專利名稱：一種精液白細(xì)胞過氧化物酶檢測試劑盒及檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及體外檢測試劑盒和檢測方法，特別是涉及一種定量檢測人精液標(biāo)本中 白細(xì)胞濃度的試劑盒，還涉及利用該試劑盒來檢測人精液標(biāo)本中白細(xì)胞濃度的方法，主要 用來篩查男性生殖道感染，還涉及利用該試劑盒檢測試劑是否有效的方法。
背景技術(shù)：
人附屬性腺感染、自身免疫性睪丸炎、精索靜脈曲張，吸煙、酗酒、接觸刺激性有毒 物質(zhì)、經(jīng)常熱水浴等，均可導(dǎo)致人精液白細(xì)胞精子癥，影響精液質(zhì)量，降低受孕率。目前相 關(guān)的人精液標(biāo)本中白細(xì)胞濃度的實驗室檢測方法主要有精液直接鏡檢法、吉姆薩染色法、 瑞氏染色法、免疫細(xì)胞染色法等。精液直接鏡檢法是直接將精液涂片計數(shù)精液內(nèi)的圓細(xì) 胞，不能區(qū)分白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、精原細(xì)胞；吉姆薩染色法和瑞氏染色法能準(zhǔn)確判斷白細(xì)胞， 操作步驟較多且陳舊性白細(xì)胞不易識別；免疫細(xì)胞染色法系通過白細(xì)胞膜表面共同抗原 (CD45)進(jìn)行免疫組化染色，檢測結(jié)果最為準(zhǔn)確，但成本較昂貴、操作步驟繁瑣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種性能穩(wěn)定、操作簡單、易于臨床推廣應(yīng)用、能 開展質(zhì)量控制工作的精液白細(xì)胞過氧化物酶染色試劑盒，同時，本發(fā)明還提供一種利用該 試劑盒進(jìn)行檢測的方法學(xué)特異、操作簡單、易于臨床推廣應(yīng)用的精液白細(xì)胞過氧化物酶染 色檢測方法，同時，本發(fā)明還提供一種利用該試劑盒測試劑是否有效的方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種精液白細(xì)胞過氧化物酶檢測試劑盒，其特 征在于，包括A液、B液和HRP質(zhì)控液；所述的A液是以弱酸性緩沖液與氯化銨、乙二胺四乙 酸二鈉、正甲苯胺配制成的PH4 7的溶液，濃度為每升A液中含有氯化銨2 100克、乙 二胺四乙酸二鈉0. 5 50克、正甲苯胺0. 05 50ml ；所述B液是在水或弱酸性緩沖液中 加入過氧化氫配制成的PH4 7的溶液，濃度為每升B液中含有過氧化氫10 500ml ；所 述HRP質(zhì)控液是在弱酸性緩沖液中加入過氧化物酶的溶液，濃度為每升HRP質(zhì)控液中含有 過氧化物酶0. 001 1克。每升所述A液中含有氯化銨22. 727克、乙二胺四乙酸二鈉4. 545克、正甲苯胺 0. 205ml ；每升所述B液中含有過氧化氫30ml。每升所述HRP質(zhì)控液也中含有過氧化物酶0. 1克。所述弱酸性緩沖液為pH4 7、0· 01 lmol/L的磷酸鹽緩沖液或檸檬酸緩沖液或 醋酸緩沖液或磷酸氫二鈉_檸檬酸緩沖液或至少其中兩種的混合物。所述A液、B液和HRP質(zhì)控液中分別加入適量的防腐劑；所述A液為分裝于密封容 器的多瓶。同時本發(fā)明還提供，利用權(quán)利要求1所述精液白細(xì)胞過氧化物酶檢測試劑盒檢測 精液標(biāo)本的方法，其特征在于，包括如下步驟步驟一.取A液，并向A液內(nèi)加入B液，混勻，A液與B液的體積比為1 0. 