一種新型快速定量檢測橄欖油中含羥基化合物的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種新型快速定量檢測橄欖油中含羥基成份的方法，屬于食用油脂檢測領(lǐng)域。本發(fā)明基于19FNMR技術(shù)發(fā)明的方法能夠簡單快速定量檢測橄欖油中含羥基化合物的含量，可廣泛運用到其他食用油脂的檢測。氟衍化試劑氟代苯甲酰氯與含羥基化合物發(fā)生取代反應(yīng)，使含羥基化合物氟衍生化。運用傅立葉超導(dǎo)核磁共振波譜儀將氟衍生化的含羥基化合物做19FNMR圖譜。對圖譜進行手動積分，可以準(zhǔn)確計算出含羥基化合物的含量。結(jié)果準(zhǔn)確可靠，方法簡單可行，操作簡單易學(xué)，可為橄欖油的質(zhì)量分析提供很有價值的參考，也可用于檢測其他食用油的含羥基化合物的含量。
【專利說明】一種新型快速定量檢測橄欖油中含羥基化合物的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食用油脂檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，具體是檢測橄欖油中含羥基化合物的方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]橄欖油是常用食用油脂中營養(yǎng)價值比較豐富的一種。由于橄欖油含有豐富的不飽和脂肪酸及微量成份，使其具有非常高的食用價值和保健功效。在西方被譽為“液體黃金”、“地中海甘露”。含羥基化合物是橄欖油微量成份的重要組成部分，包括單甘酯、甘油二酯、直鏈脂肪醇類、甾醇類(@ -谷甾醇、A-5-燕麥甾醇、膽固醇)、酚類(生育酚、酪醇、羥基酪醇、木質(zhì)素等)等物質(zhì)。
[0003]橄欖油中的脂肪酸絕大部分都是以甘油酸酯的形式存在，其中甘三酯占到90%以上，單甘酯的含量低于1%，甘二酯主要是以1，3-甘二酯的形式存在，但是由于隨著儲存時間的增加、精煉、產(chǎn)地等不同，橄欖油中的1，3_甘二酯會異構(gòu)化為1，2_甘二酯。研究表明1，3_甘二酯與總甘二酯的比例可以作為橄欖油分級的重要依據(jù)。
[0004]臨床研究表明，飲食中的植物甾醇可以抑制小腸對膽固醇的吸收和降低血液中膽固醇的水平?，F(xiàn)代研究表明植物留醇還具有抗炎、抗菌、抗?jié)儭⒖寡趸涂鼓[瘤活性。初榨橄欖油中的游離植物留醇含量受到儲存時間和儲存條件的影響會酯化，另外精煉橄欖油中的游離植物留醇也會發(fā)生酯化。因此檢測橄欖油中的游離植物留醇的含量對橄欖油的質(zhì)量評價具有重要參考價值，也是檢測橄欖油摻假的重要指標(biāo)。
[0005]橄欖油中的酚類物質(zhì)(Ct-生育酔、羥基酪醇、橄欖苦味素等)是天然的抗氧化
齊IJ，橄欖油無需再添加其他合成的抗氧化劑，而且酚類物質(zhì)也是賦予橄欖油特殊口味的主要物質(zhì)。流行病學(xué)研究表明酚類物質(zhì)能夠很好的預(yù)防癌癥和冠心病，也具有抗衰老的作用。由于橄欖油中的酚類化合物含量低、結(jié)構(gòu)復(fù)雜，傳統(tǒng)的方法的檢測方法很難快速準(zhǔn)確的檢測出含量。精煉橄欖油中的酚類物質(zhì)由于經(jīng)過高溫、脫臭等處理含量下降。
[0006]酸度是用來測定每一百克油脂中自由脂肪酸所占的比例的指標(biāo)，自由脂肪酸又叫游離脂肪酸，是油脂中“不安分”的脂肪組成部分，酸度過高容易導(dǎo)致氧化，從而導(dǎo)致油脂酸敗，不可食用。國際橄欖油理事會和歐盟的標(biāo)準(zhǔn)顯示，特級初榨橄欖油的油酸含量低于0.8，初榨橄欖油低于2.0，精煉橄欖油由于經(jīng)過化學(xué)脫酸過程，酸度低于0.3。檢測橄欖油及其他油脂的酸度能夠判斷油脂的游離脂肪酸的比例指標(biāo)，容易判斷是否酸敗。在油脂氧化過程中也會產(chǎn)生醛基化合物，檢測醛基化合物的含量可以判斷油脂的氧化程度，初榨橄欖油沒有經(jīng)過高溫、高壓，所以醛基化合物含量都比較低，精煉橄欖油的醛基含量比初榨橄欖油高的多，這是判斷橄欖油等級的重要指標(biāo)之一。
