釀酒工藝中玉竹多糖的白酒冷浸、逆流提取方法及其在線質(zhì)量控制方法
【專(zhuān)利摘要】釀酒工藝中玉竹多糖的白酒冷浸、逆流提取方法及其在線質(zhì)量控制方法。提取方法：⑴.玉竹切成薄片，或切成段，或破碎成顆粒；⑵.用酒精濃度體積比45%-55%的白酒，按質(zhì)量比1:7.0-1:8.0的投料比常溫冷浸；⑶.用酒精濃度體積比45%-55%的白酒，逆流提取。優(yōu)化方案的玉竹切成薄片，或切成段，或破碎成顆粒后用外力壓扁。本發(fā)明方法直接、效率高，避免了過(guò)濾的困難；規(guī)避了遭受霉菌的污染；能避免分子量過(guò)大的多糖在保健酒中的沉淀。為釀酒工藝中的玉竹提取的較理想方法?？刂品椒ǖ姆桨覆恍枰獦悠返那疤幚?；分析步驟少、誤差影響因素少；耗時(shí)短；能夠滿足對(duì)大批量樣品快速測(cè)定和在線質(zhì)量控制的需求。
【專(zhuān)利說(shuō)明】釀酒工藝中玉竹多糖的白酒冷浸、逆流提取方法及其在線質(zhì)量控制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種提取方法，具體涉及一種釀酒工藝中玉竹多糖的白酒冷浸、逆流提取方法。本發(fā)明的優(yōu)化方案中還涉及到釀酒工藝中玉竹多糖白酒冷浸、逆流提取過(guò)程的在線質(zhì)量控制方法。
【背景技術(shù)】[0002]玉竹，為百合科黃精屬植物玉竹(Polygonatum odoratum(Mill.)Druce)的干燥根莖，是藥食兩用中藥之一，收載中國(guó)藥典2010版[國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010]。玉竹味甘，微寒。具有養(yǎng)陰潤(rùn)燥，生津止渴之功，具有降血糖，抗腫瘤，抗氧化等活性。
[0003]玉竹含有大量多糖，少量留體阜苷、黃酮等成分，其中多糖又分為分子量較小的寡糖如玉竹果聚糖；與分子量較大的多糖，如玉竹粘多糖。玉竹白酒提取液是致中和保健酒的重要的中間體，主要為分子量較小多糖，玉竹寡糖，及少量玉竹皂苷及黃酮成分。文獻(xiàn)一報(bào)道玉竹多糖具有增強(qiáng)耐缺氧(孫立彥，劉振亮，孫金霞，等.玉竹多糖對(duì)小鼠常壓耐缺氧作用的影響[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2008，39(3):335-338)、抗衰老(單穎，姜東，潘興瑜，等.玉竹多糖對(duì)衰老模型鼠免疫功能的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2007，27(1):20-22.[5];單穎，潘興瑜，姜東，等.玉竹多糖抗衰老的實(shí)驗(yàn)觀察[J].中國(guó)臨床康復(fù)，2006，10 (3): 79-81)、抗氧化(徐大量，林輝，李盛青，等.玉竹水提液體內(nèi)外抗氧化的實(shí)驗(yàn)研究[J].中藥材，2008，31 (5):729-731 )、降血糖(季峰，魏賢勇，劉廣龍，等.玉竹多糖降血糖作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].江蘇中醫(yī)藥，2006，27 (9):70-71.)等作用，因此，開(kāi)發(fā)玉竹多糖具有重要意義?，F(xiàn)有技術(shù)玉竹多糖的提取工藝已有一些技術(shù)方案，例如:中國(guó)第200910022946.7號(hào)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)、中國(guó)第200910012185.7號(hào)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)、中國(guó)第200410022863.5號(hào)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)，以上現(xiàn)有技術(shù)提取玉竹多糖的方法大多為水浸或水煮，或增加超聲處理、醇沉等方法；這些方法都需要過(guò)濾得到產(chǎn)品。