一種連翹葉藥材的質(zhì)量檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種連翹葉藥材的質(zhì)量檢測方法，包括鑒別和含量測定兩部分，其中鑒別為薄層色譜鑒別方法，含量測定方法采用高效液相色譜方法，同時本發(fā)明方法經(jīng)過線性關(guān)系考察、精密度考察等一系列方法學(xué)驗證均符合要求，由此建立系統(tǒng)完善的連翹葉質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，為連翹葉中苷類成分的進(jìn)一步分離、鑒定和產(chǎn)品開發(fā)提供了依據(jù)。
【專利說明】一種連翹葉藥材的質(zhì)量檢測方法
發(fā)明領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種中藥材的檢測方法，特別涉及一種連翹葉藥材的質(zhì)量檢測方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]連翹是中醫(yī)臨床常用傳統(tǒng)藥物之一，通常以其果實入藥，近年來，人們對連翹葉的化學(xué)成分和藥理作用進(jìn)行了一些研究，研究表明，連翹葉里含有連翹苷、連翹酯苷、蘆丁、右旋松脂酚等化學(xué)成分，與連翹果實十分類似，而且連翹葉里相關(guān)成分的含量遠(yuǎn)高于連翹果實，其中連翹苷含量差別約10倍以上，連翹酯苷差別5?10倍；同時連翹葉提取物有較好的抑菌，抗病毒作用，在對抗肺炎、上呼吸道感染方面有較好的療效。因此，將連翹葉開發(fā)為藥品有較好的應(yīng)用前景。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)中與連翹葉質(zhì)量檢測方法相關(guān)的文獻(xiàn)如下:
[0004]文獻(xiàn)《HPLC測定連翹葉不同提取物中連翹苷的含量比較》.陜西農(nóng)業(yè)科學(xué).2012(3) —文建立了連翹葉不同提取物中連翹苷含量的測定方法，主要是對連翹葉不同溶劑提取，結(jié)晶所得提取物中連翹苷含量進(jìn)行比較；
[0005]文獻(xiàn)《不同部位、不同產(chǎn)地及不同采集時間連翹中連翹酯苷A的含量測定》.陜西中醫(yī)2010年第31卷第10期一文對不同部位、不同產(chǎn)地及不同采集時間連翹中連翹酯苷A的含量進(jìn)行了測定，其中不同部位包括連翹心、連翹葉、連翹花，但是按文獻(xiàn)中檢測連翹酯苷A的色譜條件，分離度不好；
[0006]文獻(xiàn)《不同采收期連翹葉中連翹苷、連翹酯苷和蘆丁的含量測定》對不同采收期連翹葉中連翹苷、連翹酯苷和蘆丁的含量進(jìn)行了測定，其對連翹苷、連翹酯苷、蘆丁的含量測定采用同一份供試品，供試品的制備均采用甲醇超聲提取，但是采用甲醇提取，連翹酯苷提取不完全；
[0007]以上文獻(xiàn)均未對連翹葉藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行系統(tǒng)性的研究，故有必要建立連翹葉藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為質(zhì)量控制提供依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的在于提供一種連翹葉藥材的質(zhì)量檢測方法。
[0009]本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
[0010]本發(fā)明連翹葉藥材的質(zhì)量檢測方法包括鑒別和/或含量測定中的一種或幾種；
[0011]其中所述鑒別為薄層色譜鑒別方法:
[0012]供試品溶液的制備:取連翹葉粉末0.2?2g，加甲醇5?30ml，密塞，超聲處理10?30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10?30ml使溶解，將不溶物過濾，收集濾液,用I?5倍體積的水飽和有機(jī)溶劑振搖萃取I?5次,合并萃取液,減壓回收,殘洛用I?IOml甲醇溶解，作為供試品溶液；
[0013]對照品溶液的制備:取連翹苷對照品，加甲醇制成每Iml含0.25mg的溶液，作為對照品溶液I ;取連翹酯苷A對照品，加甲醇制成Iml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液II ；[0014]照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液1、對照品溶液II各I?10 μ 1，分別點于同一娃膠G薄層板上，以8?30: 0.5?1.5: 0.5?1.5的乙酸乙酯-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0015]其中所述含量測定方法包括如下方法中的一種或幾種:
[0016](I)連翹苷的含量測定:照高效液相色譜法測定；
[0017]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10?30: 60?90的乙腈-水為流動相；檢測波長為277nm;理論板數(shù)按連翹苷峰計算應(yīng)不低于3000 ；
[0018]對照品溶液的制備取連翹苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0.2mg的溶液，即得；
