專利名稱：一種胃蛋白酶原Ⅱ生物素-鏈霉親和素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種胃蛋白酶原II生物素-鏈霉親和素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，本實(shí)用新型涉及一種血清(血漿)中胃蛋白酶原II檢測(cè)試劑盒 ，屬于體外試劑診斷領(lǐng)域中血清(漿)抗原的酶聯(lián)免疫檢測(cè)(ELISA)。
背景技術(shù)：
胃蛋白酶原II (簡(jiǎn)稱PG II)來(lái)源于全胃腺和遠(yuǎn)端十二指腸Brunner氏腺，胃粘膜合成的PGII約為總量的25%，PG II大部分進(jìn)入消化道，少量進(jìn)入血液循環(huán)，因此被稱為“反映胃部狀態(tài)和功能的指針”。國(guó)內(nèi)外臨床研究指出，PG II與胃底粘膜病變的相關(guān)性較大，其升高與胃底腺管萎縮、腸上皮化生或假幽門腺化生、異型增生有關(guān)。測(cè)定PG II含量有助檢測(cè)出十二指腸潰瘍、萎縮性胃炎、胃炎、胃癌等其他消化道疾病，供臨床檢測(cè)和體檢篩查需求。在人群胃病篩查中，每個(gè)人做胃鏡是不現(xiàn)實(shí)的，可通過(guò)非侵入性血清PG檢測(cè)將淺表性胃炎、糜爛性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃癌等高危人群篩查出來(lái)，再進(jìn)行胃鏡檢查是一種切實(shí)可行的方案。目前，PG的檢測(cè)方法主要有TRFIA、ELISA、生化法及化學(xué)發(fā)光法。但是或是存在檢測(cè)儀器價(jià)格昂貴，或是檢測(cè)準(zhǔn)確度不能達(dá)到臨床要求等問(wèn)題，推廣使用困難。而本實(shí)用新型選用了技術(shù)成熟、價(jià)格低廉，無(wú)技術(shù)壁壘的ELISA雙抗夾心方法，其特點(diǎn)是加入了生物素-鏈霉親和素放大體系，提高檢測(cè)靈敏度和特異度，增加測(cè)量量程，能達(dá)到和符合臨床使用要求。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型的目的是提供一種新型的PG II的生物素-鏈霉親和素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，運(yùn)用生物素-(鏈霉)親和素的放大效應(yīng)，將雙抗夾心法的信號(hào)放大，達(dá)到高靈敏、特異性好、量程范圍寬的目的。該試劑盒能夠?qū)崿F(xiàn)快速、簡(jiǎn)便的檢測(cè)。本實(shí)用新型的技術(shù)方案一種血清胃蛋白酶原II生物素-鏈霉親和素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，試劑盒內(nèi)設(shè)有抗體反應(yīng)板(1)，PG II標(biāo)準(zhǔn)品(2)，生物素-PG II單克隆抗體(3)，鏈霉親和素-HRP酶工作液(4)，顯色液A液與B液各一瓶(5)，反應(yīng)終止液(6)，樣品稀釋液，濃縮洗滌液(8)和盒體(9)組成；抗體反應(yīng)板(I)為胃蛋白酶原II單克隆抗體包被，可拆卸96孔酶標(biāo)板；生物素-PG II單克隆抗體(3)為連有生物素的另一株胃蛋白酶原II單克隆抗體；PG II標(biāo)準(zhǔn)品
(2)為不同濃度的胃蛋白酶原II抗原凍干品一套；鏈霉親和素-HRP酶工作液(4)是辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素。該血清(漿)PG II酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，另附操作說(shuō)明書。每個(gè)試劑盒的試劑足夠96次測(cè)定，檢測(cè)時(shí)包被抗體與生物素化另一株抗體與樣本中的抗原構(gòu)成夾心復(fù)合物，加入酶標(biāo)鏈霉親和素工作液后，用顯色液顯色，樣品OD值與樣品PG II含量成正相關(guān)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即獲得相應(yīng)PG II濃度，操作簡(jiǎn)便。本實(shí)用新型的有益效果一、靈敏度高，血清(漿)樣本不需要稀釋，比普通ELISA方法高十倍左右；二、量程寬，樣品濃度值介于0-50ng/mL的都能準(zhǔn)確檢測(cè)；三、檢測(cè)時(shí)間短，從樣品孵育到顯色，I. 5小時(shí)完成；四、加樣量少，每次僅20 μ L。