[0007]目前檢測橄欖油中的含羥基物質(zhì)主要是氣相色譜法、1H NMR法、13C NMR法。由于1H NMR有重疊峰，13C NMR弛豫時間長不敏感，這樣圖譜解析和定量都具有非常大的挑戰(zhàn)性。氣相色譜檢測需要先將游離留醇酯化，由于橄欖油中本身就含有一部分酯化植物留醇，所以檢測游離植物留醇要先檢測出總植物留醇才能進一步檢測游離植物留醇。這種方法過程繁瑣復(fù)雜而且耗時耗力，對實驗的操作和條件的控制要求都比較高。[0008]本發(fā)明基于19F NMR技術(shù)發(fā)明的方法能夠簡單快速定量檢測橄欖油中含羥基化合物的含量。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0009]本發(fā)明基于19F NMR技術(shù)發(fā)明的方法試劑盒能夠簡單快速定量檢測橄欖油中含羥基化合物的含量，可廣泛運用到其他食用油脂的檢測。
[0010]本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:氟衍化試劑4-氟苯甲酰氯與含羥基化合物發(fā)生取代反應(yīng)，使含羥基化合物氟衍生化。運用德國BRUKER AVANCE/AV 500 MHz傅立葉超導(dǎo)核磁共振波譜儀將氟衍生化的含羥基化合物做19F NMR圖譜。
[0011]運用核磁圖譜處理軟件MestReNova V6.1對含羥基化合物圖像進行手動積分,計算出樣品中含羥基化合物含量。
[0012]一種新型快速定量檢測橄欖油中含羥基化合物的方法，其特征在于具有以下的過程和步驟:
a.羥基化合物的氟衍生化試劑的選擇:所述的氟衍化試劑包括4-氟苯甲酰氯、2，4，6-三氟苯甲酰氯、3，5- 二氟苯甲酰氯。
[0013]b.存儲溶液的配制:所述的存儲溶液為氘代氯仿與吡啶體積比為1.5:1或1.6:1的混合液，儲存試劑用量為10.0ml,儲存試劑含有0.1mg六氟苯20mg叔丁基對苯酚，放在分子篩里防水儲存。六氟苯、叔丁基對苯酚為內(nèi)標(biāo)。
[0014]c.橄欖油試樣的反應(yīng)處理:所述的橄欖油樣品投放量IOOmg至150mg,置于5mm核磁管里并加入0.5ml至0.6ml上述儲存試劑和30 y L氟衍化試劑，將反應(yīng)混合物放置室溫下反應(yīng)30min，待完全反應(yīng)完后，立即`用核磁共振波譜儀做19F NMR圖譜。
[0015]d.利用核磁共振波譜儀作19F NMR圖譜:利用核磁共振波譜儀作19F NMR圖譜在BRUKER AVANCE/AV 500 MHz傅立葉超導(dǎo)核磁共振波譜儀操作得到的；探頭溫度為26 土 I° C ;典型的光譜參數(shù)如下:90脈沖寬度19.3 ii S，掃描寬度100 kHz，弛豫延遲ls，內(nèi)存大小64 K。每個譜累積采樣64次。所有圖譜在進行傅里葉變換之前，擴大線寬0.3Hz校正漂移。
[0016]e.運用核磁共振圖譜處理軟件MestReNova V6.1對含羥基化合物圖像進行手動
Lg 5C 4 乂 y
積分，計算試樣中含羥基化合物的含量:計算公式為:hgc xloo
-m
Idg和Ii分別為甘油二酯和4-氟苯甲酰氯的積分，馬,為甘油二酯的分子量，m為實驗中橄欖油實際使用量，X為內(nèi)標(biāo)的暈?zāi)柫俊?br>
[0017]本發(fā)明的有益效果是:可以快速簡單定量檢測橄欖油中含羥基化合物的含量。結(jié)果準(zhǔn)確可靠，方法簡單可行，操作簡單易學(xué)，可為橄欖油的質(zhì)量分析提供很有價值的參考，也可用于檢測其他食用油的含羥基化合物的含量。
