專利名稱：一種組織脫蠟液的制作方法
一種組織脫蠟液技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于病理學(xué)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種免疫組織化學(xué)、免疫細胞化學(xué)和原位雜交過程中石蠟包埋組織或細胞的脫蠟液。技術(shù)背景
目前，絕大多數(shù)病理組織切片的制作仍采用傳統(tǒng)的石蠟切片制作技術(shù)。病理制片過程中，組織的透明、切片染色前的脫蠟和染色后的透明三個環(huán)節(jié)，普遍采用二甲苯作為透明、脫蠟劑。雖然二甲苯具有良好的脫蠟和透明效果，但它是具有強烈刺激性氣味的有毒物質(zhì)，可經(jīng)呼吸道和皮膚吸收進入體內(nèi)。二甲苯對眼及上呼吸道有刺激作用，高濃度時對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有麻醉作用。短期內(nèi)吸入較高濃度二甲苯可出現(xiàn)眼及上呼吸道明顯的刺激癥狀、 眼結(jié)膜及咽部充血、頭暈、惡心、嘔吐、胸悶、四肢無力、意識模糊、步態(tài)蹣跚。重者可有躁動、 抽搐或昏迷，有的有癔病樣發(fā)作。長期接觸有神經(jīng)衰弱綜合征，女工有月經(jīng)異常，工人常發(fā)生皮膚干燥、皸裂、皮炎等癥狀。而且在組織處理過程中，二甲苯易使組織收縮、硬化變脆、 對切片質(zhì)量有一定影響。
以IHC為基礎(chǔ)的病理診斷的快速發(fā)展極大的推動了自動化染色儀的普及，自動化染色儀的發(fā)展代表外科病理學(xué)診斷的另一重要進展和創(chuàng)新。自動化控制和標準化所有關(guān)鍵性步驟，包括試劑應(yīng)用、沖洗、最佳滴度、蒸發(fā)控制、溫度和濕度，通過減少人為和技術(shù)造成的誤差，提高了染色的精確性、一致性、重現(xiàn)性和可靠性。自動化染色儀不僅使全方位控制染色成為可能，而且使IHC可被以前沒有專門進行手動IHC的操作員采用。但由于二甲苯會腐蝕儀器的部件，所以絕大多數(shù)自動化染色儀不能在線脫蠟或選擇其它二甲苯替代物脫蠟。
因此，為了保護相關(guān)實驗員的身體健康，并提高自動化染色儀的自動化程度，尋找一種無毒、無刺激性氣味、無腐蝕性的脫蠟液尤為重要。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種無毒、無刺激性氣味、無腐蝕性的組織脫蠟液。
本發(fā)明的脫蠟液包括植物油。
所述的植物油為大豆油、玉米油、葵花籽油、棉籽油、芝麻油、山茶油、棕櫚油中的一種或多種的混合物。
所述植物油在脫蠟液中的質(zhì)量比例為50% 100%。
更優(yōu)選地，所述植物油在脫蠟液中的質(zhì)量比例為90% 100%。
更優(yōu)選地，所述脫蠟液為植物油。
本發(fā)明的脫蠟液既可用于常規(guī)實驗室組織石蠟切片的手動脫蠟，也可用于自動化染色儀上組織石蠟切片的在線脫蠟。
本發(fā)明的脫蠟液用于實驗室手動脫蠟的步驟為將組織切片置于第一缸脫蠟液中，室溫浸泡3-10分鐘，取出切片后放入第二缸脫蠟液中以相同條件重復(fù)上一步操作，再3取出切片放入第三缸脫蠟液中以相同條件重復(fù)上一步操作；自來水沖洗后先后將切片分別放入100%、100%、95%、85%的酒精中浸泡0. 5-3min分鐘，然后用水沖洗即可完成。
本發(fā)明的脫蠟液用于自動化染色儀上脫蠟的步驟為將脫蠟液滴在切片上使其完全覆蓋組織或細胞，2(T75°C處理3-10分鐘，去除切片表面的脫蠟液，滴加新的脫蠟液重復(fù)以上步驟兩次，自來水沖洗后，用50%以上相同濃度的酒精沖洗3次，每次0. 5-3分鐘，最后用水沖洗即可完成。
