專利名稱：一種血管緊張素Ⅱ1型受體自身抗體的形態(tài)學檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及自身抗體的檢測方法，具體是一種血管緊張素II ι型受體自身抗體 (ATl-AA)的形態(tài)學檢測方法。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)的免疫組織化學法是用特異性抗體來顯示目標蛋白在組織細胞中的分布及 表達情況，而用形態(tài)學手段來確定一種特異性抗體在機體組織中分布特征的報道甚少。子癇前期是妊娠期特發(fā)的母嬰皆受累的嚴重病癥，病因復雜難明。近年來，患者血 清中ATl-AA的發(fā)現(xiàn)為該病病因及發(fā)病機制的闡明提供了一條新思路。該自身抗體具有ATl 受體類激動劑樣效應，可引發(fā)多種與疾病密切相關(guān)的病理改變，并且證明ATl-AA屬于IgG3 類免疫球蛋白，提示其可能會通過胎盤/乳汁等途徑由母體進入后代體內(nèi)。盡管如此，由于 技術(shù)問題，目前對于ATl-AA的檢測主要采用生物學鑒定法，比如酶聯(lián)免疫吸附法、激光共 聚焦共定位、免疫共沉淀等，這些方法或可檢測自身抗體的水平，或是通過觀察ATl-AA與 ATl受體的特異結(jié)合，間接證明該自身抗體的存在，但均不能定位自身抗體的分布。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種血管緊張素II 1型受體自身抗體的形態(tài)學檢測方 法，該方法能夠定位自身抗體的分布。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，利用免疫組織化學法原理，先合成特異性識別ATl-AA的抗 原決定簇一ATl受體細胞外第二環(huán)(ATlR-EC11)肽段；將合成的ATlR-EC11肽段標記上辣 根過氧化物酶(HRP)；待組織取出后，迅速浸入4%多聚甲醛液中固定，24小時后石蠟包埋， 切片；組織切片經(jīng)常規(guī)脫蠟、水化、高壓抗原修復后，滴加HRP標記的ATlR-EC11肽段，4°C過 夜；最后采用DAB顯色。所述的ATlR-EC11肽段，起止位置為I165-T191,其氨基酸序列為SEQ ID NO :1。所述的組織切片厚度為3-50 μ m。與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明的優(yōu)點本發(fā)明利用免疫組織化學法原理，采用合成的抗 原定位組織中的自身抗體，不僅能檢測到該自身抗體的存在，還能顯示自身抗體在組織中 的分布特征，為臨床相關(guān)疾病病理檢測提供了新的方法。


圖IATl-AA在大鼠胎盤絨毛組織中的分布圖
具體實施例方式實施例1 檢測大鼠胎盤組織中ATl-AA 委托上海吉爾生化有限公司合成ATlR-EC11肽段；
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采用濟南泰天和生物科技有限公司生產(chǎn)的Glue活化辣根過氧化物酶A型試劑盒， 將合成的ATlR-EC11肽段標記上HRP ；大鼠懷孕20天時(臨產(chǎn)前)，腹腔注射10%水合氯醛(0.3ml/100g)進行麻醉。 剖宮取出胎盤，用磷酸鹽緩沖液(PBS，0.01M，pH 7. 2)經(jīng)臍靜脈充分灌流，待沖洗液徹底清 亮后將胎盤組織浸入4%多聚甲醛液中固定，石蠟包埋。8 μ m切片，脫蠟水化，3% H2O2孵育 10min，PBS沖洗5minX3次。高壓抗原修復(0. OlM枸櫞酸鈉緩沖液，pH 6. 0, 270°C, IOmin)， PBS 沖洗 5minX 3 次，滴加 HRP 標記的 ATlR-EC11 肽段[5% PMT (0. OlM PBS+5% BSA), 1 100 稀釋]后4°C過夜。PBS沖洗5minX3次。DAB顯色。脫水、透明、封片。常規(guī)免疫組化法檢 測胎盤中總IgGs作為陽性對照。結(jié)果見圖1，在含有大量ATl-AA的免疫組Wistar孕鼠胎盤絨毛的滋養(yǎng)層細胞及血 管內(nèi)皮細胞處均有明顯黃染，證明有ATl-AA表達(短箭頭)，其分布與總IgGs —致(長箭 頭)；而不含ATl-AA的陰性組大鼠胎盤組織中有一般IgGs通過，卻無特異性ATl-AA存在。 直接證明母體中的ATl-AA可以通過胎盤轉(zhuǎn)給其后代。
權(quán)利要求
一種血管緊張素II 1型受體自身抗體的形態(tài)學檢測方法，其特征在于，包括如下步驟先合成AT1R ECII肽段；將合成的AT1R ECII肽段標記上辣根過氧化物酶(HRP)；待組織取出后，迅速浸入4％多聚甲醛液中固定，24小時后石蠟包埋，切片；組織切片經(jīng)常規(guī)脫蠟、水化、高壓抗原修復后，滴加HRP標記的AT1R ECII肽段，4℃過夜；最后采用DAB顯色；所述的AT1R ECII肽段，其氨基酸序列為SEQ ID NO1。
2.如權(quán)利要求1所述的一種血管緊張素II1型受體自身抗體的形態(tài)學檢測方法，其特 征在于，所述的組織切片厚度為3-50 μ m。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種血管緊張素II 1型受體自身抗體(AT1-AA)的形態(tài)學檢測方法，步驟包括先合成AT1R-ECII肽段；再將合成的AT1R-ECII肽段標記上辣根過氧化物酶(HRP)；待組織取出后，迅速浸入4％多聚甲醛液中固定，24小時后石蠟包埋，切片；組織切片經(jīng)常規(guī)脫蠟、水化、高壓抗原修復后，滴加HRP標記的AT1R-ECII肽段，4℃過夜；最后采用DAB顯色。本發(fā)明利用免疫組織化學法原理，采用合成的抗原定位組織中的自身抗體，不僅能檢測到該自身抗體的存在，還能顯示自身抗體在組織中的分布特征，為臨床相關(guān)疾病病理檢測提供了新的方法。
文檔編號G01N33/53GK101968482SQ201010259270
公開日2011年2月9日 申請日期2010年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月18日
發(fā)明者劉慧榮, 張?zhí)K麗, 楊麗紅, 楊曉麗, 燕子, 王瑾, 田玨, 鄭榮華 申請人:山西醫(yī)科大學