專利名稱::鱗狀細(xì)胞癌抗原化學(xué)發(fā)光免疫分析定量測(cè)定試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域:
:本發(fā)明涉及免疫分析醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,具體地,本發(fā)明提供了一種鱗狀細(xì)胞癌抗原化學(xué)發(fā)光免疫分析定量測(cè)定試劑盒及其制備方法。
背景技術(shù):
:鱗狀細(xì)胞癌抗原(scc)是一種特異性很好而且是最早用于診斷鱗癌的腫瘤標(biāo)志物。它最初從宮頸癌組織中分離獲得,就生物活性而言屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑家族,它包括兩個(gè)基因SCC1和SCC2。SCC廣泛存在于不同器官的正常組織中(含量極微)和惡性病變的上皮細(xì)胞中。在血清中至少有四種形式的SCC:游離SCC1、游離SCC2、以及與相對(duì)應(yīng)的絲氨酸蛋白酶結(jié)合物。SCC在正常的鱗狀上皮細(xì)胞中抑制細(xì)胞調(diào)亡和參與鱗狀上皮層的分化,在腫瘤細(xì)胞中參與腫瘤的生長(zhǎng),它有助于所有鱗狀上皮細(xì)胞起源癌的診斷和監(jiān)測(cè),例如子宮頸癌、肺癌(非小細(xì)胞肺癌)、頭頸部癌、食管癌以及外陰部鱗狀細(xì)胞癌等。檢測(cè)總SCC,其臨床意義有1.對(duì)子宮頸癌有較高的診斷價(jià)值對(duì)原發(fā)性宮頸鱗癌敏感性為44%-69%;復(fù)發(fā)癌敏感性為67%-100%,特異性90%-96%;其血清學(xué)水平與腫瘤發(fā)展、侵犯程度及有否轉(zhuǎn)移相關(guān)。在宮頸癌根治術(shù)后SCC濃度顯著下降;可及早提示復(fù)發(fā),50%患者的SCC濃度升高先于臨床診斷復(fù)發(fā)2-5個(gè)月,它可以作為獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因子加以應(yīng)用。2.輔助診斷肺鱗癌其水平與腫瘤的進(jìn)展程度相關(guān),它配合CA125、CYFRA21-1,.和CEA聯(lián)合檢測(cè)可提高肺癌患者診斷的靈敏性。3.食管鱗癌的預(yù)測(cè)陽(yáng)性率隨病情發(fā)展而上升,對(duì)于晚期患者,其靈敏性可達(dá)73%,聯(lián)合檢測(cè)CYFRA21-1和SCC可以提高檢測(cè)的靈敏性。4.其它鱗癌的診斷和監(jiān)測(cè)頭頸癌、外陰癌、膀胱癌、肛管癌、皮膚癌等。對(duì)于SCC的定量分析,目前常用的方法是酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA),但由于酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)檢測(cè)靈敏度不夠高,檢測(cè)范圍窄,影響因素較多,易造成假陰性和假陽(yáng)性等缺點(diǎn),因此不能滿足臨床的要求。本發(fā)明"鱗狀細(xì)胞癌抗原化學(xué)發(fā)光免疫分析定量測(cè)定試劑盒"可以檢測(cè)出患有子宮頸癌、肺癌(非小細(xì)胞肺癌)、食管癌以及頭頸癌等人體內(nèi)的鱗狀細(xì)胞癌抗原含量,并且根據(jù)所含鱗狀細(xì)胞癌抗原含量的多少來(lái)判斷治療的效果及其病情的變化。它具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒,酶標(biāo)記的抗體與固相載體上包被的抗體與被測(cè)樣品中的鱗狀細(xì)胞癌抗原形成"包被抗體-抗原-抗體-酶"的夾心復(fù)合物結(jié)構(gòu),因此本發(fā)明采用的"雙抗體夾心一步法"反應(yīng)模式,既有效地利用了化學(xué)發(fā)光技術(shù)原理,又在酶聯(lián)免疫分析的基礎(chǔ)上應(yīng)用酶催化發(fā)光底物,通過檢測(cè)發(fā)光底物產(chǎn)生的光信號(hào)代替酶聯(lián)免疫分析中的顯色底物,因而具有與酶聯(lián)免疫分析同等的特異性,而靈敏度卻大大提高,可為臨床診斷提供更為特異、快速、可靠的依據(jù)。
發(fā)明內(nèi)容為了解決上述問題因此開發(fā)和完成了本發(fā)明,即將化學(xué)發(fā)光技術(shù)與scc的免疫分析學(xué)有效地結(jié)合,同時(shí)使用了發(fā)光信號(hào)強(qiáng)、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、更高信噪比的自制化學(xué)發(fā)光底物液,提供了一種能夠更加簡(jiǎn)便、快速、靈敏、穩(wěn)定地檢測(cè)scc的試劑盒。同時(shí)本發(fā)明的試劑盒采用的方法比酶免疫分析法靈敏度高,減少了假陽(yáng)性和假陰性的出現(xiàn),并且可以縮短檢測(cè)窗口期,因此使本試劑盒更適于在產(chǎn)業(yè)上有效地進(jìn)行推廣和應(yīng)用。