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)有以下不足:(1)因?yàn)槎嗵堑姆肿恿窟h(yuǎn)遠(yuǎn)大于提取溶劑分子量，玉竹多糖的粘度又很大，過(guò)濾等轉(zhuǎn)移過(guò)程的操作非常困難；濾材經(jīng)常被堵塞，而無(wú)法完成過(guò)濾過(guò)程；制備轉(zhuǎn)移過(guò)程中，多糖也極易被微生物污染。(2)多糖中有分子量較小的寡糖，如玉竹果聚糖；與分子量較大的多糖，如玉竹粘多糖；前者是玉竹白酒提取液中的重要組分，也是酒中作為天然增塑劑的重要組分；后者在白酒中往往形成沉淀，給產(chǎn)品質(zhì)量帶來(lái)威脅，需要規(guī)避去除部分。
[0005](3)玉竹根莖類(lèi)藥材，細(xì)長(zhǎng)條狀，彎曲，不規(guī)整，直徑2_8mm，質(zhì)地致密，導(dǎo)致玉竹飲片為無(wú)定形截面切片，多為短柱狀，多糖提取率受到極大影響，往往被忽略。
[0006](4)玉竹白酒提取液中間體生產(chǎn)過(guò)程的在線量控制一直沿用中國(guó)藥典玉竹項(xiàng)下多糖測(cè)定法，難以滿足在線生產(chǎn)的在線量控制。同時(shí)這種測(cè)量方法前處理復(fù)雜；分析步驟多、誤差影響因素多(如:精密加入濃硫酸、苯酚、搖勻，顯色過(guò)程加熱與冷卻時(shí)間的影響較大);耗時(shí)長(zhǎng)(每次隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線5個(gè)點(diǎn))，較難滿足對(duì)大批量樣品快速測(cè)定和在線質(zhì)量控制的需求，至今也未見(jiàn)更好的玉竹多糖測(cè)定方法報(bào)道。
[0007]在酒類(lèi)釀造工藝中，采用近紅外光譜在線快速檢測(cè)酒中成分的方法已經(jīng)有所報(bào)道。例如，中國(guó)第200810048945.5號(hào)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)，公開(kāi)了一種中藥保健酒(一種液體體系)生產(chǎn)過(guò)程中總黃酮、總皂苷的近紅外光譜快速無(wú)損在線監(jiān)測(cè)方法；包括以下步驟:(I).安裝近紅外監(jiān)測(cè)系統(tǒng)；(2).采樣測(cè)定化學(xué)值；(3).建立相應(yīng)工藝點(diǎn)被測(cè)藥液中總黃酮、總皂苷物質(zhì)的數(shù)學(xué)模型；(4).模型驗(yàn)證與優(yōu)化；(5).在線檢測(cè)各工藝點(diǎn)藥液中總黃酮、總皂苷含量；(6).工藝監(jiān)控及優(yōu)化。該方法通過(guò)預(yù)先建立生產(chǎn)過(guò)程各工藝點(diǎn)指標(biāo)成分的近紅外數(shù)學(xué)模型，并將此模型用于工藝過(guò)程中指標(biāo)成分的定量分析，實(shí)現(xiàn)對(duì)整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程的在線質(zhì)量控制，分析結(jié)果重現(xiàn)性好，快速無(wú)損，相對(duì)偏差小于5%。
[0008]但是，該專(zhuān)利采用近紅外光譜快速檢測(cè)法檢測(cè)的組分總黃酮、總皂苷均為小分子量的化合物；而致中和白酒提取液為液體體系，由玉竹多糖類(lèi)物質(zhì)不僅為大分子量的物質(zhì)，而且尚含玉竹皂苷與黃酮化合小分子等物質(zhì)組成，與文獻(xiàn)報(bào)道的體系完全不同，目前尚未見(jiàn)中藥中玉竹多糖體系、玉竹提取物體系、玉竹白酒提取液體系的建?？焖贉y(cè)定方法或生產(chǎn)過(guò)程在線量控制方法。
