專利名稱：8-苯胺基-1-萘磺酸及其衍生物在蛋白質(zhì)熒光檢測中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)熒光檢測技術(shù)，具體地說涉及蛋白質(zhì)的一種新的熒光染料。
背景技術(shù)：
在生命科學(xué)研究領(lǐng)域，離不開對生命的基本物質(zhì)蛋白質(zhì)和DNA的研究，也就離不開對蛋白質(zhì)的檢測技術(shù)。尤其是最近幾年，隨著基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的飛速發(fā)展，使我們對蛋白質(zhì)的分離檢測技術(shù)有了更高的要求。蛋白質(zhì)的檢測方法有很多，包括濁度法、凱氏定氮法、吸光光度法、熒光光度法，以及新發(fā)展起來的共振瑞利散射法、高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳分析法等。熒光光度法是目前研究最多、應(yīng)用最廣、操作較為簡便、靈敏度較高的檢測方法。ANS屬于萘磺酸類化合物，將ANS及其衍生物應(yīng)用于凝膠蛋白質(zhì)檢測可為蛋白質(zhì)染色提供一種快速、靈敏的方法，其靈敏達(dá)到1 2ng/band，可與經(jīng)典熒光染色法SYPRO Ruby相媲美。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的提供ANS及其衍生物在蛋白質(zhì)熒光檢測中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的ANS相關(guān)化合物是指以ANS為母核的鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、鎂鹽、鈣鹽或ANS 母核為
權(quán)利要求
1.ANS及其衍生物在蛋白質(zhì)熒光檢測中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的ANS衍生物包括ANS的鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、鎂鹽、鈣鹽或鋅鹽。
3.一種蛋白質(zhì)熒光檢測方法，其包括步驟1)、將經(jīng)SDS-PAGE電泳后的蛋白質(zhì)樣品凝膠置于固定液中固定10-60min，棄固定液，然后用去離子水沖洗l-20min ；2)、加入熒光染色液染色l-30min，用去離子水沖洗1-lOmin，其中所述染色液為含按重量體積比0. 0001% -0.01%的ANS或其衍生物及按體積比為10-30%乙醇、5_15%乙酸的水溶液；3)、檢測。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟1)中蛋白固定時(shí)間為20min，然后用去離子水沖洗5min。
5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟2)中染色的時(shí)間為lOmin，然后用去離子水沖洗Imin。
6.如權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟2)染色液中ANS的濃度按重量體積比為0. 002%。
7.如權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟2)中乙醇濃度為對％。
8.如權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟2)中乙酸濃度為7%。
9.如權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟3)檢測波長為250-370nm。
10.如權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟3)中檢測波長為312nm。
全文摘要
本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)熒光檢測技術(shù)，具體地說是8-苯胺基-1-萘磺酸(簡稱ANS)及其衍生物在蛋白質(zhì)熒光檢測中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了應(yīng)用ANS進(jìn)行蛋白質(zhì)熒光檢測的方法，包括步驟將蛋白質(zhì)樣品電泳后的凝膠在固定液中固定，去離子水沖洗；染色，去離子水沖洗；檢測。本發(fā)明具有靈敏度高、操作簡單迅速、重現(xiàn)性好、染色背景淺、線性關(guān)系好、可逆性好、兼容性好、使用安全、成本低等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N21/25GK102590099SQ20111002074
公開日2012年7月18日 申請日期2011年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月18日
發(fā)明者叢維濤, 仇佩虹, 朱忠欣, 李校堃, 洪國贏, 王曉杰, 金利泰 申請人:溫州醫(yī)學(xué)院