專利名稱：一種hplc法分析分離鹽酸依伐布雷定中間體光學異構體的方法
技術領域：
本發(fā)明屬涉及一種高效液相色譜法，尤其是一種分析分離鹽酸依伐布雷定中 間體及其光學異構體的高效液相色譜法。
背景技術：
鹽酸依伐布雷定為一種抗心絞痛藥，有良好的抗心絞痛和抗心肌缺血作用， 中間體的分子式為C H15N(VHC1，化學名為(R)- (4,5-二甲氧基苯并環(huán)丁烷-1-基)甲胺鹽酸鹽，結構式為
NH7 HCI
該分子中含1個手性碳原子，在通過定向合成目標化合物鹽酸依伐布雷定的過程 中需要控制其光學異構體的含量。
對于鹽酸依伐布雷定中間體的光學異構體雜質(zhì)，在藥物合成過程當中是需要 進行質(zhì)量控制的。含手性碳原子的光學異構體的分離一直是手性藥物合成和制劑 過程中質(zhì)量控制的難點，實現(xiàn)鹽酸依伐布雷定中間體及其光學異構體的分離在鹽 酸依伐布雷定藥物的合成和制劑過程的質(zhì)量控制方面具有現(xiàn)實意義。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種分析分離鹽酸依伐布雷定中間體及其光學異構 體雜質(zhì)的高效液相色譜方法，從而實現(xiàn)鹽酸依伐布雷定中間體與其光學異構體雜 質(zhì)的分離測定。
申請人發(fā)現(xiàn)，以纖維素類手性柱，以加入一定比例胺的正相混合溶劑為流動 相低溫條件下，可以將鹽酸依伐布雷定中間體及其光學異構體進行有效分離，從 而可以準確控制鹽酸依伐布雷定中間體的質(zhì)量。本發(fā)明的方法能簡單、快速、準確地分析分離鹽酸依伐布雷定中問體及其光學異構體雜質(zhì)。
進一步地，選用纖維素類手性柱OJ-H (Daicel， 250mmx4.6mm' 5pm)，可 以獲得更好的分析分離效果。OJ-H (Daicel， 250mmx4.6mm， 5pm)纖維素類手
性柱是以對甲苯基甲酸酯鍵合纖維素為填料。
進--歩地，本發(fā)明的正相溶劑選用正己烷和無水乙醇的混合溶劑。
本發(fā)明時方法中的流動相選用體積比為50 :50~90 : io正己烷和異丙醇的
混合溶劑。
本發(fā)明的方法中的流動相中的胺選用二乙胺。 本發(fā)明所述的分析分離方法，可按照以下方法實現(xiàn)
(1) 取鹽酸依伐布雷定樣品適量，用無水乙醇溶解樣品，配制成每lml含鹽 酸依伐布雷定0.1mg 0.5mg的樣品溶液。
(2) 設置流動相流速為0.4 1.2ml/min，最佳檢測波長為288nm，色譜柱柱 溫的最佳溫度為室溫。
(3) 取(l)的樣品溶液2-50pl注入液相色譜儀，完成鹽酸依伐布雷定中間體 及其光學異構體的分析與分離。
其中
高效液相色譜儀島津lC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCl-10Avp， DGU-12A; 色譜柱OJ-H (Daicel， 4.6mmx250mm， 5pm)纖維素手性色譜柱；
流動相正己烷-異丙醇-二乙胺=80 : 20 : 0.2;
檢測波長288nm; 流速1.0ml/min; 進樣體積1(^1。
本發(fā)明采用纖維素類OJ-H (Daicel， 4.6mmx250mm， 5nm)手性色譜柱， 能夠有效的分析分離鹽酸依伐布雷定及其光學異構體(雜質(zhì))；選擇流動相溶解 樣品，確保了溶液的穩(wěn)定性；選擇進樣體積10nl，柱溫為室溫，提高了色譜峰的 對稱性。本發(fā)明解決了含鹽酸依伐布雷定中間體及其光學異構體的原料及制劑的 分析與分離問題，從而確保了鹽酸依伐布雷定中間體及其制劑的質(zhì)量可控。
圖1實施例1，正己烷-異丙醇-二乙胺=70 : 30 : 0.2的HPLC圖；圖2實施例2，正己烷-異丙醇乙胺=80 : 20 : o.i的hplc圖;
圖3實施例3，正己垸-異丙醇-二乙胺=90 : 10 : 0.1的HPLC圖; 圖4實施例4，正己垸-異丙醇-二乙胺=50 : 50 : 0.2的HPLC圖。
具體實施例方式
-實施例1
儀器與條件
高效液相色譜儀島津lC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCl-10Avp， DGU-12A; 色譜柱OJ-H (Daicel， 4.6mmx250mm， 5nm);
流動相正己垸-異丙醇-二乙胺=70 :30 : 0.2;
流速1.0ml/min; 檢測波長288ran;
進樣體積10nl。
實驗步驟
分別稱取鹽酸依伐布雷定中間體及其光學異構體各5mg，置于25ml容量瓶 中，加無水乙醇溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。并分別稱取鹽酸 依伐布雷定中間體及其光學異構體各5mg，分別置于2個25ml容量瓶中，加無
水乙醇溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖l，圖中1號峰為鹽酸依伐布雷定中間體，2號峰為異構 體，可以看出在該條件下鹽酸依伐布雷定中間體主峰可以和異構體完全分離開 來，且鹽酸依伐布雷定中間體主峰在8.3min左右。
實施例2
儀器與條件
高效液相色譜儀島津lC-10ATvp， SPD-M10Avp， SCl-10Avp， DGU-12A;
色譜柱OJ-H (Daicel， 4.6mmx250mm， 5pm);
流動相正己垸-異丙醇-二乙胺=80 : 20 : o.i;
