專利名稱：一種柿葉提取物及其制劑的hplc分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種柿葉提取物及其制劑的成分的分析技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及利用高效液相色譜法進(jìn)行的一種柿葉提取物及其制劑的HPLC分析方法。
背景技術(shù)：
柿葉為柿科植物柿樹的干燥葉，柿葉主要含黃酮類、有機(jī)酸和三萜等成分。柿葉具有抗菌消炎、清熱解毒、抗氧化、軟化血管等作用，因而可以作為藥物來利用。由于柿葉具有上述的藥效，因而，在現(xiàn)有技術(shù)中，柿葉的提取得到多方研究.柿葉提取物，是指經(jīng)法定工藝制得的中間提取物，其工藝路線為取干柿葉，加水煎煮二次，第一次2小時(shí)，第二次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度1. 12 1. 15 (60°C )，加乙醇至含醇量達(dá)85%，靜置過夜，濾取上清液，備用；沉淀物用65%乙醇洗滌兩次，合并洗滌液，靜置過夜，濾取上清液，與備用上清液合并，回收乙醇，加入適量的水，混勻，濾過，濾液用乙酸乙酯提取四次，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯并濃縮成稠膏，低溫干燥，即得。柿葉提取物目前主要用于制備腦心清片、腦心清膠囊、腦心清滴丸和腦心清分散片等一些制劑，由于不用產(chǎn)地、不同氣候及提取工藝會(huì)影響柿葉提取物有效成分含量，從而影響柿葉提取物的質(zhì)量，而柿葉提取物的質(zhì)量又決定了腦心清片、腦心清滴丸等制劑的質(zhì)量好壞，所以，需要對(duì)柿葉提取物及其制劑的主要成分進(jìn)行分析，考察柿葉提取物及其制劑質(zhì)量好壞及各批次產(chǎn)品之間的質(zhì)量差異。在現(xiàn)有技術(shù)中，僅存在對(duì)不同產(chǎn)地柿葉進(jìn)行質(zhì)量分析的方法，具體為稱取柿葉粉末約5g，置于索氏提取器中，加入200mL石油醚，80°C回流 5h，用于脫脂及除葉綠素。精密稱取脫脂柿葉粉末1. Og于25mL具塞錐形瓶中，加入10. OOmL 甲醇-水(75 25)的提取溶液，密塞后稱重。超聲提取40min，放冷，稱重，甲醇補(bǔ)足減失重量。搖勻，過0. 45μπι濾膜，取續(xù)濾液進(jìn)樣。精密吸取供試品溶液10 μ 1進(jìn)樣，采用以下色譜條件進(jìn)行洗脫P(yáng)henomenex Luna C18色譜柱(4. 6mmX 250mm, 5 μ m)和保護(hù)柱；檢測波長 360nm ；柱溫為室溫；流速0. 8mL ·π η-1 ；進(jìn)樣量20 μ L。流動(dòng)相為乙腈-IOmmol 'L-1KH2P04 溶液，二元梯度洗脫，0 20min，13%乙腈，20 45min，20%乙腈，45 60min，60%乙腈， 60 70min, 100% 乙腈。上述的現(xiàn)有技術(shù)存在如下缺點(diǎn)1、現(xiàn)有技術(shù)主要是對(duì)不同產(chǎn)地的柿葉藥材進(jìn)行指紋圖譜分析，考察不同產(chǎn)地柿葉的質(zhì)量穩(wěn)定性；2、現(xiàn)有技術(shù)所得的指紋圖譜中含有12個(gè)特征色譜峰，只對(duì)其中的2個(gè)進(jìn)行了指認(rèn)，反映的信息量小。所以到目前為止，仍無較好的方法來全面分析柿葉提取物及其制劑中主要化學(xué)成分以及考察它們的質(zhì)量穩(wěn)定性
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種柿葉提取物及其制劑的HPLC分析方法，對(duì)柿葉提取物及其制劑的主要成分進(jìn)行綜合分析，對(duì)不同批次的柿葉提取物及其制劑的指紋圖譜相進(jìn)行測試，建立柿葉提取物及其制劑的HPLC對(duì)照指紋圖譜，通過測試柿葉提取物及其制劑樣品的指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜的相似度，來鑒別柿葉提取物及其制劑質(zhì)量的優(yōu)劣程度，達(dá)到控制柿葉提取物及其制劑質(zhì)量的目的。