[0019]供試品溶液的制備取連翹葉粉末0.1?6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇5?50ml，稱定重量，浸潰過夜，以功率400?600W，頻率30?50kHz超聲處理5?50分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2?IOml，蒸至近干，加中性氧化鋁0.1?1.0g拌勻，加在100?120目、lg，內(nèi)徑為I?1.5cm的中性氧化鋁柱上，用60?80%乙醇60?90ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘渣用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至2?IOml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0020]測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5?20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；
[0021]本品按干燥品計算，含連翹苷(C27H34O11)不得少于0.2?2.0%。
[0022](2)連翹酯苷A的含量測定照高效液相色譜法測定；
[0023]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以8?20: 60?95的乙腈-冰醋酸溶液為流動相；檢測波長為330nm ;理論板數(shù)按連翹酯苷A峰計算應(yīng)不低于5000 ；
[0024]對照品溶液的制備取連翹酯苷A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0.2mg的溶液，即得；
[0025]供試品溶液的制備取連翹葉粉末30?70mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50?90%甲醇5?50ml，密塞，稱定重量，以功率400?600W，頻率30?50kHz超聲處理5?50分鐘，放冷，再稱定重量，用50?90%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0026]測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5?20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；
[0027]本品按干燥品計算，含連翹酯苷A(C29H36O15)不得少于2.0?8.0%。
[0028]其中所述鑒別方法優(yōu)選為:
[0029]供試品溶液的制備:取連翹葉粉末lg，加甲醇20ml，密塞，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，將不溶物過濾，收集濾液,用3倍體積的水飽和有機(jī)溶劑振搖萃取3次，合并萃取液，減壓回收，殘渣用5ml甲醇溶解，作為供試品溶液；
[0030]對照品溶液的制備:取連翹苷對照品，加甲醇制成每Iml含0.25mg的溶液，作為對照品溶液I ;取連翹酯苷A對照品，加甲醇制成Iml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液II ；[0031]照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液1、對照品溶液II各3 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以18: I: I的乙酸乙酯-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0032]其中鑒別方法供試品溶液的制備中所述有機(jī)溶劑為乙酸乙酯、二氯甲烷、正丁醇、乙醚、石油醚、正己烷、醋酸甲酯等中的一種或幾種，優(yōu)選為乙酸乙酯；
[0033]其中所述含量測定方法優(yōu)選包括如下方法中的一種或幾種:
[0034](I)連翹苷的含量測定:照高效液相色譜法測定；
[0035]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以21: 79的乙腈-水為流動相；檢測波長為277nm ;理論板數(shù)按連翹苷峰計算應(yīng)不低于3000 ；
[0036]對照品溶液的制備取連翹苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0.2mg的溶液，即得；
[0037]供試品溶液的制備取連翹葉粉末0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇15ml，稱定重量，浸潰過夜，以功率500W，頻率40kHz超聲處理25分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，蒸至近干，加中性氧化鋁0.5g拌勻，加在100?120目、lg，內(nèi)徑為I?1.5cm的中性氧化鋁柱上，用70%乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘渣用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0038]測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；
[0039]本品按干燥品計算，含連翹苷(C27H34O11)不得少于1.0%。
[0040](2)連翹酯苷A的含量測定照高效液相色譜法測定；
[0041]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以14: 86的乙腈-冰醋酸溶液為流動相；檢測波長為330nm ;理論板數(shù)按連翹酯苷A峰計算應(yīng)不低于5000 ；
[0042]對照品溶液的制備取連翹酯苷A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0.2mg的溶液，即得；
[0043]供試品溶液的制備取連翹葉粉末50mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇15ml，密塞，稱定重量以功率500W，頻率40kHz超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0044]測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；