[0009]直接采用近紅外光譜快速檢測(cè)多糖類(lèi)物質(zhì)，由于譜段過(guò)寬會(huì)導(dǎo)致包含冗雜的信息，計(jì)算量和時(shí)間也增大。實(shí)驗(yàn)表明:不同批次的玉竹白酒提取液的近紅外譜圖極為相似，且相互重疊，建立紅外數(shù)據(jù)與化學(xué)分析數(shù)據(jù)關(guān)系的數(shù)學(xué)模型，是一項(xiàng)門(mén)檻高、工作量大，難度大的研究工作。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，本發(fā)明提供一種釀酒工藝中玉竹多糖的白酒冷浸、逆流提取方法，該方法直接、效率高，不需要過(guò)濾，避免了過(guò)濾操作的困難；規(guī)避多糖遭受霉菌污染的操作環(huán)節(jié)；同時(shí)能夠避免大分子量多糖在保健酒中的沉淀。為釀酒工藝中的玉竹白酒提取液提供一種較為理·想的制備方法。本發(fā)明的優(yōu)化方案中還涉及到釀酒工藝中玉竹多糖白酒冷浸、逆流提取時(shí)的在線量控制方法。優(yōu)化方案將克服現(xiàn)有技術(shù)玉竹白酒在線量控制方法的諸多不足，提供一種新的在線量控制方法，是一種快速檢測(cè)玉竹白酒提取液中多糖含量的近紅外光譜法，該方法不需要樣品的前處理；分析步驟少、誤差影響因素少；耗時(shí)短；能夠滿足對(duì)大批量樣品快速測(cè)定和在線質(zhì)量控制的需求。
[0011]完成上述發(fā)明任務(wù)的技術(shù)方案是:一種釀酒工藝中玉竹多糖的白酒冷浸、逆流提取方法，其特征在于，步驟如下:
(1).玉竹切成薄片，切成段，或破碎成顆粒；
(2).用酒精濃度45%-55%(v/v)的白酒，按1:7.0-1:8.0的投料比(質(zhì)量比)常溫冷浸；
(3).用酒精濃度45%_55%(v/v)的白酒，逆流提取。
[0012]所述“酒精濃度45%_55% (v/v)的白酒”，本發(fā)明推薦采用致中和白酒。
[0013]其中，步驟⑵的常溫指生產(chǎn)場(chǎng)地的溫度?？呻S季節(jié)的不同而不同。
[0014]本發(fā)明有以下優(yōu)化方案:
1、所述的“玉竹切成薄片”，是指切成厚度0.1-0.3cm的薄片；“切成段”是指切成
0.6-lcm長(zhǎng)的段；“破碎成顆?！笔侵钙扑槌纱笮?.6-lcm的顆粒；所述的“破碎成顆?！辈荒芷扑槌珊芗?xì)的細(xì)粉，細(xì)粉容易出現(xiàn)“結(jié)鍋巴”現(xiàn)象，不利于溶齊?浸潤(rùn)、多糖的溶脹、溶解，即不利于多糖的提取效率。
[0015]2、增加有以下步驟:(1)-1玉竹切成薄片或破碎成顆粒后，用外力壓扁。
[0016]因?yàn)榍谐杀∑蚱扑槌深w粒時(shí)，只有切口處的玉竹部分細(xì)胞被切開(kāi)，而大部分植物細(xì)胞是完整的，不利于多糖的溶出；而進(jìn)一步壓扁時(shí)，大部分植物細(xì)胞被破壞，細(xì)胞壁破裂，有利于多糖的溶出；
3、所述步驟⑴的“玉竹切成薄片或破碎成顆粒”，其含水量控制在質(zhì)量比8%-15%;本申請(qǐng)推薦的含水量為13% ；
4、所述步驟⑵的白酒的體積比推薦采用50%;按1:6-9 (質(zhì)量比)的投料比常溫冷浸；
5、所述步驟⑵的用體積比白酒常溫冷浸的時(shí)間為12小時(shí)以上。
[0017]本發(fā)明的方法中，冷浸時(shí)間很重要。所述的“冷浸的時(shí)間為12小時(shí)以上”是指，較薄的薄片或較小的顆粒，冷浸12小時(shí)-8天即可，較厚的薄片或較大的顆粒，冷浸I月也可以。冷浸的時(shí)間越長(zhǎng)浸出效果越好，但會(huì)使生產(chǎn)周期過(guò)長(zhǎng)。本發(fā)明建議冷浸24小時(shí)-168小時(shí)；優(yōu)選24小時(shí)-72小時(shí)；推薦采用72小時(shí)；
6、所述步驟⑶的用酒精濃度45%-55%(v/v)的白酒，逆流提取時(shí)，加熱到30_80°C，推薦50-70 0C ;優(yōu)選 65-70 °C ；
7、所述步驟⑶的逆流提取時(shí)，逆流循環(huán)速度每5公斤藥材為1.0-1.5T/h*5kg (噸/小時(shí)*5公斤藥材)；
8、所述步驟⑶的逆流提取時(shí)間約6-8h;或在提取液多糖濃度達(dá)15-28mg/mL時(shí)，停止提取，收集提取液；
本申請(qǐng)推薦，在提取液多糖濃度達(dá)15-20mg/mL時(shí)，停止提取，收集提取液。
[0018]9、增加有以下步驟:
⑷、(5):重復(fù)步驟⑵-步驟⑶；即，以上步驟⑵、⑶提取方法重復(fù)兩次，或步驟⑵-步驟⑶交替進(jìn)行數(shù)次(常溫冷浸+加熱逆流提取步驟可交替進(jìn)行)，提取時(shí)間2-8天，冷浸與逆流提取時(shí)間比2:1-8:1;
(6).合并兩次或數(shù)次的提取液，放置備用；
(7).使用前，將合并后的提取液用硅藻土過(guò)濾，按既定工藝勾兌，即可。
[0019]第一次的提取液中，小分子多糖較多；第二次的提取液中，大分子的多糖較多。合并兩次的提取液并放置一段時(shí)間以后，由于溶解度的競(jìng)爭(zhēng)作用，部分較大分子的多糖會(huì)析出，有利于提聞提取液的品質(zhì)。
[0020]現(xiàn)有技術(shù)中尚未見(jiàn)玉竹的溶劑直接提取方法。本發(fā)明的前期研究表明:玉竹藥材質(zhì)地致密、粘多糖含量高、分子量大、不利于提取溶劑向藥材組織中擴(kuò)散，加之多糖分子量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于提取溶劑分子量。造成現(xiàn)有技術(shù)的提取方法不夠理想。本發(fā)明的多糖提取過(guò)程實(shí)際分為3階段:(1)浸透階段是白酒分子逐漸浸潤(rùn)、滲透至藥材組織中，前期試驗(yàn)表明玉竹質(zhì)地致密，該階段與眾不同；(2)溶脹的階段白酒分子再進(jìn)一步擴(kuò)散至多糖分子中，使多糖溶脹的階段，此過(guò)程與溫度關(guān)系復(fù)雜甚至負(fù)相關(guān)；(3)溶解階段多糖經(jīng)一定時(shí)間充分溶脹后，多糖再逐漸擴(kuò)散至白酒中。該3個(gè)階段是構(gòu)成復(fù)雜的多因素物理化學(xué)過(guò)程，這時(shí)采用冷浸-加熱逆流提取方法，能夠得到所需的多糖，兼顧到玉竹皂苷黃酮成分。因此本發(fā)明的溶劑直接提取方法需克服許多因素的干擾，并選擇合適條件，才能完成。[0021]由于本發(fā)明中包括有“提取液多糖濃度達(dá)15_28mg/mL時(shí)，停止提取，收集提取液”的步驟，所以測(cè)定提取液多糖濃度(在線過(guò)程質(zhì)量控制)成為本提取方法的內(nèi)容之一；本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)化(或完成本申請(qǐng)的第二個(gè)發(fā)明任務(wù))，涉及到釀酒工藝中玉竹多糖的白酒冷浸、逆流提取中的在線質(zhì)量控制方法，其特征在于，步驟如下:
⑴.供試品溶液的制備:
在各工藝點(diǎn)，分別各取玉竹白酒提取液適量，其中玉竹提取液中含玉竹多糖濃度8mg/mL以上；離心進(jìn)行固液分離，取上清液，以0.05微米無(wú)機(jī)膜過(guò)濾；
⑵.通過(guò)近紅外監(jiān)測(cè)系統(tǒng)分別采集各工藝點(diǎn)供試品溶液的近紅外光譜后，用相應(yīng)的近紅外數(shù)學(xué)模型進(jìn)行分析計(jì)算，即得出各工藝點(diǎn)藥液中玉竹多糖含量；
所述的“分別采集各工藝點(diǎn)供試品溶液的近紅外光譜”，是選擇6028.39~5943.53cm-l波段建模；測(cè)量參數(shù):透射，分辨率8cm-l，掃描次數(shù)64次，掃描范圍4000~lOOOOcm-1，每個(gè)樣品重復(fù)掃描3次，求平均光譜；根據(jù)平均光譜，得到多糖含量。
[0022](3).工藝監(jiān)控及優(yōu)化通過(guò)所檢測(cè)的數(shù)據(jù)，確定調(diào)配冷浸時(shí)間與逆流溫度與時(shí)間等數(shù)據(jù)并對(duì)工藝進(jìn)行監(jiān)控、調(diào)整和優(yōu)化。
[0023]所述的“相應(yīng)的近紅外數(shù)學(xué)模型”是指按照以下方法建立的模型:
a.供試品溶液的制備:
在各工藝點(diǎn)，分別各取玉竹白酒提取液適量，其中玉竹提取液中含玉竹多糖濃度8mg/mL以上；離心進(jìn)行固液分離，取上清液，以0.05微米無(wú)機(jī)膜過(guò)濾；