圖I本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖。圖中1、包被有PG II單克隆抗體的微孔板，即抗體反應(yīng)板 I 塊(96Τ) ;2、PG II 標(biāo)準(zhǔn)品(0、5、10、20、30、50ng/mL，6 瓶);3、生物素-PG II 單克隆抗體(另一株，與包被抗體成對(duì))1X0. 5mL/瓶(用時(shí)I : 50稀釋);4、鏈霉親和素-HRP酶工作液IX 15mL/瓶；5、顯色液A液與B液各一瓶；6、反應(yīng)終止液I X IOmL/瓶；7、樣 品稀釋液lX20mL/瓶；8、濃縮洗滌液lX40mL/瓶；9、盒體。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例I :PG II的ELISA樣品測(cè)定檢測(cè)I、加樣先向微孔板中加入20 μ L標(biāo)準(zhǔn)品或血清(漿)樣品，再加入100 μ L/孔已稀釋的生物素-PG II單克隆抗體溶液。2、37。(孵育4511^11。3、加入洗滌液(使用時(shí)蒸餾水25倍稀釋)洗板4次，拍干。4,100 μ L/孔依次加入鏈霉親和素-HRP酶工作液，37°C孵育15min。5、加入洗滌液(使用時(shí)蒸餾水25倍稀釋)洗板4次，拍干。6、顯色液A液、B液各一滴，37°C避光，孵育15min。7、每孔依次滴加終止液,靜置Imin。8、加入終止液后，20min內(nèi)讀數(shù)，酶標(biāo)儀測(cè)量每孔熒光計(jì)數(shù)0D45(I。 結(jié)果處理根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和對(duì)OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，計(jì)算得到樣品中PG II含量(表I)。表I
PG II標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)樣品
Γ> ττ f t、， O 5 10 20 30 !>0 11 PG Ii mm________
OD 值0—070—4S OJ 1—29 1.95 OjT本實(shí)用新型所述實(shí)施例是指導(dǎo)性的，非限定性的，只是幫助理解本實(shí)用新型，因此本實(shí)用新型并不限于具體實(shí)施方式
中所述的實(shí)施例，凡是由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本實(shí)用新型的技術(shù)方案得出的其他具體實(shí)施方式
，同樣屬于本實(shí)用新型保護(hù)的范圍。
權(quán)利要求1. ー種血清胃蛋白酶原II生物素-鏈霉親和素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征是試劑盒內(nèi)設(shè)有抗體反應(yīng)板(1)，PG II標(biāo)準(zhǔn)品(2)，生物素-PG II單克隆抗體(3)，鏈霉親和素-HRP酶工作液(4)，顯色液A液與B液各一瓶(5 )，反應(yīng)終止液(6 )，樣品稀釋液(7 )，濃縮洗滌液(8)和盒體(9)組成； 抗體反應(yīng)板(I)為胃蛋白酶原II單克隆抗體包被，可拆卸96孔酶標(biāo)板；生物素-PG II單克隆抗體(3)為連有生物素的另ー株胃蛋白酶原II單克隆抗體；PG II標(biāo)準(zhǔn)品(2)為不同濃度的胃蛋白酶原II抗原凍干品ー套；鏈霉親和素-HRP酶工作液(4)是辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素。
專利摘要一種胃蛋白酶原Ⅱ生物素-鏈霉親和素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，屬于體外試劑診斷技術(shù)領(lǐng)域。本實(shí)用新型基于雙抗夾心方法，利用了抗原抗體特異性免疫反應(yīng)，定量檢測(cè)血清(漿)中胃蛋白酶原Ⅱ含量。試劑盒內(nèi)組成包括抗體反應(yīng)板、PGⅡ標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體、反應(yīng)稀釋液、鏈霉親和素-HRP酶工作液、濃縮洗滌液、顯色液和終止液。利用生物素-鏈霉親和素的放大效應(yīng)和高效價(jià)的單克隆抗體，達(dá)到血清不需要稀釋直接反應(yīng)檢測(cè)，減輕工作量的目的；同時(shí)獲得寬的測(cè)量范圍，便于臨床使用。本實(shí)用新型的積極意義在于試劑盒靈敏度高、特異性好、測(cè)量范圍寬、操作簡(jiǎn)單，利于大規(guī)模推廣應(yīng)用，有廣闊的市場(chǎng)前景。
文檔編號(hào)G01N33/577GK202583208SQ20122021968
公開(kāi)日2012年12月5日 申請(qǐng)日期2012年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月16日
發(fā)明者張藝, 黃飚, 張玨, 周彬, 王柯, 朱嵐 申請(qǐng)人:江蘇省原子醫(yī)學(xué)研究所, 無(wú)錫市江原實(shí)業(yè)技貿(mào)總公司