專利名稱：一種中藥凍干注射劑中有機(jī)溶劑殘留的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥凍干注射劑中有機(jī)溶劑殘留的測(cè)定方法，屬于藥物制劑分析技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
中藥凍干注射劑在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)上，要求控制的項(xiàng)目比較多，其中，對(duì)于藥物分離過(guò)程中使用了大孔吸附樹脂，根據(jù)藥品研發(fā)指導(dǎo)原則的要求需要對(duì)藥物的有機(jī)溶劑殘留進(jìn)行檢測(cè)控制，這對(duì)于藥物的安全性至關(guān)重要。CN1785223A公開了一種治療肌肉萎縮及重癥肌無(wú)力的藥物及其制備方法，該專利公開了該藥物的組方、制劑以及膠囊、片劑等制備方法；該專利還公開了該藥物的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，證實(shí)該藥物具有增強(qiáng)正常運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元活力，促進(jìn)神經(jīng)突起生長(zhǎng)，又能保護(hù)興奮性氨基酸毒性損傷運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，減少細(xì)胞凋亡，在維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能，延緩病情發(fā)展，提高患者生存質(zhì)量方面具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值；該專利還公開了其中人參提取物的制備方法，“取人參藥材，用60-90%乙醇提取1-3次，第1次加藥材8-12倍量溶劑提取1_2小時(shí)，第2次加6-10倍量溶劑提取1-2小時(shí)，第3次加6-10倍量溶劑提取0. 5-1小時(shí)；合并上述提取液， 趁熱濾過(guò)，減壓回收乙醇，并濃縮，放入不銹鋼桶內(nèi)，加純水?dāng)嚢杈鶆?，冷藏?duì)-3他；將冷藏液取出，放至常溫，板框過(guò)濾器過(guò)濾，用少量水洗滌板框，濾液加純水稀釋，備用；取人參濃縮藥液通過(guò)處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，并分別用pH值8-9的氨水、20%乙醇、80% 乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液。將80%洗脫液加入純水，配成50%醇溶液，通過(guò)中性氧化鋁柱，收集洗脫液，再用少量50%乙醇洗滌柱子，合并洗脫液備用；取藥液加入活性炭， 回流加熱，煮沸20min，趁熱板框抽濾，收集濾液，濃縮，冷藏過(guò)夜；澄清板過(guò)濾，減壓干燥， 即得人參提取物?！痹撊藚⑻崛∥锛礊槿藚⒖傇碥仗崛∥铮辉搶＠€公開了淫羊藿提取物的提取方法，“取淫羊藿藥材，加水煎煮提取2-5次，加水量為10-30倍，第一次提取時(shí)間定為 0. 5-2h，以后3次為0. 5-lh ；合并上述提取液，趁熱濾過(guò)，減壓濃縮，放入不銹鋼桶內(nèi)，加乙醇至藥液含醇濃度為70%，冷藏；過(guò)濾，濾液回收乙醇并濃縮，加水?dāng)嚢杈鶆?，冷藏，過(guò)濾， 備用；取淫羊藿藥液通過(guò)處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，并分別用純水、20%乙醇、50% 乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液；洗脫液拌入適量硅藻土混勻，用無(wú)水乙醇提取2-5次，提取液合并，回收乙醇并濃縮，濃縮液加入丙酮，并攪拌均勻，冷藏，過(guò)濾，沉淀加丙酮再同前處理2次，合并3次濾液，回收溶劑，并濃縮，減壓干燥，即得淫羊藿提取物。”該淫羊藿提取物即為淫羊藿總黃酮提取物。該專利未公開凍干注射劑制備及其含量測(cè)定方法。由CN1785223A公開的技術(shù)內(nèi)容，可以看出，該中藥組合物分離過(guò)程中使用了大孔吸附樹脂，因此有必要對(duì)其制備的制劑-凍干注射劑進(jìn)行有機(jī)溶劑殘留的檢測(cè)。本專利申請(qǐng)即是在CN1785223A的基礎(chǔ)上做了進(jìn)一步的研發(fā)，在研制該中藥組合物的凍干注射劑的基礎(chǔ)上，制定了有機(jī)溶劑殘留的測(cè)定方法
