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      尿路表皮癌的檢測(cè)方法

      文檔序號(hào):5938627閱讀:414來(lái)源:國(guó)知局
      專利名稱:尿路表皮癌的檢測(cè)方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明涉及尿路表皮癌的檢測(cè)方法,具體地說(shuō)是涉及使用了 5-氨基乙酰丙酸(ALA)或其衍生物或者它們的鹽(以下,有時(shí)稱為“ALA類”)的尿路表皮癌的檢測(cè)方法。
      背景技術(shù)
      尿路表皮癌的檢測(cè),通常是對(duì)脫落在尿液中的細(xì)胞進(jìn)行巴氏染色后在顯微鏡下觀察來(lái)進(jìn)行的,診斷要求熟練,還存在細(xì)胞漏看多的問(wèn)題。檢測(cè)困難會(huì)關(guān)系到癌癥發(fā)現(xiàn)的延誤,并且也會(huì)關(guān)系到病癥復(fù)發(fā)的錯(cuò)過(guò)。另一方面,已知在膀胱癌患者的內(nèi)視鏡手術(shù)中,將ALA類注入膀胱內(nèi),觀察膀胱內(nèi)的癌細(xì)胞發(fā)出的熒光來(lái)決定切除部位(例如,參照非專利文獻(xiàn)I),還知道通過(guò)口服給藥或者 靜脈注射ALA類也可以觀察膀胱內(nèi)的熒光(參照專利文獻(xiàn)I)。此外,還提出有一種含有ALA類的腫瘤診斷劑,其目的在于,將該腫瘤診斷劑按照一次每Ikg體重給藥O. OOlmg IOg后,通過(guò)測(cè)量血液、體液、組織、尿、糞便、唾液、汗、髓液、精液或者眼淚等從體內(nèi)或體外采集到的試料中的原卟啉IX、尿卟啉I、糞卟啉I等來(lái)判斷所診斷的腦、鼻道、鼻腔、氣管、支氣管、口腔、咽、食道、胃、乳房、結(jié)腸直腸、肺、卵巢、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肝臟、膀胱、尿道、尿管、胰腺、頸管、腹腔、肛門管或者子宮頸等組織中有無(wú)腫瘤(例如,參照專利文獻(xiàn)2)。此外,現(xiàn)已報(bào)告有PDD細(xì)胞學(xué)(PDDcytology)法,該法以熒光尿中的剝離細(xì)胞為對(duì)象,進(jìn)行用于檢測(cè)ALA誘導(dǎo)熒光陽(yáng)性細(xì)胞的熒光細(xì)胞學(xué)診斷以及流式細(xì)胞術(shù),該熒光尿中的剝離細(xì)胞通過(guò)將從膀胱癌患者回收的尿液殘?jiān)芙庥贏LA濃度被調(diào)整到200μ g/mL的無(wú)血清培養(yǎng)液中,在37°C下在暗室中保溫2個(gè)小時(shí)后再用于檢測(cè)的體外培養(yǎng)(In vitroincubation)法或者從膀胱癌患者的膀胱內(nèi)保持了 2個(gè)小時(shí)后的ALA溶液(I. 5gALA/50mL緩沖液)中回收的尿液殘洛用于檢測(cè)的體內(nèi)培養(yǎng)(in vivo incubation法)法進(jìn)行了處理(例如,參照非專利文獻(xiàn)2)?,F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)I :W02009/130893號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2 日本特開(kāi)2006-124372號(hào)公報(bào)非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)I :5- 7 S 7 7' V >酸(5-ALA)膀胱內(nèi)注入t二 J:石蛍光膀胱鏡全用^ &膀胱癌O光力學(xué)的診斷、井上啓史、辛島尚、鎌田雅行、執(zhí)印太郎、倉(cāng)林睦、大礎(chǔ)祐治、日本泌尿器科學(xué)會(huì)雜誌、Vol. 97、pp. 719-729非專利文獻(xiàn)2:膀胱癌O光力學(xué)的診斷-蛍光尿細(xì)胞診O有用性_、藤本清秀、三宅牧人、中井清、松村善昭、穴井智、平尾佳彥、日本泌尿器科學(xué)界雑誌Vol. 