專利名稱：用羅丹明s雙酶催化分光光度法測定葡萄糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分析化學(xué)領(lǐng)域，特別是一種用羅丹明s雙酶催化分光光度法測 定葡萄糖的方法。
背景技術(shù)：
葡萄糖是生物體內(nèi)具有極其重要的生理意義，它是人體中能量的來源，同 時也是預(yù)測某些疾病(如糖尿病及其并發(fā)癥)的風(fēng)向標(biāo)。眾所周知，體液中葡 萄糖含量的高低是標(biāo)志著人體健康狀況的重要指標(biāo)，尤其是糖尿病人的體液葡 萄糖監(jiān)控，葡萄糖濃度的突然升高與降低都預(yù)示著異常情況的發(fā)生，所以，準(zhǔn) 確測定葡萄糖對臨床治療，及對預(yù)防疾病具有非常重要的意義。由于蛋白質(zhì)， 核酸和葡萄糖是很重要的生物宏觀分子，它們是高密度信息的攜帶和基因信息 的傳遞，葡萄糖參與許多生理學(xué)和病理學(xué)的過程，掌控著許多疾病的發(fā)生和治 愈，葡萄糖的檢測不僅在醫(yī)藥工業(yè)，臨床診斷被重視，而且在生物化學(xué)和食品 工業(yè)等其他研究領(lǐng)域也很受歡迎，最近幾年，葡萄糖性能的研究已經(jīng)有了大的 進(jìn)步，同時，也為葡萄糖的分析檢測帶來了大的挑戰(zhàn)。目前，葡萄糖的檢測方 法有滴定法，分光光度法，磷光光度法，化學(xué)發(fā)光法，熒光法，電化學(xué)法，氣 相色譜法，高效液相色譜法，葡萄糖傳感器等。建立在酶催化反應(yīng)基礎(chǔ)之上的 葡萄糖傳感器，由于簡單、高靈敏和具有專一性，越來越受歡迎。在葡萄糖傳 感器中常用的酶是葡萄糖氧化酶，大多數(shù)方法是由在空氣中氧的存在下葡萄糖 氧化酶氧化葡萄糖產(chǎn)生葡萄糖酸和過氧化氫，葡萄糖的濃度與氧氣降低的濃度 和過氧化氳增加的濃度是成比例的，這樣，通過檢測氧氣的減少和濃度和過氧 化氬增加的濃度可以間接檢測葡萄糖的濃度。葡萄糖傳感器檢測葡萄糖選擇性 高，但同時也存在酶的固定化或電極修飾手續(xù)繁瑣、酶柱或電極使用壽命較短、 天然過氧化物酶價格昂貴、易變性失活、反應(yīng)條件苛刻等問題。
建立一種靈敏度高、選擇性好、操作筒便、快捷的方法很有必要。分光光 度法具有筒便、快速，儀器價廉，易操作等特點(diǎn)而在許多領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。
目前應(yīng)用碘化鉀一辣根過氧化物酶一葡萄糖氧化酶一羅丹明s催化體系分光光
度法測定痕量葡萄糖的方法尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是要提供一種用羅丹明s雙酶催化分光光度法測定葡萄糖的方法。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的在5 mL具塞比色管中，分別加入0. 05 ~ 0. 50mLpH4. 6 的HAc-NaAc緩沖溶液和0. 05 ~ 0. 50 mL 0. 04 mol/L KI溶液，然后加入0. 05 ~ 1. 0 mL 0. 20 jLi g /mL夢束才艮過氧4b物酶，再加入0. 01 ~ 2. 5 mL 1. 01 x l(T4 mol/L 葡萄糖溶液，用二次蒸餾水稀釋至刻度2.5 mL，搖勻，放置2 60分鐘，然后 加入0. 10 ~ 0. 60 mL 2. 00 x 10Hmol/L羅丹明S溶液，用二次蒸餾水定容至4. 0 mL,搖勻，靜置10分鐘。于紫外可見分光光度計(jì)上，在波長526 nm處測定吸 光度值A(chǔ)";以不加葡萄糖，做試劑空白A,計(jì)算^//526咖=力。-42" 值。另取 葡萄糖注射液適量，同法測定吸光度值，可計(jì)算出注射液中葡萄糖的含量。
