一種檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型公開(kāi)了一種檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡。本實(shí)用新型的技術(shù)方案要點(diǎn)為：一種檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡，包括塑料盒體和封裝于塑料盒體內(nèi)的試紙條，所述的試紙條的底層為支撐層，該支撐層上由左到右依次附著有緊密相連的樣品墊、金標(biāo)抗體結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，所述的塑料盒體上開(kāi)有加樣孔和觀察窗，該加樣孔的位置與試紙條上的樣品墊位置相對(duì)應(yīng)，觀察窗與試紙條上的硝酸纖維素膜位置相對(duì)應(yīng)。本實(shí)用新型操作簡(jiǎn)單、快速準(zhǔn)確、靈敏度高、成本低、穩(wěn)定性好，可進(jìn)行批量檢測(cè)。
【專利說(shuō)明】一種檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于食品安全一獸藥殘留免疫化學(xué)檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡。
【背景技術(shù)】
[0002]磺胺類藥物(Sulfonamides, SAs)是指具有對(duì)氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的一類藥物的總稱，多為兩性化合物，是一類傳統(tǒng)的人工合成抗菌藥物?；前奉愃幬锏囊志鷻C(jī)理是由于磺胺類藥物能分解出對(duì)氨基苯磺酰胺，其分子的形狀和大小與組成葉酸中的對(duì)氨基苯甲酸類似，化學(xué)性質(zhì)也相似。由于細(xì)菌對(duì)二者缺乏選擇性，大量的對(duì)氨基苯磺酰胺替代了對(duì)氨基苯甲酸而被細(xì)菌吸收，干擾了細(xì)菌葉酸的合成而影響其生長(zhǎng)繁殖。磺胺類藥物抗菌譜較廣，對(duì)大多數(shù)革蘭氏陽(yáng)性菌和部分革蘭氏陰性菌均有抑制效果，具有一定療效的SAs就有幾十種。因具有廣譜、穩(wěn)定、經(jīng)濟(jì)、易用以及聯(lián)合抗菌增效劑效果可提高數(shù)十倍的特點(diǎn)，磺胺類藥物常用于治療家畜子宮炎、呼吸道和消化道感染、豬萎縮性鼻炎、禽霍亂、傷寒、副傷寒和球蟲感染。當(dāng)磺胺類藥物以亞治療濃度作為飼料添加劑使用時(shí)，可預(yù)防疾病的發(fā)生，提高飼料轉(zhuǎn)化效率和促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)。
[0003]磺胺類藥物在動(dòng)物體內(nèi)代謝時(shí)間較長(zhǎng)，往往造成動(dòng)物可食性組織中磺胺類藥物殘留超標(biāo)。而長(zhǎng)期食用含有磺胺類藥物殘留的食品，會(huì)引起磺胺類藥物的逐漸蓄積，危害人體健康，主要表現(xiàn)為變態(tài)反應(yīng)、過(guò)敏反應(yīng)、泌尿系統(tǒng)障礙、致畸作用、致突變作用、致癌作用以及激素樣作用。而且磺胺類藥物在食品、飼料中的殘留極易引發(fā)細(xì)菌耐藥性和環(huán)境污染。動(dòng)物排泄物中的抗菌藥物和耐藥菌株被釋入環(huán)境后，將污染水源和土壤，在污泥中細(xì)菌可長(zhǎng)期保持耐藥性。同時(shí)，磺胺類藥物殘留也是目前動(dòng)物性食品貿(mào)易的主要技術(shù)問(wèn)題，嚴(yán)重影響了畜牧業(yè)的正常發(fā)展。為了保障動(dòng)物用藥的安全性和有效性，許多國(guó)家規(guī)定了磺胺類藥物的最高殘留限量(maximum residue limits, MRL),加拿大、歐盟、美國(guó)規(guī)定動(dòng)物組織中磺胺類藥物總量的最大殘留量是100 yg/kg，日本為20 μ g/kg，并且有逐步嚴(yán)格控制的發(fā)展趨勢(shì)。2002年12月我國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)文件規(guī)定，食用動(dòng)物產(chǎn)品中磺胺類藥物最高殘留限量為100 μ g/kg，并將其列為獸藥殘留監(jiān)控的重點(diǎn)。
