專(zhuān)利名稱(chēng)：一種鯉魚(yú)肌肉中環(huán)丙沙星、恩諾沙星殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于獸藥殘留檢測(cè)的動(dòng)物性食品基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)領(lǐng)域，具體是涉及一種鯉魚(yú)肌肉中環(huán)丙沙星、恩諾沙星殘留基體凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是具有準(zhǔn)確量值的測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)，是研究與評(píng)價(jià)測(cè)量方法、保證測(cè)量結(jié)果的一致性和可比性，保證國(guó)家之間、部門(mén)之間、商品交換或技術(shù)交流之間、生產(chǎn)過(guò)程控制的不同時(shí)間之間的分析結(jié)果的可比性和一致性的重要物質(zhì)。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(ReferenceMaterial，簡(jiǎn)稱(chēng)RM)包括純的化學(xué)物質(zhì)和具有一定理化特性的實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)樣品
背景技術(shù)：
環(huán)丙沙星和恩諾沙星是典型的喹諾酮類(lèi)藥物，喹諾酮類(lèi)藥物是一種人工合成的廣譜抗生素，很多國(guó)家都禁止使用喹諾酮類(lèi)藥物用作獸藥，在我國(guó)環(huán)丙沙星是禁止用于動(dòng)物的，恩諾沙星是限制使用的獸藥，但一些養(yǎng)殖企業(yè)盲目追求治療效果，大量濫用喹諾酮類(lèi)藥物，致使一些動(dòng)物產(chǎn)品中存在一定喹諾酮類(lèi)藥物殘留，日本、美國(guó)等發(fā)達(dá)國(guó)家經(jīng)常以此為技術(shù)壁壘限制中國(guó)動(dòng)物源食品特別是水產(chǎn)品的出口。在食品安全檢測(cè)體系中，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)整個(gè)檢測(cè)質(zhì)量控制體系起到核心作用。歐盟對(duì)獸藥殘留分析方法與結(jié)果表達(dá)的法規(guī)(2002/657/EC)中明確指出了需要采用實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行檢測(cè)過(guò)程控制，可見(jiàn)實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)樣品在獸藥殘留檢測(cè)中的具有十分重要的意義。目前用于喹諾酮類(lèi)藥物殘留檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)主要是各種純品標(biāo)準(zhǔn)樣品，檢測(cè)質(zhì)量控制主要是通過(guò)向樣品中添加純的各種標(biāo)準(zhǔn)品后進(jìn)行檢測(cè)分析，這種分析方法無(wú)法代表目標(biāo)分析物在活體內(nèi)真正存在的狀態(tài)，即無(wú)法代表目標(biāo)分析物在動(dòng)物的體內(nèi)“內(nèi)化”狀態(tài)。這樣方式得到的標(biāo)準(zhǔn)樣品并非真正意義上的實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)樣品，由于目標(biāo)物和基體結(jié)合情形與真實(shí)檢測(cè)樣品不完全一致而導(dǎo)致提取、凈化等處理結(jié)果與日常分析樣本存在較大差異，從而影響結(jié)果的可靠性和有效性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是國(guó)內(nèi)首次獲得鯉魚(yú)肌肉實(shí)物環(huán)丙沙星、恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)樣品，且兩種藥物同時(shí)存在。