本發(fā)明的目的是提供一種鱗狀細(xì)胞癌抗原化學(xué)發(fā)光免疫分析定量測(cè)定試劑根據(jù)本發(fā)明的鱗狀細(xì)胞癌抗原化學(xué)發(fā)光免疫分析定量測(cè)定試劑盒包括1)鱗狀細(xì)胞癌抗原校準(zhǔn)品;2)鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體包被的固相載體;3)酶標(biāo)記的鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體;4)上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物液;以及5)濃縮洗滌液。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒,其中,所述固相載體為微孔板、塑料管或塑料珠。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒,其中,所述標(biāo)記酶為堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶。優(yōu)選地,上述試劑盒中,所述化學(xué)發(fā)光底物為1,2-二氧乙垸類衍生物、魯米諾或異魯米諾;所述1,2-二氧乙烷類衍生物為(金剛烷)-1,2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基-l,2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。優(yōu)先地,上述試劑盒中,所述的濃縮洗滌液為Tris-HCl洗滌液或PBST洗液。本發(fā)明的再一目的是提供一種制備上述試劑盒的方法。制備上述試劑盒的方法,包括以下步驟1)配制鱗狀細(xì)胞癌抗原校準(zhǔn)品;2)以鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體包被固相載體;3)以酶標(biāo)記鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體;4)配制上述酶所作用的發(fā)光底物液;5)配制濃縮洗滌液;6)分裝上述鱗狀細(xì)胞癌抗原校準(zhǔn)品、酶標(biāo)記的鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體、上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物液和濃縮洗滌液;以及7)組裝為成品。根據(jù)本發(fā)明的方法,所述包被固相載體的步驟2)包括以下步驟I)包被采用0.05mol/LpH值為7.2的硼酸鹽緩沖液與適當(dāng)濃度的鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體混合制成包被液,并將其負(fù)載于固相載體上;II)封閉配制ly。BSA封閉液,然后將所得封閉液負(fù)載于上述洗滌后的固相載體上。其中堿性磷酸酶標(biāo)記鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體,采用戊二醛交聯(lián)法進(jìn)行標(biāo)記;辣根過氧化物酶標(biāo)記鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體,采用過碘酸鈉法進(jìn)行標(biāo)記。所述鱗狀細(xì)胞癌抗原校準(zhǔn)品為標(biāo)準(zhǔn)級(jí),純度不得低于80%,包被的微孔板為48或96孔的微孔板條。標(biāo)記抗體的酶為偶聯(lián)堿性磷酸酶(ALP),采用的化學(xué)發(fā)光底物液和濃縮洗滌液分別為AMPPD與Tris-HC1或標(biāo)記抗體的酶為辣根過氧化物酶(HRP),所用的化學(xué)發(fā)光底物液和濃縮洗滌液分別為魯米諾和PBST。圖1為實(shí)施例1所制備的試劑盒中的校準(zhǔn)品線性圖圖2為本發(fā)明的試劑盒同酶免試劑盒進(jìn)行臨床血樣測(cè)值的對(duì)比具體實(shí)施例方式實(shí)施例1應(yīng)用堿性磷酸酶系統(tǒng)制備本發(fā)明的鱗狀細(xì)胞癌抗原化學(xué)發(fā)光免疫分析定量測(cè)定試劑盒首先對(duì)所用的原材料進(jìn)行了篩選試驗(yàn)和質(zhì)量鑒定,以保證試驗(yàn)的精確性,然后對(duì)包被方法進(jìn)行了研究,選擇出最適合的包被緩沖液和封閉液,找到最佳的濃度條件,并且優(yōu)先配制出了能夠使酶標(biāo)記物長(zhǎng)期保持活性的酶標(biāo)記物稀釋液。一、堿性磷酸酶標(biāo)記抗體的制備采用經(jīng)典的戊二醛交聯(lián)法與堿性磷酸酶偶聯(lián),對(duì)PBS充分透析,加入等體積的甘油,在低溫冰箱(-20°C)中保存。使用時(shí)用酶標(biāo)記物稀釋液稀釋。經(jīng)試驗(yàn)證明,酶標(biāo)抗體的工作濃度范圍為1:30005000。具體地,酶標(biāo)記物稀釋液配制方法為Tris12.120gBSA5gProclin-300lmL雙蒸水lOOOmL溶解混勻后,加入HC1,調(diào)整pH值至7.5。