專(zhuān)利名稱(chēng)：檢測(cè)禽流感病毒的蛋白質(zhì)芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種蛋白質(zhì)芯片，特別涉及一種檢測(cè)禽流感病毒的蛋白質(zhì)芯片。
背景技術(shù)：
禽流感病毒(AIV)屬于正黏病毒科(ort homy xoviridae)流感病毒屬，是一種A 型流感病毒。根據(jù)血凝素(H)和神經(jīng)氨酸酶(N)，可將A型流感病毒分為不同亞型，已發(fā)現(xiàn) 有16種血凝素H亞型(Hl H16)和9種神經(jīng)氨酸酶N亞型(附 N9)[2]。A型流感病毒 感染人、豬、馬、海豹、水貂、鯨及所有禽類(lèi)。在正黏病毒科中A型流感病毒是唯一感染禽類(lèi) 的病毒型。禽流感病毒呈世界性分布，絕大多數(shù)禽流感病毒為隱性感染，感染后可以表現(xiàn)為 輕度的呼吸道癥狀、消化道癥狀，死亡率較低；或表現(xiàn)為較嚴(yán)重的全身性、出血性、敗血性癥 狀，死亡率較高。這種癥狀上的不同，主要是由禽流感病毒的毒力所決定的。根據(jù)禽流感病 毒致病性和毒力的不同，可以將禽流感分為高致病性禽流感、低致病性禽流感和無(wú)致病性 禽流感。研究表明，原本為低致病性禽流感病毒(H5N2、H7N7、H9N2)，可經(jīng)6 9個(gè)月禽間 流行的迅速變異而成為高致病性禽流感病毒。高致病性禽流感病毒(HPAIV)感染動(dòng)物具有 迅速傳播和高致死性的特性，通常由H5、H7和H9亞型禽流感病毒引起，是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè) 的重大傳染病之一，甚至威脅著人類(lèi)的健康。近年來(lái)AIV突破種間障礙，直接感染人并且致 人死亡。由于其病毒亞型眾多，抗原性變異極快，毒株的致病性也相差很大，早期快速檢測(cè) 禽流感病毒成了預(yù)防和控制禽流感的前提條件。目前用于禽流感檢測(cè)的方法有禽流感病毒分離技術(shù)、瓊脂擴(kuò)散(AGP)試驗(yàn)、血凝 試驗(yàn)、血凝抑制(HI)試驗(yàn)、神經(jīng)氨酸酶抑制(Ni)試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、病毒中 和試驗(yàn)(SN)、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)、免疫熒光技術(shù)(IF)及核酸探針技術(shù)等。其 中血凝試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)和瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)是OIE推薦使用的方法?？梢钥闯觯鲜銮萘鞲?的檢測(cè)方法都是較傳統(tǒng)的技術(shù)，病毒分離培養(yǎng)及血凝試驗(yàn)、中和試驗(yàn)都需要2 3天方能完 成，且需要在復(fù)雜的技術(shù)操作和昂貴儀器的試驗(yàn)室進(jìn)行。PCR、IF方法也需要一天時(shí)間并需 較高設(shè)備。ELISA法只能一次檢出一個(gè)片斷，連一個(gè)亞型都無(wú)法完整測(cè)出。由于禽流感的抗 原變異較大，由H1-H16、N1-N9之間的不同組合就能演變出幾十甚至上百種亞型。因此，光 靠傳統(tǒng)方法進(jìn)行如此多型別的鑒定是費(fèi)時(shí)費(fèi)事的。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型的目的在于提供一種可同時(shí)檢測(cè)人類(lèi)和禽類(lèi)禽流感病毒的蛋白質(zhì)芯 片。