b.采樣測(cè)定化學(xué)值采集各工藝點(diǎn)不少于30個(gè)不同批次的藥液樣品，使用中國(guó)藥典玉竹項(xiàng)下方法檢測(cè)標(biāo)提取液中玉竹多糖含量，得離線指標(biāo)成分化學(xué)測(cè)定值；` c，建立相應(yīng)工藝點(diǎn)被測(cè)藥液中多糖的數(shù)學(xué)模型在進(jìn)行第二步操作的同時(shí)，采集各工藝點(diǎn)藥液的近紅外光譜，并對(duì)各原始光譜進(jìn)行預(yù)處理，使用化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件，以數(shù)學(xué)運(yùn)算方式從上述對(duì)應(yīng)光譜中提取數(shù)據(jù)信息，建立被測(cè)藥液中玉竹多糖含量與吸收光譜之間關(guān)系的數(shù)學(xué)模型；所述的以數(shù)學(xué)運(yùn)算方式從上述對(duì)應(yīng)光譜中提取數(shù)據(jù)信息是:采用化學(xué)計(jì)量學(xué)中的偏最小二乘法(PLS)，通過(guò)不同的濾噪方法以及不同的模型校正方法進(jìn)行組合，比較不同方法組合條件下的相關(guān)系數(shù)(R)、校正均方差(RMSEC)、預(yù)測(cè)均方差(RMSEP)、內(nèi)部交叉驗(yàn)證均方差(RMSECV)和因子數(shù)(Factors)，經(jīng)過(guò)多次手動(dòng)選擇及綜合比較，選擇1-Der+nosmoothing提取特征，最大限度去除冗余信息及消除各種干擾因素引起的光譜偏差，建立定量校正模型。
[0024]d，模型驗(yàn)證與優(yōu)化使用己建立的數(shù)學(xué)模型對(duì)第二步所采集的藥液樣品進(jìn)行模型預(yù)測(cè)，并與其化學(xué)測(cè)定值對(duì)比，要求誤差小于10%。
[0025]以下是對(duì)本發(fā)明工作機(jī)理的研究結(jié)果。
[0026]本發(fā)明冷浸+熱逆流提取方法制備的玉竹多糖白酒提取液為復(fù)雜體系，體系成分為白酒、玉竹多糖，如玉竹果聚糖，玉竹皂苷，黃酮成分，該體系中各成分的分子振動(dòng)光譜如近紅外圖譜所示，因振動(dòng)吸收行為多為分子的倍頻吸收，很難用數(shù)字描述與用肉眼區(qū)別。但取該體系液體Iml加入無(wú)水乙醇9ml，搖勻，離心，收集沉淀，干燥，可得玉竹多糖，其分子指紋特征，IR, KBr, V cm-1 (T%):3366.9(19.1), 2933.7 (33.3), 2354.4 (83.96)，1736.3(52? 4)，1630.7(37.87)，1417.4(23.53)，1131.1(13.31)，1023.3(9.2), 930.2(17.45), 814.4(27.99), 595.6(20.44)。[0027]1、藥材質(zhì)地對(duì)提取率的影響影響。玉竹藥材很難粉碎，即使粉碎但提取過(guò)程中碎塊之間的結(jié)塊，造成粘鍋不利于提取與轉(zhuǎn)移。本發(fā)明對(duì)玉竹飲片切成薄片或破碎成顆粒，然后進(jìn)一步壓扁，提取效率得到很大提升，從而解決這一問(wèn)題。
[0028]壓扁后的玉竹和破碎玉竹，提取多糖含量均隨提取時(shí)間的增加而增加，但壓扁玉竹的多糖含量比正常玉竹的多糖含量要高，壓扁玉竹提取率高；但2天最高提取液濃度僅有13.48mg/mL，沒(méi)能達(dá)到預(yù)期含量。隨著靜置時(shí)間延長(zhǎng)，7天后，多糖含量明顯升高，達(dá)到26.7mg/mL ;提示本品玉竹多糖為寡糖。提示本品玉竹多糖含量與冷浸時(shí)間密切相關(guān)。
[0029]2、提取時(shí)間對(duì)提取率的影響。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)多糖要先溶脹，再溶解，需要選擇合適時(shí)間，B組(顆粒大小0.6-lcm)與提取時(shí)間正相關(guān),選擇了提取條件；A組(顆粒大小l_4cm)與提取時(shí)間相關(guān)性差，提取效率較差。
