專利名稱：測(cè)定三氮脒顆粒中三氮脒和安替比林含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，涉及定量測(cè)定制劑中三氮脒和安替比林含量的方法，具體地說(shuō)是用一種測(cè)定三氮脒顆粒劑中 三氮脒和安替比林含量的方法。
背景技術(shù)：
三氮脒屬于芳香雙脒類，是傳統(tǒng)使用的廣譜抗血液原蟲(chóng)藥，對(duì)家畜梨形蟲(chóng)、錐蟲(chóng)和無(wú)形體均有治療作用，但預(yù)防效果較差。芳香雙脒類的抗蟲(chóng)作用同干擾蟲(chóng)體的需氧糖酵解和DNA合成有關(guān)，這類藥物均會(huì)引起宿主低血糖。梨形蟲(chóng)和錐蟲(chóng)所進(jìn)行的需氧糖酵解要依靠宿主的葡萄糖，這類藥物的殺錐蟲(chóng)作用取決于它對(duì)錐蟲(chóng)需氧糖酵解的抑制作用和核蛋白變性作用。具有治療作用的三氮脒顆粒劑，里面添加了一定量的安替比林作為解熱陣痛的活性物質(zhì)被國(guó)外市場(chǎng)廣泛使用，但目前文獻(xiàn)記載三氮脒顆粒中檢測(cè)三氮脒和安替比林的液相方法還很少有報(bào)道，國(guó)內(nèi)外藥典也沒(méi)有記載此品種的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題，是針對(duì)三氮脒顆粒中添加了安替比林活性物質(zhì)，中國(guó)藥典和文獻(xiàn)報(bào)道中沒(méi)有其檢測(cè)方法，在此情況下，提供了一種測(cè)定三氮脒顆粒中測(cè)定三氮脒和安替比林含量的測(cè)定方法，該方法屬于高效液相色譜法即HPLC法，具有操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)等特點(diǎn)，適用于三氮脒顆粒中測(cè)定三氮脒和安替比林含量的測(cè)定。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是
一種測(cè)定三氮脒顆粒中三氮脒和安替比林的含量的方法，它屬于HPLC法，該方法的色譜條件為
(1)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑DiamonsiI C18柱(250mmX 4. 6mm, 5 u m)；
(2)流動(dòng)相體積比為磷酸緩沖鹽溶液甲醇=2710 ；
(3)紫外檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm。作為本發(fā)明的一種限定，所述的磷酸鹽緩沖液為磷酸二氫鉀或磷酸二氫鈉溶液。作為上述限定的進(jìn)一步限定，所述的磷酸鹽緩沖液為磷酸二氫鉀溶液。作為上述限定的再次限定，所述的磷酸二氫鉀溶液為I. 15%的磷酸二氫鉀水溶液。作為上述限定的最后限定，所述磷酸二氫鉀水溶液用85%磷酸調(diào)節(jié)pH值至3. O。作為本發(fā)明的另一種限定，所述該HPLC法的色譜條件為所用流動(dòng)相的流速為0. 5mL/min,進(jìn)樣體積為20 u L，柱溫為30°C。通過(guò)建立的上述方法，用來(lái)測(cè)定三氮脒顆粒中三氮脒和安替比林的含量，能夠達(dá)到分析準(zhǔn)確的目的。由于采用了上述的技術(shù)方案，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，所取得的技術(shù)進(jìn)步在于采用HPLC法檢測(cè)三氮脒顆粒中三氮脒和安替比林含量的方法，操作簡(jiǎn)單，提高了檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度。
本發(fā)明適于對(duì)三氮脒顆粒中三氮脒和安替比林的含量進(jìn)行HPLC法測(cè)定。


圖I為本發(fā)明實(shí)施例溶劑干擾性試驗(yàn)的HPLC 圖2為本發(fā)明實(shí)施例空白輔料干擾性試驗(yàn)的HPLC 圖3為本發(fā)明實(shí)施例三氮脒對(duì)照品HPLC 圖4為本發(fā)明實(shí)施例安替比林對(duì)照品HPLC 圖5為本發(fā)明實(shí)施例三氮脒和安替比林標(biāo)準(zhǔn)品HPLC 圖6為本發(fā)明實(shí)施例三氮脒和安替比林樣品HPLC 圖7為本發(fā)明實(shí)施例對(duì)照品進(jìn)樣量5 μ L線性測(cè)定的HPLC 圖8為本發(fā)明實(shí)施例對(duì)照品進(jìn)樣量10 μ L線性測(cè)定的HPLC 圖9為本發(fā)明實(shí)施例對(duì)照品進(jìn)樣量15 μ L線性測(cè)定的HPLC 圖10為本發(fā)明實(shí)施例對(duì)照品進(jìn)樣量20 μ L線性測(cè)定的HPLC 圖11為本發(fā)明實(shí)施例對(duì)照品進(jìn)樣量25 μ L線性測(cè)定的HPLC圖。本發(fā)明下面將結(jié)合說(shuō)明書(shū)附圖及具體實(shí)施例作進(jìn)ー步詳細(xì)說(shuō)明。
