專(zhuān)利名稱(chēng)：一種半定量快速檢測(cè)大麻植物中△⁹-THC含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物成分檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種半定量快速檢測(cè)大麻植物中 A9-THC含量的方法。
背景技術(shù)：
大mCannabis sativa L.)中含有一種致幻物質(zhì)四氫大麻酚(THC， tetrahydrocannabinol)，易被不法分子用來(lái)提煉毒品，造成社會(huì)危害。由于非法毒品的蔓延，許多國(guó)家采取了限制種植大麻的措施。按照國(guó)際禁毒公約的規(guī)定，大麻干物質(zhì)中THC含量> 0. 3%作為判定毒品大麻的依據(jù)。而THC含量低于0. 3%的工業(yè)大麻的纖維、籽、桿甚至全株皆具有較高的經(jīng)濟(jì)開(kāi)發(fā)利用價(jià)值，它的利用可涉及造紙、紡織、建材、工業(yè)用油、功能保健食品、化妝品、醫(yī)藥等工業(yè)行業(yè)。由于在我國(guó)，工業(yè)大麻推廣種植利用力度加大和與四氫大麻酚相關(guān)的刑事案件逐年上升之間的矛盾日趨顯著，迫切需要研發(fā)一種快速測(cè)定新采集的大麻植物中THC含量是否低于0. 3%，可供實(shí)驗(yàn)室快速篩查及基層單位容易掌握并配置的檢測(cè)分析方法，為大麻的禁(限)種執(zhí)法管理和大麻育種研究服務(wù)。由于大麻中近百種大麻酚類(lèi)衍生物之間的化學(xué)性質(zhì)相近，給Δ 9-THC的分離和進(jìn)一步定量分析造成了困難?，F(xiàn)有國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中，有基于化學(xué)顯色原理的大麻定性分析方法，但只能對(duì)大麻酚類(lèi)化合物進(jìn)行顯色，從而定性判定是否為大麻或大麻毒品；有基于氣相色譜法、液相色譜的儀器方法，可以進(jìn)行Δ 9-THC的準(zhǔn)確定量分析，但缺點(diǎn)是檢驗(yàn)速度慢，分析操作繁瑣，購(gòu)買(mǎi)儀器價(jià)格昂貴，需要專(zhuān)門(mén)培訓(xùn)，且檢驗(yàn)成本高(一個(gè)樣品需400元人民幣以上)，難以在基層單位推廣；還有基于免疫測(cè)定技術(shù)的大麻定性方法，該方法主要用于如唾液、血液、尿液等流體生物樣品中A9-THC的定性檢測(cè)(CN200910004736. 5)。這些方法都無(wú)法對(duì)大麻植物中的 Δ 9-THC含量是否超過(guò)或低于0. 3%進(jìn)行快速、準(zhǔn)確地測(cè)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種快速、簡(jiǎn)易、準(zhǔn)確地檢測(cè)大麻植物中A9-THC含量的方法。本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。除非另有說(shuō)明，本發(fā)明所采用的百分?jǐn)?shù)均為重量百分?jǐn)?shù)。一種半定量快速檢測(cè)大麻植物中Δ 9-THC含量的方法，包括以下步驟
1、樣品前處理將大麻植株置于9(Tl80°C環(huán)境下烘烤廣lOmin，粉碎至過(guò)0. 425mm篩； 烘烤溫度優(yōu)選14(T160°C，加熱時(shí)間優(yōu)選2 5 min02、超聲波提取將粉碎好的大麻樣品與有機(jī)溶劑按固液比1: 20 50 (g: ml)混合后，超聲波提取廣8 min，過(guò)濾后得供試品溶液；另取A9-THC含量為0.3%的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為對(duì)照品溶液；
所述的有機(jī)溶劑為石油醚、正己烷、氯仿、甲醇或乙醇中的任一種，或是以下兩種有機(jī)溶劑的混合物，包括石油醚-乙酸乙酯、正己烷-乙酸乙酯、正己烷-氯仿、石油醚-氯仿、氯仿-乙酸乙酯，正己烷-二氯甲烷、正己烷-甲醇；兩種有機(jī)溶劑的混合體積比為 1:1 15:1。兩種有機(jī)溶劑的混合體積比優(yōu)選5:廣10:1。超聲波提取時(shí)間優(yōu)選3、min。3、樣品展開(kāi)在1(T30°C環(huán)境下，取供試品溶液和對(duì)照品溶液各1在同一塊薄層層析材料上點(diǎn)樣，再用展開(kāi)劑展開(kāi)，展開(kāi)高度為rScm ；
