一種簡(jiǎn)易的高通量硫氧還蛋白活性檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型屬于分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及到一種簡(jiǎn)易的高通量硫氧還蛋白活性檢測(cè)試劑盒。其包含試劑盒蓋、試劑盒以及置于試劑盒內(nèi)的四個(gè)試劑瓶；所述的四個(gè)試劑瓶分別盛裝檢測(cè)緩沖液、終止緩沖液、酶溶液和標(biāo)準(zhǔn)液；所述檢測(cè)緩沖液為NADPH、底物和磷酸鉀緩沖液；所述終止緩沖液為DTNB和鹽酸胍溶液；所述標(biāo)準(zhǔn)液為5μg/mL的人硫氧還蛋白和0.1％wt血清白蛋白混合液。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型檢測(cè)靈敏度高；與此同時(shí)，其成分的組合配置能夠基本滿足現(xiàn)行常用自動(dòng)檢測(cè)設(shè)備基本流程配置的需要。此外，該試劑盒還能檢測(cè)細(xì)胞、組織裂解液及純化硫氧還蛋白活性，且無(wú)獨(dú)特的組織特異性。
【專利說(shuō)明】
一種簡(jiǎn)易的高通量硫氧還蛋白活性檢測(cè)試劑盒
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本實(shí)用新型屬于分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體來(lái)說(shuō)，涉及到一種簡(jiǎn)易的高通量硫氧還蛋白活性檢測(cè)試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]硫氧還蛋白存在于所有活細(xì)胞中，與細(xì)胞生長(zhǎng)與存活密切相關(guān)。硫氧還蛋白也會(huì)分泌到細(xì)胞外，存在于血液及細(xì)胞外液中。該蛋白活性變化與許多疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。目前，硫氧還蛋白ELISA試劑盒，是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，依靠抗原、抗體的特異性反應(yīng)，檢測(cè)硫氧還蛋白的蛋白水平。然而，硫氧還蛋白極易被體內(nèi)的代謝物、中間產(chǎn)物修飾改變活性，組織和細(xì)胞中硫氧還蛋白的蛋白水平，不能確切地反映硫氧還蛋白的功能狀態(tài)。此外，ELISA試劑盒有獨(dú)特的組織特異性，實(shí)驗(yàn)中可能用到不同來(lái)源的樣本，需要辨別哪種ELISA試劑盒能測(cè)手中的樣本。至今，實(shí)驗(yàn)室研究中，硫氧還蛋白的測(cè)活方法主要有兩種:胰島素測(cè)活法(Luthman,B1chemistry 21:6628-6633 ； 1982.)、終點(diǎn)法(Arner ,Methods Enzymol300:226-239.； 1999.)及改良后的終點(diǎn)法(Wu，Y.Atherosclerosis 212:351-355;2010.)。胰島素測(cè)活法，適合酶動(dòng)力學(xué)研究，不適合大批量樣本的測(cè)定。終點(diǎn)法及改良后的終點(diǎn)法，各實(shí)驗(yàn)室所用的條件及標(biāo)準(zhǔn)不盡相同，步驟較復(fù)雜，所測(cè)得的結(jié)果難以比較。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本實(shí)用新型提供了一種高靈敏度、高效且使用簡(jiǎn)便的簡(jiǎn)易的高通量硫氧還蛋白活性檢測(cè)試劑盒。
[0004]本實(shí)用新型所述的一種簡(jiǎn)易的高通量硫氧還蛋白活性檢測(cè)試劑盒，所述活性檢測(cè)試劑盒包含試劑盒蓋1、試劑盒3以及置于試劑盒內(nèi)的四個(gè)試劑瓶2;所述的四個(gè)試劑瓶2分別盛裝檢測(cè)緩沖液、終止緩沖液、酶溶液和標(biāo)準(zhǔn)液;所述檢測(cè)緩沖液為NADPH-底物緩沖液；所述終止緩沖液為DTNB的鹽酸胍緩沖液；所述標(biāo)準(zhǔn)液為人硫氧還蛋白的血清白蛋白稀釋液。
[0005]所述NADPH-底物緩沖液為NADPH、底物和磷酸鉀緩沖液;所述DTNB的鹽酸胍緩沖液為DTNB和鹽酸狐溶液;所述人硫氧還蛋白的血清白蛋白稀釋液為5yg/mL的人硫氧還蛋白和0.1 % wt血清白蛋白混合液。
[0006]所述試劑瓶2為塑料瓶或EP管。
[0007]所述血清白蛋白為人血清白蛋白或牛血清白蛋白。
[0008]所述試劑盒蓋I扣蓋在試劑盒3上構(gòu)成外部大小為1cmX 1cmX 3cm的立方體。
[0009 ]上述盛裝檢測(cè)緩沖液、終止緩沖液、酶溶液和標(biāo)準(zhǔn)液的試劑瓶2的容量分別為
3.7mL、15mL、100yUS200yL。