[0030]3、提取次數(shù)、提取液濃度提取率影響。因本發(fā)明發(fā)現(xiàn)提取多糖有飽和現(xiàn)象，當(dāng)多糖濃度達(dá)10-15mg/mL與20_25mg/mL時(shí)，增加時(shí)間提取濃度不再增加或增加緩慢；另外，多糖中有分子量較小的寡糖或果聚糖，分子量較大的粘多糖，在不同濃度酒精中溶解度有差距，2者有競(jìng)爭(zhēng)溶解關(guān)系，與提取次數(shù)與提取液濃度有關(guān)。
[0031 ] 4、飲片含水量或白酒的酒精度數(shù)對(duì)提取物含量的影響，發(fā)現(xiàn)飲片含水量、或低酒精濃度白酒在較短的時(shí)間內(nèi)(幾小時(shí))對(duì)提取有正面作用，但隨著提取的延長(zhǎng)，對(duì)提取產(chǎn)生負(fù)面作用，對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果表明飲片含水量10-15%提取效果較好。
[0032]5、提取溫度，逆流提取速率，藥材含水量對(duì)提取率的影響，薄片和/或壓扁與提取溫度和時(shí)間正相關(guān)，但大顆粒(大于l-4cm)與提取溫度和時(shí)間相關(guān)性較差，提取效率低。
[0033]6、以上優(yōu)化方案中建立了近紅外模型，可用于玉竹提取液復(fù)雜體系的在線過(guò)程質(zhì)量控制，適合大批量樣品的含量測(cè)定和在線質(zhì)量控制，為玉竹白酒提取液的質(zhì)量監(jiān)控提供一種新的方法和思路。
[0034]PLS主因子數(shù)所用的因子數(shù)過(guò)少，光譜中一些有用信息因不被包含而導(dǎo)致模型的預(yù)測(cè)能力較差；反之，選擇的因子數(shù)過(guò)多，則出現(xiàn)過(guò)擬合現(xiàn)象影響其結(jié)果。圖2為主因子數(shù)Factor、RMSECV、預(yù)測(cè)殘差平方和(PRESS)相關(guān)圖，采用內(nèi)部驗(yàn)證法，根據(jù)內(nèi)部交叉驗(yàn)證均方差(RMSECV)隨主因子數(shù)的變化。
[0035]以下是對(duì)該檢測(cè)方法的論證:
1.多糖含量的測(cè)定
1.1對(duì)照品溶液的配制、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制均按玉竹藥材多糖含量測(cè)定方法[1]。
[0036]1.2供試品溶液的制備和含量測(cè)定
按中國(guó)藥典方法略加改進(jìn)，取玉竹白酒提取液適量(約4ml)，置5ml離心管中，離心lOmin，精密取上清液1ml，置IOml離心管中，加95%乙醇8ml，搖勻，離心lOmin，傾去上清液，加水，超聲溶解沉淀，定量轉(zhuǎn)移到100ml量瓶中，加水，定容至刻度。精密量取2ml，置IOml容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。
[0037]精密量取供試品溶液2ml，置具塞試管中，精密加入4%苯酚1ml，混勻，迅速精密加入濃硫酸7ml，充分混勻，于40°C保溫30min，取出，冰浴5min，在490nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度值(A)，用2.1.1項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度(C)，73批玉竹白酒提取液多糖含量為3.47~15.78mg.ml-1
[0038]2近紅外光譜數(shù)據(jù)的采集將73份樣品液離心，取適量于液體樣品管中，測(cè)量參數(shù):透射，分辨率ScnT1，掃描次數(shù)64次，掃描范圍4000~lOOOOcnT1，每個(gè)樣品重復(fù)掃描3次，求平均光譜。73份玉竹白酒提取液近紅外光譜疊加見(jiàn)圖1。
[0039]3建立模型的方法
