專利名稱：一種同時檢測兩種β-腎上腺受體激動劑快速檢測卡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種同時檢測兩種β-腎上腺受體激動劑快速檢測卡，是一種檢測 β -腎上腺受體激動劑鹽酸克倫特羅和/或沙丁胺醇的檢測器具，屬于β -腎上腺受體激動劑檢測技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
鹽酸克倫特羅和沙丁胺醇都屬于腎上腺受體激動劑，具有擴張支氣管的作用，在臨床上常用來防治哮喘、肺氣腫等肺部疾病。在畜牧業(yè)生產(chǎn)中，由于它可明顯增加瘦肉率，一些養(yǎng)豬戶將其作為飼料添加劑使用，俗稱“瘦肉精”。通常在肥豬出欄前20天左右添加，能起到促進動物肌肉生長，減少動物胴體脂肪的效果。人食用了飼喂鹽酸克倫特羅或沙丁胺醇作為添加劑的動物所生產(chǎn)的禽畜產(chǎn)品后，會產(chǎn)生心跳過快，心慌，不由自主的顫抖、雙腳站不住，心悸胸悶，四肢肌肉顫動，頭暈乏力等神經(jīng)中樞中毒后失控的現(xiàn)象，對心率失常、高血壓、青光眼、糖尿病、甲狀腺機能亢進等疾病的患者則有較大危害，甚至導致死亡，因此全球禁止將其作為飼料添加劑。在我國農(nóng)業(yè)部早已發(fā)文，明令禁止在豬飼料中使用瘦肉精，但不法之徒被利益驅(qū)使，仍大量使用，致使中毒事件頻發(fā)，老百姓談肉色變。傳統(tǒng)的鹽酸克倫特羅和沙丁胺醇檢測方法有高效液相色譜法(HPLC)、氣-質(zhì)聯(lián)用法(GC-MQ以及酶聯(lián)免疫吸附法，這些方法操作過程都比較繁瑣，并且依賴儀器設(shè)備，不適用于現(xiàn)場快速檢測。為此，本發(fā)明擬發(fā)明一種基于鹽酸克倫特羅蛋白質(zhì)偶聯(lián)物抗原性的免疫學檢測方法。鹽酸克倫特羅和沙丁胺醇都屬于腎上腺受體激動劑，結(jié)構(gòu)類似，具有相似的化學結(jié)構(gòu)，依據(jù)免疫制備的抗鹽酸克倫特羅抗體可與沙丁胺醇進行反應(yīng)，有些抗體交叉反應(yīng)率達 100%。根據(jù)這一現(xiàn)象，采用抗鹽酸克倫特羅抗體和鹽酸克倫特羅蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，采取免疫學競爭法的原理，結(jié)合膠體金標記技術(shù)和免疫層析法設(shè)計的一種快速檢測卡，可快速特異地檢測樣品中的鹽酸克倫特羅和/或沙丁胺醇。根據(jù)檢測卡樣品檢測線(T)和質(zhì)控線(C)的有無顯色來判定樣品中的鹽酸克倫特羅和/或沙丁胺醇含量。反應(yīng)是利用免疫反應(yīng)而建立的一種檢測方法，具有特異性強的優(yōu)點，可避免其它檢測方法的假陽性導致的誤檢問題。同時檢測卡操作簡單快速，無需特殊的儀器設(shè)備，既可以在實驗室進行，也可在超市、家庭、車間等實地進行測定。由于樣本量需要少、簡便快速，適用于大量樣本的篩查。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種同時檢測兩種β -腎上腺受體激動劑的檢測器具，直接應(yīng)用免疫學的方法直接檢測尿液、飼料或動物組織、肉、肝臟樣品中鹽酸克倫特羅和/或沙丁胺醇的含量。本發(fā)明的技術(shù)方案一種同時檢測兩種β -腎上腺受體激動劑快速檢測卡，在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼(1)中設(shè)置測試條(2)，檢測卡外殼表面有檢測窗孔(3)和加樣孔(4)；測試條(2)是由支承背板(5)上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊(8)、膠體金膜(7)、硝酸纖維素膜(6)、和吸水膜(9)所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜(6)，支承背板一端疊置粘貼吸水膜(9)，另一端疊置粘貼樣品墊(8)，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜(7);膠體金膜為含抗鹽酸克倫特羅抗體膠體金標記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測帶和一條質(zhì)控帶，依次是含鹽酸克倫特羅蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測帶(10)，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶(11 )，測試條置入檢測卡外殼內(nèi)，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。