本實(shí)用新型提供的檢測(cè)禽流感病毒的蛋白質(zhì)芯片，包括含有至少11個(gè)凹形腔室 的固體基質(zhì)和設(shè)置在所述至少11個(gè)凹形腔室內(nèi)的包被層；所述11個(gè)凹形腔室內(nèi)的包被層分別是檢測(cè)禽流感病毒的陽(yáng)性質(zhì)控蛋白、檢測(cè)禽 流感病毒的陰性質(zhì)控蛋白以及如下所示的檢測(cè)禽流感病毒的9種抗原H1亞型抗原、H3亞 型抗原、H5亞型抗原、H7亞型抗原、H9亞型抗原、附亞型抗原、N2亞型抗原、NP亞型抗原和NSl亞型抗原；所述固體基質(zhì)的所有凹形腔室經(jīng)戊二醛處理使其表面帶有活性醛基基團(tuán)，所述所 有凹形腔室通過(guò)醛基與所述包被層的蛋白質(zhì)的氨基發(fā)生縮合反應(yīng)并形成共價(jià)鍵連接。上述固體基質(zhì)為玻片、硅片、塑料或硝酸纖維膜。進(jìn)一步，上述凹形腔室分布呈方陣陣列，所述方陣陣列為5X5、4X4或6X6的點(diǎn)陣。所述5X5點(diǎn)陣排布具體如下從上至下用A、B、C、D、E分別代表行，從左至右用1、2、3、4、5分別代表列；其中，腔 室A1、B1、C1、D1、E1的包被層是陽(yáng)性質(zhì)控蛋白，腔室E4、E5的包被層是陰性質(zhì)控蛋白，腔室 A2、B2的包被層是Hl亞型抗原，A3、B3的包被層是H3亞型抗原，A4、B4的包被層是H5亞 型抗原，A5、B5的包被層是H7亞型抗原，C2、D2的包被層是H9亞型抗原，C3、D3的包被層 是附亞型抗原，C4、D4的包被層是N2亞型抗原，C5、D5的包被層是NSl亞型抗原，腔室E2、 E3的包被層是NP亞型抗原。本實(shí)用新型在使用時(shí)，直接將待測(cè)樣品加入各腔室中，溫育后加入二抗。當(dāng)檢測(cè)對(duì) 象為禽類(lèi)時(shí)，向每腔室加入二抗為兔抗雞IgG-HRP ；當(dāng)檢測(cè)對(duì)象為人時(shí)，則向每腔室加入二 抗SPA-HRP ；然后在37°C下溫育30分鐘后，向每腔室中加入顯色劑即可。本實(shí)用新型檢測(cè)禽流感病毒的蛋白質(zhì)芯片能在很短的時(shí)間內(nèi)檢測(cè)出病毒結(jié)果，可 直觀地了解禽流感病毒的感染情況，同時(shí)可用于對(duì)人類(lèi)和禽類(lèi)禽流感病毒抗體的快速鑒別 診斷，為禽流感的防治創(chuàng)造了良好的前提條件。

圖1為本實(shí)用新型蛋白質(zhì)芯片的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步說(shuō)明，但本實(shí)用新型并不限于以下實(shí) 施例。實(shí)施例1如圖1所示，一種檢測(cè)禽流感病毒的蛋白質(zhì)芯片，包括含二十五個(gè)凹形腔室2的玻 片1和設(shè)置在二十五個(gè)凹形腔室2內(nèi)的包被層。包被層包被的是蛋白質(zhì)。玻片1經(jīng)過(guò)戊二 醛處理使其表面帶有活性醛基基團(tuán)，玻片1通過(guò)醛基與包被層包被的蛋白質(zhì)的氨基發(fā)生縮 合反應(yīng)并形成共價(jià)鍵連接。具體地講，25個(gè)凹形腔室2呈5X5點(diǎn)陣分布，該5X5點(diǎn)陣排布為從上至下用A、 B、C、D、E分別代表行，從左至右用1、2、3、4、5分別代表列；其中，腔室Al、Bi、Cl、Dl、El中 包被層是陽(yáng)性質(zhì)控蛋白(雞IgG與人IgG的混合物)，腔室E4、E5包被層是陰性質(zhì)控蛋白 (待測(cè)樣品稀釋液)，各雙位點(diǎn)腔室A2、B2包被層是Hl亞型抗原，A3、B3包被層是H3亞型 抗原，A4、B4包被層是H5亞型抗原，A5、B5包被層是H7亞型抗原，C2、D2包被層是H9亞型 抗原，C3、D3包被層是附亞型抗原，C4、D4包被層是N2亞型抗原，C5、D5包被層是NSl亞 型抗原，腔室E2、E3包被層是NP亞型抗原。