[0004]磺胺類藥物殘留檢測(cè)方法主要有微生物學(xué)法、理化分析法和免疫法等。微生物學(xué)法簡(jiǎn)便、費(fèi)用低，但操作費(fèi)時(shí)且敏感性、特異性都較差，在定性定量上均存在困難，不能滿足現(xiàn)代殘留檢測(cè)的需要；理化法常作為確證方法用于測(cè)定動(dòng)物組織中的藥物殘留，如氣相色譜(GC)、高效液性色譜(HPLC)、氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)和液質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS)等，這些方法靈敏準(zhǔn)確、特異性強(qiáng)，分離度好，可以同時(shí)測(cè)定多種藥物，但需要昂貴的儀器設(shè)備、樣品前處理復(fù)雜、繁瑣費(fèi)時(shí)、檢測(cè)成本高，不能現(xiàn)場(chǎng)操作，而且需要專業(yè)技術(shù)人員。與之相比，免疫學(xué)分析技術(shù)具有靈敏、快速、特異、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，是近年來(lái)逐漸發(fā)展起來(lái)的一種重要的痕量檢測(cè)技術(shù)，在獸藥殘留分析領(lǐng)域應(yīng)用越來(lái)越多，具有廣闊的推廣應(yīng)用前景。
[0005]膠體金標(biāo)記免疫分析法是近年來(lái)迅速發(fā)展的一種新型分析技術(shù)，其特點(diǎn)是簡(jiǎn)便快速、成本低、無(wú)污染、無(wú)需培訓(xùn)，非常適合于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。與ELISA相比，具有樣品前處理簡(jiǎn)單，顯色時(shí)間短(3-5 min)，且所有試劑包含在一根試紙條上，無(wú)需使用儀器等優(yōu)點(diǎn)，具有廣闊的市場(chǎng)前景和應(yīng)用價(jià)值。因此，研制快速、靈敏、高效的檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡對(duì)于保障動(dòng)物性食品安全具有十分重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本實(shí)用新型解決的技術(shù)問(wèn)題是提供了一種操作簡(jiǎn)單、快速準(zhǔn)確、靈敏度高、成本低、穩(wěn)定性好，可進(jìn)行批量生產(chǎn)的檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡。
[0007]本實(shí)用新型的技術(shù)方案是:一種檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡，其特征在于:所述的檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡包括塑料盒體和封裝于塑料盒體內(nèi)的試紙條，所述的試紙條的底層為支撐層，該支撐層上由左到右依次附著有緊密相連的樣品墊、金標(biāo)抗體結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，所述的塑料盒體上開(kāi)有加樣孔和觀察窗，該加樣孔的位置與試紙條上的樣品墊位置相對(duì)應(yīng)，觀察窗與試紙條上的硝酸纖維素膜位置相對(duì)應(yīng)，所述的硝酸纖維素膜上有對(duì)氨基苯磺酰胺一載體蛋白偶聯(lián)物溶液印制的檢測(cè)線(T線)和羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線(C線)，兩者間距5 mm，其中對(duì)氨基苯磺酰胺一載體蛋白偶聯(lián)物溶液印制的檢測(cè)線(T線)位于靠近樣品墊的一側(cè)，所述的結(jié)合墊上灌注有膠體金標(biāo)記的抗磺胺類藥物單克隆抗體。
[0008]本實(shí)用新型所述的支撐層是由聚氯乙烯樹脂與穩(wěn)定劑及輔料配合制成的PVC板。本實(shí)用新型所述的吸收墊是由吸水能力極強(qiáng)的植物長(zhǎng)纖維為原材料制成的純白濾紙。本實(shí)用新型所述的樣品墊和金標(biāo)抗體結(jié)合墊是由玻璃纖維棉制作而成的。本實(shí)用新型所述的樣品墊和金標(biāo)抗體結(jié)合墊的疊壓寬度為2 mm,吸收墊與硝酸纖維素膜的疊壓寬度為2 _。本實(shí)用新型所述的樣品墊、金標(biāo)抗體結(jié)合墊和吸收墊上方覆蓋有膠膜保護(hù)層。本實(shí)用新型所述的硝酸纖維素膜兩端分界處有標(biāo)記線。
[0009]本實(shí)用新型具有以下優(yōu)點(diǎn):(1)靈敏度高、特異性強(qiáng)。檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡以膠體金標(biāo)記高親和力的單克隆抗體制備而成，金標(biāo)抗體中金顆粒與抗體分子通過(guò)異性電荷間范德華力相結(jié)合，膠體金對(duì)單克隆抗體的特異性和親和力影響很小。因此，快速檢測(cè)試紙卡具有較高的靈敏度和特異性，其檢測(cè)靈敏度可達(dá)8 μ g/kg ；
[0010](2)操作簡(jiǎn)單、方便快捷。使用快速檢測(cè)試紙卡時(shí)無(wú)需其它任何試劑，只要將處理后的樣品溶液用滴管滴入試紙卡加樣孔內(nèi)3?4滴，3飛min即可觀察結(jié)果；