展開(kāi)時(shí)環(huán)境溫度優(yōu)選為15 25°C。所述的薄層層析材料為聚酰胺、硅膠GF254、硅膠HF254或硅膠H。所述的展開(kāi)劑為石油醚-乙醚、正己烷-乙醚、石油醚-甲醇、石油醚-乙醇、石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、正己烷-甲醇、正己烷-乙醇、正己烷-乙酸乙酯、正己烷-丙酮、氯仿或二氯甲烷；當(dāng)展開(kāi)劑為兩種有機(jī)溶劑的混合物時(shí)，兩種有機(jī)溶劑的混合體積比為1 :5 20 :1ο當(dāng)選擇聚酰胺作為薄層層析材料時(shí)，展開(kāi)劑優(yōu)選氯仿、二氯甲烷、正己烷-甲醇 (乙醇)、石油醚-甲醇(乙醇)或正己烷-乙酸乙酯；當(dāng)展開(kāi)劑為兩種有機(jī)溶劑的混合物時(shí)， 兩種有機(jī)溶劑的混合體積比為ι :5 15 :1。當(dāng)選擇硅膠作為薄層層析材料時(shí)，展開(kāi)劑優(yōu)選正己烷-乙醚、石油醚-乙酸乙酯或正己烷-丙酮，兩種有機(jī)溶劑的混合體積比為1 :5 10 :1。展開(kāi)高度優(yōu)選為5 7cm。4、顯色采用濃度1 5 mg/ml的快藍(lán)B鹽或快藍(lán)BB鹽的有機(jī)溶劑同時(shí)對(duì)展開(kāi)后的供試品和對(duì)照品進(jìn)行顯色，有機(jī)溶劑為三氯甲烷或二氯甲烷；
5、判定在與對(duì)照品Δ 9-THC的&值相同的位置若樣品出現(xiàn)玫紅色斑點(diǎn)，則該斑點(diǎn)可定性為Δ 9_THC，然后按照該斑點(diǎn)的顏色深淺進(jìn)行半定量判定若斑點(diǎn)顏色明顯比對(duì)照品 A9-THC深，則樣品中A9-THC的含量明顯高于0. 3% ；若顏色明顯比對(duì)照品Δ 9_THC淺，則樣品中Δ 9-THC的含量明顯低于0. 3% ；若顏色與對(duì)照品Δ 9-THC近似，則視為樣品中Δ 9-THC 的含量近似于0. 3%。本發(fā)明人經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期和深入的研究，尋找到新的應(yīng)用于大麻植物中A9-THC半定量檢測(cè)的薄層層析材料和對(duì)應(yīng)的展開(kāi)劑體系，繼而摸索出快速加熱大麻植物的前處理?xiàng)l件， 通過(guò)與對(duì)照品目視比色，達(dá)到快速檢測(cè)判定的目的。前處理加熱溫度選擇
由文獻(xiàn)和實(shí)際檢測(cè)實(shí)驗(yàn)(如

圖1)可知，在新采集的大麻植物中，THC含量較THCA的含量低，在高溫情況下，存在THC的轉(zhuǎn)化和THCA脫羧基轉(zhuǎn)化為T(mén)HC的競(jìng)爭(zhēng)，采用不同的溫度處理，以期得到最佳的處理溫度。前處理加熱溫度研究選擇9(T180°C采用不同處理時(shí)間對(duì)少量大麻植物樣品進(jìn)行高溫快速處理，優(yōu)選出加熱溫度為14(T160°C，加熱時(shí)間最佳為2飛分鐘。選用高毒和低毒大麻植物樣品進(jìn)行快速半定量檢測(cè)方法與標(biāo)準(zhǔn)《工業(yè)大麻品種類(lèi)型》(DB53/ T 295. 1-2009)中使用的HPLC儀器定量分析方法比較，THC含量的相對(duì)誤差高毒品種為 1. 3 9. 8%，低毒品種為1. 6% 12· 8%ο提取溶劑和超聲時(shí)間的選擇提取溶劑的研究，通過(guò)對(duì)常用提取溶劑的篩選，可知用甲醇、甲醇-氯仿(二氯甲烷) 等溶劑對(duì)大麻植物樣品進(jìn)行提取，提取液雜質(zhì)較多，對(duì)隨后的薄層層析顯色判定造成假陽(yáng)性干擾，而用石油醚-乙酸乙酯、正己烷-乙酸乙酯、正己烷、石油醚提取的干擾較小，且提取率為949Γ98%。當(dāng)使用兩種有機(jī)溶劑混合時(shí)，低極性與較高極性有機(jī)溶劑的體積比為 1:廣15:1，優(yōu)選為5:廣10:1;超聲提取時(shí)間選擇廣8 min0進(jìn)行上述HPLC儀器定量分析可知，超聲提取3、min分鐘后的THC的溶出達(dá)到最大值。薄層層析材料及層析條件選擇