[0018]說明書附圖
圖1、運用19F NMR檢測甘油的圖譜。
[0019]圖2、運用19F NMR檢測羥基酪醇的圖譜。
[0020]圖3、運用19F NMR檢測棕櫚醇的圖譜。[0021]圖4、運用19F NMR檢測a-生育酚的圖譜。
[0022]圖5.運用19F NMR檢測1，2_甘油二油酸酯、1，3-甘油二油酸酯的圖譜。
[0023]圖6.羥基酪醇、a-生肓釀、棕櫚醇等的19F NMR圖譜
【具體實施方式】
[0024]以下將結(jié)合實施實例形式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進一步說明。
[0025](I).儲存試劑的配制:配制氘代氯仿與吡啶體積比為1.5:1儲存試劑10.0ml,儲存試劑含有0.1mg六氟苯20mg叔丁基對苯酹,放在分子篩里防水儲存。六氟苯、叔丁基對苯酚為內(nèi)標(biāo)。
[0026](2).核磁樣品的準(zhǔn)備:精確秤取橄欖油150mg置于5mm核磁管里并加入0.5ml上述儲存試劑和30 u L4-氟苯甲酰氯，將反應(yīng)混合物放置室溫下反應(yīng)30min，待完全反應(yīng)完后，立即運用核磁共振波譜儀做19F NMR圖譜。
[0027](3).核磁共振檢測:19F NMR圖譜是在BRUKER AVANCE/AV 500 MHz傅立葉超導(dǎo)核磁共振波譜儀操作得到的。探頭溫度為25°C。在這項研究中典型的光譜參數(shù)如下:90脈沖寬度的19.3 ii S，掃 描寬度100 kHz，弛豫延遲ls，內(nèi)存大小64 K。每個譜累積采樣64次。所有圖譜在進行傅里葉變換之前，擴大線寬0.3Hz校正漂移。
[0028]模型化合物氟衍生物的19F NMR的化學(xué)位移(ppm)見下表1.表1.模型化合物的氟衍生物的19F NMR化學(xué)位移(ppm)
【權(quán)利要求】
1.一種新型快速定量檢測橄欖油中含羥基化合物的方法，其特征在于具有以下的過程和步驟: a.羥基化合物的氟衍生化試劑的選擇:所述的氟衍化試劑包括4-氟苯甲酰氯、.2，4，6-三氟苯甲酰氯、3，5- 二氟苯甲酰氯。 b.存儲溶液的配制:所述的存儲溶液為氘代氯仿與吡啶體積比為1.5:1或1.6:1的混合液，儲存試劑用量為10.0ml,儲存試劑含有0.1mg六氟苯20mg叔丁基對苯酚，放在分子篩里防水儲存。六氟苯、叔丁基對苯酚為內(nèi)標(biāo)。 c.橄欖油試樣的反應(yīng)處理:所述的橄欖油樣品投放量IOOmg至150mg，置于5mm核磁管里并加入0.5ml至0.6ml上述儲存試劑和30 y L氟衍化試劑，將反應(yīng)混合物放置室溫下反應(yīng)30min，待完全反應(yīng)完后，立即用核磁共振波譜儀做19F NMR圖譜。 d.利用核磁共振波譜儀作19FNMR圖譜:利用核磁共振波譜儀作19F NMR圖譜在BRUKERAVANCE/AV 500 MHz傅立葉超導(dǎo)核磁共振波譜儀操作得到的；探頭溫度為26 ± I ° C ;典型的光譜參數(shù)如下:90脈沖寬度19.3 ii S，掃描寬度100 kHz，弛豫延遲ls，內(nèi)存大小64 K。每個譜累積采樣64次。所有圖譜在進行傅里葉變換之前，擴大線寬0.3Hz校正漂移。
【文檔編號】G01N24/08GK103487455SQ201310436221
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年9月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月24日
【發(fā)明者】翁新楚, 李成, 周璐琳, 顧振華, 方曉明 申請人:上海大學(xué)