[0011](3)檢測(cè)結(jié)果形象、直觀。試紙卡以紅色印跡線“ I ”或“ Il ”作為檢測(cè)線的陽(yáng)性和陰性標(biāo)記，即在硝酸纖維素膜上質(zhì)控線(C線)顯示一條紅色“ I ”印跡時(shí)，表示被檢測(cè)樣品溶液中磺胺類藥物殘留含量> 8 μ g/kg ;若硝酸纖維素膜上質(zhì)控線(C線)和檢測(cè)線(T線)同時(shí)出現(xiàn)兩條紅色“ Il ”印跡時(shí)，表示樣品溶液中磺胺類藥物殘留含量<8 μ g/kg。結(jié)果形象直觀，簡(jiǎn)單準(zhǔn)確，不容易出現(xiàn)誤判；
[0012](4)膠膜的使用可以延長(zhǎng)檢測(cè)結(jié)果觀察時(shí)間，試紙卡穩(wěn)定性好。本試紙卡樣品吸收墊將檢測(cè)溶液完全吸收，使之與偶聯(lián)墊上金標(biāo)抗體充分反應(yīng)，可以有效減少誤差率；還可以防止外界雜質(zhì)干擾，影響金標(biāo)抗體與檢測(cè)抗原的結(jié)合；
[0013](5)成本低、投資少。使用本實(shí)用新型試紙卡，不需要另配復(fù)雜的儀器設(shè)備和昂貴的試劑，現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)一步到位，成本低廉，見(jiàn)效快；
[0014](6)易于大范圍推廣應(yīng)用。本試紙卡操作簡(jiǎn)單，適合不同類別的人員使用，如實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)、海關(guān)檢疫、衛(wèi)生監(jiān)督、規(guī)模養(yǎng)殖及個(gè)體生產(chǎn)等，具有廣闊的市場(chǎng)前景和較大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0015]圖1是本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2是本實(shí)用新型中試紙條的側(cè)視圖；圖3是本實(shí)用新型中試紙條的俯視圖。
【具體實(shí)施方式】
[0016]結(jié)合附圖詳細(xì)描述實(shí)施例。一種檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡，包括塑料盒體I和封裝于塑料盒體I內(nèi)的試紙條2，所述的試紙條2的底層為支撐層3，該支撐層3上由左到右依次附著有緊密相連的樣品墊4、金標(biāo)抗體結(jié)合墊5、硝酸纖維素膜6和吸收墊7，所述的塑料盒體I上開(kāi)有加樣孔8和觀察窗9，該加樣孔8的位置與試紙條2上的樣品墊4位置相對(duì)應(yīng)，觀察窗9與試紙條2上的硝酸纖維素膜6位置相對(duì)應(yīng)，所述的硝酸纖維素膜6上有對(duì)氨基苯磺酰胺一載體蛋白偶聯(lián)物溶液印制的檢測(cè)線(T線)11和羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線(C線)10，兩者間距5 mm，其中對(duì)氨基苯磺酰胺一載體蛋白偶聯(lián)物溶液印制的檢測(cè)線(T線)11位于靠近樣品墊4的一側(cè)，所述的結(jié)合墊5上灌注有膠體金標(biāo)記的抗磺胺類藥物單克隆抗體。
[0017]本實(shí)用新型所述的支撐層3是由聚氯乙烯樹脂與穩(wěn)定劑及輔料配合制成的PVC板。本實(shí)用新型所述的吸收墊7是由吸水能力極強(qiáng)的植物長(zhǎng)纖維為原材料制成的純白濾紙。本實(shí)用新型所述的樣品墊4和金標(biāo)抗體結(jié)合墊5是由玻璃纖維棉制作而成的。本實(shí)用新型所述的樣品墊4和金標(biāo)抗體結(jié)合墊5的疊壓寬度為2 mm,吸收墊7與硝酸纖維素膜6的疊壓寬度為2 _。本實(shí)用新型所述的樣品墊4、金標(biāo)抗體結(jié)合墊5和吸收墊7上方覆蓋有膠膜保護(hù)層12。本實(shí)用新型所述的硝酸纖維素膜6兩端分界處有標(biāo)記線13。
[0018]本實(shí)用新型所述的試紙卡的檢測(cè)原理:
[0019]試紙卡根據(jù)抗原抗體競(jìng)爭(zhēng)性免疫層析原理設(shè)計(jì)。滴加樣品液后，在吸收墊和硝酸纖維素膜的毛細(xì)作用下，樣品溶液向上遷移，到達(dá)結(jié)合墊時(shí)，金標(biāo)抗體將被溶解。當(dāng)樣品中含有磺胺類藥物時(shí)，它們將和金標(biāo)抗體結(jié)合，并一起向上遷移，到達(dá)固定有對(duì)氨基苯磺酰胺-OVA的檢測(cè)線位置時(shí)，檢測(cè)抗原將和SAs競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合金標(biāo)抗體上有限的抗原結(jié)合位點(diǎn)。樣品中SAs含量越高，檢測(cè)抗原和金標(biāo)抗體結(jié)合數(shù)量就越少，T線顯色就越弱；當(dāng)樣品中SAs高于一定數(shù)值(8 μ g/kg)時(shí)，檢測(cè)抗原就無(wú)法和金標(biāo)抗體結(jié)合，T線不顯色。無(wú)論樣品中是否有SAs存在，過(guò)量的金標(biāo)抗體或檢測(cè)抗原與金標(biāo)抗體的結(jié)合物都將和二抗GaMIgG結(jié)合，在C線形成紅色。
