專利名稱：一種人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白酶促化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法和試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于免疫檢測分析技術(shù)領(lǐng)域，具體提供了ー種人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白酶促化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法和試劑盒，適用于人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白的酶促化學(xué)發(fā)光檢測分析。
背景技術(shù)：
人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP)是ー種重要的細(xì)胞內(nèi)脂肪酸結(jié)合蛋白。其分子量較小為15kD的胞漿蛋白，大量存在于心肌組織中，其在心肌中的含量比骨骼肌高10倍，在腎、肝、小腸含量很低。它在心肌細(xì)胞內(nèi)干預(yù)游離脂肪酸的細(xì)胞內(nèi)運輸，提供心肌細(xì)胞能量。心肌缺血導(dǎo)致心肌細(xì)胞壞死，h-FABP從心肌細(xì)胞滲漏到血液中，從而使外周血的h-FABP上 升。AMI出現(xiàn)后6h內(nèi)血中升高的生化標(biāo)志物為早期標(biāo)志物，h-FABP在AMI發(fā)生后I 2h立即升高，并持續(xù)至12h，保持較高水平和較高的敏感性，在24h左右恢復(fù)并接近正常水平，成為理想的診斷AMI的早期生化標(biāo)志物。目前人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白的檢測方法主要有酶聯(lián)免疫吸附實驗(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)和膠體金免疫層析法(Gold-immunochromatography assay,GICA)。ELISA方法具有操作簡單、技術(shù)可靠、試劑方便易得等優(yōu)點，但其敏感性、特異性不夠高，作為定量方法不夠準(zhǔn)確；GICA方法簡便、快速、可單份或成批測定，但其靈敏度更低于ELISA方法，而且通常情況下只能做為定性方法，而不能作為定量方法?；瘜W(xué)發(fā)光(ChemiLuminescence,簡稱為CL)分析法是分子發(fā)光光譜分析法中的一類，其原理是在化學(xué)反應(yīng)中生成的不穩(wěn)定的激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)其回到基態(tài)時，釋放光子。化學(xué)發(fā)光分析法主要是依據(jù)化學(xué)檢測體系中待測物濃度與體系的化學(xué)發(fā)光強度在一定條件下呈線性定量關(guān)系的原理，利用儀器對體系化學(xué)發(fā)光強度的檢測，而確定待測物含量的一種痕量分析方法。在免疫檢測分析中，使用化學(xué)發(fā)光技術(shù)，可以使檢測的范圍達到6個數(shù)量級，而且靈敏度很高，達10_18摩爾水平，加上標(biāo)記物穩(wěn)定，有效期長，使其受到越來越多的關(guān)注與應(yīng)用。但目前尚沒有利用化學(xué)發(fā)光分析法測量人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白的研究和應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
為了進一步提高人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白檢測的敏感性、特異性和準(zhǔn)確度，發(fā)明人將酶促化學(xué)發(fā)光分析方法應(yīng)用于人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白的檢測中，經(jīng)過大量的實驗，摸索出一種靈敏、準(zhǔn)確且穩(wěn)定的檢測方法，由此完成了本發(fā)明。本發(fā)明ー個方面涉及ー種人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白檢測方法，其包括以下步驟(I)將固相化抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體固定在固相表面，加入待測樣本和標(biāo)記的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體，溫育，然后用洗滌液洗滌；任選地，同時設(shè)立人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的對照；(2)加入化學(xué)發(fā)光底物工作液，放置一段時間；(3)測量發(fā)光值，得到待測樣本的人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白濃度值。其中步驟(I)中的溫育為，在18_42°C條件下，優(yōu)選為20_37°C條件下，溫育5-120min，優(yōu)選為溫育10_ 60min，更優(yōu)選為15_45min，在本發(fā)明的一個實施方案中，在37°C條件下，溫育30min。其中步驟(2)中的放置放一段時間是指l-30min,優(yōu)選為2_20min。在本發(fā)明的一個實施方案中，放置時間為5min。具體地，檢測方法如下I.在固定有抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白單克隆抗體的聚苯こ烯微孔板中加入5-100 μ L血清或血漿樣本，標(biāo)準(zhǔn)品，混勻；加入5-100 μ L辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白單克隆抗體，37°C溫育10-60分鐘。