本發(fā)明的目的是提供一種鯉魚(yú)肌肉中環(huán)丙沙星和恩諾沙星殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，通過(guò)添加環(huán)丙沙星和恩諾沙星養(yǎng)殖鯉魚(yú)，獲得樣品材料，并制備成一種均勻性好、穩(wěn)定性好、易保存且目標(biāo)物和基體結(jié)合情形與真實(shí)檢測(cè)樣品一致的標(biāo)準(zhǔn)樣品；該標(biāo)準(zhǔn)樣品可用于環(huán)丙沙星、恩諾沙星等喹諾酮類(lèi)藥物殘留檢測(cè)質(zhì)量控制、檢測(cè)方法評(píng)價(jià)、檢測(cè)能力評(píng)價(jià)。本發(fā)明鯉魚(yú)肌肉中環(huán)丙沙星和恩諾沙星殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法采用環(huán)丙沙星和恩諾沙星對(duì)活鯉魚(yú)進(jìn)行添加養(yǎng)殖，使鯉魚(yú)體內(nèi)含有環(huán)丙沙星和恩諾沙星，在不含藥物水中飼養(yǎng)待鯉魚(yú)肌肉藥物分布達(dá)到均勻狀態(tài)后，將鯉魚(yú)捕撈快速冷凍至-18°C以下，將冷凍的鯉魚(yú)室溫下解凍，取肌肉部分勻漿制成魚(yú)糜，冷凍干燥，過(guò)篩，裝瓶，真空封裝，制備得到鯉魚(yú)肌肉中環(huán)丙沙星和恩諾沙星殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品；制備的標(biāo)準(zhǔn)樣品中的環(huán)丙沙星和恩諾沙星濃度約為100ug/kg。本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)是采用模擬養(yǎng)殖條件下對(duì)生長(zhǎng)的活鯉魚(yú)藥物養(yǎng)殖添加后選擇適當(dāng)時(shí)機(jī)，將鯉魚(yú)捕撈快速冷凍至-18°C以下，將冷凍的鯉魚(yú)室溫下解凍，取肌肉部分勻漿制成魚(yú)糜，冷凍干燥，過(guò)篩，分裝密封包裝、均勻性檢驗(yàn)、穩(wěn)定性研究和協(xié)作實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，通過(guò)給藥控制和采集時(shí)機(jī)的選擇可獲得預(yù)期含量的目標(biāo)物結(jié)合狀態(tài)與實(shí)際檢測(cè)樣品一致的含環(huán)丙沙星和恩諾沙星鯉魚(yú)基體陽(yáng)性材料，采用攪碎和勻化介質(zhì)相結(jié)合的工藝可以保證材料的均勻性，冷凍干燥、分裝密封可以保證樣品的穩(wěn)定性，便于標(biāo)準(zhǔn)樣品的常溫傳遞。本發(fā)明的產(chǎn)品可以在常溫下運(yùn)輸，保質(zhì)期長(zhǎng)，目標(biāo)物和基體結(jié)合情形與真實(shí)檢測(cè)樣品一致，可用于相關(guān)檢測(cè)分析的質(zhì)量控制，樣品均勻穩(wěn)定，運(yùn)輸方便，使用可靠，產(chǎn)品具有顯著的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例1對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。實(shí)施例1，一種鯉魚(yú)肌肉中環(huán)丙沙星和恩諾沙星殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法， 本實(shí)施例以控制目標(biāo)含量水平lOOug/kg為例，其具體步驟如下(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇市購(gòu)活體鯉魚(yú)，要求個(gè)體大小均一、均重約1. ^g，應(yīng)先確認(rèn)樣品中不含環(huán)丙沙星和恩諾沙星，隨機(jī)取樣，檢測(cè)確認(rèn)為陰性樣品后進(jìn)行喂養(yǎng)。