101、No. 2、総會(huì)特集號(hào) February、2010如上所述,由于以往的尿路表皮癌的檢測(cè)要求熟練,而且存在細(xì)胞漏看多的問(wèn)題,所以期待有高精度且簡(jiǎn)易的新手法。例如,在上述的體外培養(yǎng)(In vitro incubation)法中,需要在暗黑的環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)的培養(yǎng)裝置,而且,在采尿后至結(jié)果出來(lái)之前,患者需要等待幾個(gè)小時(shí)。在上述體內(nèi)培養(yǎng)(in vivo incubation)法中,存在著在膀胱內(nèi)注入ALA溶液時(shí)給患者造成了負(fù)擔(dān),且只能發(fā)現(xiàn)膀胱癌的問(wèn)題。

      發(fā)明內(nèi)容
      本發(fā)明的目的在于提供一種不需要特殊的培養(yǎng)裝置,在采尿后立刻就能進(jìn)行判斷等,可以簡(jiǎn)單且高精度地檢測(cè)出尿路表皮癌的尿路表皮癌檢測(cè)方法。本發(fā)明的發(fā)明者們,在使用上述ALA類的技術(shù)是否也可以應(yīng)用到尿路表皮癌的細(xì)胞診斷的構(gòu)思下,經(jīng)過(guò)反復(fù)努力研究的結(jié)果,發(fā)現(xiàn)通過(guò)檢測(cè)給藥ALA類的被檢體的排出到體外的尿液中游離的癌細(xì)胞中的熒光,可以查出尿路表皮癌,而且,也發(fā)現(xiàn)該ALA類的給藥量,為過(guò)去的用于決定切除部位的用量的一半以下這樣的極少量就足夠,并據(jù)此完成了本發(fā)明?!?br> 也就是說(shuō),本發(fā)明涉及(I) 一種尿路表皮癌的檢測(cè)方法,其特征在于,對(duì)被檢體給藥5-氨基乙酰丙酸(ALA)或其衍生物或者它們的鹽之后,從該被檢體中采集尿液,檢測(cè)所采集的尿液中的細(xì)胞內(nèi)的熒光的存在或者熒光量,(2)—種尿路表皮癌的檢測(cè)方法,其特征在于,對(duì)從給藥了 5-氨基乙酰丙酸(ALA)或其衍生物或者它們的鹽后的被檢體中采集的尿液進(jìn)行細(xì)胞分離,檢測(cè)該細(xì)胞的熒光的存在或者熒光量,(3)如上述(I)或者(2)所述的尿路表皮癌的檢測(cè)方法,其特征在于,將5-氨基乙酰丙酸(ALA)或其衍生物或者它們的鹽,用ALA鹽酸鹽換算,按每Ikg被檢體給藥O. 05^20mg, (4)如上述(I)或者(2)所述的尿路表皮癌的檢測(cè)方法,其特征在于,口服給藥5-氨基乙酰丙酸(ALA)或其衍生物或者它們的鹽,
      (5)如上述(I)或者(2)所述的尿路表皮癌的檢測(cè)方法,其特征在于,被檢體是尿路表皮癌的疑似患者,(6) —種尿路表皮癌檢測(cè)劑,用于上述(I)或者(2)所述的方法,其特征在于,含有5-氨基乙酰丙酸(ALA)或其衍生物或者它們的鹽。技術(shù)效果根據(jù)本發(fā)明,不需要特殊的培養(yǎng)裝置,可以在采尿后立刻進(jìn)行判斷,而且還可以在檢測(cè)到尿液中的細(xì)胞內(nèi)的熒光的時(shí)候,判定為存在異常,可以立刻轉(zhuǎn)移到用內(nèi)視鏡診斷或者實(shí)施尿道摘除措施。例如,在進(jìn)行用于確認(rèn)病癥有無(wú)復(fù)發(fā)的內(nèi)視鏡檢測(cè)之前,進(jìn)行該尿液中細(xì)胞的熒光檢測(cè),沒(méi)有可疑點(diǎn)的話則不必進(jìn)行內(nèi)視鏡檢測(cè)。這種方法,不僅很大程度上減輕了患者的負(fù)擔(dān),而且還減少了國(guó)民醫(yī)療費(fèi)。像這樣,本發(fā)明的方法,不僅是膀胱癌,所有的尿路表皮癌的檢測(cè)都可以迅速且簡(jiǎn)易高精度地進(jìn)行,是該領(lǐng)域的醫(yī)療中劃時(shí)代的方法。而且,即使少量的ALA類的給藥量也可以檢測(cè)出來(lái),有利于減少成本,并且還收到了不會(huì)實(shí)質(zhì)性地引起光損傷這樣安全方面的效果。