005 1 0. 1 ；步驟二 .再加入完全液化的新鮮的待檢精液標(biāo)本，振蕩混勻，精液標(biāo)本在反應(yīng)體 系內(nèi)所占體積為2% 20% ；步驟三.在10°C 40°C溫度下放置10分鐘 120分鐘進(jìn)行反應(yīng)；步驟四.振蕩混勻后將反應(yīng)液充入計數(shù)池，置于顯微鏡高倍視野下觀察結(jié)果并計 數(shù)，顯微鏡下觀察到的棕色細(xì)胞即為過氧化物酶陽性的白細(xì)胞。所述步驟一中A液與B液的體積比為1 0. 028 ；所述步驟二中精液標(biāo)本在反應(yīng) 體系內(nèi)所占體積為10. 8% ；所述步驟三中在室溫下放置20 30分鐘進(jìn)行反應(yīng)。所述步驟二之前還包括如下步驟等待新鮮精液在體外自然液化；或者精液在體 外60分鐘后仍然不能完全液化時，加入培養(yǎng)液或洗滌液并以吸管反復(fù)吹打促進(jìn)完全液化； 液化后的精液標(biāo)本直接用于步驟二。所述步驟四之后還有步驟五，將計數(shù)結(jié)果乘以精液標(biāo)本稀釋倍數(shù)，計算計數(shù)池內(nèi) 棕色細(xì)胞的濃度。同時本發(fā)明還提供，利用所述精液白細(xì)胞過氧化物酶檢測試劑盒檢測試劑是否有 效的方法，其特征在于，包括如下步驟步驟一.取A液，并向A液內(nèi)加入B液，混勻，A液與B液的體積比為1 0. 005 1 0. 1 ；步驟二 .再加入HRP質(zhì)控液，振蕩混勻，HRP質(zhì)控液在反應(yīng)體系內(nèi)所占體積為 2% 20% ；步驟三.在10°C 40°C溫度下放置10分鐘 120分鐘進(jìn)行反應(yīng)；步驟四.將反應(yīng)液在分光光度計上比色，用純化水調(diào)零，波長520nm，比色光徑為 Icm ；OD520nmacm ^ 1.0表明試劑有效，OD520nmacm <1.0表明試劑無效。本發(fā)明過氧化物酶染色法的檢驗原理是多形核粒細(xì)胞特有的過氧化物酶分解 過氧化氫，產(chǎn)生新生態(tài)氧，后者氧化正甲苯胺生成正甲苯胺藍(lán)、形成棕色物使細(xì)胞著色，過 氧化物酶陽性細(xì)胞染棕色，而過氧化物酶陰性細(xì)胞不著色，在顯微鏡下計數(shù)精液標(biāo)本內(nèi)染 棕色細(xì)胞的數(shù)量，可計算精液標(biāo)本內(nèi)白細(xì)胞濃度，精液中白細(xì)胞數(shù)量> lX106/ml，即為 白細(xì)胞精子癥，提示男性主殖道附屬性腺感染，并可能因此影響精液質(zhì)量。但白細(xì)胞數(shù)量 < 1X IOfVml也不能排除附性腺感染的可能性，需要用其它方法進(jìn)一步確認(rèn)。確認(rèn)的方法包 括精液標(biāo)本微生物培養(yǎng)，或采用靈敏度和特異性較好的檢測指標(biāo)(如精漿彈性蛋白酶)。本發(fā)明的精液白細(xì)胞過氧化物酶染色試劑盒中有A液、B液、HRP質(zhì)控液。A液中 的氯化銨的水溶液呈弱酸性，能夠為過氧化物酶催化反應(yīng)提供離子環(huán)境與弱酸性環(huán)境，在 溶液中濃度為2g/L 100g/L，在反應(yīng)體系內(nèi)濃度為1. 756g/L 87. 805g/L ；乙二胺四乙 酸二鈉具有廣泛的配位性能，幾乎能與所有的金屬離子形成穩(wěn)定的螯合物，能消除反應(yīng)體 系內(nèi)干擾氧化反應(yīng)的金屬離子影響，在溶液中濃度為0. 