為了解決上述問題，本發(fā)明是采用如下技術(shù)解決方案來實(shí)現(xiàn)上述目的一種柿葉提取物及其制劑的HPLC分析方法，包括如下步驟1)稱取至少十個(gè)柿葉提取物樣品或柿葉提取物制劑粉末樣品，分別與乙醇或甲醇混合、過濾，得到各樣品的供試品溶液；2)而后利用HPLC進(jìn)行分析，得到各樣品的HPLC指紋圖譜，根據(jù)各樣品的HPLC指紋圖譜建立柿葉提取物或柿葉提取物制劑的HPLC對(duì)照指紋圖譜；其中，HPLC的色譜條件流動(dòng)相設(shè)定如下乙腈-磷酸溶液，二元梯度洗脫洗脫時(shí)間為9 llmin，濃度從13% 15% 變化至17% 19%的乙腈；洗脫時(shí)間為14 16min，濃度為17% 19%的乙腈；洗脫時(shí)間為19 21min，濃度從17% 19%變化至29% 31%的乙腈；洗脫時(shí)間為14 16min，濃度從29% 31%變化至49% 51%的乙腈；3)將待測樣品與甲醇或乙醇混合、過濾，得到待測樣品的供試品溶液，而后用 HPLC按步驟2)中的色譜條件進(jìn)行分析，得到該待測樣品的HPLC指紋圖譜，將該指紋圖譜與相應(yīng)的HPLC對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行比較。優(yōu)選地，過濾采用微孔濾膜進(jìn)行。優(yōu)選地，所述微孔濾膜的孔徑為0. 35 μ m 0. 45 μ m。優(yōu)選地，將柿葉提取物制劑去除外殼后碾成粉末，制成柿葉提取物制劑粉末樣品。優(yōu)選地，步驟1)中，在過濾之前，先將柿葉提取物制劑粉末樣品與甲醇或乙醇的混合物超聲后放涼。優(yōu)選地，步驟1)中，超聲時(shí)間為IOmin 50min。優(yōu)選地，所述乙醇或甲醇的濃度為50% 100%。優(yōu)選地，高效液相色譜分析法分析中，采用二極管陣列檢測器采集波長，采集范圍為從(190nm 210nm)至(390nm 410nm)；檢測波長 250nm 260nm。優(yōu)選地，所述磷酸溶液的濃度為0. 1 % 0. 3 %。優(yōu)選地，步驟2)中，平衡時(shí)間為IOmin 30min。與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明由于對(duì)色譜條件進(jìn)行合理設(shè)置，使得采用本發(fā)明的方法所得的指紋圖譜中含有16個(gè)特征峰，并對(duì)其中的7個(gè)進(jìn)行了指認(rèn)，相比于現(xiàn)有技術(shù)中所得的指紋圖譜中含有12個(gè)特征峰，只對(duì)其中的2個(gè)進(jìn)行指認(rèn)，本發(fā)明反映的信息量大，能更好地達(dá)到控制柿葉提取物及其制劑質(zhì)量的目的。本發(fā)明建立柿葉提取物及其制劑的HPLC 分析方法，對(duì)不同廠家、不同批次的柿葉提取物及制劑HPLC指紋圖譜進(jìn)行對(duì)比研究，建立柿葉提取物及制劑的HPLC對(duì)照指紋圖譜，對(duì)柿葉提取物及其制劑的質(zhì)量進(jìn)行分析，辨別柿葉提取物及其制劑質(zhì)量的好壞、優(yōu)劣，達(dá)到控制柿葉提取物及其制劑質(zhì)量的目的。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例一建立的柿葉提取物的對(duì)照指紋圖譜；
圖2為本發(fā)明實(shí)施例二建立的柿葉提取物制劑_腦心清片的對(duì)照指紋圖譜；圖3為本發(fā)明實(shí)施例三建立的柿葉提取物制劑_腦心清膠囊的對(duì)照指紋圖譜。