在本發(fā)明的一個實施方案中，溫育30mino2.洗滌可采用手工洗滌或洗板機洗滌。手工操作方法為直接排除包被板中的液體，并加入洗滌液(300 μ L/孔)，倒出洗滌液并拍擊以除去掛壁液體，重復(fù)三次,洗板機操作見儀器說明書。3.加入化學(xué)發(fā)光底物工作液每孔加入50-400 μ L，所述發(fā)光底物工作液包括底物溶液、輔助發(fā)光溶液和反應(yīng)增強劑?；靹蚝?-20分鐘測量。4.讀取發(fā)光值在發(fā)光測定儀上測定每孔的發(fā)光值。本發(fā)明的另一方面涉及人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白檢測試劑盒，其包括連接有抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體的微孔板，標(biāo)記的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體和化學(xué)發(fā)光底物工作液。在本發(fā)明中，所述化學(xué)發(fā)光底物工作液包括底物溶液、輔助發(fā)光溶液和反應(yīng)增強齊 。在本發(fā)明中，所述試劑盒還可以包括洗滌液，人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)量控制血清。在本發(fā)明中，待測樣本可以為血清、血漿，在本發(fā)明的一個實施方案中，待測樣本為血清。在本發(fā)明中，所述的固相化的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體和用來標(biāo)記的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體各自獨立地為單克隆抗體或多克隆抗體，在本發(fā)明的一個實施方案中，固相化的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體和標(biāo)記(酶標(biāo))的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體均為單克隆抗體；其中固相化的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體與標(biāo)記的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體可以相同，也可以不相同。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述的固相化的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體和標(biāo)記的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體購自芬蘭hytest公司。在本發(fā)明的ー個具體實施方案中，所述的固相化的抗體和標(biāo)記的抗體均為芬蘭hytest公司公司的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白單克隆抗體，克隆號為28和22，其對應(yīng)的貨號分別為4F29 (28)和4F29 (22)。在本發(fā)明的另ー個具體實施方案中，所述的固相化的抗體和標(biāo)記的抗體均為芬蘭hytest公司的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白單克隆抗體，克隆號為28和31，其對應(yīng)的貨號分別為4F29 (28)和4F29 (31)，對于上述的每ー對抗體，當(dāng)其中一個作為固相化抗體時，另ー個即為標(biāo)記的抗體。所述人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體(包括固相化和標(biāo)記的抗體)可以是利用免疫學(xué)中常用的動物制備的抗體，例如鼠抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體、兔抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體或羊抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體，在本發(fā)明的一個實施方案中，為鼠抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體。在本發(fā)明中，所述的標(biāo)記抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體的標(biāo)記物為過氧化物酶，例如為辣根過氧化物酶或煙草過氧化物酶；所述底物為在一定條件下，能被所述酶激發(fā)發(fā)光的物質(zhì)；在本發(fā)明的一個實施方案中，所述標(biāo)記物為辣根過氧化物酶，所述底物為魯米諾或其衍生物。 所述魯米諾衍生物包括但不限于異魯米諾、4一氨基已基N —こ基異魯諾、及N- (6-氨基己基)-N-こ基異魯米諾(AHEI)和N- (4-氨基丁基)-N-こ基異魯米諾(ABEI)。在本發(fā)明中，所述輔助發(fā)光的溶液包括但不限于過氧化氫溶液、鐵氰化鉀溶液、碘化物溶液、高錳酸鉀溶液，在本發(fā)明的一個實施方案中，為過氧化氫溶液；所述反應(yīng)增強劑為能增強底物發(fā)光的物質(zhì)，當(dāng)?shù)孜餅轸斆字Z或其衍生物吋，反應(yīng)增強劑包括但不限于對碘苯酹、對溴苯酹，在本發(fā)明的一個實施方案中，為對碘苯酹。底物溶液在輔助發(fā)光溶液和反應(yīng)增強劑的作用下發(fā)光，發(fā)光的強度與樣本中人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白的含量成正比。