陰性樣品在 200C -25°C環(huán)境下飼養(yǎng)2天后，剔除受傷不健康的鯉魚(yú)；(2)藥物養(yǎng)殖添加向魚(yú)池中添加的醫(yī)用環(huán)丙沙星和恩諾沙星片劑，先將兩種藥片分別粉碎、水溶解，根據(jù)養(yǎng)殖水量，添加藥物使水中環(huán)丙沙星濃度約為500ug/L，喂養(yǎng)M 小時(shí)后再添加恩諾沙星藥液，濃度控制約為250ug/L，實(shí)時(shí)監(jiān)控檢測(cè)水體中和魚(yú)體內(nèi)藥物濃度，在此條件下繼續(xù)養(yǎng)殖18- 小時(shí)后，鯉魚(yú)肌肉內(nèi)藥物濃度約為環(huán)丙沙星和恩諾沙星濃度分別約為20ug/kg和25ug/kg，將鯉魚(yú)撈至不含環(huán)丙沙星和恩諾沙星的養(yǎng)殖池中繼續(xù)養(yǎng)殖12小時(shí)，使鯉魚(yú)肌肉內(nèi)藥物分布均勻；此時(shí)兩種藥物在鯉魚(yú)體內(nèi)濃度約為20ug/kg。(3)撈出步驟( 中飼養(yǎng)完成后的鯉魚(yú)快速冷凍至_18°C以下，將冷凍的鯉魚(yú)室溫下解凍，去鱗、去皮、去頭、去刺、去內(nèi)臟，留取肌肉部分；(3)攪碎勻漿將魚(yú)肉混合攪碎，IOkg攪碎魚(yú)肉中加^(guān)ig稀釋劑(水+乙醇，95+5，) 混勻制成魚(yú)糜(4)冷凍干燥將魚(yú)糜放入真空冷凍干燥機(jī)內(nèi)冷凍干燥，冷凍干燥條件-60°C速凍成厚度不超過(guò)2cm的凍塊，置于真空干燥倉(cāng)中，快速升溫至60°C，保持48小時(shí)，直至凍塊干燥；(5)粉碎均質(zhì)將冷凍干燥的魚(yú)糜用中藥粉碎機(jī)粉碎，以攪拌鍋混勻。(6)過(guò)篩勻質(zhì)后的魚(yú)粉過(guò)0.6mm孔篩，棄去篩余；(7)包裝快速用聚乙烯瓶分裝(聚乙烯瓶提前45°C烘干)，每個(gè)瓶?jī)?nèi)魚(yú)粉重量 10g，再用鋁箔袋將聚乙烯瓶進(jìn)行真空封裝；以下是本發(fā)明的具體實(shí)施實(shí)驗(yàn)和效果數(shù)據(jù)，以進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但是本發(fā)明不僅限于此。1、均勻性檢驗(yàn)采用單因素方差分析進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)，隨機(jī)抽取10個(gè)樣品，每個(gè)樣品平行測(cè)定2 次，進(jìn)行單因素方差分析，分析結(jié)果表明，環(huán)丙沙星F值為0. 74 ；恩諾沙星F值為0. 88，均小于F臨界值3. 02，樣品是均勻的。稱(chēng)取0. 5g樣品，加2. Oml水還原15min，按GB/T20366-2006《動(dòng)物源產(chǎn)品中喹諾酮類(lèi)殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》方法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下表1環(huán)丙沙星均勻性檢測(cè)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種鯉魚(yú)肌肉中環(huán)丙沙星、恩諾沙星殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，其特征在于 采用環(huán)丙沙星、恩諾沙星對(duì)活鯉魚(yú)進(jìn)行添加養(yǎng)殖并控制添加時(shí)間，使鯉魚(yú)體內(nèi)含有環(huán)丙沙星、恩諾沙星，在不含藥物水中飼養(yǎng)待鯉魚(yú)肌肉中藥物分布達(dá)到均勻狀態(tài)后，取魚(yú)肉勻漿制成魚(yú)糜，冷凍干燥，過(guò)篩，裝瓶，真空封裝，制備得到鯉魚(yú)肌肉中同時(shí)含有環(huán)丙沙星、恩諾沙星凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品。