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種中藥凍干注射劑有機(jī)溶劑殘留的測(cè)定方法。本發(fā)明所述中藥凍干注射劑是由如下重量份比例的原料制成人參總皂苷提取物30-70 淫羊藿總黃酮提取物20-60。本發(fā)明采用頂空氣相色譜法，對(duì)該中藥凍干注射劑進(jìn)行有機(jī)溶劑殘留的控制。本發(fā)明測(cè)定方法可以有效的、可靠的對(duì)本發(fā)明所述中藥凍干注射劑進(jìn)行質(zhì)量控制，以確保其安全有效。本發(fā)明測(cè)定方法中，頂空氣相色譜條件條件優(yōu)選如下色譜柱毛細(xì)管柱填料為聚乙二醇-20M，規(guī)格為30πιΧ320μπιΧ0. 25μπι;程序升溫方式為柱溫60°C，保持anin，然后以10°C · mirT1升至80°C，保持5min，再以15°C · mirT1 升至150°C，保持Imin ；FID檢測(cè)器溫度為240°C，進(jìn)樣口溫度為200°C ；載氣為氮?dú)猓魉?l.OmL IirT1 ；分流進(jìn)樣，分流比為10 1 ；頂空進(jìn)樣體積為ImL ；以水為溶劑平衡溫度為 90°C，平衡時(shí)間為20min。本發(fā)明測(cè)定方法中，供試品和對(duì)照品的配制方法如下供試品溶液取權(quán)利要求1所述中藥凍干注射劑0. 4g，精密稱定，置IOmL頂空進(jìn)樣瓶中，精密加水2mL密封瓶口，振搖使溶解，即得；對(duì)照品溶液取正己烷、苯、甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對(duì)二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯適量，精密稱定，分別加N，N- 二甲基甲酰胺制成每mL含苯0. 20mg，正己烷2. 36mg,甲苯、 鄰二甲苯、間二甲苯、對(duì)二甲苯各2. OOmg，苯乙烯2. 50mg，二乙烯苯1. OOmg的溶液，作為各自單獨(dú)的對(duì)照品貯備溶液；分別量取各對(duì)照品貯備溶液苯、甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對(duì)二甲苯各10mL，苯乙烯8mL，正己烷8. 5mL，二乙烯苯20mL混合，加N，N- 二甲基甲酰胺定容到 IOOmL,作為混合對(duì)照品貯備溶液，取混合對(duì)照品貯備液anl，加水稀釋至100ml，作為對(duì)照品溶液。本發(fā)明測(cè)定方法所述中藥凍干注射劑的原料重量比例優(yōu)選為人參總皂苷提取物35 淫羊藿總黃酮提取物55。還優(yōu)選為人參總皂苷提取物65 淫羊藿總黃酮提取物25?；蛘呷藚⒖傇碥仗崛∥?0 淫羊藿總黃酮提取物40。為證實(shí)本發(fā)明方法可行性，發(fā)明人進(jìn)行了如下的驗(yàn)證試驗(yàn)1、樣品制備人參總皂苷提取物50克淫羊藿總黃酮提取物40克制備方法a、將800克羥丙基-β -環(huán)糊精加水4000ml溶解制成20%的溶液，將淫羊藿總黃酮提取物加水750ml (5. 33% )加熱溶解，分次緩慢加入羥丙基- β _環(huán)糊精溶液中，保溫 800C 士 1°C，動(dòng)態(tài)攪拌包合，包合時(shí)間3小時(shí)，將人參總皂苷提取物加水IOOml (50% )加熱溶解，加入包合液中，繼續(xù)包合1小時(shí)；b、加水調(diào)節(jié)溶液總量至6000ml，用10 %的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH到7. 5，加入活性炭M克(即含活性炭0. 4% )，煮沸10分鐘，趁熱用澄清板框過(guò)濾，濾除活性炭，再用 0.22 um微孔濾膜過(guò)濾，用水定容至6000ml ；