將玉竹白酒提取液多糖含量值和近紅外光譜輸入TQ Analyst定量分析軟件，進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用化學(xué)計(jì)量學(xué)中的偏最小二乘法(PLS)建立定量校正模型。通過(guò)不同的濾噪方法以及不同的模型校正方法進(jìn)行組合，比較不同方法組合條件下的相關(guān)系數(shù)(R)、校正均方差(RMSEC)、預(yù)測(cè)均方差(RMSEP)、內(nèi)部交叉驗(yàn)證均方差(RMSECV)和因子數(shù)(Factors)，結(jié)果見(jiàn)表1。經(jīng)過(guò)多次手動(dòng)選擇及綜合比較，最終選擇1-Der+no smoothing處理效果最好。
[0040]表1多糖模型不同預(yù)處理方法的比較
【權(quán)利要求】
1.一種釀酒工藝中玉竹多糖的白酒冷浸、逆流提取方法，其特征在于，步驟如下: (1).玉竹切成薄片，或切成段，或破碎成顆粒； (2).用酒精濃度體積比45%-55%的白酒，按質(zhì)量比1:7.0-1:8.0的投料比常溫冷浸； ⑶.用酒精濃度體積比45%-55%的白酒，逆流提取。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的釀酒工藝中玉竹多糖的白酒冷浸、逆流提取方法，其特征在于，所述的“玉竹切成薄片，或切成段，或破碎成顆?！?，是指切成厚度0.1-0.3cm的薄片；或切成0.6-lcm長(zhǎng)的段,或破碎成大小0.6-lcm的顆粒。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的釀酒工藝中玉竹多糖的白酒冷浸、逆流提取方法，其特征在于，增加有以下步驟:(1)-1玉竹切成薄片，或切成段，或破碎成顆粒后，用外力壓扁。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的釀酒工藝中玉竹多糖的白酒冷浸、逆流提取方法，其特征在于，所提取的多糖為寡糖，特征為表1的參數(shù)所限定的多糖: 表:玉竹多糖，F(xiàn)IR特征圖譜(KBr，V cnT1)

5.所述步驟⑴的“玉竹切成薄片，或切成段，或破碎成顆?！?，其含水量控制在質(zhì)量比8%-15% ； 所述步驟⑵的白酒的體積比采用50%酒精濃度；按質(zhì)量比1:6-9的投料比常溫冷浸； 所述步驟⑵的用白酒常溫冷浸的時(shí)間為12小時(shí)以上； 所述步驟⑶的用白酒逆流提取時(shí)，加熱到30-80°C ； 所述步驟⑶的逆流提取時(shí)，逆流循環(huán)速度為1.0-1.5T/h*5kg ； 所述步驟⑶的逆流提取時(shí)間約6-8h ;或在提取液多糖濃度達(dá)15-28mg/mL時(shí)，停止提取，收集提取液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的釀酒工藝中玉竹多糖的白酒冷浸、逆流提取方法，其特征在于， 所述步驟⑴的“玉竹切成薄片，或切成段，或破碎成顆粒”，其含水量控制在質(zhì)量比
13% ； 所述步驟⑵的用白酒常溫冷浸的時(shí)間為12小時(shí)-8天； 所述步驟⑶的用白酒，逆流提取時(shí)，加熱到50-70°C ； 所述步驟⑶的逆流提取，是在提取液多糖濃度達(dá)15-20mg/mL時(shí)，停止提取，收集提取液。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的釀酒工藝中玉竹多糖的白酒冷浸、逆流提取方法，其特征在于， 所述步驟⑵的用白酒常溫冷浸的時(shí)間為冷浸24小時(shí)-168小時(shí)； 所述步驟⑶的用白酒，逆流提取時(shí)，加熱到65-70°C。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7之一所述的釀酒工藝中玉竹多糖的白酒冷浸、逆流提取方法，其特征在于，增加有以下步驟: ⑷、(5):重復(fù)步驟⑵-步驟⑶；或步驟⑵-步驟⑶交替進(jìn)行數(shù)次，提取時(shí)間2-8天，冷浸與逆流提取時(shí)間比2:1 -8:1 ; (6).合并兩次或數(shù)次的提取液，放置備用； (7).使用前，將合并后的提取液用硅藻土過(guò)濾，按既定工藝勾兌，即可。