在本發(fā)明中，洗滌液為能夠去掉抗原抗體間非特異性結(jié)合的液體，例如磷酸鹽緩沖液(PBS溶液)或三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽(Tris-HCl)緩沖液，同時還含有吐溫-20，吐溫-20的濃度為O. 1-1%。，優(yōu)選為O. 2-0. 8%。，更優(yōu)選為O. 3-0. 6%。。在本發(fā)明的一個實施方案中，洗滌液(IOOOml)的成分包括氯化鈉(NaCl) 2 g，磷酸ニ氫鈉(NaH2PO4. 12H20)2. 9 g，磷酸氫ニ鉀(K2HPO4) O. 2 g，氯化鉀(KCl) O. 2 g，曲拉通 X — 1000. 5mL，吐溫-200. 5mL，布蘭尼道克斯(Bronidox-L) 5g。在本發(fā)明中，將抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白單克隆抗體連接在聚苯こ烯微孔板作為固相試劑。所述的抗體與微孔板的連接，可以是直接的，也可以是間接的(如通過生物素-親和素系統(tǒng)等);可以通過物理吸附(靜電作用、離子鍵或疏水作用等)或化學(xué)偶聯(lián)連接。所述的標(biāo)記抗體偶聯(lián)方法是使用過碘酸鈉活化辣根過氧化物酶，與抗體以1:2至2:1的比例混合，并使用凝膠層析純化酶標(biāo)抗體。在本發(fā)明中，在加入待測樣本后加入的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體即為酶標(biāo)ニ抗，與微孔板固相連接的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體為ー杭。在加入酶標(biāo)ニ抗后，即形成固相-抗體-抗原-酶標(biāo)ニ抗的免疫夾心復(fù)合物。發(fā)明的有益效果I、使用兩個單克隆抗體，特異性強，避免了干擾物的影響，使免疫反應(yīng)的親和カ更高，而且單抗的生產(chǎn)批間差異相對小，更容易保證產(chǎn)品的批間穩(wěn)定。2、使用化學(xué)發(fā)光底物溶液，使檢測的靈敏度和特異性得到了提高，而且線性范圍更寬。3、使用固相偶聯(lián)后的抗體，可以使用物理方法分離結(jié)合的抗原或抗體，降低了非特異性結(jié)合。
4、本發(fā)明提供的人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白檢測方法和試劑盒，對人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白檢測的靈敏度、特異性更高，結(jié)合其他臨床癥狀就可以輔助判斷檢查者是否患有心肌壞死的病變，如急性心肌缺血，心肌梗塞等。


圖I為檢測FABP濃度和發(fā)光值的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。其中橫坐標(biāo)為FABP濃度，單位為μ g/L ;縱坐標(biāo)為發(fā)光值，單位為RLU (相對發(fā)光強度)。
具體實施例方式
本發(fā)明公開了 ー種人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白酶促化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法和試劑盒，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進エ藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似 的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法、試劑盒已經(jīng)通過較佳實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進行改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。在本發(fā)明中，所述的固相化的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體和標(biāo)記的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體購自芬蘭hytest公司公司，其均為抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白單克隆抗體，其中ー對克隆號為28和22，其對應(yīng)的貨號分別為4F29 (28)和4F29 (22);另ー對克隆號為28和31，其對應(yīng)的貨號分別為4F29 (28)和4F29 (31)。對于上述的每ー對抗體，當(dāng)其中一個作為固相化抗體時，另ー個即為標(biāo)記的抗體。實施例I辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記抗體的制備將抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白單克隆抗體，濃度濃縮至2mg/mL。使用改良過的過碘酸鈉法進行標(biāo)記，具體步驟為(I)5mg HRP (購自美國sigma公司)溶于O. 5ml雙蒸水中，加入新配制的O. O6M0I/L NaIO4 水溶液 O. 5ml，混勻，置 4°C，30min ；(2)加入O. 16Mol/Lこニ醇水溶液O. 5ml，室溫放置30min ；(3)加入含5mg純化抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白單克隆抗體(克隆號22)的水溶液2. 5ml，混勻，并裝入透析袋，對O. 05Mol/L pH 9. 