專利名稱：一種檢測一氧化氮的熒光探針及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種一氧化氮熒光探針，尤其是涉及一種檢測一氧化氮的熒光探針及其制備方法。
背景技術(shù)：
一氧化氮(NO)是人類首次發(fā)現(xiàn)的在機體中具有信號分子作用的一種氣體，作為生理活性氧物種(R0Q中的重要一員，它是生物體內(nèi)一種重要的細(xì)胞信使分子，被譽為“信息分子、效應(yīng)分子、明星分子”。近年來的研究表明，一氧化氮作為一種新型的細(xì)胞內(nèi)信使分子，廣泛參與機體心血管、神經(jīng)和免疫系統(tǒng)的生理和病理調(diào)節(jié)。它能舒張血管、降低血壓、抑制血管平滑肌細(xì)胞的增值和血小板粘附，并作為一種神經(jīng)遞質(zhì)，在神經(jīng)元的信息傳遞中起重要作用。目前的研究表明，一氧化氮還在生殖器、肺等器官中都有遞質(zhì)的功能，還具有免疫調(diào)節(jié)功能、抗?jié)冏饔谩⒄{(diào)節(jié)性功能等其他生理功能。鑒于一氧化氮的重要生理功能，所以一氧化氮的分析成為研究其生理功能及建立其分布模型的重要環(huán)節(jié)，如何能更快速、準(zhǔn)確、靈活、方便的對一氧化氮進行分析已經(jīng)成為揭示一氧化氮神秘面紗重要研究方向。目前，檢測一氧化氮的方法有化學(xué)發(fā)光法、電子順磁共振法、電化學(xué)方法、分光光度法以及熒光光度法。熒光光度法由于信號直觀、檢測方便、 易于實現(xiàn)對生理活性細(xì)胞進行實時的時空分辨觀測而得到重點關(guān)注。設(shè)計實用型一氧化氮熒光分子探針，要求探針自身的熒光盡可能弱，而與一氧化氮作用后熒光量子產(chǎn)率高。熒光最大發(fā)射波長最好處于紅區(qū)以至近紅外光譜區(qū)，以減少生物體自身的熒光干擾，同時，這種探針捕集一氧化氮的速度要快，進行活體分析時對活體不產(chǎn)生毒害作用。目前，有關(guān)一氧化氮的熒光分子傳感設(shè)計主要基于以下兩大機制一種是基于一氧化氮分子與過渡金屬-熒光配體配合物的中心金屬離子或熒光配體作用(J. Am. Chem. Soc.，2004，126 (15)，4972—4978. J. Am. Chem. Soc. 2005，127，12170—12171. J. Am. Chem. Soc.，2004，126，6564-656 。另一種是基于一氧化氮與鄰苯二胺衍生物的特異性化學(xué)反應(yīng)(Anal. Chem. , 1998,70(13) :2446-2453. Anal. Chem.，1999，71 (11) :2071-2075. J. Am. Chem. Soc.，2004，126(10) :3357-3367. J. Am. Chem. Soc. ；2005 ；127(11) :3684-3685. J.Am. Chem. Soc.，2009，131，10189-10200.)，目前基于該種機制設(shè)計的熒光探針獲得較廣泛的應(yīng)用，然而它卻存在如合成繁瑣不易、探針熒光Mokes位移較小等不足。而以?；彵蕉窞橐谎趸R別基團的熒光探針鮮有報道。相較于必須通過繁瑣的多步合成路線而引入的鄰苯二胺基團，?；彵蕉犯菀自跓晒鈭F上通過一步酰胺化反應(yīng)直接引入，大大簡化了探針的制備方法及成本，而且也拓展了可使用的熒光團的種類。4-胺基_1，8萘酰亞胺熒光團具有長波發(fā)射以及大Mokes位移的優(yōu)點(J.Am. Chem. Soc. ；1981 ；103 :7615-7620.)，能夠顯著減少熒光分析中散射光以及背景熒光的干擾，在針對諸如鋅、汞、銅等金屬離子的熒光探針設(shè)計中得到很好的應(yīng)用，然而卻未見應(yīng)用于識別一氧化氮的熒光探針的設(shè)計中。