5g/L 50g/L，在反應(yīng)體系內(nèi)濃度 為0. 439g/L 43. 9g/L;正甲苯胺被過氧化物酶氧化后形成正甲苯胺藍(lán)，呈棕色，指示細(xì)胞 內(nèi)過氧化物酶的存在，在溶液中濃度為0. 05ml/L 50ml/L，在反應(yīng)體系內(nèi)濃度為0. 044ml/ L 43. 9ml/L。B液是含過氧化氫的水溶液或弱酸性緩沖液；過氧化氫可作為過氧化物酶 的底物，被催化形成新生態(tài)氧，進(jìn)而氧化正甲苯胺形成正甲苯胺藍(lán)，在溶液中濃度為IOml/ L 500ml/L，在反應(yīng)體系內(nèi)濃度為0. 244ml/L 12. 195ml/L。
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采用該試劑盒可以非常簡單方便地檢測精液標(biāo)本中過氧化物酶陽性的白細(xì)胞數(shù) 量和濃度，本發(fā)明的過氧化物酶染色法在不影響檢測效能的前提下，簡化了操作步驟，特異性高。由于本發(fā)明的試劑盒還含有辣根過氧化物酶(HRP)質(zhì)控液，它是含過氧化物酶的 弱酸性緩沖液，在溶液中濃度為0. 001g/L lg/L，在反應(yīng)體系內(nèi)濃度為0. 000097g/L 0. 097g/L, HRP質(zhì)控液可替代精液標(biāo)本，用于檢測A液和B液的反應(yīng)效能，監(jiān)測試劑是否失 效，便于臨床常規(guī)開展與質(zhì)量控制。
具體實施例方式實施例1一、制備本實施例1的精液白細(xì)胞過氧化物酶檢測試劑盒1.配制pH4 7、0. 01mol/L磷酸鹽緩沖液稱取12水磷酸氫二鈉1. 7728克，磷酸二氫鉀0. 694克，加入適量純化水?dāng)嚢枞芙?后，在PH計監(jiān)測下，用濃鹽酸或濃氫氧化鈉溶液調(diào)整pH值至4 7。2.配制 A 液(1)稱取氯化銨22. 727克、乙二胺四乙酸二鈉4. 545克，加入適量pH4 7、 0. 01mol/L磷酸鹽緩沖液，攪拌溶解；(2)量取正甲苯胺0. 205ml，加入上述步驟(1)的溶液內(nèi)，攪拌溶解，用pH4 7、 0. 01mol/L磷酸鹽緩沖液定容至1L，攪拌混勻；(3)分裝為0. 9ml/瓶至玻璃或塑料制密封容器內(nèi)，密封避光保存，臨用前置于室 溫。臨床使用時僅需取出一瓶A液，滴入B液和加入待檢標(biāo)本即可，方便了操作。3.配制 B 液量取30ml過氧化氫，用純化水定容至1L，攪拌混勻。4.配制HRP質(zhì)控液稱取過氧化物酶0. 1克，加入適量pH4 7、0. 01mol/L磷酸鹽緩沖液，攪拌溶解 后，用pH4 7、0. 01mol/L磷酸鹽緩沖液定容至1L，攪拌混勻。二、利用本實施例1的試劑盒檢測精液標(biāo)本，步驟如下1.受試者禁欲2-7天后，通過手淫法或用特制的精液采集套留取全部精液標(biāo)本；2.等待新鮮精液在體外自然液化，精液必須新鮮，不可低溫保存，以免凍融后造成 白細(xì)胞內(nèi)過氧化物酶裂解釋放至胞外，造成棕染白細(xì)胞數(shù)量減少或碎片增多；3.取A液1瓶(0. 9ml)，并向A液內(nèi)加入B液1滴(約0. 025ml)，混勻，A液與B 液的體積比為1 0.028;4.再加入完全液化后的新鮮的待檢精液標(biāo)本0. 1ml，振蕩1 2分鐘混勻，精液標(biāo) 本在反應(yīng)體系內(nèi)所占體積為10.8% ；5.室溫下放置30分鐘進(jìn)行反應(yīng)；6.