      圖I是給藥ALA鹽酸鹽Ig時(shí)從尿液中分離出的細(xì)胞的熒光顯微鏡照片。圖2是給藥ALA鹽酸鹽500毫克時(shí)從尿液中分離的細(xì)胞的熒光顯微鏡照片。
      具體實(shí)施方式
      作為本發(fā)明的尿路表皮癌的檢測(cè)方法,只要是對(duì)被檢體給藥5-氨基乙酰丙酸或其衍生物或者它們的鹽(ALA類)之后,從該被檢體中采集尿液,檢測(cè)所采集到的尿液中的細(xì)胞內(nèi)的熒光(例如,檢測(cè)熒光的存在或者熒光量)的方法;和對(duì)從給藥了 5-氨基乙酰丙酸或其衍生物或者它們的鹽(ALA類)后的被檢體中采集的尿液進(jìn)行細(xì)胞分離,檢測(cè)分離后的細(xì)胞中的熒光的方法,則沒(méi)有特別的限制,對(duì)于本發(fā)明的尿路表皮癌的檢測(cè)方法,還包括收集用于檢測(cè)的數(shù)據(jù)的方法。此外,作為本發(fā)明的尿路表皮癌檢測(cè)劑只要是在上述本發(fā)明的方法中使用的、含有ALA類的尿路表皮癌檢測(cè)劑,就沒(méi)有特別的限制。此外,所謂的本發(fā)明的檢測(cè)對(duì)象的尿路表皮癌,就是覆蓋尿路(腎臟、腎盂、尿管、膀胱、尿道)內(nèi)腔的轉(zhuǎn)移上皮所發(fā)生的惡性腫瘤。此外,本發(fā)明的被檢體,可以是包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物,具體地說(shuō),例示了通過(guò)問(wèn)診等診察疑似為尿路表皮癌的人。
      ALA類中,作為ALA的衍生物,可以例舉出含有ALA的酯基和?;难苌?,優(yōu)選例舉了甲酯基和甲?;?,甲酯基和乙?;柞セ驼蓟?,甲酯基和正丁?;阴セ图柞;阴セ鸵阴;阴セ驼蓟?,乙酯基和正丁?;慕M合。ALA類中,作為ALA或者其衍生物的鹽,可列舉出例如,鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、醋酸鹽、丙酸鹽、甲苯磺酸鹽、琥珀酸鹽、草酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、乙醇酸鹽、甲磺酸鹽、丁酸鹽、戊酸鹽、檸檬酸鹽、延胡索酸鹽、馬來(lái)酸鹽、蘋果酸鹽等酸附加鹽,以及鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽等金屬鹽,銨鹽、烷基銨鹽等。并且,這些鹽在使用時(shí)被作為溶液使用,其作用與ALA及其衍生物是同樣的。在這些ALA類中,優(yōu)選為5-氨基乙酰丙酸、或者5-氨基乙酰丙酸的甲酯,乙酯、丙酯、丁酯、戊酯、或者它們的鹽酸鹽,磷酸鹽,硫酸鹽。以上的ALA類,既可以形成水合物或者溶劑化物,還可以是任意一種單獨(dú)或者2種以上適當(dāng)組合使用。這些ALA類,可以通過(guò)化學(xué)合成、微生物生產(chǎn)和酶生產(chǎn)中的任意一種方法制造,在通過(guò)微生物或者酶生產(chǎn)的情況下,只有在不特別含有不合適的抑制物時(shí),可以不提煉而直接使用。作為這些ALA類對(duì)被檢體的給藥量,用ALA鹽酸鹽換算的話,每Ikg被檢體,例如優(yōu)選為O. 02 50mg,0. 05 20mg,更優(yōu)選為O. 2 10mg,進(jìn)一步優(yōu)選為5 10mg。作為本發(fā)明的尿路表皮癌的檢測(cè)方法中的ALA類的給藥方法,可例舉出包括舌下給藥在內(nèi)的口服給藥,包括點(diǎn)滴在內(nèi)的靜脈注射,使用敷劑等經(jīng)皮膚給藥劑、栓劑、點(diǎn)滴等,從減輕患者負(fù)擔(dān)和增強(qiáng)熒光的靈敏度的觀點(diǎn)來(lái)講,優(yōu)選為口服給藥。