二、鱗狀細(xì)胞癌抗原校準(zhǔn)品的制備以小牛血清或蛋白緩沖液為基質(zhì),加入鱗狀細(xì)胞癌抗原純品配制而成。制備的最終系列濃度為O、2、10、25、50、150ng/mL。三、抗體包被的固相載體的制備。(1)包被采用0.05mol/LpH值為7.2的硼酸鹽緩沖液與適當(dāng)濃度的鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體混合制成包被液,并將其負(fù)載于微孔板上;具體地,所述0.05mol/L硼酸鹽緩沖液的配方為-NaH2P04'2H200.495gNa2HP04.12H202.58gNaCl5.8g去離子水lOOOmL溶解混勻后,調(diào)整pH值至9.6,加入5.0mg鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體混勻,按110yL/孔的量加入微孔板中,4'C過夜。(2)封閉封閉液的配方為NaH2P04.2H200.2gNa2HP04'12H202.9gBSA10gProclin300lmL雙蒸水定容至lOOOmL將上述試劑稱量好放入潔凈容器中,加雙蒸水定容,溶解混勻,調(diào)整pH值為7.07.6。按20(VL/孔的量加入微孔板中,室溫放置3小時(shí)。甩掉封閉液,在吸水紙上拍干。室溫除濕干燥24小時(shí)后立即進(jìn)行封袋。置于28'C保存,備用。四、化學(xué)發(fā)光底物本發(fā)明所使用的堿性磷酸酶(ALP)的化學(xué)發(fā)光底物液的配制方法Tris24gNaCl160gKC14gHC115mL.雙蒸水lOOOmLProclin300lmLAMPPD200mL五、20倍濃縮洗滌液的制備配方Tris24gNaCl160gKC14gHC115mL去離子水lOOOraL調(diào)整pH值至7.4。六、半成品及成品組成上述步驟所得產(chǎn)品分裝即為半成品。隨機(jī)抽取三份經(jīng)過特異性、精密性、靈敏度及穩(wěn)定性檢定合格后組裝成SCC化學(xué)發(fā)光免疫分析定量測(cè)定試劑盒。利用本發(fā)明的試劑盒進(jìn)行檢測(cè),靈敏度高,特異性強(qiáng),檢測(cè)范圍寬,操作簡(jiǎn)單,無(wú)放射性污染,試劑盒成本低,臨床適用性強(qiáng),更適用于我國(guó)在臨床上的檢測(cè)與應(yīng)用。實(shí)施例2應(yīng)用辣根過氧化物酶系統(tǒng)制備本發(fā)明的鱗狀細(xì)胞癌抗原化學(xué)發(fā)光免疫分析定量測(cè)定試劑盒一、辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體的制備溶解4.4mgHRP于lmL蒸餾水中,加入0.4mL過碘酸鈉(50mmol/L)室溫?cái)嚢?0min,經(jīng)lmmol/L醋酸鈉緩沖液,pH值為4.4透析后加入8mg鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體,攪拌2h,最后用200mmol/LNaBH4進(jìn)行還原,經(jīng)0.02MPBS緩沖液透析后,加等體積甘油,一20'C以下保存。二、化學(xué)發(fā)光底物的制備化學(xué)發(fā)光底物A液魯米諾4-羥基聯(lián)苯4-碘苯硼酸10mM0.3mM0.05mM硼砂雙蒸水定溶調(diào)整pH至8.010.0化學(xué)發(fā)光底物B液過氧化脲3.5mMI.7716g0.051g0.012gII.4g4.9g1000mLTween200.1%Na2HP0412H20NaH2P042H20雙蒸水調(diào)整pH至7.07.6使用時(shí)A液與B液等比例混合。三、20倍濃縮洗滌液的制備配方Na2訓(xùn)412H2058gNaH2P042H202gNaCl160gTween-20lmLProclin300lmL去離子水1000mL調(diào)整pH至7.27.40.329glml51.58g8.74g1000mL其他試劑與組分的配制方法與堿性磷酸酶系統(tǒng)制備鱗狀細(xì)胞癌抗原化學(xué)發(fā)光免疫分析定量試劑盒的方法一致。實(shí)施例23制備本發(fā)明的鱗狀細(xì)胞癌抗原化學(xué)發(fā)光免疫分析定量測(cè)定試劑除分別以塑料管、塑料珠作為載體外,其余均以與實(shí)施例1相同的方法制備本發(fā)明的定量測(cè)定試劑盒。實(shí)施例4本發(fā)明的試劑盒的使用方法使用本試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前,需先取出固相載體、校準(zhǔn)品/檢測(cè)樣品、標(biāo)記抗體溶液在室溫放置1530分鐘,使它們平衡到室溫;之后,準(zhǔn)備好合適的微量加樣器及對(duì)應(yīng)吸頭并且檢査化學(xué)發(fā)光儀以及輔助儀器,如洗板機(jī)等,是否正常工作。