振蕩混勻后將反應(yīng)液充入現(xiàn)有技術(shù)中常用的IOOum深度一次性計數(shù)池，置于顯 微鏡物鏡40倍視野下觀察，所用顯微鏡目鏡的孔徑為20mm，顯微鏡下觀察到的棕色細(xì)胞即 為過氧化物酶陽性的白細(xì)胞，棕色細(xì)胞個數(shù)是平均8個/HP (高倍視野)。結(jié)果觀察時，即使 在細(xì)胞內(nèi)僅見少量棕色顆粒，也應(yīng)將此細(xì)胞計數(shù)為過氧化物酶陽性細(xì)胞；
7.計算結(jié)果，精液標(biāo)本白細(xì)胞的濃度=每高倍視野棕色細(xì)胞個數(shù)X換算系數(shù)X 標(biāo)本稀釋倍數(shù)=8X50000X 10. 25 = 4. 1 X 106/ml ； (0. Iml 精液加入 0. 9mlA 液、0. 025ml B 液內(nèi)，稀釋了 10. 25倍。)結(jié)論是該精液標(biāo)本表明被測者有白細(xì)胞精子癥。三、利用本實施例1的試劑盒檢測試劑是否有效，步驟如下1.取A液1瓶(0. 9ml)，并向A液內(nèi)加入B液1滴(約0. 025ml)，混勻，A液與B 液的體積比為1 0.028;2.再加入HRP質(zhì)控液0. 1ml，振蕩1 2分鐘混勻；3.室溫下放置30分鐘進(jìn)行反應(yīng)；4.將反應(yīng)液在分光光度計上比色，用純化水調(diào)零，波長520nm，比色光徑為Icm ； OD520nmacffl 為 1. 461，OD520nmacffl 彡 1. 0 表明試劑有效。實施例2一、制備本實施例2的精液白細(xì)胞過氧化物酶檢測試劑盒1.配制pH4 7、0. 5mol/L的檸檬酸緩沖液(1)稱取1水檸檬酸105. 07克，加入適量純化水?dāng)嚢枞芙猓?2)用濃氫氧化鈉溶液調(diào)整溶液pH值至4 7 ；(3)用純化水定容至1L，攪拌混勻。2.配制 A 液(1)稱取氯化銨2克、乙二胺四乙酸二鈉0. 5克，加入適量pH4 7、0. 5mol/L檸檬 酸緩沖液，攪拌溶解；(2)量取正甲苯胺0.05ml，加入上述步驟(1)的溶液內(nèi)，攪拌溶解，用pH4 7、 0. 5mol/L檸檬酸緩沖液定容至1L，攪拌混勻；(3)分裝為0. 9ml/瓶至玻璃或塑料制密封容器內(nèi)，密封避光保存，臨用前置于室
ilm ο3.配制 B 液量取IOml過氧化氫，用上述pH4 7、0. 05mol/L檸檬酸緩沖液定容至1L，攪拌混勻。4.配制HRP質(zhì)控液稱取過氧化物酶0. 5克，加入適量pH4 7、0. 05mol/L檸檬酸緩沖液，攪拌溶解 后，用pH4 7、0. 05mol/L檸檬酸緩沖液定容至1L，攪拌混勻。二、利用本實施例2的試劑盒檢測精液標(biāo)本，步驟如下1.受試者禁欲2-7天后，通過手淫法或用特制的精液采集套留取全部精液標(biāo)本；2.新鮮精液在體外60分鐘后仍然未完全液化，這時加入與精液體積相同的培養(yǎng) 液或洗滌液并以吸管反復(fù)吹打促進(jìn)完全液化(最終的計算結(jié)果需乘以稀釋倍數(shù)2)；3.取A液1瓶(0. 9ml)，并向A液內(nèi)加入B液2滴(約0. 05ml)，混勻，A液與B液 的體積比為1 0.056;4.再加入完全液化后的新鮮的待檢精液標(biāo)本0. 05ml，振蕩1 2分鐘混勻，精液 標(biāo)本在反應(yīng)體系內(nèi)所占體積為5. 26% ；5. 10°C放置120分鐘進(jìn)行反應(yīng)；
