專利名稱：檢測b型流感嗜血桿菌發(fā)酵液不同發(fā)酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種檢測葡萄糖濃度的方法，特別是檢測b型流感嗜血桿菌發(fā)酵液不同發(fā)酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法。
背景技術：
通過測定不同發(fā)酵時間段b型流感嗜血桿菌發(fā)酵液中葡萄糖的含量變化情況，可以基本上表征出發(fā)酵過程中菌的生長情況，也可以對其發(fā)酵動力學及發(fā)酵過程中代謝產(chǎn)物的量有一定的表征，根據(jù)測定結果適時補充所需葡萄糖，可以促進更好的達到發(fā)酵目的。目前發(fā)酵液糖含量的測定主要有斐林法，3，5-ニ硝基水楊酸比色法(DNS法)、HPLC、葡萄糖試劑盒以及葡萄糖傳感儀幾種方式。其中斐林法對實驗環(huán)境及實驗者的滴定手法要求非常嚴格，因此測定結果重現(xiàn)性較差，不同實驗者出現(xiàn)偏差較大；DNS法發(fā)酵液需經(jīng)過處理，測定過程較為繁瑣，測定時間較長；HPLC、葡萄糖試劑盒及葡萄糖傳感儀成本較高。由于發(fā)酵液成分復雜，上述方法存在干擾現(xiàn)象，檢測準確度不高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的缺點，提供一種檢測b型流感嗜血桿菌發(fā)酵液不同發(fā)酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法，可直觀、準確、迅速的檢測發(fā)酵液中葡萄糖的含量，具有檢測結果穩(wěn)定、檢測時間短，檢測過程簡捷、成本低的優(yōu)點。本發(fā)明的目的通過以下技術方案來實現(xiàn)檢測b型流感嗜血桿菌發(fā)酵液不同發(fā)酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法，它包括以下步驟
A、以任ー時間段的Hib發(fā)酵液的樣品作為供試品，取供試品2ml置于250ml錐形瓶中，加水25ml，精密加入堿性銅試液25ml ；
B、加熱回流使其在3分鐘內(nèi)沸騰，并連續(xù)沸騰5分鐘，迅速冷卻至室溫，期間保證瓶中氧化亞銅不與空氣接觸，后立即加入25%碘化鉀溶液15ml，搖勻，隨振搖隨緩緩加入硫酸溶液(I — 5) 25ml ；
C、待ニ氧化碳停止放出后，立即用0.lmol/L的硫代硫酸鈉滴定液滴定，滴定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續(xù)滴定至藍色消失；
D、取水2ml做一空白試驗；
E、發(fā)酵液零小時樣品的測定，其包括以下步驟
1)、取2ml發(fā)酵液零小時樣品，即加糖不加菌的樣品，置于250ml錐形瓶中，加水25ml，精密加入堿性銅試液25ml ；
2)、加熱回流使其在3分鐘內(nèi)沸騰，并連續(xù)沸騰5分鐘，迅速冷卻至室溫，期間保證瓶中氧化亞銅不與空氣接觸，立即加25%碘化鉀溶液15ml，搖勻，隨振搖隨緩緩加入硫酸溶液(1 — 5) 25ml ；
3)、待ニ氧化碳停止放出后，立即用0.lmol/L的硫代硫酸鈉滴定液滴定，滴定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續(xù)滴定至藍色消失；
F、以發(fā)酵液零小時樣品消耗滴定液的體積為100%，其余樣品消耗滴定液體積與發(fā)酵零小時樣品消耗的滴定液體積進行比較，得到發(fā)酵液不同時段剩余葡萄糖含量占初始葡萄糖含量的百分比。本發(fā)明具有以下優(yōu)點