具體實(shí)施例方式 以下實(shí)施例用于補(bǔ)充說(shuō)明本發(fā)明，而并非本發(fā)明的限定。
實(shí)施例一種測(cè)定三氮脒顆粒劑中三氮脒和安替比林含量的方法 該方法屬于HPLC法，其色譜條件為
(1)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑DiamonsiI C18柱(250mmX 4. 6mm, 5 μ m)；
(2)流動(dòng)相體積為磷酸緩沖鹽溶液甲醇=27:10。磷酸鹽緩沖液為磷酸ニ氫鉀溶液(也可以用磷酸ニ氫鈉溶液替代)，具體為I. 15%的磷酸ニ氫鉀水溶液，用85%磷酸調(diào)節(jié)pH值至 3.0 ;
所用流動(dòng)相的流速為O. 5mL/min，進(jìn)樣體積為20 μ L，柱溫為30°C ；
(3)紫外檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm。一、本發(fā)明方法的建立過(guò)程
1、儀器與試劑
儀器島津LC-2010A高效液相色譜儀(LC-2010型號(hào)檢測(cè)器，LC-2010型號(hào)泵，LC-2010柱溫箱，LC-2010自動(dòng)進(jìn)樣器)，LCsolution色譜工作站；
試劑甲醇(色譜純)，磷酸ニ氫鉀(優(yōu)級(jí)純)，磷酸(優(yōu)級(jí)純)，水(二次去離子水)，三氮脒顆粒(樣品，河北科星藥業(yè)有限公司生產(chǎn))，三氮脒對(duì)照品(批號(hào)091203，中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量為99. 6%);安替比林對(duì)照品(批號(hào)100506-200301，中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量為99. 8%)。2、含量測(cè)定方法的建立
2.I、波長(zhǎng)的選擇
根據(jù)三氮脒，安替比林紫外光吸收具有的特性，測(cè)定了其水溶液在紫外光下的吸收?qǐng)D譜，三氮脒和安替比林在波長(zhǎng)為250nm均有很好的吸收，并且相交，因此確定250nm做為其檢測(cè)波長(zhǎng)。2. 2、溶液的配制、溶劑為流動(dòng)相。混合對(duì)照品溶液的配制精密稱取三氮脒對(duì)照品40. Omg和安替比林對(duì)照品55. Omg置于IOOml棕色容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻即得對(duì)照品溶液M。三氮脒對(duì)照品溶液制備精密稱取三氮脒對(duì)照品40. Omg置于IOOmL棕色容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻即得溶液A。安替比林對(duì)照品溶液的制備精密稱取安替比林對(duì)照品55. Omg置于IOOmL棕色容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻即得溶液B。樣品溶液的配制精密稱取樣品適量(約相當(dāng)于三氮脒40. Omg，安替比林約為55. Omg)，置于IOOmL棕色容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻即得樣品溶液D。2. 3、溶劑、空白輔料的干擾性試驗(yàn)