[0045]本品按干燥品計算，含連翹酯苷A(C29H36O15)不得少于6.0%。
[0046]其中連翹酯苷A含量測定方法的流動相優(yōu)選0.1% -2%的冰醋酸溶液，進(jìn)一步優(yōu)選為0.4%的冰醋酸溶液。
[0047]本發(fā)明連翹葉藥材的質(zhì)量檢測方法，經(jīng)過線性關(guān)系考察、精密度考察等一系列方法學(xué)驗證均符合實驗要求，由此建立系統(tǒng)完善的連翹葉質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，為連翹葉中苷類成分的進(jìn)一步分離、鑒定和產(chǎn)品開發(fā)提供了依據(jù)，對促進(jìn)連翹葉資源的充分開發(fā)利用提供了理論依據(jù)。[0048]下述實驗例和實施例用于進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不限于本發(fā)明。
[0049]實驗例1:鑒別方法學(xué)研究
[0050]試驗儀器與試藥:
[0051 ] 薄層板(青島海洋化工廠分廠)，展開缸，烘箱，乙酸乙酯(北京化工廠)，甲酸(光復(fù))，水(純化水)，甲醇(北京化工廠)10%硫酸乙醇溶液；
[0052]連翹葉藥材:采自山西省芮城縣。
[0053]方法:取本品粉末lg，加甲醇20ml，密塞，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，將不溶物過濾，收集濾液,用3倍體積的水飽和乙酸乙酯振搖萃取3次，合并萃取液，50°C減壓回收，殘渣用5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。另取連翹苷對照品，加甲醇制成每Iml含0.25mg的溶液，作為對照品溶液；取連翹酯苷A對照品，加甲醇制成Iml含0.2mg的溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各3 μ I，分別點于同一硅膠G薄層板上，以表1中的展開條件展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液。
[0054]表1不同展開條件的展開效果
[0055]
【權(quán)利要求】
1.一種連翹葉藥材的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法中連翹葉的鑒別方法為: 供試品溶液的制備:取連翹葉粉末0.2~2g，加甲醇5~30ml，密塞，超聲處理10~30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10~30ml使溶解，將不溶物過濾，收集濾液,用I~5倍體積的水飽和有機(jī)溶劑振搖萃取I~5次,合并萃取液,減壓回收,殘洛用I~IOml甲醇溶解，作為供試品溶液； 對照品溶液的制備:取連翹苷對照品，加甲醇制成每Iml含0.25mg的溶液，作為對照品溶液I ;取連翹酯苷A對照品，加甲醇制成Iml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液II ； 照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液1、對照品溶液II各I~10 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以8~30: 0.5~1.5: 0.5~1.5的乙酸乙酯-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
2.如權(quán)利要求1所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法中連翹葉的鑒別方法為: 供試品溶液的制備:取連翹葉粉末lg，加甲醇20ml，密塞，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干,殘渣加水20ml使溶解，將不溶物過濾，收集濾液,用3倍體積的水飽和有機(jī)溶劑振搖萃取3次，合并萃取液，減壓回收，殘渣用5ml甲醇溶解，作為供試品溶液； 對照品溶液的制備:取連翹苷對照品，加甲醇制成每Iml含0.25mg的溶液，作為對照品溶液I ;取連翹酯苷A對照品，加甲醇制成Iml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液II ； 照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液1、對照品溶液II各3 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以18:` I: I的乙酸乙酯-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
3.如權(quán)利要求1或2所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法供試品溶液的制備中所述有機(jī)溶劑為乙酸乙酯、二氯甲烷、正丁醇、乙醚、石油醚、正己烷、醋酸甲酯等中的一種或幾種。
4.如權(quán)利要求3所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法供試品溶液的制備中所述有機(jī)溶劑為乙酸乙酯。