本發(fā)明用檢測還原糖的原 理，測定發(fā)酵液中不同發(fā)酵時間下的葡萄糖含量，可消除大部分干擾，準確度較高；采用了百分比的形式處理實驗數(shù)據(jù)，更直觀的表達了整個發(fā)酵過程菌的生長情況，解決了發(fā)酵過程中實時監(jiān)控葡萄糖含量的問題，且檢測結果穩(wěn)定、檢測時間短,檢測過程簡捷、成本低。本發(fā)明由于可直觀、準確、迅速的檢測發(fā)酵液中葡萄糖的含量水平，可作為判斷菌體生長情況的重要依據(jù)，同時可及時監(jiān)控菌體生長環(huán)境中碳源是否充足，為發(fā)酵過程的補料提供重要依據(jù)。
具體實施例方式下面結合實施例對本發(fā)明做進ー步的描述
實施例I :分別取發(fā)酵0小吋、I小吋、2小吋、3小吋、4小吋、5小吋、6小時的Hib發(fā)酵
液作為供試品，依次按下述方法進行葡萄糖含量檢測。檢測b型流感嗜血桿菌發(fā)酵液不同發(fā)酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法包括以下步驟
A、以任ー時間段的Hib發(fā)酵液的樣品作為供試品,取供試品2ml置于250ml錐形瓶中，加水25ml，精密加入堿性銅試液25ml ；
B、加熱回流使錐形瓶中溶液在3分鐘內(nèi)沸騰，并連續(xù)沸騰5分鐘，迅速冷卻至室溫，期間保證瓶中氧化亞銅不與空氣接觸，后立即加入25%碘化鉀溶液15ml，搖勻，隨振搖隨緩緩加入硫酸溶液(I — 5) 25ml ；
C、待ニ氧化碳停止放出后，立即用0.lmol/L的硫代硫酸鈉滴定液滴定，滴定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續(xù)滴定至藍色消失；
D、取水2ml做一空白試驗；
E、發(fā)酵液零小時樣品的測定，其包括以下步驟
1)、取2ml發(fā)酵液零小時樣品，即加糖不加菌的樣品，置于250ml錐形瓶中，加水25ml，精密加入堿性銅試液25ml ；
2)、加熱回流使錐形瓶中溶液在3分鐘內(nèi)沸騰，并連續(xù)沸騰5分鐘，迅速冷卻至室溫，期間保證瓶中氧化亞銅不與空氣接觸，立即加25%碘化鉀溶液15ml，搖勻，隨振搖隨緩緩加入硫酸溶液(I — 5) 25ml ；
3)、待ニ氧化碳停止放出后，立即用0.lmol/L的硫代硫酸鈉滴定液滴定，滴定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續(xù)滴定至藍色消失；
F、以發(fā)酵液零小時樣品消耗滴定液的體積為100%，其余樣品消耗滴定液體積與發(fā)酵零小時樣品消耗的滴定液體積進行比較，得到發(fā)酵液不同時段剩余葡萄糖含量占初始葡萄糖含量的百分比。試驗結果如下所示，以上幾種供試品消耗的硫代硫酸鈉體積(去空白后)分別為發(fā)酵I小時的Hib發(fā)酵液 3. 27 ml,
發(fā)酵2小時的Hib發(fā)酵液 3. 02 ml,
發(fā)酵3小時的Hib發(fā)酵液 2. 81 ml,
發(fā)酵4小時的Hib發(fā)酵液 2. 76 ml,
發(fā)酵5小時的Hib發(fā)酵液 2. 52 ml,
發(fā)酵6小時的Hib發(fā)酵液 2. 07 ml,
