酶制劑中鉛的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物制劑檢測【技術領域】，具體涉及酶制劑中鉛的檢測方法。所述方法包括步驟（1）樣品前處理，將樣品進行濕法消化；（2）標準曲線制備；（3）測定；（4）結果計算，通過樣品測定的準確度、精密度（重復性、重現性），不同行業(yè)酶制劑的適用性，以及標準大米物質的真值回歸實驗等驗證了該方法，說明該方法是一種簡便、可靠、準確的方法。
【專利說明】酶制劑中鉛的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及生物制劑檢測【技術領域】，具體涉及酶制劑中鉛的檢測方法。
【背景技術】
[0002]近年來，隨著畜牧業(yè)生產方式的轉變，飼料及飼料添加劑也向高產、安全、精準的功能轉變，酶制劑被認為是飼料添加劑中最安全的產品，酶制劑產業(yè)獲得了迅速發(fā)展。
[0003]然而，酶制劑的各種衛(wèi)生、質量指標的檢測方法卻發(fā)展滯后，甚至沒有專屬的國標或行標，大多都是參考相近的標準進行檢測，如飼用酶制劑中鉛的檢測在NY/T722-2003《飼料用酶制劑通則》中指定使用GB/T13080-1991《飼料中鉛的測定》，該標準已被GB/T13080-2004《飼料中鉛的測定》代替，但使用該方法無法得到正確結果，該標準適用于鉛含量相對較高的配合飼料、濃縮飼料、單一飼料、添加劑預混料等產品，而酶制劑產品中鉛的含量一般均較低，采用火焰原子化法無法測得理想結果；再加上酶制劑產品的載體種類較多，對其有一定干擾，不添加基體改進劑就直接采用標準曲線法，所得數據重復性差，精密度低，回收率無法達標。因此，為更好地推動酶制劑的發(fā)展，我們急需建立各種衛(wèi)生質量標準的檢測方法。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的目的就是建立一種準確簡單的酶制劑中鉛的檢測方法。
[0005]根據本發(fā)明的酶制劑中鉛的檢測方法包括以下步驟:
[0006](I)樣品前處理，將樣品進行濕法消化；
[0007](2)標準曲線制備`
[0008]取定代表樣品進行標準加入法測定，取鉛標準工作液于進樣盤中設定5ng/ml，10ng/ml, 15ng/ml, 20ng/ml四個點，稀釋，以原子吸收分光光度計石墨爐在檢測波長283.3nm，狹縫0.7nm，燈電流5_10mA的條件下測定吸收值，制作標準曲線；
[0009](3)測定
[0010]將前處理后的試樣溶液和試劑空白注入原子吸收分光光度計石墨爐中，波長283.3nm,狹縫0.7nm,燈電流5_10mA，按繪制標準曲線步驟進行測定，測出相應吸光值與標準曲線比較定量；
[0011](4)結果計算
[0012]試樣中鉛含量按式(I)進行計算。
(Cl-CO)X KX 1000
[0013]_ X1000 X1000....................................(I)
[0014]式中:
[0015]X—試樣中鉛含量，單位為毫克每千克或毫克每升(mg/kg或mg/L)
[0016]Cl——測定樣液中鉛含量，單位為納克每毫升(ng/mL)；
[0017]CO——空白液中鉛含量，單位為納克每毫升(ng/mL)；[0018]V—試樣消化液定量總體積，單位為毫升(mL)；
[0019]m——試樣質量或體積，單位為克或毫升(g或mL)。
[0020]根據本發(fā)明的【具體實施方式】，所述酶制劑中鉛的檢測方法包括以下步驟:
[0021](I)樣品前處理，