5碳酸鹽緩沖液緩緩攪拌透析6h (或過夜)，使之結(jié)合；(4)取出透析袋中溶液，加入NaBH4溶液(5mg/ml) O. 2ml，混勻，置4°C，2h ;(5)在以上溶液中緩慢加入等體積的飽和硫酸銨溶液，混勻，4°C 30min,離心，去上清，沉淀以少許O. 02Mol/L pH7. 4PBS溶液溶解，裝入透析袋，以O(shè). 02Mol/L pH7. 4PBS液在4°C透析除鹽，過夜；(6)次日取出透析袋中溶液，離心，以除去不溶物，即得酶一抗體(HRP-IgG)結(jié)合物(HRP標(biāo)記的抗體)，以O(shè). 02Mol/L pH7. 4PBS液加至5ml。然后使用Superdex200凝膠層析柱分離純化，收集第一和第二峰，除去未連接的游離抗體和酶，將連接物保存于4°C。使用含O. I %牛血清白蛋白的Tris-HCI緩沖液(pH7. 4)，將HRP標(biāo)記的ニ抗稀釋到I. Oug/mL,作為工作液。實施例2包被抗體的吸附固定化用O. 02M，PH7. 4磷酸鹽緩沖液(PBS溶液)稀釋抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白單克隆抗體(克隆號28)到2. 5μ g/ml，加入聚苯こ烯的微孔板，100 μ L/孔，4°C過夜，用洗滌液清洗三次，用1%牛血清白蛋白300 μ L/孔常溫封閉2小時后拍干備用。洗滌液配制方法為氯化鈉(NaCl) 2 g，磷酸ニ氫鈉(NaH2PO4. 12H20) 2. 9 g，磷酸氫ニ鉀(K2HPO4) O. 2 g，氯化鉀(KCl) O. 2 g，曲拉通 X-1000. 5mL，吐溫-200. 5mL，布蘭尼道 克斯(Bronidox-L) 5 g ,用純化水配成IOOOmL,用O. 2 μ m過濾器過濾,于室溫保存。實施例3包被抗體的親和固定化用O. 02M，PH7. 4磷酸鹽緩沖液稀釋親和素至I. O μ g/ml，加入聚苯こ烯微孔板中，100 μ L/孔，4°C過夜，用洗滌液(配制方法同實施例2)清洗三次，加入生物素標(biāo)記的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體(克隆號22)(生物素標(biāo)記方法參看Thermofisher的EZ-Link Sulfo-NHS-Biotin 的使用說明，貨號是 21217，)，濃度 1.0yg/ml, 100 μ L/ 孔，4°C過夜，用洗滌液清洗三次，用1%牛血清白蛋白300 μ L/孔常溫封閉2小時后拍干備用。實施例4人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白的酶促化學(xué)發(fā)光免疫檢測材料與設(shè)備I、人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白標(biāo)準(zhǔn)品O. 5-50 μ g/L。其配制方法為2g氯化鈉，2. 42g三羥基氨基甲烷，5 g牛血清白蛋白，O. 5mL普勞可林300。用IOOOmL純化水溶解,用鹽酸調(diào)pH至7. 6，O. 2 μ m過濾器過濾,于4°C保存，作為標(biāo)準(zhǔn)品稀釋的緩沖液。按照Pierce蛋白定量檢測試劑BCA法確定人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白純品濃度，然后使用緩沖液進行稀釋(標(biāo)準(zhǔn)品范圍為O. 5-50 μ g/L)，于4°C保存，用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。2、抗體固相包被微孔板具體見實施例2。3、辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記抗體具體見實施例I。酶標(biāo)抗體用稀釋液稀釋，稀釋液配制方法為使用小牛血清加入O. 5%普勞可林300，用O. 45 μ m過濾器過濾·4、洗滌液IOOmL,配制見實施例2。5、化學(xué)發(fā)光底物工作液，參見專利“超高敏酶促化學(xué)發(fā)光液”，專利號為ZL91110621. 9，其具體配方為 I. 25mmol/L 魯米諾，O. 136mmol/L 對-碘苯酚，I Ommo I/LTris *HCL (pH8. 6), O. 2% こ醇，O. 3mmol/LNaCl, 5mmol/L環(huán)已ニ胺四こ酸(CDTA), 4mmol/L 的H2O2 與 4mmo1 /I,的 NaBO3 混合。6、患者血清100份(其中50例臨床診斷為心肌梗塞，50例為心肌缺血，正常人血清100 份。7,MPC-I化學(xué)發(fā)光測定儀(北京源德醫(yī)學(xué)生物工程有限公司)。8、水浴箱(用于37°C溫浴)。操作步驟
I、加樣與免疫反應(yīng)在實施例2制備的抗體固相包被微孔板中加入20 μ L患者、正常血清樣本或人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，在每ー微孔中加入實施例I制備的酶標(biāo)抗體工作液100 μ L，混勻后，37°C溫育30分鐘。2、洗滌每孔加入300 μ L洗滌液，然后甩干。重復(fù)兩次。3、加入化學(xué)發(fā)光底物工作液每孔加入100 μ L化學(xué)發(fā)光底物工作液。4、加入底物和增強劑混合液后5分鐘讀取發(fā)光值在發(fā)光測定儀測定每孔的發(fā)光值，測定時間為I秒鐘。5、檢測結(jié)果檢測FABP濃度和發(fā)光值的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖I。
對零標(biāo)準(zhǔn)點進行20次重復(fù)測試，取零標(biāo)準(zhǔn)點測定的平均值加上2倍的標(biāo)準(zhǔn)差，即 為其靈敏度。本方法的靈敏度為< O. 5 μ g/L。對200例臨床血清進行測定，化學(xué)發(fā)光法測定的正常范圍上限為I. 56μ g/L，根據(jù)這個判斷標(biāo)準(zhǔn)可以得到表I中的結(jié)果，同時膠體金免疫層析法和酶聯(lián)免疫吸附實驗法的檢測方法按照各自的說明書進行(膠體金試劑盒購自深圳康生保生物技術(shù)有限公司，貨號為A207002 ；ELISA檢測試劑盒購自荷蘭hycult公司，貨號為HK402)。檢測結(jié)果見表I。表I.各方法對于200份臨床血清的檢出情況