使用本試劑盒按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的具體操作步驟如下1)將實(shí)驗(yàn)需要的微孔板放置在板架上;2)反應(yīng)孔中分別加各濃度校準(zhǔn)品0、2、10、25、50、150ng/mL和待測(cè)樣品每孔各加25ixL,每次試驗(yàn)設(shè)空白1L,然后除空白孔外各孔加酶標(biāo)記抗體溶液100";3)微量振蕩器上振蕩30秒混勻;4)用封板膜封板,室溫(2027°C)溫育60min;5)用洗液棄去孔中溶液,自動(dòng)洗板機(jī)或者手工洗板5次,在吸水紙上拍干;6)每孔加發(fā)光底物液100yL,用微量震蕩器充分震蕩均勻,室溫(2027'C)避光反應(yīng)1030min。7)在化學(xué)發(fā)光測(cè)量?jī)x上依序測(cè)量各孔的發(fā)光強(qiáng)度(RLU),測(cè)量時(shí)間1秒/孔;8)分別讀取校準(zhǔn)品濃度值和其相對(duì)應(yīng)的RLU值,在建立的雙對(duì)數(shù)曲線上建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(參見附圖1);9)打印檢測(cè)結(jié)果報(bào)告。實(shí)施例5本發(fā)明的試劑盒在方法學(xué)上的鑒定按照本領(lǐng)域中常規(guī)的制造及檢定規(guī)程對(duì)實(shí)施例1中制備的試劑盒進(jìn)行鑒定,經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)證明,本發(fā)明試劑盒方法學(xué)指標(biāo)如下1)檢測(cè)范圍O.3200ng/mL;2)最低檢出量平行測(cè)定20孔零值校準(zhǔn)品血清,計(jì)算零值校準(zhǔn)品RLU平均值(X)及標(biāo)準(zhǔn)差(S),以X+2S為定值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中,求出其對(duì)應(yīng)的濃度值,所對(duì)應(yīng)的濃度值即為最低檢出量為0.3ng/mL。3)精密度:測(cè)定SCC質(zhì)控血清的濃度,重復(fù)檢測(cè)3次,每次重復(fù)20孔,進(jìn)行精密度測(cè)定,計(jì)算分析內(nèi)精密度(高、中、低三個(gè)質(zhì)量控制范圍)為6.7%,,分析間精密度(高、中、低三個(gè)質(zhì)量控制范圍)為7.7%;4)準(zhǔn)確性分別進(jìn)行低中高三個(gè)濃度血清(濃度分別5ng/mL、20ng/mL和50ng/mL)的回收實(shí)驗(yàn),其平均分別為101%、110%和96%;5)特異性:分別測(cè)定與CEA、CA125、AFP等常見腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行交叉反應(yīng),其交叉反應(yīng)率分別為0.04%,0.06%,0.05%均小于0.1%;6)穩(wěn)定性:各試劑組分別置于37'C烘箱中3天、7天和15天,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)各組分仍穩(wěn)定。利用本發(fā)明方法進(jìn)行檢測(cè),靈敏度高,特異性強(qiáng),檢測(cè)范圍寬,操作簡(jiǎn)單,無(wú)放射性污染,試劑盒成本低,臨床適用性強(qiáng),更適用于我國(guó)臨床檢測(cè)。因此本發(fā)明為臨床檢測(cè)鱗狀細(xì)胞癌抗原(SCC),輔助診斷以及手術(shù)后觀察提供了一種更準(zhǔn)確,特異,方便,快捷的方法。實(shí)施例6使用本發(fā)明的試劑盒同酶免試劑盒進(jìn)行臨床血樣測(cè)值對(duì)比取用醫(yī)院臨床收集腫瘤病人血清標(biāo)本150份,其中原發(fā)性宮頸癌患者52例,復(fù)發(fā)性宮頸癌患者32例,肺癌患者43例,頭頸癌患者8例,食道癌患者15例,正常人血清標(biāo)本200份。分別使用本發(fā)明實(shí)施例1的試劑盒和酶免診斷試劑盒進(jìn)行血樣檢測(cè),統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果并進(jìn)行相關(guān)分析,這兩種方法高度相關(guān)。本發(fā)明試劑盒與酶免試劑盒的臨床實(shí)驗(yàn)比對(duì),實(shí)驗(yàn)結(jié)果見下表1:表1本發(fā)明試劑盒與酶免試劑盒的臨床實(shí)驗(yàn)比對(duì)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>其中200份正常人血樣的SCC平均值為2.82ng/mL,正常參考值為小于5ng/mL。經(jīng)試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)SCC對(duì)子宮頸癌是一個(gè)較敏感的診斷指標(biāo)、對(duì)肺癌等其他癌癥則具有輔助診斷的作用。同時(shí)通過比較發(fā)現(xiàn)本法與酶免試齊i檢檢測(cè)結(jié)果較接近,其相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.9708。但本發(fā)明試劑盒檢出陽(yáng)性血清的檢出率為62.7%高于酶免試劑盒的59.3%,表明本試劑盒明顯優(yōu)于酶聯(lián)免疫試劑盒。