具體實(shí)施例方式為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面通過具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。本發(fā)明的基本構(gòu)思是建立柿葉提取物及其制劑的HPLC分析方法，對(duì)不同廠家、 不同批次的柿葉提取物及制劑HPLC指紋圖譜進(jìn)行對(duì)比研究，建立柿葉提取物及制劑的 HPLC對(duì)照指紋圖譜，然后將待測樣品的指紋圖譜與該對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行比較、鑒別，辨別柿葉提取物及其制劑質(zhì)量的好壞、優(yōu)劣，達(dá)到控制柿葉提取物及其制劑質(zhì)量的目的。以上所述的HPLC為高效液相色譜的簡稱。實(shí)施例一1、建立對(duì)照指紋圖譜取柿葉提取物0.03g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇10ml，搖勻， 微孔濾膜(0.45μπι)過濾，即得供試品溶液。精密吸取供試品溶液10 μ 1進(jìn)樣，采用以下色譜條件進(jìn)行洗脫色譜柱(美國安捷倫公司TC C18 (4. 6mmX250mm,5ym))；乙腈-0.2%磷酸溶液，二元梯度洗脫洗脫時(shí)間為lOmin，濃度從14%變化至 18%的乙腈；洗脫時(shí)間為15min，濃度為18%的乙腈；洗脫時(shí)間為20min，濃度從18%變化至30%的乙腈；洗脫時(shí)間為15min，濃度從30%變化至50%的乙腈；平衡時(shí)間20min ；流速 1. Oml · HiirT1 ；進(jìn)樣量10 μ 1 ；柱溫25°C ；DAD檢測器采集范圍200nm 400nm ；檢測波長 256nm。通過上述方法對(duì)十個(gè)批次的柿葉提取物樣品進(jìn)行指紋圖譜測定，色譜儀上安裝國家藥典委員會(huì)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)，通過該系統(tǒng)建立柿葉提取物對(duì)照指紋圖譜，柿葉提取物應(yīng)具有16個(gè)共有特征峰(其中有7個(gè)特征峰得到指認(rèn))，結(jié)果如圖1所示， 其中峰2 原兒茶酸；峰3 糠酸；峰7 金絲桃苷；峰8 異槲皮素；峰12 黃芪苷；峰15 槲皮素；峰16:山柰素。2、檢測取待測柿葉提取物0.03g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇10ml， 搖勻，微孔濾膜(0.45μπι)過濾，即得供試品溶液。精密吸取供試品溶液10μ 1進(jìn)樣，采用以下色譜條件進(jìn)行洗脫色譜柱(美國安捷倫公司TC C18(4.6_X25(kim，5ym))；乙腈-0.2%磷酸溶液，二元梯度洗脫洗脫時(shí)間為lOmin，濃度從14%變化至 18%的乙腈；洗脫時(shí)間為15min，濃度為18%的乙腈；洗脫時(shí)間為20min，濃度從18%變化至30%的乙腈；洗脫時(shí)間為15min，濃度從30%變化至50%的乙腈；平衡時(shí)間20min ；流速 1. Oml · HiirT1 ；進(jìn)樣量10 μ 1 ；柱溫25°C ；DAD檢測器采集范圍200nm 400nm ；檢測波長 256nm。用上述測試方法得到該待測柿葉提取物樣品的指紋圖譜后，再利用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)將該指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行比較，得出該指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜的相似度。在使用對(duì)照指紋圖譜對(duì)柿葉提取物樣品進(jìn)行鑒別時(shí)，樣品的指紋圖譜中，應(yīng)呈現(xiàn)16個(gè)與對(duì)照指紋圖譜相對(duì)應(yīng)的特征峰，同時(shí)，樣品的指紋圖譜與對(duì)照圖譜的相似度應(yīng)該不低于0. 90。如果該待測樣品具有16個(gè)與對(duì)照指紋圖譜相對(duì)應(yīng)的特征峰，且通過中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)得出其與對(duì)照指紋圖譜的相似度大于或等于0. 90，可以認(rèn)為該待測樣品的質(zhì)量較好。使用本發(fā)明的對(duì)照指紋圖譜能很好地達(dá)到控制柿葉提取物質(zhì)量的目的。實(shí)施例二1、建立對(duì)照指紋圖譜取柿葉提取物制劑_腦心清片10片，去包衣，碾碎，稱取粉末0. 