包括上述ALA類在內(nèi)的本發(fā)明的尿路表皮癌檢測(cè)劑,根據(jù)需要,也可以含有其他的藥效成分如營(yíng)養(yǎng)劑、載體等其他成分。作為能夠與本發(fā)明的檢測(cè)劑相配合的載體,例舉了適于攝取的有機(jī)或者無(wú)機(jī)的固體或者液體的、通常為惰性的制藥學(xué)上可允許的載體材料,具體地說(shuō),可以例舉例如,結(jié)晶性纖維素、明膠、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、滑石、植物性及動(dòng)物性脂肪、油脂、橡膠,聚亞烷基二醇。作為口服給藥劑的藥劑類型,可以例舉出粉末、顆粒、藥片、膠囊、口服液、懸浮液等,它們可以適當(dāng)?shù)厥褂萌軇⒎稚?、增量劑、賦形劑等依照常法制造。并且,在以水溶液調(diào)制作為本發(fā)明的檢測(cè)劑時(shí),為了防止ALA類分解,優(yōu)選在調(diào)制時(shí)不要讓水溶液成為堿性,若是成為堿性的情況下,可通過(guò)除氧來(lái)防止分解。本發(fā)明的尿路表皮癌的檢測(cè)方法,給藥ALA類(本發(fā)明的檢測(cè)劑)之后采集尿液,用熒光顯微鏡等檢測(cè)所采集的尿液中的細(xì)胞是否有熒光或熒光量,可以由此來(lái)檢測(cè)尿路表皮癌。此外,還對(duì)所采集的尿液添加ALA類,按需要放置所定的時(shí)間,通過(guò)檢測(cè)熒光的有無(wú)或者熒光量,能夠進(jìn)一步提高其靈敏度。在本發(fā)明的尿路表皮癌的檢測(cè)方法中,根據(jù)熒光的存在可以機(jī)械性地進(jìn)行尿路表皮癌的檢測(cè)(判定),因此即使是不具備醫(yī)師等特定知識(shí)的人也可以容易地進(jìn)行檢測(cè),而且,還可以使用裝置進(jìn)行檢測(cè)。尿液的采集,最好是在給藥ALA類(本發(fā)明的檢測(cè)劑)之后初次排出的尿液,優(yōu)選在I個(gè)小時(shí)以后12個(gè)小時(shí)以內(nèi)進(jìn)行,更優(yōu)選在2個(gè)小時(shí)以后12個(gè)小時(shí)以內(nèi)進(jìn)行。此外,尿液的攝取方法,無(wú)論是自然排尿還是通過(guò)導(dǎo)尿管攝取都可以。在檢測(cè)細(xì)胞中的熒光時(shí),與通常的細(xì)胞診斷一樣,從尿液中通過(guò)離心分離或者過(guò)濾來(lái)進(jìn)行細(xì)胞分離。在熒光檢測(cè)時(shí),用與俗特譜帶相當(dāng)?shù)淖贤饩€照射包括紫-藍(lán)可見(jiàn)光線的激發(fā)光,用熒光顯微鏡等檢測(cè)所產(chǎn)生的熒光。實(shí)施例以下,根據(jù)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明更具體地進(jìn)行說(shuō)明,本發(fā)明的技術(shù)范圍并不局限于這 些示例。[實(shí)施例I]將ALA鹽酸鹽Ig溶解到50ml的橙汁中,讓某個(gè)疑似膀胱癌患者(體重約60kg)內(nèi)月艮。約4個(gè)小時(shí)后采尿,在遮光狀態(tài)下馬上進(jìn)行離心(3000轉(zhuǎn)/分X 15分),對(duì)沉淀進(jìn)行顯微鏡檢測(cè)。其結(jié)果如圖I所示。此外,顯微鏡是在奧林巴斯(OLYMPUS)的型號(hào)為(BX50CXD)的顯微鏡中安裝了奧林巴斯(OLYMPUS)的DP70攝像機(jī)后的顯微鏡,反射鏡組均為歐米伽(OMEGAOPTICAL)公司制造的,激發(fā)濾色鏡(Exciter)為XF1076 400AF30 ;分光鏡(Dichroic)為XF2007 475DCLP,發(fā)射濾色鏡(Emitter)為XF3090 585ALP,均為標(biāo)準(zhǔn)的熒光顯微鏡系統(tǒng)。如圖I可知,可看見(jiàn)清晰的癌細(xì)胞所發(fā)出的PPIX熒光。