權(quán)利要求1、鱗狀細(xì)胞癌抗原化學(xué)發(fā)光免疫分析定量測(cè)定試劑盒,其特征在于,所述試劑盒包括鱗狀細(xì)胞癌抗原校準(zhǔn)品、鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體包被的固相載體、酶標(biāo)記的鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體、化學(xué)發(fā)光底物液;以及濃縮洗滌液。2、如權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述校準(zhǔn)品系列是以小牛血清或蛋白緩沖液為基質(zhì),加入鱗狀細(xì)胞癌抗原純品配制而成;包被鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體的固相載體為包被的微孔板、塑料珠或塑料管;所述酶為堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶。3、如權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述化學(xué)發(fā)光底物液為1,2_二氧乙烷類衍生物、魯米諾或異魯米諾。4、如權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述濃縮洗滌液為Tris-HC1洗滌液或PBST洗滌液。5、如權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于,所述酶標(biāo)記物的工作濃度為1:30005000。6、如權(quán)利要求3所述的試劑盒,其特征在于,所述l,2-二氧乙烷類衍生物為(金剛烷)-1,2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基-1,2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。7、一種制備權(quán)利要求1所述試劑盒的方法,其特征在于包括以下步驟1)配制鱗狀細(xì)胞癌抗原校準(zhǔn)品;2)以鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體包被固相載體;3)以酶標(biāo)記鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體;4)配制上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物液;5)配制濃縮洗滌液;6)分裝上述鱗狀細(xì)胞癌抗原校準(zhǔn)品、酶標(biāo)記的鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體、上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物液和濃縮洗滌液;以及7)組裝為成品。8、如權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于,所述包被固相載體的步驟2)包括以下步驟I)包被采用0.05mol/LpH值為7.2的硼酸鹽緩沖液與適當(dāng)濃度的鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體混合制成包被液,并將其負(fù)載于固相載體上;II)封閉配制ly。BSA封閉液,然后將所得封閉液負(fù)載于上述洗滌后的固相載體上。9、如權(quán)利要求7或8所述的方法,其特征在于,所述固相載體為微孔板、塑料珠或塑料管。10、如權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于,所述化學(xué)發(fā)光底物液為1,2-二氧乙垸類衍生物、魯米諾或異魯米諾;所述濃縮洗滌液為Tris-HCl洗滌液或PBST洗漆液。全文摘要本發(fā)明提供了一種鱗狀細(xì)胞癌抗原化學(xué)發(fā)光免疫分析定量測(cè)定試劑盒,涉及免疫分析醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明試劑盒主要由鱗狀細(xì)胞癌抗原校準(zhǔn)品、鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體包被的固相載體、酶標(biāo)記的鱗狀細(xì)胞癌抗原抗體、化學(xué)發(fā)光底物液、以及濃縮洗滌液組成。所述試劑盒的制備方法,主要包括以下步驟固相載體的包被,校準(zhǔn)品、酶標(biāo)記物的制備,化學(xué)發(fā)光底物液和濃縮洗滌液的配制。采用本試劑盒及其制備方法,可提高檢測(cè)的靈敏度、線性范圍和定量的準(zhǔn)確性,使用方便,安全穩(wěn)定。文檔編號(hào)G01N33/574GK101377497SQ20081010266公開日2009年3月4日申請(qǐng)日期2008年3月25日優(yōu)先權(quán)日2008年3月25日發(fā)明者超任,唐寶軍,宋勝利,應(yīng)希堂,胡國(guó)茂,鄭金來(lái)申請(qǐng)人:北京科美東雅生物技術(shù)有限公司