發(fā)酵液零小時樣品3.44 ml通過上述試驗結果可以得出發(fā)酵I小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時的Hib發(fā)酵液中剰余葡萄糖含量占初始葡萄糖含量的百分比分別為95. 06%,87. 79%，81. 69%，80. 23%, 73. 26%, 60. 17%。本發(fā)明采用了百分比的形式處理實驗數(shù)據(jù)，測定發(fā)酵液中不同發(fā)酵時間下的葡萄糖含量，更直觀的表達了整個發(fā)酵過程菌的生長情況，解決了發(fā)酵過程中實時監(jiān)控葡萄糖含量的問題，且檢測結果穩(wěn)定、檢測時間短，檢測過程簡捷、成本低，可作為判斷菌體生長情況的重要依據(jù)，同時可及時監(jiān)控菌體生長環(huán)境中碳源是否充足，為發(fā)酵過程的補料提供重要依據(jù)。
權利要求
1.檢測b型流感嗜血桿菌發(fā)酵液不同發(fā)酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法，其特征在于它包括以下步驟A、以任一時間段的Hib發(fā)酵液的樣品作為供試品,取供試品2ml置于250ml錐形瓶中， 加水25ml，精密加入堿性銅試液25ml ；B、加熱回流使其在3分鐘內(nèi)沸騰，并連續(xù)沸騰5分鐘，迅速冷卻至室溫，期間保證瓶中氧化亞銅不與空氣接觸，后立即加入25%碘化鉀溶液15ml，搖勻，隨振搖隨緩緩加入硫酸溶液(I — 5) 25ml ；C、待二氧化碳停止放出后，立即用0.lmol/L的硫代硫酸鈉滴定液滴定，滴定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續(xù)滴定至藍色消失；D、取2ml水做一空白試驗；E、發(fā)酵液零小時樣品葡萄糖含量測定；F、以發(fā)酵液零小時樣品消耗滴定液的體積為100%，其余樣品消耗滴定液體積與發(fā)酵零小時樣品消耗的滴定液體積進行比較，得到發(fā)酵液不同時段剩余葡萄糖含量占初始葡萄糖含量的百分比； 其中，所述的發(fā)酵液零小時樣品葡萄糖含量測定測定包括以下子步驟I)、取2ml發(fā)酵液零小時樣品，即加糖不加菌的樣品，置于250ml錐形瓶中，加水 25ml，精密加入堿性銅試液25ml ；2)、加熱回流使其在3分鐘內(nèi)沸騰，并連續(xù)沸騰5分鐘，迅速冷卻至室溫，期間保證瓶中氧化亞銅不與空氣接觸，立即加25%碘化鉀溶液15ml，搖勻，隨振搖隨緩緩加入硫酸溶液 (1 — 5) 25ml ；3)、待二氧化碳停止放出后，立即用0.lmol/L的硫代硫酸鈉滴定液滴定，滴定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續(xù)滴定至藍色消失。
全文摘要
本發(fā)明公開了檢測b型流感嗜血桿菌發(fā)酵液不同發(fā)酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法，其主要是用硫代硫酸鈉滴定液滴定任一時間段的Hib發(fā)酵液的樣品，然后將該樣品消耗的滴定液體積與發(fā)酵零小時樣品消耗的滴定液體積進行比較，得到發(fā)酵液不同時段剩余葡萄糖含量占初始葡萄糖含量的百分比。本發(fā)明的有益效果是采用了百分比的形式處理實驗數(shù)據(jù)測定發(fā)酵液中不同發(fā)酵時間下的葡萄糖含量，更直觀的表達了發(fā)酵過程中菌的生長情況，檢測結果穩(wěn)定、檢測時間短，檢測過程簡捷、成本低，可直觀、準確、迅速的檢測發(fā)酵液中葡萄糖的含量水平，可作為判斷菌體生長情況的重要依據(jù)，同時可及時監(jiān)控菌體生長環(huán)境中碳源是否充足，為發(fā)酵過程的補料提供重要依據(jù)。
文檔編號G01N21/79GK102621140SQ201210036480
公開日2012年8月1日 申請日期2012年2月17日 優(yōu)先權日2012年2月17日
發(fā)明者朱琳, 羅芹, 趙丹, 韓煉 申請人:成都歐林生物科技股份有限公司