6.振蕩混勻后將反應(yīng)液充入現(xiàn)有技術(shù)中常用的IOOum深度一次性計數(shù)池，置于顯 微鏡物鏡40倍視野下觀察，所用顯微鏡目鏡的孔徑為20mm，顯微鏡下觀察到的棕色細(xì)胞即 為過氧化物酶陽性的白細(xì)胞，棕色細(xì)胞個數(shù)是平均3個/HP。結(jié)果觀察時，即使在細(xì)胞內(nèi)僅 見少量棕色顆粒，也應(yīng)將此細(xì)胞計數(shù)為過氧化物酶陽性細(xì)胞；7.計算結(jié)果，精液標(biāo)本白細(xì)胞的濃度=每高倍視野棕色細(xì)胞個數(shù)X換算系數(shù)X 標(biāo)本稀釋倍數(shù)=3X50000X20X2 = 6X 106/ml ；結(jié)論是該精液標(biāo)本表明被測者有白細(xì)胞精子癥。三、利用本實施例2的試劑盒檢測試劑是否有效，步驟如下1.取A液1瓶(0. 9ml)，并向A液內(nèi)加入B液2滴(約0. 05ml)，混勻，A液與B液 的體積比為1 0.056;2.再加入HRP質(zhì)控液0. 05ml，振蕩1 2分鐘混勻；3. 10°C放置120分鐘進(jìn)行反應(yīng)；4.將反應(yīng)液在分光光度計上比色，用純化水調(diào)零，波長520nm，比色光徑為Icm ；
彡1.0表明試劑有效。實施例3一、制備本實施例1的精液白細(xì)胞過氧化物酶檢測試劑盒1.配制pH4 7、lmol/L的醋酸緩沖液(1)量取冰醋酸57. 2ml，加入適量純化水?dāng)嚢枞芙猓?2)用濃氫氧化鈉溶液調(diào)整溶液pH值至4 7 ；(3)用純化水定容至1L，攪拌混勻。2.配制 A 液(1)稱取氯化銨100克、乙二胺四乙酸二鈉50克，加入適量pH4 7、lmol/L醋酸 緩沖液，攪拌溶解；(2)量取正甲苯胺50ml，加入上述步驟⑴的溶液內(nèi)，攪拌溶解，用pH4 7、lmol/ L醋酸緩沖液定容至1L，攪拌混勻；(3)加入0. 5克的硫柳汞防腐劑，以抑制微生物生長，延長試劑的使用期限；(4)分裝為0. 9ml/瓶至玻璃或塑料制密封容器內(nèi)，密封避光保存，臨用前置于室3.配制 B 液:量取500ml過氧化氫，用純化水定容至1L，攪拌混勻，加入0. 5克量的苯甲酸防腐 劑。4.配制HRP質(zhì)控液稱取過氧化物酶1克，加入適量醋酸緩沖液，攪拌溶解后，用醋酸緩沖液定容至 1L，并加入Iml的ProClin系列防腐劑，攪拌混勻。二、利用本實施例1的試劑盒檢測精液標(biāo)本，步驟如下1.受試者禁欲2-7天后，通過手淫法或用特制的精液采集套留取全部精液標(biāo)本；2.等待新鮮精液在體外自然液化；3.取A液1瓶(0. 9ml)，并向A液內(nèi)加入B液0. 09ml，混勻，A液與B液的體積比 為 1 0.1 ；
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4.再加入完全液化后的新鮮的待檢精液標(biāo)本0. 2ml，振蕩1 2分鐘混勻，精液標(biāo) 本在反應(yīng)體系內(nèi)所占體積為20. 2% ；5. 37°C放置10分鐘進(jìn)行反應(yīng)；6.振蕩混勻后將反應(yīng)液充入現(xiàn)有技術(shù)中常用的IOOum深度一次性計數(shù)池，置于顯 微鏡物鏡40倍視野下觀察，所用顯微鏡目鏡的孔徑為20mm，顯微鏡下觀察到的棕色細(xì)胞即 為過氧化物酶陽性的白細(xì)胞，棕色細(xì)胞個數(shù)是平均2個/HP。