權(quán)利要求
1.一種人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白檢測方法，其包括以下步驟 (1)將固相化抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體固定在固相表面，加入待測樣本和標(biāo)記的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體，溫育，然后用洗滌液洗滌；任選地，同時設(shè)立人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的對照； (2)加入化學(xué)發(fā)光底物工作液，放置一段時間； (3)測量發(fā)光值，得到待測樣本的人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白濃度值。
2.權(quán)利要求I的檢測方法，其中所述的固相化抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體和標(biāo)記的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體各自獨立地為單克隆抗體或多克隆抗體，優(yōu)選為單克隆抗體；所述的固相化抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體和標(biāo)記的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體可以相同，也可以不相同。
3.權(quán)利要求I的檢測方法，其中所述的標(biāo)記物為過氧化物，優(yōu)選為辣根過氧化物酶或煙草過氧化物酶。
4.權(quán)利要求3的檢測方法，其中所述的底物為魯米諾或其衍生物。
5.權(quán)利要求I的檢測方法，其中步驟(I)中的溫育為，在18-42°C、優(yōu)選為20-37°C、例如為37°C條件下,溫育5_120min,優(yōu)選為溫育10-60min,更優(yōu)選為15_45min。
6.權(quán)利要求I的檢測方法，其中步驟(I)中的洗滌液為磷酸鹽緩沖液或三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖液，同時還含有吐溫-20，其濃度為0. 1-1%。，優(yōu)選為0. 2-0. 8%。，更優(yōu)選為0.3-0. 6%0。
7.權(quán)利要求I的檢測方法，其中步驟(2)中的放置一段時間為l-30min，優(yōu)選為2_20mino
8.人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白檢測試劑盒，其包括連接有固相化抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體的微孔板，標(biāo)記的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體和化學(xué)發(fā)光底物工作液，所述化學(xué)發(fā)光底物工作液包括底物溶液、輔助發(fā)光溶液和反應(yīng)增強劑。
9.權(quán)利要求8的試劑盒，其還包括洗滌液和人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白標(biāo)準(zhǔn)品。
10.權(quán)利要求8的試劑盒，其中所述的固相化抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體和標(biāo)記的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體各自獨立地為單克隆抗體或多克隆抗體，優(yōu)選為單克隆抗體；所述的固相化抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體和標(biāo)記的抗人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白抗體可以相同，也可以不相同。
11.權(quán)利要求8的試劑盒，其中所述的標(biāo)記物為過氧化物，優(yōu)選為辣根過氧化物酶或煙草過氧化物酶。
12.權(quán)利要求11的試劑盒，其中所述的底物為魯米諾或其衍生物。
全文摘要
本發(fā)明屬于免疫檢測分析技術(shù)領(lǐng)域，具體提供了一種人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白酶促化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法，所述方法包括形成固相-抗體-抗原-酶標(biāo)二抗免疫夾心復(fù)合物以及用化學(xué)發(fā)光的方法檢測所述免疫夾心復(fù)合物的步驟。本發(fā)明還提供了一種人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白酶促化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒。本發(fā)明提供的檢測方法和檢測試劑盒適用于人心肌脂肪酸結(jié)合蛋白的檢測分析，并且具有檢測范圍大、靈敏度和特異性高的優(yōu)點。
文檔編號G01N33/68GK102735849SQ20121023378
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月5日
發(fā)明者吳曉東, 唐磊, 孫旭東, 朱琳琳, 楊曉林 申請人:北京源德生物醫(yī)學(xué)工程有限公司