5.如權(quán)利要求1-4所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法中所述含量測定方法包括如下方法中的一種或幾種: (I)連翹苷的含量測定:照高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10~30: 60~90的乙腈-水為流動相；檢測波長為277nm ;理論板數(shù)按連翹苷峰計算應(yīng)不低于3000 ； 對照品溶液的制備取連翹苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0.2mg的溶液，即得； 供試品溶液的制備取連翹葉粉末0.1~6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇5~50ml，稱定重量，浸潰過夜，以功率400~600W，頻率30~50kHz超聲處理5~50分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2~IOml，蒸至近干，加中性氧化鋁0.1~1.0g拌勻，加在100~120目、lg，內(nèi)徑為I~1.5cm的中性氧化鋁柱上，用60~80 %乙醇60~90ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘渣用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至2~IOml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5~20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得； 本品按干燥品計算，含連翹苷(C27H34O11)不得少于0.2~2.0% ; (2)連翹酯苷A的含量測定照高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以8~20: 60~95的乙腈-冰醋酸溶液為流動相；檢測波長為330nm ;理論板數(shù)按連翹酯苷A峰計算應(yīng)不低于5000 ； 對照品溶液的制備取連翹酯苷A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0.2mg的溶液，即得； 供試品溶液的制備取連翹葉粉末30~70mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50~90%甲醇5~50ml，密塞，稱定重量，以功率400~600W，頻率30~50kHz超聲處理5~50分鐘，放冷，再稱定重量，用50~90%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5~20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得； 本品按干燥品計算，含連翹酯苷A(C29H36O15)不得少于2.0~8.0%。
6.如權(quán)利要求5所述的的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法中所述含量測定方法包括如下方法中的一種或幾種: (1)連翹苷的含量測定:照高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以21: 79的乙腈-水為流動相；檢測波長為277nm ;理論板數(shù)按連翹苷峰計算應(yīng)不低于3000 ； 對照品溶液的制備取連翹苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0.2mg的溶液，即得； 供試品溶液的制備取連翹葉粉末0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇15ml，稱定重量，浸潰過夜，以功率500W，頻率40kHz超聲處理25分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，蒸至近干，加中性氧化鋁0.5g拌勻，加在100~120目、lg，內(nèi)徑為I~1.5cm的中性氧化鋁柱上，用70%乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘渣用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得; 本品按干燥品計算，含連翹苷(C27H34O11)不得少于1.0% ； (2)連翹酯苷A的含量測定照高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以14: 86的乙腈-冰醋酸溶液為流動相；檢測波長為330nm;理論板數(shù)按連翹酯苷A峰計算應(yīng)不低于5000 ； 對照品溶液的制備取連翹酯苷A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0.2mg的溶液，即得； 供試品溶液的制備取連翹葉粉末50mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇15ml，密塞，稱定重量以功率500W，頻率40kHz超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得; 本品按干燥品計算，含連翹酯苷A(C29H36O15)不得少于6.0%。
7.如權(quán)利要求5或6所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法中連翹酯苷A的含量測定方法中流動相為0.1%~2%的冰醋酸溶液。
8.如權(quán)利要求7所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法中連翹酯苷A的含量測定方法中流動相為0.4%的冰 醋酸溶液。
【文檔編號】G01N30/02GK103675189SQ201310021813
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年1月22日 優(yōu)先權(quán)日:2012年9月5日
【發(fā)明者】禹玉洪, 任武賢, 楊芮平, 郝東方, 李琳 申請人:亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司