結(jié)果觀察時，即使在細(xì)胞內(nèi)僅 見少量棕色顆粒，也應(yīng)將此細(xì)胞計數(shù)為過氧化物酶陽性細(xì)胞；7.計算結(jié)果精液標(biāo)本內(nèi)細(xì)胞的濃度=每高倍視野棕色細(xì)胞個數(shù)X換算系數(shù)X 標(biāo)本稀釋倍數(shù)=2X50000X5. 95 = 0. 595 X IO6 ；結(jié)論是該精液標(biāo)本表明被測者無白細(xì)胞精子癥。三、利用本實施例1的試劑盒檢測試劑是否有效，步驟如下1.取A液1瓶(0. 9ml)，并向A液內(nèi)加入B液0. 09ml，混勻，A液與B液的體積比 為 1 0. 1 ；2.再加入HRP質(zhì)控液0. 2ml，振蕩1 2分鐘混勻；3. 37°C放置10分鐘進(jìn)行反應(yīng)；4.將反應(yīng)液在分光光度計上比色，用純化水調(diào)零，波長520nm，比色光徑為Icm ；
OD520nmacffl 為 1. 438，OD520nmacffl 彡 1. 0 表明試劑有效。
權(quán)利要求
一種精液白細(xì)胞過氧化物酶檢測試劑盒，其特征在于，包括A液、B液和HRP質(zhì)控液；所述的A液是以弱酸性緩沖液與氯化銨、乙二胺四乙酸二鈉、正甲苯胺配制成的pH4～7的溶液，濃度為每升A液中含有氯化銨2～100克、乙二胺四乙酸二鈉0.5～50克、正甲苯胺0.05～50ml；所述B液是在水或弱酸性緩沖液中加入過氧化氫配制成的pH4～7的溶液，濃度為每升B液中含有過氧化氫10～500ml；所述HRP質(zhì)控液是在弱酸性緩沖液中加入過氧化物酶的溶液，濃度為每升HRP質(zhì)控液中含有過氧化物酶0.001～1克。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的精液白細(xì)胞過氧化物酶檢測試劑盒，其特征在于，每升所述A 液中含有氯化銨22. 727克、乙二胺四乙酸二鈉4. 545克、正甲苯胺0. 205ml ；每升所述B液 中含有過氧化氫30ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的精液白細(xì)胞過氧化物酶檢測試劑盒，其特征在于，每升所 述HRP質(zhì)控液也中含有過氧化物酶0. 1克。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的精液白細(xì)胞過氧化物酶檢測試劑盒，其特征在于，所述弱 酸性緩沖液為PH4 7、0. 01 lmol/L的磷酸鹽緩沖液或檸檬酸緩沖液或醋酸緩沖液或磷 酸氫二鈉_檸檬酸緩沖液或至少其中兩種的混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的精液白細(xì)胞過氧化物酶檢測試劑盒，其特征在于，所述A 液、B液和HRP質(zhì)控液中分別加入適量的防腐劑；所述A液為分裝于密封容器的多瓶。
6.利用權(quán)利要求1所述精液白細(xì)胞過氧化物酶檢測試劑盒檢測精液標(biāo)本的方法，其特 征在于，包括如下步驟步驟一.取A液，并向A液內(nèi)加入B液，混勻，A液與B液的體積比為1 0.005 1 0. 1 ；步驟二 .再加入完全液化的新鮮的待檢精液標(biāo)本，振蕩混勻，精液標(biāo)本在反應(yīng)體系內(nèi) 所占體積為2% 20% ；步驟三.在10°C 40°C溫度下放置10分鐘 120分鐘進(jìn)行反應(yīng)；步驟四.