而且,對(duì)該細(xì)胞進(jìn)行通常病理診斷時(shí)正確顯示出就是癌細(xì)胞。如上所述可知,根據(jù)本發(fā)明的方法,不用像以往那樣進(jìn)行膀胱內(nèi)觀察,通過(guò)檢測(cè)尿液中的細(xì)胞的熒光,就能進(jìn)行尿路表皮癌檢測(cè)。口服給藥ALA類時(shí),由于ALA類從血液供給到癌患部,所以不僅是癌患部,甚至在從癌患部剝離下來(lái)的癌細(xì)胞中也蓄積著來(lái)自ALA類的PPIX,這是以往所沒(méi)有想到的,但是實(shí)際上,從癌患部剝離下來(lái)的尿液中的癌細(xì)胞中也蓄積著源于ALA類的PPIX,通過(guò)檢測(cè)尿液中的細(xì)胞熒光,收到了可以檢測(cè)到尿路表皮癌這樣意想不到的效果。[實(shí)施例2]除了將給藥量降為實(shí)施例I的一半,即500mg以外,其他均與實(shí)施例I 一樣來(lái)實(shí)施檢測(cè)法。其結(jié)果,可得出圖2的圖片。另外,對(duì)該細(xì)胞進(jìn)行通常的病理診斷時(shí)正確顯示出就是癌細(xì)胞。產(chǎn)業(yè)上利用的可能性根據(jù)本發(fā)明的尿路表皮癌的檢測(cè)方法,減輕了患者的負(fù)擔(dān),又可以非常迅速且簡(jiǎn)單地進(jìn)行正確的檢測(cè),此外,由于ALA類的給藥量用以往的一半就足夠,所以可以節(jié)省費(fèi)用,還可以實(shí)質(zhì)性地排除偶爾出現(xiàn)的嘔吐、肝功能障礙、光過(guò)敏等危險(xiǎn)性,因此可以說(shuō)是對(duì)尿路表皮癌的早期發(fā)現(xiàn)做出貢獻(xiàn)的劃時(shí)代的方法。
      權(quán)利要求
      1.一種尿路表皮癌的檢測(cè)方法,其特征在于,對(duì)被檢體給藥5-氨基乙酰丙酸即ALA或其衍生物或者它們的鹽之后,從該被檢體中采集尿液,檢測(cè)所采集的尿液中的細(xì)胞內(nèi)的熒光。
      2.一種尿路表皮癌的檢測(cè)方法,其特征在于,對(duì)從給藥了 5-氨基乙酰丙酸即ALA或其衍生物或者它們的鹽后的被檢體中采集到的尿液進(jìn)行細(xì)胞分離,檢測(cè)分離出的細(xì)胞內(nèi)的熒光。
      3.如權(quán)利要求I或2所述的尿路表皮癌的檢測(cè)方法,其特征在于,將5-氨基乙酰丙酸或其衍生物或者它們的鹽,用ALA鹽酸鹽換算,按每Ikg被檢體給藥O. 05^20mgo
      4.如權(quán)利要求I或2所述的尿路表皮癌的檢測(cè)方法,其特征在于,口服給藥5-氨基乙酰丙酸或其衍生物或者它們的鹽。
      5.如權(quán)利要求I或2所述的尿路表皮癌的檢測(cè)方法,其特征在于,被檢體為尿路表皮癌的疑似患者。
      6.一種尿路表皮癌檢測(cè)劑,用于權(quán)利要求I或2所述的方法,其特征在于,含有5-氨基乙酰丙酸或其衍生物或者它們的鹽。
      全文摘要
      本發(fā)明提供一種尿路表皮癌的檢測(cè)方法,可以簡(jiǎn)易且高精度地進(jìn)行尿路表皮癌的檢測(cè)。對(duì)被檢體給藥5-氨基乙酰丙酸(ALA)或其衍生物或者它們的鹽之后從該被檢體中采集尿液,檢測(cè)所采集的尿液中的細(xì)胞內(nèi)的熒光的存在或者熒光量。
      文檔編號(hào)G01N33/58GK102918392SQ20118002629
      公開(kāi)日2013年2月6日 申請(qǐng)日期2011年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月21日
      發(fā)明者井上啟史, 執(zhí)印太郎, 降幡睦夫, 平尾佳彥, 田中徹 申請(qǐng)人:思佰益藥業(yè)股份有限公司, 國(guó)立大學(xué)法人高知大學(xué)
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