9.權(quán)利要求1所述釀酒工藝中玉竹多糖的白酒冷浸、逆流提取方法的在線質(zhì)量控制方法，其特征在于，步驟如下: (I).供試品溶液的制備: 在各工藝點(diǎn)，分別取玉竹白酒提取液適量，其中玉竹提取液中含玉竹多糖濃度6mg/mL以上；離心進(jìn)行固液分離，取上清液，以0.05微米無(wú)機(jī)膜過(guò)濾； ⑵.通過(guò)近紅外監(jiān)測(cè)系統(tǒng)分別采集各工藝點(diǎn)供試品溶液的近紅外光譜后，用相應(yīng)的近紅外數(shù)學(xué)模型進(jìn)行分析計(jì)算，即得出各工藝點(diǎn)藥液中玉竹多糖含量； 所述的“分別采集各工藝點(diǎn)供試品溶液的近紅外光譜”，是選擇6028~5943cm-l波段建模；測(cè)量參數(shù):透射，分辨率8cm-l，掃描次數(shù)64次，掃描范圍4000~1000Ocm-1，每個(gè)樣品重復(fù)掃描3次，求平均光譜；根據(jù)平均光譜，得到多糖含量； ⑶.工藝監(jiān)控及優(yōu)化通過(guò)所檢測(cè)的數(shù)據(jù)，確定調(diào)配冷浸時(shí)間與逆流溫度與時(shí)間等數(shù)據(jù)并對(duì)工藝進(jìn)行監(jiān)控、調(diào)整和優(yōu)化。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的釀酒工藝中玉竹多糖的白酒冷浸、逆流提取方法的在線質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述的“相應(yīng)的近紅外數(shù)學(xué)模型”是指按照以下方法建立的模型: a.供試品溶液的制備: 在各工藝點(diǎn)，分別各取玉竹白酒提取液適量，其中玉竹提取液中含玉竹多糖濃度8mg/mL以上；離心進(jìn)行固液分離，取上清液，以0.05微米無(wú)機(jī)膜過(guò)濾； b.采樣測(cè)定化學(xué)值采集各工藝點(diǎn)不少于30個(gè)不同批次的藥液樣品，使用中國(guó)藥典玉竹項(xiàng)下方法檢測(cè)標(biāo)提取液中玉竹多糖含量，得離線指標(biāo)成分化學(xué)測(cè)定值； c，建立相應(yīng)工藝點(diǎn)被測(cè)藥液中多糖的數(shù)學(xué)模型在進(jìn)行第二步操作的同時(shí)，采集各工藝點(diǎn)藥液的近紅外光譜，并對(duì)各原始光譜進(jìn)行預(yù)處理，使用化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件，以數(shù)學(xué)運(yùn)算方式從上述對(duì)應(yīng)光譜中提取數(shù)據(jù)信息，建立被測(cè)藥液中玉竹多糖含量與吸收光譜之間關(guān)系的數(shù)學(xué)模型； 所述的以數(shù)學(xué)運(yùn)算方式從上述對(duì)應(yīng)光譜中提取數(shù)據(jù)信息是:采用化學(xué)計(jì)量學(xué)中的偏最小二乘法，通過(guò)不同的濾噪方法以及不同的模型校正方法進(jìn)行組合，比較不同方法組合條件下的相關(guān)系數(shù)、校正均方差、預(yù)測(cè)均方差、內(nèi)部交叉驗(yàn)證均方差和因子數(shù)，經(jīng)過(guò)多次手動(dòng)選擇及綜合比較，選擇1-Der+no smoothing提取特征,最大限度去除冗余信息及消除各種干擾因素引起的光譜偏差，建立定量校正模型； d，模型驗(yàn)證與優(yōu)化使用己建立的數(shù)學(xué)模型對(duì)第二步所采集的藥液樣品進(jìn)行模型預(yù)測(cè)，并與其化學(xué)測(cè)定值對(duì)比，要求誤差小于10%。
【文檔編號(hào)】G01N21/359GK103627612SQ201310464013
【公開(kāi)日】2014年3月12日 申請(qǐng)日期:2013年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月30日
【發(fā)明者】叢曉東, 邢瀟琳, 樊玲玲, 張?chǎng)? 錢(qián)建華, 方小民, 彭美仙 申請(qǐng)人:浙江致中和實(shí)業(yè)有限公司