選擇硅膠(含硅膠GF254、硅膠HF254或硅膠H等)作為薄層層析材料，優(yōu)選出正己烷-乙醚、石油醚-乙酸乙酯、正己烷-丙酮為展開(kāi)劑體系，低極性溶劑與高極性溶劑的體積比為 1 :5 20 :1，更優(yōu)選1 :5 10 :1。采用其中的最佳展開(kāi)劑體系展開(kāi)，CBD、CBN和^(的&值分別可為0. 36,0. 32、0· 27 (如圖2所示)。選擇聚酰胺作為薄層層析材料，優(yōu)選出氯仿、二氯甲烷、正己烷-甲醇(乙醇)、石油醚-甲醇(乙醇)、正己烷-乙酸乙酯為展開(kāi)劑體系，當(dāng)使用有機(jī)溶劑混合溶液時(shí)，低極性溶劑與高極性溶劑的體積比為1 :5 20 :1，更優(yōu)選1 :5 15 :1。采用其中的最佳展開(kāi)劑體系展開(kāi)，CBD、CBN和THC的&值分別可為0. 31,0. 37,0. 67(如圖2所示)。與使用硅膠薄層層析材料的對(duì)應(yīng)展開(kāi)體系結(jié)果比較，THC與其他兩個(gè)干擾成分相距較遠(yuǎn)，且處于較前位置， 易于辨識(shí)，更便于目視定量。顯色條件選擇
顯色條件研究，選擇快藍(lán)B鹽或快藍(lán)BB鹽的有機(jī)溶液，如三氯甲烷、二氯甲烷。該顯色劑對(duì)THC等大麻酚類(lèi)化合物有特征顯色，其他酚類(lèi)對(duì)其干擾較少。THC、CBD、CBN三種化合物顏色分別顯示為玫紅色、橘黃色、紫色。有機(jī)溶液顯色后易揮干，顯色2 5min內(nèi)為最佳判定時(shí)間?？焖{(lán)B鹽或快藍(lán)BB鹽的有機(jī)溶液濃度可選擇廣5mg/ml，現(xiàn)配現(xiàn)用，若密封并避光低溫(_20°C)放置，有效時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)至12小時(shí)。采用硅膠薄層層析，在上述顯色劑濃度下，檢測(cè)下限為10μ g/ml ；采用聚酰胺薄膜層析，檢測(cè)下限為20. 0 μ g/ml。檢測(cè)方法有效性驗(yàn)證
硅膠薄層層析板半定量檢測(cè)分析
取不同THC濃度的大麻植物樣品36份，采用本發(fā)明所述的Δ 9-THC快速半定量檢測(cè)方法操作并做出判定，與HPLC儀器定量分析結(jié)果比較，判定結(jié)果正確率為91. 7% (如表1)。表1小同大麻大庥 SlffiSi THC含呈半判定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種半定量快速檢測(cè)大麻植物中A9-THC含量的方法，包括以下步驟(1)樣品前處理將大麻植株置于9(Tl80°C環(huán)境下烘烤廣lOmin，粉碎至過(guò)0.425mm篩；(2)超聲波提取將粉碎好的大麻樣品與有機(jī)溶劑按固液比1:20 50混合后，超聲波提取廣8 min，過(guò)濾后得供試品溶液；另取A9-THC含量為0. 3%的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為對(duì)照品溶液；(3)樣品展開(kāi)在1(T30°C環(huán)境下，取供試品溶液和對(duì)照品溶液在同一塊薄層層析材料上點(diǎn)樣，再用展開(kāi)劑展開(kāi)，展開(kāi)高度為rScm ；(4)顯色采用濃度1 5mg/ml的快藍(lán)B鹽或快藍(lán)BB鹽的有機(jī)溶劑同時(shí)對(duì)展開(kāi)后的供試品和對(duì)照品進(jìn)行顯色，有機(jī)溶劑為三氯甲烷或二氯甲烷；(5)判定在與對(duì)照品Δ9-THC的&值相同的位置若樣品出現(xiàn)玫紅色斑點(diǎn)，則該斑點(diǎn)可定性為Δ 9_THC，然后按照該斑點(diǎn)的顏色深淺進(jìn)行半定量判定若斑點(diǎn)顏色明顯比對(duì)照品 A9-THC深，則樣品中A9-THC的含量明顯高于0. 3% ；若顏色明顯比對(duì)照品Δ9_THC淺，則樣品中Δ 9-THC的含量明顯低于0. 3% ；若顏色與對(duì)照品Δ 9-THC近似，則視為樣品中Δ 9-THC 的含量近似于0. 3%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的半定量快速檢測(cè)大麻植物中Δ9-THC含量的方法，其特征在于步驟(1)中，烘烤溫度為14(T160°C，加熱時(shí)間為2、min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的半定量快速檢測(cè)大麻植物中Δ9-THC含量的方法，其特征在于步驟(2)中，所述的有機(jī)溶劑為石油醚、正己烷、氯仿、甲醇或乙醇中的任一種，或是以下兩種有機(jī)溶劑的混合物，包括石油醚-乙酸乙酯、正己烷-乙酸乙酯、正己烷-氯仿、石油醚-氯仿、氯仿-乙酸乙酯，正己烷-二氯甲烷、正己烷-甲醇；兩種有機(jī)溶劑的混合體積比為1:1 15:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的半定量快速檢測(cè)大麻植物中Δ9-THC含量的方法，其特征在于兩種有機(jī)溶劑的混合體積比為5:廣10:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的半定量快速檢測(cè)大麻植物中Δ9-THC含量的方法，其特征在于步驟(2)中，所述的超聲波提取時(shí)間為3、min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的半定量快速檢測(cè)大麻植物中Δ9-THC含量的方法，其特征在于步驟(3)中，展開(kāi)時(shí)的環(huán)境溫度為15 25°C。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的半定量快速檢測(cè)大麻植物中Δ9-THC含量的方法，其特征在于步驟(3)中，所述的薄層層析材料為聚酰胺、硅膠GF254、硅膠HF254或硅膠H。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的半定量快速檢測(cè)大麻植物中Δ9-THC含量的方法，其特征在于步驟(3)中，所述的展開(kāi)劑為石油醚-乙醚、正己烷-乙醚、石油醚-甲醇、石油醚-乙醇、石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、正己烷-甲醇、正己烷-乙醇、正己烷-乙酸乙酯、正己烷-丙酮、氯仿或二氯甲烷；當(dāng)展開(kāi)劑為兩種有機(jī)溶劑的混合物時(shí)，兩種有機(jī)溶劑的混合體積比為1 5 20 :1ο
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的半定量快速檢測(cè)大麻植物中Δ9-THC含量的方法，其特征在于當(dāng)選擇聚酰胺作為薄層層析材料時(shí)，展開(kāi)劑為氯仿、二氯甲烷、正己烷-甲醇、正己烷-乙醇、石油醚-甲醇、石油醚-乙醇或正己烷-乙酸乙酯；展開(kāi)劑為兩種有機(jī)溶劑的混合物時(shí)，兩種有機(jī)溶劑的混合體積比為1 :5 15 1 ；當(dāng)選擇硅膠作為薄層層析材料時(shí)，展開(kāi)劑為正己烷-乙醚、石油醚-乙酸乙酯或正己烷-丙酮，兩種有機(jī)溶劑的混合體積比為1 : 5 10 :1。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的半定量快速檢測(cè)大麻植物中A9-THC含量的方法，其特征在于步驟(3)中，展開(kāi)劑的展開(kāi)高度為5 7cm。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種半定量快速檢測(cè)大麻植物中△9-THC含量的方法。將大麻植株烘烤、粉碎至細(xì)粉，經(jīng)有機(jī)溶劑超聲波提取得供試品溶液，另取Δ9-THC含量為0.3%的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為對(duì)照品溶液，再經(jīng)點(diǎn)樣、展開(kāi)、顯色后，通過(guò)觀察供試品與對(duì)照品顏色的差異，即可判定供試品中△9-THC的含量。通過(guò)高溫加熱，大麻植物中的水分被迅速揮去，△9-THC快速?gòu)钠漪人犷?lèi)前體經(jīng)過(guò)脫羧基而轉(zhuǎn)化形成，解決了新采集大麻植物樣品中難以檢測(cè)到△9-THC的問(wèn)題。該方法具有快速、簡(jiǎn)便、易操作、檢測(cè)成本低的特點(diǎn)，能夠?qū)Υ舐橹参镞M(jìn)行快速半定量檢測(cè)，可供實(shí)驗(yàn)室快速篩查，基層單位容易掌握并配置，具有良好的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)G01N30/90GK102175813SQ20111003281
公開(kāi)日2011年9月7日 申請(qǐng)日期2011年1月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月30日
發(fā)明者張慶瀅, 楊明, 許艷萍, 郭孟璧, 郭鴻彥, 陳璇 申請(qǐng)人:云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所