50g,置具塞錐形瓶中，精密加入65 %甲醇25ml，稱重，超聲30min，放冷，稱重，用65%甲醇補(bǔ)足減失重量。微孔濾膜(0.45μπι)過濾，即得供試品溶液。精密吸取供試品溶液10 μ 1進(jìn)樣，采用以下色譜條件進(jìn)行洗脫色譜柱(美國安捷倫公司TC C18(4.6_X25(kim，5ym))；乙腈-0.2%磷酸溶液，二元梯度洗脫洗脫時(shí)間為llmin，濃度從15%變化至 17%的乙腈；洗脫時(shí)間為16min，濃度為17%的乙腈；洗脫時(shí)間為21min，濃度從17%變化至29%的乙腈；洗脫時(shí)間為16min，濃度從31%變化至49%的乙腈；平衡時(shí)間20min ；流速 1. Oml · miiT1 ；進(jìn)樣量10 μ 1 ；柱溫25V ；DAD檢測器采集范圍:1900nm 390nm ；檢測波長 250nmo通過上述方法對(duì)十個(gè)批次的柿葉提取物制劑_腦心清片進(jìn)行指紋圖譜進(jìn)行測定， 色譜儀上安裝國家藥典委員會(huì)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)，通過該系統(tǒng)建立腦心清片對(duì)照指紋圖譜，腦心清片對(duì)照指紋圖譜應(yīng)具有16個(gè)共有特征峰(其中有7個(gè)特征峰得到指認(rèn))，結(jié)果如圖2所示，其中峰2 原兒茶酸；峰3 糠酸；峰7 金絲桃苷；峰8 異槲皮素；峰12 黃芪苷；峰15 槲皮素；峰16 山柰素。2、檢測取待測柿葉提取物制劑-腦心清片10片，去包衣，碾碎，稱取粉末0. 50g，置具塞錐形瓶中，精密加入65%甲醇25ml，稱重，超聲30min，放冷，稱重，用65%甲醇補(bǔ)足減失重量。 微孔濾膜(0.45μπι)過濾，即得供試品溶液。精密吸取供試品溶液10 μ 1進(jìn)樣，采用以下色譜條件進(jìn)行洗脫色譜柱(美國安捷倫公司TC C18(4.6_X25(kim，5ym))；乙腈-0.2%磷酸溶液，二元梯度洗脫洗脫時(shí)間為llmin，濃度從15%變化至 17%的乙腈；洗脫時(shí)間為16min，濃度為17%的乙腈；洗脫時(shí)間為21min，濃度從17%變化至29%的乙腈；洗脫時(shí)間為16min，濃度從29%變化至49%的乙腈；平衡時(shí)間20min ；流速 1. Oml · miiT1 ；進(jìn)樣量10 μ 1 ；柱溫25°C ；DAD檢測器采集范圍:190nm 390nm ；檢測波長 250nmo用上述測試方法得到該待測柿葉提取物制劑_腦心清片樣品的指紋圖譜，再利用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)將該指紋圖譜與特征圖譜進(jìn)行比較，得出該指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜的相似度，同時(shí)觀察該指紋圖譜相對(duì)應(yīng)的特征峰個(gè)數(shù)，最后評(píng)價(jià)柿葉提取物制劑-腦心清片樣品的質(zhì)量。在使用對(duì)照指紋圖譜對(duì)柿葉提取物制劑腦心清片樣品進(jìn)行鑒別時(shí)，樣品的指紋圖譜中，應(yīng)呈現(xiàn)16個(gè)與對(duì)照指紋圖譜相對(duì)應(yīng)的特征峰，同時(shí)，樣品的指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜的相似度應(yīng)該不低于0. 90。如果該待測樣品具有16個(gè)與對(duì)照指紋圖譜相對(duì)應(yīng)的特征峰，且通過中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)得出其與對(duì)照指紋圖譜的相似度大于或等于0. 90，可以認(rèn)為該待測樣品的質(zhì)量較好。使用本發(fā)明的對(duì)照指紋圖譜能很好地達(dá)到控制柿葉提取物制劑_腦心清片質(zhì)量的目的。在其他實(shí)施方式中，可以采用甲醇或者其他濃度的乙醇，如乙醇濃度為50 % 100%中的任意一值。實(shí)施例三1、建立特征圖譜取柿葉提取物制劑_腦心清膠囊10粒，去掉膠囊外殼，碾碎內(nèi)容物，稱取粉末 0. 