本發(fā)明測定方法靈敏度高、簡便、快捷，儀器價廉，易操作。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例葡萄糖的吸收光譜圖。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例
在5 mL具塞比色管中，分別加入0. 15 mL pH4, 6的HAc-NaAc緩沖溶液和 0. 35 mL 0. 04 mol/L KI溶液，然后加入0. 60 mL 0. 20 ju g /mL辣根過氧化物酶， 再加入O. 01、 0.05、 0.10、 0.20、 0.30、 0. 35 mL 1. 01 x 10-4mol/L葡萄糖溶液, 用二次蒸餾水稀釋至刻度2. 5 mL，搖勻，i史置30分鐘，然后加入0. 35 mL 2. 00 x10—、01/L羅丹明S溶液，用二次蒸餾水定容至4. 0mL，搖勻，靜置10分鐘。 于紫外可見分光光度計(jì)上，在波長526腿處測定吸光度值力526皿；以不加葡萄糖，
做試劑空白A，計(jì)算A爲(wèi)26咖=^"m值，其吸光度值力526咖與葡萄糖濃度的線
性回歸方程為A兌26咖=0.0152C- 0.003。另取葡萄糖注射液適量，加水稀釋， 取適量，同法測定吸光度值，代入上述線性回歸方程，可計(jì)算出注射液中葡萄 糖的含量為50. 73 mg/mL。
測定葡萄糖的吸收光譜圖見圖1。
權(quán)利要求
1.一種用羅丹明S雙酶催化分光光度法測定葡萄糖的方法，其特征在于具體步驟為在5mL具塞比色管中，分別加入0.05～0.50mL pH4.6的HAc-NaAc緩沖溶液和0.05～0.50mL 0.04mol/L KI溶液，然后加入0.05～1.0mL 0.20μg/mL辣根過氧化物酶，再加入0.01～2.5mL 1.01×10-4mol/L葡萄糖溶液，用二次蒸餾水稀釋至刻度2.5mL，搖勻，放置2～60分鐘，然后加入0.10～0.60mL 2.00×10-4mol/L羅丹明S溶液，用二次蒸餾水定容至4.0mL，搖勻，靜置10分鐘；于紫外可見分光光度計(jì)上，在波長526nm處測定吸光度值A(chǔ)526nm；以不加葡萄糖，做試劑空白A0，計(jì)算ΔA526nm＝A0-A526nm值；另取葡萄糖注射液適量，同法測定吸光度值，計(jì)算出注射液中葡萄糖的含量。
全文摘要
本發(fā)明公開了用羅丹明S雙酶催化分光光度法測定葡萄糖的方法。在5mL具塞比色管中，分別加入0.05～0.50mL pH4.6的HAc-NaAc緩沖溶液和0.05～0.50mL0.04mol/L KI溶液，然后加入0.05～1.0mL 0.20μg/mL辣根過氧化物酶，再加入0.01～2.5mL 1.01×10-4mol/L葡萄糖溶液，用二次蒸餾水稀釋至刻度2.5mL，搖勻，放置2～60分鐘，然后加入0.10～0.60mL 2.00×10-4mol/L羅丹明S溶液，用二次蒸餾水定容至4.0mL，搖勻，靜置10分鐘；于紫外可見分光光度計(jì)上，在波長526nm處測定吸光度值A(chǔ)_526nm；以不加葡萄糖，做試劑空白A₀，計(jì)算ΔA_526nm＝A₀-A_526nm值；另取葡萄糖注射液適量，同法測定吸光度值，可計(jì)算出注射液中葡萄糖的含量。本發(fā)明測定靈敏度高、操作簡便、儀器價廉。
文檔編號G01N33/50GK101320034SQ20081007367
公開日2008年12月10日 申請日期2008年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月7日
發(fā)明者梁月園, 湯亞芳, 蔣治良, 勇 黃 申請人:桂林工學(xué)院