c、105°C熱壓滅菌30分鐘，取出，放至常溫，用0. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾，分裝至15ml 西林瓶，每支6ml，半壓塞，置凍干機(jī)中，-40°C預(yù)凍3小時(shí)；d、按照預(yù)凍條件，在真空度為0. 05Pa狀態(tài)下，從_40°C至0°C升溫升華28小時(shí)，再?gòu)?°C至30°C升溫干燥4. 5小時(shí)；e、在升華和干燥的真空狀態(tài)下壓塞，出箱，壓鋁蓋，燈檢，包裝。2、方法學(xué)驗(yàn)證2.1儀器和試劑Agilent 6890N氣相色譜儀(包括FID氫火焰檢測(cè)器，7694E頂空進(jìn)樣器，美國(guó)安捷倫公司)；二乙烯苯(批號(hào)CA1260M00)；苯(批號(hào)C10535000)；鄰二甲苯(批號(hào) C17945000)；間二甲苯(批號(hào):C17945100)；對(duì)二甲苯(批號(hào):C17945200)；苯乙烯(批號(hào) C16982000)；正己燒(批號(hào)C14195500)；以上試劑均為德國(guó) Labor Dr. Ehrensterfer. Gmbh 生產(chǎn)。甲苯(色譜純，天津光復(fù)精細(xì)化工)；N，N-二甲基甲酰胺(分析純，天津大茂化工)。 水為無(wú)有機(jī)物蒸餾水。3方法與結(jié)果3. 1色譜條件色譜柱AT-WAX毛細(xì)管柱聚乙二醇-20M，30mX320ymX0. 25μπι ；程序升溫方式為柱溫60°C，保持anin，然后以10°C · mirT1升至80°C，保持5min，再以15°C · mirT1升至150°C，保持Imin ；FID檢測(cè)器溫度為240°C，進(jìn)樣口溫度為200°C ；載氣為氮?dú)猓魉?l.OmL IirT1 ；分流進(jìn)樣，分流比為10 1 ；頂空進(jìn)樣體積為ImL 以水為溶劑平衡溫度為 90°C，平衡時(shí)間為20min。3. 2溶液的制備3. 2.1對(duì)照品溶液取正己烷、苯、甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對(duì)二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯適量，精密稱定，分別加N，N-二甲基甲酰胺制成每mL含苯0. 20mg，正己烷2. 36mg，甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對(duì)二甲苯各2. OOmg，苯乙烯2. 50mg，二乙烯苯1. OOmg的溶液，作為各自單獨(dú)的對(duì)照品貯備溶液。分別量取各對(duì)照品貯備溶液苯、甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對(duì)二甲苯各10mL， 苯乙烯8mL，正己烷8. 5mL，二乙烯苯20mL混合，加N，N-二甲基甲酰胺定容到IOOmL,作為混合對(duì)照品貯備溶液，取混合對(duì)照品貯備液anl，加水稀釋至100ml，作為對(duì)照品溶液。3. 2. 2供試品溶液取上述制備的本發(fā)明凍干注射劑內(nèi)容物0.4g，精密稱定，置IOmL頂空進(jìn)樣瓶中， 精密加水2mL密封瓶口，振搖使溶解，即得。3. 2. 3空白溶液取按本品制備工藝制備的輔料空白樣品0.4g，置IOmL頂空進(jìn)樣瓶中，精密加水 2mL密封瓶口，振搖使溶解，即得。3. 3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)取“3. 2”項(xiàng)下方法制備的對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白溶液，按“3. 1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖。結(jié)果表明，正己烷、苯、甲苯、對(duì)二甲苯、間二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯各峰與相鄰峰均達(dá)基線分離，分離度大于1.5，按鄰二甲苯峰計(jì)算，理論塔板數(shù)(N)不低于
5100000。3. 4線性關(guān)系分別取上述混合對(duì)照品貯備液0. 8,1. 2,1. 6,2. 0,2. 4mL，加N，N_ 二甲基甲酰胺定容至IOOmL,制成濃度為1. 6,2. 4,3. 2,4. 0、4. 8μ g · mL-1的系列混合對(duì)照品溶液(其中苯為0. 16,0. 24,0. 32,0. 40,0. 48 μ g .mL-l)，分別精密量取2mL置IOmL頂空進(jìn)樣瓶中，密封， 搖勻，按“2. 1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積(A)對(duì)濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，結(jié)果見表1。表1線性關(guān)系考察結(jié)果(n = 5)
權(quán)利要求