50g,置具塞錐形瓶中，精密加入85 %乙醇25ml，稱重，超聲15min，放冷，稱重，用85 %乙醇補(bǔ)足減失重量。微孔濾膜(0.35μπι)過濾，即得供試品溶液。精密吸取供試品溶液10 μ 1進(jìn)樣，采用以下色譜條件進(jìn)行洗脫色譜柱(美國安捷倫公司TC C18 (4. 6mmX250mm,5ym))；乙腈-0. 3%磷酸溶液，二元梯度洗脫洗脫時(shí)間為9min，濃度從13%變化至19% 的乙腈；洗脫時(shí)間為14min，濃度為19%的乙腈；洗脫時(shí)間為19min，濃度從19 %變化至 31%的乙腈；洗脫時(shí)間為16min，濃度從31%變化至50%的乙腈；平衡時(shí)間25min ；流速 1.0ml IirT1 ；進(jìn)樣量10 μ 1 ；柱溫25°C ；DAD檢測器采集范圍:210nm 410nm ；檢測波長 256nm。通過上述方法對(duì)十個(gè)批次的柿葉提取物制劑_腦心清膠囊進(jìn)行指紋圖譜測定，色譜儀上安裝國家藥典委員會(huì)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)，通過該系統(tǒng)建立對(duì)照指紋圖譜，柿葉提取物制劑腦心清膠囊的對(duì)照指紋圖譜應(yīng)具有16個(gè)共有特征峰(其中有7個(gè)特征峰得到指認(rèn))，結(jié)果如圖3所示，其中峰2 原兒茶酸；峰3 糠酸；峰7 金絲桃苷；峰8 異槲皮素；峰12 黃芪苷；峰15 槲皮素；峰16 山柰素。2、檢測取待測柿葉提取物制劑-腦心清膠囊10粒，去掉膠囊外殼，碾碎內(nèi)容物，稱取粉末
0.50g,置具塞錐形瓶中，精密加入85 %乙醇25ml，稱重，超聲45min，放冷，稱重，用85 %乙醇補(bǔ)足減失重量。微孔濾膜(0.35μπι)過濾，即得供試品溶液。精密吸取供試品溶液10 μ 1進(jìn)樣，采用以下色譜條件進(jìn)行洗脫色譜柱(美國安捷倫公司TC C18(4.6_X25(kim，5ym))；乙腈-0. 3%磷酸溶液，二元梯度洗脫洗脫時(shí)間為9min，濃度從13%變化至19% 的乙腈；洗脫時(shí)間為14min，濃度為19%的乙腈；洗脫時(shí)間為19min，濃度從19 %變化至 31 %的乙腈；洗脫時(shí)間為16min，濃度從31 %變化至50 %的乙腈；平衡時(shí)間25min ；流速
1.Oml · min-1 ；進(jìn)樣量10 μ 1 ；柱溫25V ；DAD檢測器采集范圍210nm 410nm ；檢測波長 256nm。用上述測試方法得到該待測柿葉提取物制劑_腦心清膠囊樣品的指紋圖譜，再利用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)將該指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行比較，得出該指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜的相似度。在使用對(duì)照指紋圖譜對(duì)柿葉提取物制劑-腦心清膠囊樣品進(jìn)行鑒別時(shí)，樣品的指紋圖譜中，應(yīng)呈現(xiàn)16個(gè)與特征相對(duì)應(yīng)的特征峰，同時(shí)，樣品的指紋圖譜與特征圖譜的相似度應(yīng)該不低于0. 90。如果該待測樣品的指紋圖譜具有16個(gè)與對(duì)照指紋圖譜相對(duì)應(yīng)的特征峰，且通過中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)計(jì)算得出其與對(duì)照指紋圖譜的相似度大于或等于0. 90，可以認(rèn)為該待測樣品的質(zhì)量較好。使用本發(fā)明的對(duì)照指紋圖譜能很好地達(dá)到控制柿葉提取物制劑_腦心清膠囊質(zhì)量的目的。在其他實(shí)施方式中，可以采用甲醇或者其他濃度的乙醇作為提取液，如可選用 55 %的乙醇或甲醇、69 %的乙醇或甲醇、70 %的乙醇或甲醇、76 %的乙醇或甲醇、82 %的乙醇或甲醇。