[0022]濕法消化:稱取樣品1.0-2.0g，精確到0.0OOlg,于聚四氟乙烯坩堝中，加5ml混合酸浸泡兩小時；加5ml混合酸，在電熱板上消解、趕酸，直至樣液剩ImL左右且呈澄清透明狀，冷卻后分多次加入去離子水轉移到25ml容量瓶，并定容搖勻，用一次性過濾器過濾，備用。同時制備試劑空白溶液。
[0023]檢測波長283.3nm,狹縫0.7nm,燈電流5-lOmA，石墨爐升溫程序如表1 (基體及進樣量改變后需進行改進)，背景校正為氘燈扣背景。
[0024](2)標準曲線制備
[0025]標準加入法:取定代表樣品進行標準加入法測定，取鉛標準工作液于進樣盤中，設定5ng/ml, 10ng/ml, 15ng/ml, 20ng/ml四個點，儀器進行自動稀釋，制作標準曲線。酶制劑載體成分較復雜，消化完后的樣品溶液與鎘標準溶液在成分上存在較大差異，如果直接采用標準曲線法，使用鎘標準溶液制作標曲，會導致檢測結果發(fā)生偏差；而采用標準加入法，就能在一定程度上減弱基體成分不同造成的誤差。
[0026](3)測定
[0027]試樣溶液和試劑空白，按繪制標準曲線步驟進行測定，測出相應吸光值與標準曲線比較定量。
[0028](4)基體改進劑的使用:酶制劑的基體成分較為復雜，采用石墨爐原子吸收光譜法測定時，對于有干擾的試樣，要加入基體改進劑以消除干擾。繪制標準曲線時也要加入與試樣測定時等量的集體改進劑。硝酸鈀作為基體改進劑其含有的鈀能與鉛化合，生成合金或加合物，在灰化過程中不被無機鹽夾帶造成鉛的損失，也不在灰化、原子化過程的最初階段與某些無機鹽產生氣相反應，從而消除了許多嚴重干擾和背景吸收。本發(fā)明分別試驗加入5 μ L0.1%、0.2%、0.5%的硝酸鈀，結果在加入5 μ L0.1%的硝酸鈀時峰形最好，背景值最低，基線較平穩(wěn)。
[0029](5)結果計算
[0030]試樣中鉛含量按式(I)進行計算。
【權利要求】
1.一種酶制劑中鉛的檢測方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟: (1)樣品前處理，將樣品進行濕法消化； (2)標準曲線制備 取定代表樣品進行標準加入法測定，取鉛標準工作液于進樣盤中設定5ng/ml，IOng/ml, 15ng/ml, 20ng/ml四個點,稀釋，以原子吸收分光光度計石墨爐在檢測波長283.3nm,狹縫0.7nm，燈電流5-10mA的條件下測定吸收值，制作標準曲線； (3)測定 將前處理后的試樣溶液和試劑空白注入原子吸收分光光度計石墨爐中，波長283.3nm,狹縫0.7nm，燈電流5-10mA，按繪制標準曲線步驟進行測定，測出相應吸光值與標準曲線比較定量； (4)結果計算 試樣中鉛含量按式(I)進行計算。
2.根據權利要求1所述的酶制劑中鉛的檢測方法，其特征在于，在步驟(1)中，稱取樣品1.0-2.0g，精確到0.0OOlg,于聚四氟乙烯坩堝中，加5ml混合酸浸泡兩小時；加5ml混合酸，在電熱板上消解、趕酸，直至樣液剩ImL且呈澄清透明狀，冷卻后分多次加入去離子水轉移到25ml容量瓶，并定容搖勻，用一次性過濾器過濾，備用，同時制備試劑空白溶液。
3.根據權利要求1所述的酶制劑中鉛的檢測方法，其特征在于，在繪制標準曲線時和試樣測定時，加入基體改進劑以消除干擾，所述基體改進劑為0.1￥八％硝酸鈀。
【文檔編號】G01N21/33GK103712938SQ201310745223
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年12月30日 優(yōu)先權日:2013年12月30日
【發(fā)明者】詹志春, 徐麗, 王冠 申請人:武漢新華揚生物股份有限公司