我們通過反復(fù)試驗，找到一種新的組織/細胞脫蠟液和脫蠟方法，在脫蠟過程中能完全取代二甲苯，取得了良好的染色效果，與二甲苯脫蠟效果無差異。并且我們采用的脫蠟液主要成分是天然植物油，對人體健康和環(huán)境無危害。


圖1為植物油脫蠟后HE染色結(jié)果。
圖2為植物油-CCl4脫蠟后HE染色結(jié)果。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明，以下實施例是為了進一步說明本發(fā)明，但不應(yīng)視為限制本發(fā)明。
實施例1 研究對象為甲醛固定-石蠟包埋的子宮平滑肌瘤、乳癌、扁桃體組織(XX醫(yī)院病理科)。脫蠟步驟為分別將脫蠟液滴在切片上使其完全覆蓋組織，室溫處理3-10分鐘，浙去切片表面的脫蠟液，滴加新的脫蠟液重復(fù)以上步驟兩次，自來水沖洗后先后將切片放入 100%、100%、95%、85%的酒精中浸泡0. 5-3min分鐘，最后用水沖洗即可完成。
同時設(shè)置二甲苯脫蠟對照組，其脫蠟步驟為將組織石蠟切片置于第一缸二甲苯中，室溫浸泡3-10分鐘，取出切片后放入第二缸二甲苯中以相同條件重復(fù)上一步操作，再取出切片放入第三缸二甲苯中以相同條件重復(fù)上一步操作；自來水沖洗后先后將切片放入 100%、100%、95%、85%的酒精中浸泡0. 5-3min分鐘，然后用水沖洗即可完成。
脫蠟完成后進行HE染色，其步驟為1)將組織切片浸泡于蘇木素染液中廣aiiin。
2) PBS 緩沖液中 15 40s。
3)自來水沖洗后浸泡于伊紅染液中15 2k。
4)85%酒精中3 158。
5) 95% 酒精中 3 15s。
6) 100% 酒精中 3 15s。
7) 100% 酒精中 3 15s。
8) 二甲苯中廣2min。
9)中性樹膠封固。
10)鏡檢。
實驗結(jié)果顯示，對于以上所有組織的HE染色，分別由大豆油、玉米油、葵花籽油、 棉籽油、芝麻油、山茶油、棕櫚油組成的脫蠟液或由上述植物油與四氯化碳以一定比例混合組成的脫蠟液處理后的HE染色結(jié)果與二甲苯脫蠟后HE染色結(jié)果無差異(圖1、圖2)。
試劑配置A 0. 5^1%的伊紅酒精溶液稱取伊紅Y 0. 5^1 g，加少量蒸餾水溶解后，再滴加冰醋酸直至漿糊狀。以濾紙過濾，將濾渣在烘箱中烤干后，用95%酒精IOOmL溶解。
B 蘇木素染液配方(配制3000 mL,可按比列減少) 蘇木精6 g無水乙醇100 ml 硫酸鋁鉀150 g 蒸餾水2000 ml 碘酸鈉1. 2 g 冰醋酸120 ml 甘油900 ml配制方法將蘇木素溶于無水乙醇，再將硫酸鋁鉀溶于蒸餾水，溶解后將甘油傾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸鈉。
實施例2 研究對象為甲醛固定-石蠟包埋的食道鱗癌、淋巴瘤、乳腺癌、胃癌、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌、神經(jīng)鞘瘤、肝癌、扁桃體組織(XX醫(yī)院病理科)。檢測的目標抗原有ki-67、⑶43、 C-erbB-2、p53、PR、S-100、CK8、ER、CD45R0、CD20。
脫蠟步驟為分別將脫蠟液滴在切片上使其完全覆蓋組織，室溫處理3-10分鐘， 浙去切片表面的脫蠟液，滴加新的脫蠟液重復(fù)以上步驟兩次，自來水沖洗后，用75%的酒精沖洗3次，每次0. 5-3分鐘，最后用水沖洗即可完成。