本實(shí)用新型提供的蛋白質(zhì)芯片可以直接拿來(lái)使用，將待檢測(cè)的血清稀釋后加入該蛋白質(zhì)芯片溫育，然后加入二抗。當(dāng)檢測(cè)對(duì)象是禽類(lèi)時(shí)，二抗為兔抗雞IgG-HRP ；當(dāng)檢測(cè)對(duì) 象是人時(shí)，二抗為SPA-HRP。結(jié)果判斷如下陰性標(biāo)本不顯色，即為背景色(背景色是指芯片基質(zhì)的顏色、點(diǎn)與 點(diǎn)之間的部分為背景)，顯色即為陽(yáng)性。根據(jù)顯色的深淺程度可以初略判定陽(yáng)性的強(qiáng)與弱。本實(shí)用新型以雙位點(diǎn)設(shè)計(jì)，若雙位點(diǎn)中只有一個(gè)顯色，另一位點(diǎn)未顯色，則實(shí)驗(yàn)需重復(fù)。本實(shí)用新型檢測(cè)禽流感病毒的蛋白質(zhì)芯片能在很短的時(shí)間內(nèi)檢測(cè)出病毒結(jié)果，可 直觀地了解禽流感病毒的感染情況，同時(shí)可用于對(duì)人類(lèi)和禽類(lèi)禽流感病毒抗體的快速鑒別 診斷，為禽流感的防治創(chuàng)造了良好的前提條件。以上所述之實(shí)施方式為本實(shí)用新型的實(shí)施案例之一，并非以此限制本實(shí)用新型的 實(shí)施范圍，故凡依本實(shí)用新型之形狀、構(gòu)造及原理所做的等效變化，均應(yīng)涵蓋在本實(shí)用新型 的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求一種檢測(cè)禽流感病毒的蛋白質(zhì)芯片，其特征在于所述檢測(cè)禽流感病毒的蛋白質(zhì)芯片包括含有至少11個(gè)凹形腔室的固體基質(zhì)和設(shè)置在所述至少11個(gè)凹形腔室內(nèi)的包被層。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)禽流感病毒的蛋白質(zhì)芯片，其特征在于所述凹形腔室 分布呈方陣陣列，所述方陣陣列為5X5、4X4或6X6的點(diǎn)陣。
專(zhuān)利摘要本實(shí)用新型公開(kāi)了一種檢測(cè)禽流感病毒的蛋白質(zhì)芯片。所述蛋白質(zhì)芯片包括含有至少11個(gè)凹形腔室的固體基質(zhì)和設(shè)置在所述至少11個(gè)凹形腔室內(nèi)的包被層；所述11個(gè)凹形腔室內(nèi)的包被層分別是檢測(cè)禽流感病毒的陽(yáng)性質(zhì)控蛋白、檢測(cè)禽流感病毒的陰性質(zhì)控蛋白以及如下所示的檢測(cè)禽流感病毒的9種抗原H1亞型抗原、H3亞型抗原、H5亞型抗原、H7亞型抗原、H9亞型抗原、N1亞型抗原、N2亞型抗原、NP亞型抗原和NS1亞型抗原；所述固體基質(zhì)的所有凹形腔室經(jīng)戊二醛處理使其表面帶有活性醛基基團(tuán)，所述所有凹形腔室通過(guò)醛基與所述包被層的蛋白質(zhì)的氨基發(fā)生縮合形成共價(jià)鍵連接。本實(shí)用新型的蛋白質(zhì)芯片能在很短的時(shí)間內(nèi)檢測(cè)出病毒結(jié)果，可直觀了解禽流感病毒的感染情況。
文檔編號(hào)G01N33/543GK201740782SQ20102016944
公開(kāi)日2011年2月9日 申請(qǐng)日期2010年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月20日
發(fā)明者劉春曉, 史蕾, 季明輝, 徐云慶, 李振良, 楊燕秋, 林連成, 滕娟, 趙純中, 顧大勇, 黃彤文 申請(qǐng)人:深圳國(guó)際旅行衛(wèi)生保健中心;深圳市賽爾生物技術(shù)有限公司