振蕩混勻后將反應(yīng)液充入計數(shù)池，置于顯微鏡高倍視野下觀察結(jié)果并計數(shù)， 顯微鏡下觀察到的棕色細(xì)胞即為過氧化物酶陽性的白細(xì)胞。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測精液標(biāo)本的方法，其特征在于，所述步驟一中A液與B液 的體積比為1 0.028;所述步驟二中精液標(biāo)本在反應(yīng)體系內(nèi)所占體積為10. 8%;所述步驟 三中在室溫下放置20 30分鐘進(jìn)行反應(yīng)。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測精液標(biāo)本的方法，其特征在于，所述步驟二之前還包括 如下步驟等待新鮮精液在體外自然液化；或者精液在體外60分鐘后仍然不能完全液化 時，加入培養(yǎng)液或洗滌液并以吸管反復(fù)吹打促進(jìn)完全液化；液化后的精液標(biāo)本直接用于步 馬聚.~- ο
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測精液標(biāo)本的方法，其特征在于，所述步驟四之后還有步 驟五，將計數(shù)結(jié)果乘以精液標(biāo)本稀釋倍數(shù)，計算計數(shù)池內(nèi)棕色細(xì)胞的濃度。
10.利用權(quán)利要求1所述精液白細(xì)胞過氧化物酶檢測試劑盒檢測試劑是否有效的方 法，其特征在于，包括如下步驟步驟一.取A液，并向A液內(nèi)加入B液，混勻，A液與B液的體積比為1 0.005 1 0. 1 ；步驟二 .再加入HRP質(zhì)控液，振蕩混勻，HRP質(zhì)控液在反應(yīng)體系內(nèi)所占體積為2% 20% ；步驟三.在10°C 40°C溫度下放置10分鐘 120分鐘進(jìn)行反應(yīng)；步驟四.將反應(yīng)液在分光光度計上比色，用純化水調(diào)零，波長520nm，比色光徑為Icm ；OD520nmacffl彡1. 0表明試劑有效，OD520nmacffl < 1. 0表明試劑無效。
全文摘要
一種精液白細(xì)胞過氧化物酶檢測試劑盒，包括A液、B液和HRP質(zhì)控液；A液是以弱酸性緩沖液與氯化銨、乙二胺四乙酸二鈉、正甲苯胺配制成的pH4～7的溶液；B液是在水或弱酸性緩沖液中加入過氧化氫配制成的pH4～7的溶液；HRP質(zhì)控液是在弱酸性緩沖液中加入過氧化物酶的溶液。檢測時取A液，加入B液，混勻；再加入完全液化的新鮮待檢精液標(biāo)本或HRP質(zhì)控液，振蕩混勻，在10℃～40℃溫度下放置10分鐘～120分鐘進(jìn)行反應(yīng)；然后對精液反應(yīng)液于顯微鏡高倍視野下觀察結(jié)果并計數(shù)和計算白細(xì)胞濃度，或?qū)RP質(zhì)控液反應(yīng)液在分光光度計上比色。本發(fā)明的精液白細(xì)胞過氧化物酶染色檢測試劑盒及其檢測方法性能穩(wěn)定、操作簡單、易于臨床推廣應(yīng)用、能開展質(zhì)量控制工作。
文檔編號G01N21/31GK101974611SQ20101052897
公開日2011年2月16日 申請日期2010年10月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月27日
發(fā)明者莊學(xué)敏, 李巍, 楊紅芳, 王希上, 王錚錚, 程錦軍, 鄧少君, 鐘彩顏 申請人:深圳市博銳德生物科技有限公司