(tài)類化妝品，依次進(jìn)行以下步驟1)、在色譜甲醇中加入純度為100%的氯氟舒松以及白術(shù)內(nèi)酯11，均勻混合后成對照品，氯氟舒松和白術(shù)內(nèi)酯II在對照品中的濃度分別為5叫/mL和10嗎/mL。2)、首先在干燥帶塞離心管中加入作為內(nèi)標(biāo)物的白術(shù)內(nèi)酯II甲醇溶液0.2mL，白術(shù)內(nèi)酯II甲醇溶液的濃度為l(Vg/mL，即每mL由色譜甲醇和白術(shù)內(nèi)酯II組成的溶液中含有10叫白術(shù)內(nèi)酯II;接著將此離心管于45'C水浴中氮氣流吹干；然后向該離心管中加入0.2mL待測化妝品。3)、根據(jù)乙酸乙酯用量對化妝品中激素和作為內(nèi)標(biāo)物的白術(shù)內(nèi)酯n的提取率的不同，向上述步驟2)所得的離心管中加入5mL乙酸乙酯。4)、將上述步驟3)所得的離心管進(jìn)行以下操作將其超聲2min，漩渦振蕩5min，混勻后以400010000r/min進(jìn)行離心；將離心后所得的上層液體倒入另一離心管內(nèi)，然后于45'C水浴中氮氣流吹干此另一離心管，得干燥處理后的有機(jī)相溶解物，此時有機(jī)相溶解物附著在另一離心管內(nèi)的管壁上。5)、在上述步驟4)所得的另一離心管內(nèi)加入0.2mL由體積比-50:50的乙腈與水組成的流動相，使上述有機(jī)相溶解物溶解于流動相中；1500030000r/min離心后，獲得液體層。6)、將步驟l)所得的對照品和步驟5)所得的液體層分別進(jìn)行高效液相色譜分析，檢測條件如下以日本島津高效液相色譜，兩元高壓泵，紫外/可見檢測器，SHIMADUZ色譜柱(150咖X4.6mm填充料粒徑5Mm)，以體積比為50:50的乙腈與水作為流動相，流速O.51.0mL/min、進(jìn)樣量1020pL、檢測波長為240nm、檢測溫度為30攝氏度。步驟l)所得對照品中，氯氟舒松峰面積為199335.078，白術(shù)內(nèi)酯II峰面積為209400.906，其氯氟舒松與白術(shù)內(nèi)酯11的吸收峰面積比=0.95193。步驟6)所得的待測化妝品的液體層中，氯氟舒松峰面積36071.566，白術(shù)內(nèi)酯II峰面積為183727.141，其氯氟舒松與白術(shù)內(nèi)酯II的吸收峰面積比-O.19633。7)、根據(jù)以下計算公式獲得待測化妝品中氯氟舒松的含量待測化妝品中氯氟舒松的含量二液體層中氯氟舒松與白術(shù)內(nèi)酯II的吸收峰面積比X氯氟舒松在對照品中的濃度/對照品中氯氟舒松與白術(shù)內(nèi)酯II的吸收峰面積比。因此，待測化妝品中氯氟舒松的含量=0.19633X5(ng/mL)+0.95193=1.03最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的若干個具體實施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。權(quán)利要求1、一種化妝品中氯氟舒松的定量檢測方法，其特征在于包括以下步驟1)、在色譜甲醇中加入純度為100％的氯氟舒松和白術(shù)內(nèi)酯II，均勻混合后成對照品；氯氟舒松在對照品中的濃度為0.1～10μg/mL，白術(shù)內(nèi)酯II在對照品中的濃度為8～12μg/mL；2)、在干燥帶塞離心管中加入作為內(nèi)標(biāo)物的白術(shù)內(nèi)酯II甲醇溶液0.2mL，吹干離心管，然后將待測化妝品0.2mL加入吹干后的離心管中；白術(shù)內(nèi)酯II在白術(shù)內(nèi)酯II甲醇溶液中的濃度等于白術(shù)內(nèi)酯II在對照品中的濃度；3)、在上述步驟2)所得的離心管中加入4.5～5.5mL的提取試劑；4)、將步驟3)所得的離心管振蕩混勻后以4000～10000r/min進(jìn)行離心，獲取全部有機(jī)相溶解物；并對所獲取的有機(jī)相溶解物進(jìn)行干燥處理；5)、將上述干燥處理后的有機(jī)相溶解物溶解于體積比＝50∶50的乙腈與水組成的0.2mL流動相中，15000～30000r/min離心后，獲取液體層；6)、將步驟1)所得的對照品和步驟5)所得的液體層分別進(jìn)行高效液相色譜分析，檢測條件如下以體積比＝50∶50的乙腈與水作為流動相，流速0.5～1.0mL/min、進(jìn)樣量10～20μL、檢測波長為240nm、色譜柱溫度為30攝氏度；分別獲得對照品以及液體層中氯氟舒松與白術(shù)內(nèi)酯II的吸收峰面積比；7)、根據(jù)以下計算公式獲得待測化妝品中氯氟舒松的含量待測化妝品中氯氟舒松的含量＝液體層中氯氟舒松與白術(shù)內(nèi)酯II的吸收峰面積比×氯氟舒松在對照品中的濃度/對照品中氯氟舒松與白術(shù)內(nèi)酯II的吸收峰面積比。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的化妝品中氯氟舒松的定量檢測方法，其特征是所述步驟3)中的提取試劑為乙酸乙酯。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的化妝品中氯氟舒松的定量檢測方法，其特征是所述步驟2)中于405(TC水浴中氮氣流吹干離心管。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的化妝品中氯氟舒松的定量檢測方法，其特征是所述步驟4)中離心后，將離心后所得的上層液體倒入另一離心管內(nèi)，然后于45'C水浴中氮氣流吹干此另一離心管，得干燥處理后的有機(jī)相溶解物。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的化妝品中氯氟舒松的定量檢測方法，其特征是所述步驟l)中白術(shù)內(nèi)酯II在對照品中的濃度為l(Vg/mL，步驟3)中加入5mL的乙酸乙酯。全文摘要本發(fā)明公開了一種化妝品中氯氟舒松的定量檢測方法，包括以下步驟1)、在色譜甲醇中加入氯氟舒松和白術(shù)內(nèi)酯II，得對照品；2)、在離心管中加入白術(shù)內(nèi)酯II甲醇溶液，然后將待測化妝品加入吹干后的離心管中；3)、加入提取試劑；4)、離心，獲取全部有機(jī)相溶解物，干燥；5)、將有機(jī)相溶解物溶解于流動相中，離心后獲取液體層；6)、將步驟1)所得的對照品和步驟5)所得的液體層分別進(jìn)行高效液相色譜分析，7)、待測化妝品中氯氟舒松的含量＝液體層中氯氟舒松與白術(shù)內(nèi)酯II的吸收峰面積比×氯氟舒松在對照品中的濃度/對照品中氯氟舒松與白術(shù)內(nèi)酯II的吸收峰面積比。采用本發(fā)明的方法檢測氯氟舒松具有準(zhǔn)確性高的優(yōu)點。文檔編號G01N30/00GK101303359SQ200810062610公開日2008年11月12日申請日期2008年6月24日優(yōu)先權(quán)日2008年6月24日發(fā)明者盧秀蓮,周益峰,孟慶莉,徐春紅,樓紀(jì)東,羅小牛,建葛,黃麗紅申請人:中國計量學(xué)院