[0020]本實(shí)用新型所述的試紙卡的使用方法:
[0021]I)樣品前處理:
[0022]將動(dòng)物組織或其它樣品切碎、研磨后稱取3±0.05 g樣本于50 ml離心管中，再加Λ 9 ml乙酸乙酯；劇烈震蕩5 min后,室溫下4000 r/min離心5 min ;移取6 ml上清液,于60 °C下氮?dú)獯蹈?；加入I ml正已燒,震蕩I min,再加入0.5 ml復(fù)溶液,振蕩10 s ;吸取至少100 ml下層溶液待檢。
[0023]2)樣品滴加:[0024]將試紙卡平放后，用滴管將樣品溶液滴入試紙卡加樣孔內(nèi)3?4滴，3飛min后即可觀察結(jié)果。
[0025]3)檢測(cè)結(jié)果分析:
[0026]陰性:若硝酸纖維素膜上質(zhì)控線(C線)和檢測(cè)線(T線)同時(shí)出現(xiàn)兩條紅色“ Il ”印跡時(shí)，表示樣品溶液中磺胺類藥物殘留含量< 8 μ g/kg，判為陰性。
[0027]陽(yáng)性:若硝酸纖維素膜上質(zhì)控線(C線)顯示一條紅色“ I ”印跡，而檢測(cè)線(T線)不顯色，表示被檢測(cè)樣品溶液中磺胺類藥物殘留含量> 8 μ g/kg，判為陽(yáng)性。
[0028]無(wú)效:若硝酸纖維素膜上質(zhì)控線(C線)不顯示紅色條帶，則無(wú)論檢測(cè)線(T線)是否出現(xiàn)紅色印跡，該試紙卡均判為無(wú)效。
【權(quán)利要求】
1.一種檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡，其特征在于:所述的檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡包括塑料盒體和封裝于塑料盒體內(nèi)的試紙條，所述的試紙條的底層為支撐層，該支撐層上由左到右依次附著有緊密相連的樣品墊、金標(biāo)抗體結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，所述的塑料盒體上開(kāi)有加樣孔和觀察窗，該加樣孔的位置與試紙條上的樣品墊位置相對(duì)應(yīng)，觀察窗與試紙條上的硝酸纖維素膜位置相對(duì)應(yīng)，所述的硝酸纖維素膜上有對(duì)氨基苯磺酰胺一載體蛋白偶聯(lián)物溶液印制的檢測(cè)線和羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線，兩者間距5 _，其中對(duì)氨基苯磺酰胺一載體蛋白偶聯(lián)物溶液印制的檢測(cè)線位于靠近樣品墊的一側(cè)，所述的結(jié)合墊上灌注有膠體金標(biāo)記的抗磺胺類藥物單克隆抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡，其特征在于:所述的支撐層是PVC板。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡，其特征在于:所述的吸收墊是由植物長(zhǎng)纖維為原材料制成的純白濾紙。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡，其特征在于:所述的樣品墊和金標(biāo)抗體結(jié)合墊是由玻璃纖維棉制作而成的。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡，其特征在于:所述的樣品墊和金標(biāo)抗體結(jié)合墊的疊壓寬度為2 mm,吸收墊與硝酸纖維素膜的疊壓寬度為2mmD
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡，其特征在于:所述的樣品墊、金標(biāo)抗體結(jié)合墊和吸收墊上方覆蓋有膠膜保護(hù)層。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)磺胺類藥物殘留的免疫層析試紙卡，其特征在于:所述的硝酸纖維素膜兩端分界處有標(biāo)記線。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK203385731SQ201320434944
【公開(kāi)日】2014年1月8日 申請(qǐng)日期:2013年7月19日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月19日
【發(fā)明者】常新耀, 李桂平, 王方明, 王洪潤(rùn), 楊志, 張紹鈴, 原小燕, 葛會(huì)會(huì) 申請(qǐng)人:河南知微生物工程有限公司, 河南科技學(xué)院