同時設(shè)置二甲苯脫蠟對照組，其脫蠟步驟為將組織石蠟切片置于第一缸二甲苯中，室溫浸泡3-10分鐘，取出切片后放入第二缸二甲苯中以相同條件重復(fù)上一步操作，再取出切片放入第三缸二甲苯中以相同條件重復(fù)上一步操作；自來水沖洗后先后將切片放入 100%、100%、95%、85%的酒精中浸泡0. 5-3min分鐘，最后用水沖洗即可完成。
脫蠟完成后采用檸檬酸高溫高壓抗原修復(fù)，其步驟為取適量已稀釋成工作液的檸檬酸抗原修復(fù)液(800-1500mL，pH6. 0)于壓力鍋中，將壓力鍋放置在電磁爐上，大功率加熱至沸騰；將功率調(diào)至中等(800-1000W)，將切片置于耐高溫染色架上，放入壓力鍋中，蓋上鍋蓋繼續(xù)加熱；當(dāng)壓力閥開始均勻噴氣是計時1. 5-2分鐘，移開壓力鍋，室溫冷卻10分鐘后用自來水在壓力鍋外壁沖淋加速冷卻，當(dāng)冷卻至室溫后取出玻片，自來水沖洗，在組織 3mm左右處用免疫組化油筆畫圈，PBS沖洗2X3分鐘。加入過氧化物酶阻斷劑，室溫孵育10 分鐘，PBS沖洗3X3分鐘。加入一抗，室溫孵育1小時，PBS沖洗3X3分鐘。加入二抗，室溫孵育15分鐘，PBS沖洗3X3分鐘。加入DAB顯色液，室溫孵育5分鐘，自來水沖洗終止顯色，蘇木素復(fù)染，PBS返藍。經(jīng)梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封片后顯微鏡檢。
結(jié)果顯示，所有的切片經(jīng)顯微鏡觀察無蠟點存在，脫蠟徹底，與二甲苯對比，脫蠟效果、染色強度及背景強度均無差異(表1、表2、表3)。表明，本發(fā)明的脫蠟液可完全取代二甲苯，成為一種新的石蠟組織切片脫蠟劑。
表1各種植物油脫蠟效果
權(quán)利要求
1.一種組織脫蠟液，其特征在于所述脫蠟液包括植物油。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織脫蠟液，其特征在于所述的植物油為大豆油、玉米油、 葵花籽油、棉籽油、芝麻油、山茶油、棕櫚油中的一種或多種的混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織脫蠟液，其特征在于所述植物油在脫蠟液中的質(zhì)量比例為 50%-100%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織脫蠟液，其特征在于所述植物油在脫蠟液中的質(zhì)量比例為 90%-100%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織脫蠟液，其特征在于所述脫蠟液為植物油。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種組織脫蠟液，所述脫蠟液包括植物油。本發(fā)明的脫蠟液既可用于常規(guī)實驗室組織石蠟切片的手動脫蠟，也可用于自動化染色儀上組織石蠟切片的在線脫蠟。在脫蠟過程中能完全取代二甲苯，取得了良好的染色效果，與二甲苯脫蠟效果無差異。并且我們采用的脫蠟液主要成分是天然植物油，對人體健康和環(huán)境無危害。
文檔編號G01N1/28GK102507284SQ20111035696
公開日2012年6月20日 申請日期2011年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月11日
發(fā)明者林齊心, 熊玉林, 王小亞 申請人:福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司