[0010]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型所述的簡(jiǎn)易的高通量硫氧還蛋白活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)靈敏度高，足以分辨出20微升人血清/血漿中硫氧還蛋白給出的信號(hào)；與此同時(shí)，其成分的組合配置能夠基本滿足現(xiàn)行常用自動(dòng)檢測(cè)設(shè)備基本流程配置的需要。此外，該試劑盒還能檢測(cè)細(xì)胞、組織裂解液及純化硫氧還蛋白活性，且無(wú)獨(dú)特的組織特異性。
【附圖說(shuō)明】
[0011 ]圖1:簡(jiǎn)易的高通量硫氧還蛋白活性檢測(cè)試劑盒組件示意圖；試劑盒蓋-1、試劑瓶-
2、試劑盒-3。
【具體實(shí)施方式】
[0012]下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型所述的簡(jiǎn)易的高通量硫氧還蛋白活性檢測(cè)試劑盒做進(jìn)一步說(shuō)明，但是本實(shí)用新型的保護(hù)范圍并不限于此。
[0013]實(shí)施例1
[0014]—種簡(jiǎn)易的高通量硫氧還蛋白活性檢測(cè)試劑盒，所述活性檢測(cè)試劑盒包含試劑盒蓋1、試劑盒3以及置于試劑盒內(nèi)的四個(gè)試劑瓶2;所述的四個(gè)試劑瓶2分別盛裝檢測(cè)緩沖液、終止緩沖液、酶溶液和標(biāo)準(zhǔn)液;所述檢測(cè)緩沖液為NADPH-底物緩沖液;所述終止緩沖液為DTNB的鹽酸胍緩沖液;所述標(biāo)準(zhǔn)液為人硫氧還蛋白的血清白蛋白稀釋液。
[0015]所述NADPH-底物緩沖液為2mM NADPH、ΙΟμΜ底物和250mM磷酸鉀緩沖液(pH=7.5)，底物為FITC-胰島素;所述DTNB的鹽酸胍緩沖液為ImM DTNB和8M鹽酸胍溶液;所述人硫氧還蛋白的血清白蛋白稀釋液為5yg/mL的人硫氧還蛋白(hTrxl)和0.1 % wt人血清白蛋白混合液;所述酶溶液是5μΜ牛硫氧還蛋白還原酶。所述試劑瓶2為EP管。所述試劑盒蓋子I和試劑盒框3能構(gòu)成外部大小為1cmXlOcmX 3cm的立方體。所述檢測(cè)緩沖液、終止緩沖液、酶溶液和標(biāo)準(zhǔn)液所對(duì)應(yīng)的試劑瓶2的容量以及盛裝容量依次為3.7mL、15mL、100yUS200yL。
[0016]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型所述的簡(jiǎn)易的高通量硫氧還蛋白活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)靈敏度高，足以分辨出20微升人血清/血漿中硫氧還蛋白給出的信號(hào)；與此同時(shí)，其成分的組合配置能夠基本滿足現(xiàn)行常用自動(dòng)檢測(cè)設(shè)備基本流程配置的需要。此外，該試劑盒還能檢測(cè)細(xì)胞、組織裂解液及純化硫氧還蛋白活性，且無(wú)獨(dú)特的組織特異性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種簡(jiǎn)易的高通量硫氧還蛋白活性檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述活性檢測(cè)試劑盒包含試劑盒蓋(I)、試劑盒(3)以及置于試劑盒內(nèi)的四個(gè)試劑瓶(2);所述的四個(gè)試劑瓶(2)分別盛裝檢測(cè)緩沖液、終止緩沖液、酶溶液和標(biāo)準(zhǔn)液;所述檢測(cè)緩沖液為NADPH-底物緩沖液;所述終止緩沖液為DTNB的鹽酸胍緩沖液;所述標(biāo)準(zhǔn)液為人硫氧還蛋白的血清白蛋白稀釋液。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種簡(jiǎn)易的高通量硫氧還蛋白活性檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑瓶(2)為塑料瓶或EP管。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種簡(jiǎn)易的高通量硫氧還蛋白活性檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述血清白蛋白為人血清白蛋白或牛血清白蛋白。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種簡(jiǎn)易的高通量硫氧還蛋白活性檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒蓋(I)扣蓋在試劑盒(3)上構(gòu)成外部大小為1cmX 1cmX 3cm的立方體。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種簡(jiǎn)易的高通量硫氧還蛋白活性檢測(cè)試劑盒，其特征在于，盛裝檢測(cè)緩沖液、終止緩沖液、酶溶液和標(biāo)準(zhǔn)液的試劑瓶(2)的容量分別為3.7mL、15mL、100yL及200yL。
【文檔編號(hào)】C12Q1/26GK205473834SQ201620150746
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年2月29日
【發(fā)明人】梁巍, 劉軍, 杜澄
【申請(qǐng)人】北京中科研源科技發(fā)展有限公司