本法以一步反應(yīng)在4-胺基_1，8萘酰亞胺熒光團上引入酰化鄰苯二胺基團，制得對一氧化氮具有識別作用的熒光探針并考察了其熒光特性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對已報道的基于鄰苯二胺衍生物的一氧化氮熒光探針?biāo)嬖诘牟蛔悖峁┮活惛哽`敏、高選擇性、以?；彵蕉窞橐谎趸R別基團的檢測一氧化氮的熒光探針及其制備方法與應(yīng)用。所述檢測一氧化氮的熒光探針，記為探針L其分子結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1. 一種檢測一氧化氮的熒光探針，其特征在于記為探針1，其分子結(jié)構(gòu)式如下
2.如權(quán)利要求1所述的一種檢測一氧化氮的熒光探針的制備方法，其特征在于包括以下步驟步驟一在容器中按摩爾比加入1. 0份4-氨基-1，8-萘酸酐和15份有機溶劑，再加入 1. 2份2-(2-氨基乙氧基)乙醇，加熱反應(yīng)后，冷卻至室溫；然后加入30份飽和食鹽水后有固體析出，離心并干燥得中間體A，所述中間體A的結(jié)構(gòu)式如下
3.如權(quán)利要求2所述的一種檢測一氧化氮的熒光探針的制備方法，其特征在于在步驟一中，所述加熱反應(yīng)的溫度為70 110°C，最好為90°C ；加熱反應(yīng)的時間為6 10h，最好為8h。
4.如權(quán)利要求2所述的一種檢測一氧化氮的熒光探針的制備方法，其特征在于在步驟一中，所述有機溶劑選自N，N-二甲基甲酰胺，二甲亞砜，乙二醇單甲醚，乙二醇二甲醚，1， 4-二氧六環(huán)中的一種。
5.如權(quán)利要求2所述的一種檢測一氧化氮的熒光探針的制備方法，其特征在于在步驟一中，所述柱色譜采用乙酸乙酯-二氯甲烷。
6.如權(quán)利要求2所述的一種檢測一氧化氮的熒光探針的制備方法，其特征在于在步驟二中，所述反應(yīng)的時間為8 16h，最好為12h ；所述無水硫酸鈉干燥時間為0. 5 池，最好為Ih0
7.如權(quán)利要求2所述的一種檢測一氧化氮的熒光探針的制備方法，其特征在于在步驟二中，所述柱色譜分離采用乙酸乙酯/ 二氯甲烷=1/10。
8.如權(quán)利要求2所述的一種檢測一氧化氮的熒光探針的制備方法，其特征在于在步驟三中，所述加熱回流的時間為2 4h，最好為池；所述無水硫酸鈉干燥時間為0. 5 池，最好為Ih0
9.如權(quán)利要求2所述的一種檢測一氧化氮的熒光探針的制備方法，其特征在于在步驟三中，所述柱色譜分離采用乙酸乙酯/ 二氯甲烷。
10.如權(quán)利要求1所述的一種檢測一氧化氮的熒光探針用于中性條件下水溶液中一氧化氮的熒光檢測。
全文摘要
一種檢測一氧化氮的熒光探針及其制備方法，涉及熒光探針。探針為以4-胺基-1，8-萘酰亞胺為基本分子結(jié)構(gòu)、以碳酰胺化的鄰苯二胺為一氧化氮識別基團的化合物。在容器中加入4-氨基-1，8-萘酸酐和有機溶劑，再加入2-(2-氨基乙氧基)乙醇加熱反應(yīng)后冷卻；加入食鹽水離心得中間體A，再溶解在吡啶中，加入醋酸酐后反應(yīng)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，再加入水萃?。恍D(zhuǎn)蒸發(fā)，分離得中間體B；在容器中加入B、二異丙基乙基胺和甲苯得混合液，再加到含有三光氣及甲苯的溶液中，加熱回流后冷卻；加入二氯甲烷后離心分離得上層清液，再加入到含有鄰苯二胺及二氯甲烷的溶液中反應(yīng)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，加入水萃取；所得乙酸乙酯干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，分離得產(chǎn)物。
文檔編號G01N21/64GK102516987SQ20111036723
公開日2012年6月27日 申請日期2011年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月18日
發(fā)明者樊曉星, 鄭小蘭, 鄭洪 申請人:廈門大學(xué)