流速1.0ml/min; 檢測波長288nm;
進樣體積1(^1。實驗歩驟
分別稱取鹽酸依伐布雷定中間體及其光學異構體各5mg，置于25ml容量瓶 中，加無水乙醇溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。并分別稱取鹽酸 依伐布雷定中間體及其光學異構體各5mg，分別置于2個25ml容量瓶中，加無 水乙醇溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖l，圖中1號峰為鹽酸依伐布雷定中間體，2號峰為異構 體，可以看出在該條件下鹽酸依伐布雷定主峰可以和異構體完全分離開來，且鹽 酸依伐布雷定中間體主峰在11.2min左右。
實施例3
儀器與條件
高效液相色譜儀島津lC-10ATvp， SPD-M10A甲，SCl-10Avp， DGU-12A; 色譜柱OJ陽H (Daicel, 4.6腿x250mm， 5pm);
流動相正己烷-異丙醇-二乙胺=90 : io : o.i;
流速1.0ml/min; 檢測波長288nm;
進樣體積10^1。
實驗步驟
分別稱取鹽酸依伐布雷定中間體及其光學異構體各5mg，置于25ml容量瓶 中，加無水乙醇溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。并分別稱取鹽酸 依伐布雷定中間體及其光學異構體各5mg，分別置于2個25ml容量瓶中，加無 水乙醇溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖l，圖中1號峰為鹽酸依伐布雷定中間體，2號峰為異構 體，可以看出在該條件下鹽酸依伐布雷定主峰可以和異構體完全分離開來，且鹽 酸依伐布雷定中間體主峰在21.7min左右。
實施例4
儀器與條件
高效液相色譜儀島津lC-10ATvp， SPD-M10Av; ， SCl-10Avp， DGU-12A;色譜柱OJ-H (Daicel， 4.6mmx250mm， 5,);
流動相正己垸-異丙醇-二乙胺=50 :50 : 0.2;
流速1.0ml/min; 檢測波長288nm;
進樣體積10^1。
實驗步驟 '
分別稱取鹽酸依伐布雷定中間體及其光學異構體各5mg，置于25ml容量瓶 中，加無水乙醇溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。并分別稱取鹽酸 依伐布雷定中間體及其光學異構體各5mg，分別置于2個25ml容量瓶中，加無 水乙醇溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖l，圖中1號峰為鹽酸依伐布雷定中間體，2號峰為異構 體，可以看出在該條件下鹽酸依伐布雷定主峰可以和異構體完全分離開來，且鹽 酸依伐布雷定中間體主峰在6.3min左右。
權利要求
1.一種高效液相色譜法分析分離鹽酸依伐布雷定中間體及其光學異構體的方法，其特征在于采用以纖維素類手性柱，以加入一定比例胺的正相混合溶劑為流動相，低溫條件下進行分離。
2. 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于所述纖維素類手性柱為OJ-H(Daicel， 250mmx4.6mm， 5jiiA)。
3. 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于采用正相色譜法。
4. 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于所述的正相混合溶劑為正己垸和疫 異丙醇的混合溶劑。
5. 根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于所述的正己垸和異丙醇的體積比例為50 : 50~90 : io。
6. 根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于所述的正己烷和異丙醇的體積最佳 比例為70 : 30。
7. 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于所述的胺為二乙胺。
8. 根據(jù)權利要求6所述的方法，其特征在于所述的二乙胺的加入量為 0.1% 0.5%。
9. 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于包括以下步驟(1) 取鹽酸依伐布雷定中間體樣品適量，用無水乙醇溶解樣品，得到lml含 鹽酸依伐布雷定中間體0.1mg 0.5mg的樣品溶液；(2) 設置流動相流速為0.4 1.2ml/min，檢測波長為288nm，色譜柱柱溫箱 為9 15°C;(3) 取步驟a)的樣品溶液2-50w注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鹽酸依伐布雷定中間體及其光學異構體分析與分離測定方法，采用纖維素類手性柱，以加入一定比例胺的正相混合溶劑為流動相的正相色譜法室溫條件下進行分離，用該方法可以快速的分離分析鹽酸依伐布雷定中間體以及含鹽酸依伐布雷定中間體制劑的光學異構體雜質(zhì)。
文檔編號G01N30/00GK101609071SQ20081011509
公開日2009年12月23日 申請日期2008年6月16日 優(yōu)先權日2008年6月16日
發(fā)明者牟淑慧 申請人:北京德眾萬全藥物技術開發(fā)有限公司