1.一種中藥凍干注射劑中有機(jī)溶劑殘留的測(cè)定方法，該中藥凍干注射劑是由30-70重量份的人參總皂苷提取物和20-60重量份的淫羊藿總黃酮提取物制成，其特征在于該方法采用頂空氣相色譜法測(cè)定。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定方法，其特征在于所述頂空氣相色譜法的色譜條件為 色譜柱毛細(xì)管柱填料為聚乙二醇-20M，規(guī)格為30mX 320 μ mX 0. 25 μ m ；程序升溫方式為柱溫60°C，保持anin，然后以10°C · mirT1升至80°C，保持5min，再以15°C · mirT1 升至150°C，保持Imin ；FID檢測(cè)器溫度為240°C，進(jìn)樣口溫度為200°C ；載氣為氮?dú)?，流?l.OmL IirT1 ；分流進(jìn)樣，分流比為10 1 ；頂空進(jìn)樣體積為ImL ；以水為溶劑平衡溫度為 90°C，平衡時(shí)間為20min。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的測(cè)定方法，其特征在于供試品和對(duì)照品的配制方法如下 供試品溶液取權(quán)利要求1所述中藥凍干注射劑0. 4g，精密稱定，置IOmL頂空進(jìn)樣瓶中，精密加水2mL密封瓶口，振搖使溶解，即得；對(duì)照品溶液取正己烷、苯、甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對(duì)二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯適量，精密稱定，分別加N，N- 二甲基甲酰胺制成每mL含苯0. 20mg,正己烷2. 36mg,甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對(duì)二甲苯各2. OOmg，苯乙烯2. 50mg，二乙烯苯1. OOmg的溶液，作為各自單獨(dú)的對(duì)照品貯備溶液；分別量取各對(duì)照品貯備溶液苯、甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對(duì)二甲苯各10mL，苯乙烯8mL，正己烷8. 5mL，二乙烯苯20mL混合，加N，N- 二甲基甲酰胺定容到 IOOmL,作為混合對(duì)照品貯備溶液，取混合對(duì)照品貯備液anl，加水稀釋至100ml，作為對(duì)照品溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的測(cè)定方法，其特征在于所述中藥凍干注射劑原料的重量比例如下人參總皂苷提取物35 淫羊藿總黃酮提取物55。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的測(cè)定方法，其特征在于所述中藥凍干注射劑原料的重量比例如下人參總皂苷提取物65 淫羊藿總黃酮提取物25。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的測(cè)定方法，其特征在于所述中藥凍干注射劑原料的重量比例如下人參總皂苷提取物50 淫羊藿總黃酮提取物40。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種中藥組合物凍干注射劑中有機(jī)溶劑殘留的測(cè)定方法，本發(fā)明中藥凍干注射劑原料包括人參和淫羊藿，臨床用于運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病(肌萎縮側(cè)索硬化癥、進(jìn)行性脊肌萎縮癥、進(jìn)行性延髓麻痹、原發(fā)性側(cè)索硬化癥)、進(jìn)行性肌營(yíng)養(yǎng)不良癥、先天性肌病等疾病所致的肌肉萎縮及重癥肌無(wú)力的治療，本發(fā)明方法采用頂空氣相色譜法測(cè)定其中有機(jī)溶劑的殘留量，可以用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。
文檔編號(hào)G01N30/26GK102288686SQ20101020077
公開日2011年12月21日 申請(qǐng)日期2010年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月17日
發(fā)明者劉興國(guó), 宋劍, 王貴金, 蔡燕, 裴彩云, 賈繼明, 鄭亞杰 申請(qǐng)人:河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司