為排除色譜圖中有溶劑和空白輔料干擾三氮脒和安替比林峰的出現(xiàn)，對(duì)單獨(dú)的溶劑和空白輔料進(jìn)行專屬性試驗(yàn)，以增加檢測(cè)的準(zhǔn)確性。溶劑的影響取流動(dòng)相過(guò)濾即得樣品I?？瞻纵o料的影響按制劑配方規(guī)定的比例，除三氮脒和安替比林外，加入其他輔料制成樣品，精密稱取此樣品O. Ig置于IOOmL棕色容量瓶中用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾即得樣品2。按照上述色譜條件進(jìn)樣，分別取樣品I和樣品2各20μ L，進(jìn)樣，記錄色譜圖，如圖I和圖2所示。結(jié)果顯示由圖I可以看出檢測(cè)結(jié)果接近于基線沒(méi)有干擾峰出現(xiàn)，表明溶劑對(duì)三氮脒和安替比林的測(cè)定沒(méi)有影響。由圖2可以看出沒(méi)有干擾峰出現(xiàn)，表明空白輔料對(duì)三氮脒和安替比林的測(cè)定沒(méi)有影響。按照上述色譜條件進(jìn)樣，分別取2. 2項(xiàng)下的溶液Α、B、M和溶液D各20 μ L，進(jìn)樣，記錄色譜圖，如圖3 —圖6所示。結(jié)果顯示由圖5和圖6可以看出樣品圖中安替比林和三氮脒主峰保留時(shí)間和標(biāo)準(zhǔn)品圖中安替比林和三氮脒主峰保留時(shí)間一致。2. 4、樣品含量的測(cè)定
將配制好的對(duì)照品溶液Μ，取20 μ L進(jìn)樣，取三批樣品，依照上述2. 2方法制備樣品溶液，每批樣品做2個(gè)平行，各取20 μ L進(jìn)樣，并記錄各主峰面積并按外標(biāo)法計(jì)算三氮脒和安替比林的含量，結(jié)果如表I所示，根據(jù)試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果，確定三氮脒和安替比林的含量為標(biāo)示量的 90. 0%-110. 0%。
權(quán)利要求
1.一種測(cè)定三氮脒顆粒中三氮脒和安替比林含量的方法，其特征在于它屬于HPLC法，該方法的色譜條件為 (1)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑DiamonsiI C18柱(250mmX 4. 6mm, 5 u m)； (2)流動(dòng)相體積為磷酸緩沖鹽溶液甲醇=2710 ； (3)紫外檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的測(cè)定三氮脒顆粒中三氮脒和安替比林含量的方法，其特征在于所述的磷酸鹽緩沖液為磷酸二氫鉀或磷酸二氫鈉溶液中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的測(cè)定三氮脒顆粒中三氮脒和安替比林含量的方法，其特征在于所述的磷酸鹽緩沖液為磷酸二氫鉀溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的測(cè)定三氮脒顆粒中三氮脒和安替比林含量的方法，其特征在于所述的磷酸二氫鉀溶液濃度為I. 15%的磷酸二氫鉀水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的測(cè)定三氮脒顆粒中三氮脒和安替比林含量的方法，其特征在于所述磷酸二氫鉀水溶液用85%磷酸調(diào)節(jié)pH值至3. O。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的測(cè)定三氮脒顆粒中三氮脒和安替比林含量的方法，其特征在于該方法的色譜條件為所用流動(dòng)相的流速為0. 5mL/min，進(jìn)樣體積為20 y L，柱溫為30 C。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種測(cè)定三氮脒顆粒中三氮脒和安替比林含量的方法，它屬于HPLC法，該方法的色譜條件為(1)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm，5μm)；(2)流動(dòng)相體積比為磷酸緩沖鹽溶液甲醇＝2710；(3)紫外檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm；所用流動(dòng)相的流速為0.5mL/min，進(jìn)樣體積為20μL，柱溫為30℃；本發(fā)明的測(cè)定方法操作簡(jiǎn)單，提高了檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度。本發(fā)明適于測(cè)定三氮脒顆粒中三氮脒和安替比林的含量。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102636582SQ20121007021
公開(kāi)日2012年8月15日 申請(qǐng)日期2012年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月30日
發(fā)明者呂虎林, 李倩, 馬金波, 魏桂香 申請(qǐng)人:河北科星藥業(yè)有限公司