應(yīng)用免疫學的方法直接檢測樣品中鹽酸克倫特羅和/或沙丁胺醇的含量，檢測樣品為尿液、飼料或動物組織、肉、肝臟，對于各種不同的檢測樣品用不同的處理方法針對尿液樣品的處理方法是尿液直接用作檢測樣品，若尿液呈渾濁狀，需先經(jīng)濾紙濾過，取上清液作測試樣品；針對飼料樣品的處理方法是稱取0. 5g的飼料樣品，加入2mL樣品抽提液pH7. 0、 50mmol/L Tris-HCl，在試管中攪拌1分鐘，靜置10分鐘后，取清亮上清液作測試樣品；針對動物組織、肉、肝臟樣品的處理方法是取Ig剪碎或勻漿過的動物組織、肉、 肝臟樣品，置于含ImL樣品抽提液pH7.0、50mmol/L Tris-HCl的試管中，扭緊管蓋，振搖樣品1分鐘后，經(jīng)100°C水浴5分鐘，冷卻至室溫，取清亮的中間部分作測試樣品。當檢測帶10和質(zhì)控帶11同時顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，檢測結(jié)果為陰性，表示被檢測樣品中鹽酸克倫特羅和/或沙丁胺醇含量未超過允許值。當檢測帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表示被檢測樣品中鹽酸克倫特羅和/或沙丁胺醇含量超過允許值3ppb。當檢測帶10和質(zhì)控帶11均不顯色，則表明測試條已失效。本發(fā)明的優(yōu)點是1、能檢測尿液或飼料、動物組織、肉、肝臟等樣品中含有的鹽酸克倫特羅和/或沙丁胺醇。檢測卡上的抗鹽酸克倫特羅抗體標記的膠體金和鹽酸克倫特羅蛋白質(zhì)偶聯(lián)物結(jié)合時具有很高的特異性，在實際檢測中，可以同時檢測鹽酸克倫特羅和/或沙丁胺醇，其檢測限見表1。表1交叉反應(yīng)與檢測限
權(quán)利要求1. 一種同時檢測兩種β-腎上腺受體激動劑快速檢測卡，其特征在于在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼(1)中設(shè)置測試條(2)，檢測卡外殼表面有檢測窗孔(3)和加樣孔(4); 測試條(2)是由支承背板(5)上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊(8)、膠體金膜(7)、硝酸纖維素膜(6)、和吸水膜(9)所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜(6)，支承背板一端疊置粘貼吸水膜(9)，另一端疊置粘貼樣品墊(8)，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜 (7)；硝酸纖維素膜上有一條檢測帶和一條質(zhì)控帶，依次是含鹽酸克倫特羅蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測帶(10)，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶(11)，測試條置入檢測卡外殼內(nèi)，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。
專利摘要一種同時檢測兩種β-腎上腺受體激動劑快速檢測卡，屬于β-腎上腺受體激動劑檢測技術(shù)領(lǐng)域。本實用新型一種同時檢測兩種β-腎上腺受體激動劑快速檢測卡外殼內(nèi)有測試條，測試條由支承背板上依次粘貼樣品墊、膠體金膜、硝酸纖維素膜和吸水膜所組成；膠體金膜為含抗鹽酸克倫特羅抗體膠體金標記物的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有兩條顯示印記帶，一條為含鹽酸克倫特羅蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測帶，另一條為含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶。本實用新型優(yōu)點是應(yīng)用免疫學的方法直接檢測尿液、飼料、或動物組織、肉、肝臟樣品中鹽酸克倫特羅和/或沙丁胺醇的含量。本實用新型一種同時檢測兩種β-腎上腺受體激動劑快速檢測卡易于制備，使用方便快速，結(jié)果準確。
文檔編號G01N33/558GK202166652SQ20112026047
公開日2012年3月14日 申請日期2011年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月22日
發(fā)明者吳文曄, 周堅, 熊曉芳 申請人:無錫安迪生物工程有限公司