2.—種鯉魚(yú)肌肉中同時(shí)含有環(huán)丙沙星、恩諾沙星殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，其特征在于所述制備的凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品中的環(huán)丙沙星、恩諾沙星濃度約為lOOug/kg。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鯉魚(yú)肌肉中環(huán)丙沙星、恩諾沙星殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，其特征在于采用內(nèi)外包裝，內(nèi)包裝使用聚乙烯瓶，外包裝使用鋁箔袋真空封裝。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的鯉魚(yú)肌肉中環(huán)丙沙星、恩諾沙星殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇市購(gòu)活體鯉魚(yú)，要求個(gè)體大小均一、均重約1.^g，應(yīng)先確認(rèn)樣品中不含環(huán)丙沙星、恩諾沙星，隨機(jī)取樣，檢測(cè)確認(rèn)為陰性樣品后進(jìn)行喂養(yǎng)，陰性樣品在 200C -25°C環(huán)境下飼養(yǎng)2天后，剔除受傷不健康的鯉魚(yú)；(2)藥物養(yǎng)殖添加向魚(yú)池中添加的醫(yī)用環(huán)丙沙星和恩諾沙星片劑，先將兩種藥片分別粉碎、水溶解，根據(jù)養(yǎng)殖水量，添加藥物使水中環(huán)丙沙星濃度約為500ug/L，喂養(yǎng)M小時(shí)后再添加恩諾沙星藥液，濃度控制約為250ug/L，實(shí)時(shí)監(jiān)控檢測(cè)水體中和魚(yú)體內(nèi)藥物濃度， 在此條件下繼續(xù)養(yǎng)殖18- 小時(shí)后，鯉魚(yú)肌肉內(nèi)藥物濃度約為環(huán)丙沙星和恩諾沙星濃度分別約為20ug/kg和25ug/kg，將鯉魚(yú)撈至不含環(huán)丙沙星和恩諾沙星的養(yǎng)殖池中繼續(xù)養(yǎng)殖12 小時(shí)，使鯉魚(yú)肌肉內(nèi)藥物分布均勻，此時(shí)鯉魚(yú)肌肉內(nèi)藥物濃度約為環(huán)丙沙星和恩諾沙星濃度分別約為20ug/kg和20ug/kg ；(3)撈出步驟( 中飼養(yǎng)完成后的鯉魚(yú)快速冷凍至_18°C以下，將冷凍的鯉魚(yú)室溫下解凍，去鱗、去皮、去頭、去刺、去內(nèi)臟，留取肌肉部分；(3)攪碎勻漿將魚(yú)肉混合攪碎，IOkg攪碎魚(yú)肉中加2kg稀釋劑，即5%的乙醇溶液，ν/ v，混勻制成魚(yú)糜；(4)冷凍干燥冷凍干燥條件-60°C速凍成厚度不超過(guò)2cm的凍塊，置于真空干燥倉(cāng)中，快速升溫至60°C，保持48小時(shí)，直至凍塊干燥；(5)粉碎勻質(zhì)將冷凍干燥的魚(yú)糜用中藥粉碎機(jī)粉碎，以攪拌鍋混勻；(6)過(guò)篩勻質(zhì)后的魚(yú)粉過(guò)0.6mm孔篩，棄去篩余；(7)包裝快速用聚乙烯瓶分裝，再用鋁箔袋將聚乙烯瓶進(jìn)行真空封裝。
全文摘要
本發(fā)明是一種鯉魚(yú)肌肉中環(huán)丙沙星、恩諾沙星殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，以鯉魚(yú)為研究對(duì)象，用添加目標(biāo)藥物飼養(yǎng)方式，研制出同時(shí)含有一定濃度環(huán)丙沙星和恩諾沙星的鯉魚(yú)肌肉實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)樣品。掌握本實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)樣品的生產(chǎn)關(guān)鍵控制技術(shù)，包括含量水平、均勻性、穩(wěn)定性及定值等的控制，實(shí)現(xiàn)該標(biāo)準(zhǔn)樣品的規(guī)范化、規(guī)模化生產(chǎn)制備。該標(biāo)準(zhǔn)樣品用于動(dòng)物源食品獸藥殘留檢測(cè)質(zhì)量控制和檢測(cè)能力評(píng)價(jià)，對(duì)食品安全檢測(cè)具有重要意義。
文檔編號(hào)G01N1/28GK102323123SQ201110209329
公開(kāi)日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2011年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月19日
發(fā)明者馮燕平, 周長(zhǎng)朋, 崔鳳杰, 時(shí)文春, 楊麗君 申請(qǐng)人:時(shí)文春