以上對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)介紹，文中應(yīng)用具體個(gè)例對(duì)本發(fā)明的原理及實(shí)施方式進(jìn)行了闡述，以上實(shí)施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種柿葉提取物及其制劑的HPLC分析方法，其特征在于，包括如下步驟1)稱取至少十個(gè)柿葉提取物樣品或柿葉提取物制劑粉末樣品，分別與乙醇或甲醇混合、過濾，得到各樣品的供試品溶液；2)而后利用HPLC對(duì)各樣品的供試品溶液進(jìn)行分析，得到各樣品的HPLC指紋圖譜，根據(jù)各樣品的HPLC指紋圖譜建立柿葉提取物或柿葉提取物制劑的HPLC指紋圖譜；其中，HPLC 的色譜條件流動(dòng)相設(shè)定如下乙腈-磷酸溶液，二元梯度洗脫洗脫時(shí)間為9 llmin，濃度從13% 15%變化至17% 19%的乙腈；洗脫時(shí)間為14 16min，濃度為17% 19%的乙腈；洗脫時(shí)間為19 21min，濃度從17% 19%變化至 31%的乙腈；洗脫時(shí)間為 14 16min，濃度從四％ 31%變化至49% 51%的乙腈；3)將待測樣品與甲醇或乙醇混合、過濾，得到待測樣品的供試品溶液，而后用HPLC按步驟i)中的色譜條件進(jìn)行分析，得到該待測樣品的HPLC指紋圖譜，將該指紋圖譜與相應(yīng)的 HPLC對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行比較。
2.如權(quán)利要求1所述的柿葉提取物及其制劑的HPLC分析方法，其特征在于，過濾采用微孔濾膜進(jìn)行。
3.如權(quán)利要求2所述的柿葉提取物及其制劑的HPLC分析方法，其特征在于，所述微孔濾膜的孔徑為0. 35 μ m 0. 45 μ m。
4.如權(quán)利要求1所述的柿葉提取物及其制劑的HPLC分析方法，其特征在于，將柿葉提取物制劑去除外殼后碾成粉末，制成柿葉提取物制劑粉末樣品。
5.如權(quán)利要求1所述的柿葉提取物及其制劑的HPLC分析方法，其特征在于，步驟1) 中，在過濾之前，先將柿葉提取物制劑粉末樣品與甲醇或乙醇的混合物超聲后放涼。
6.如權(quán)利要求5所述的柿葉提取物及其制劑的HPLC分析方法，其特征在于，步驟1) 中，超聲時(shí)間為IOmin 50min。
7.如權(quán)利要求1所述的柿葉提取物及其制劑的HPLC分析方法，其特征在于，所述乙醇或甲醇的濃度為50% 100%。
8.如權(quán)利要求1所述的柿葉提取物及其制劑的HPLC分析方法，其特征在于，高效液相色譜分析法分析中，采用二極管陣列檢測器采集波長，采集范圍為從(190nm 210nm)至 (390nm 410nm)；檢測波長 250nm 260nm。
9.如權(quán)利要求1所述的柿葉提取物及其制劑的HPLC分析方法，其特征在于，所述磷酸溶液的濃度為0. 0.3%。
10.如權(quán)利要求1所述的柿葉提取物及其制劑的HPLC分析方法，其特征在于，步驟2) 中，平衡時(shí)間為IOmin 30min。
全文摘要
本發(fā)明公開一種柿葉提取物及其制劑的HPLC分析方法，包括如下步驟1)稱取至少十個(gè)柿葉提取物樣品或柿葉提取物制劑粉末樣品，分別與乙醇或甲醇混合、過濾，得到各樣品的供試品溶液；2)而后利用HPLC進(jìn)行分析，得到各樣品的HPLC指紋圖譜，根據(jù)各樣品的HPLC指紋圖譜建立柿葉提取物或柿葉提取物制劑的HPLC對(duì)照指紋圖譜；3)將待測樣品與甲醇或乙醇混合、過濾，得到待測樣品的供試品溶液，而后用HPLC按步驟2)中的色譜條件進(jìn)行分析，得到該待測樣品的HPLC指紋圖譜，將該指紋圖譜與相應(yīng)的HPLC對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行比較。本發(fā)明能達(dá)到控制柿葉提取物及其制劑質(zhì)量的目的。
文檔編號(hào)G01N30/88GK102507826SQ20111035691
公開日2012年6月20日 申請日期2011年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月11日
發(fā)明者劉興華, 利幼, 吳睿, 尹仁杰, 李楚源, 林挺, 梁敬儀, 王德勤, 羅杰 申請人:廣州白云山和記黃埔中藥有限公司