專利名稱：：動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于食品檢測(cè)分析
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其是一種動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。技術(shù)背景磺胺類藥物的基本結(jié)構(gòu)為對(duì)氨苯磺酰胺，具有芳氨基和磺酰胺基，多為兩性化合物，藥物具有一定酸性。磺胺類藥物的抑菌作用是由于磺胺類藥物中能分解出對(duì)氨基苯磺酰胺，其分子的大小和形狀與組成葉酸中的對(duì)氨基苯甲酸相近，化學(xué)性質(zhì)也類似。由于細(xì)菌對(duì)二者缺乏選擇性，大量的對(duì)氨基苯磺胺替代了對(duì)氨基苯甲酸而被細(xì)菌吸收，干擾細(xì)菌葉酸的合成而影響其生長(zhǎng)繁殖，從而可抑制大多數(shù)革蘭氏陽(yáng)性菌和某些陰性菌。磺胺類藥物應(yīng)用較廣，具有一定療效的就有幾十種。在食源性動(dòng)物的飼養(yǎng)中，磺胺類藥物作為獸藥被廣泛用于獸醫(yī)臨床對(duì)細(xì)菌感染性疾病的防治。這類藥物具有顯著的毒性副作用，通過(guò)任何途徑攝入都會(huì)在人體中蓄積，并可引起泌尿系統(tǒng)的損害，特別是在體內(nèi)形成的乙酰化磺胺在酸性尿中溶解度很低，可在腎小管、腎盂、輸尿管等處析出結(jié)晶，損害腎臟?；前奉愃幬锞哂锌乖裕碳C(jī)體內(nèi)抗體的形成，造成過(guò)敏反應(yīng)，表現(xiàn)在皮炎，白細(xì)胞減少，溶血性貧血和藥熱。有資料表明，磺胺二甲嘧啶等一些磺胺類藥物在連續(xù)給藥中能夠誘發(fā)嚙齒動(dòng)物甲狀腺增生，具有潛在的致癌性。還可導(dǎo)致許多細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性，引起耐藥菌株的增加。如果這類藥物不按規(guī)定或要求使用與停藥，動(dòng)物體內(nèi)的藥物殘留會(huì)隨著食物鏈影響人體的健康，因此，歐盟、加拿大和美國(guó)規(guī)定所有磺胺類藥物在可食組織和奶中總量的最高殘留限量為100pg/kg，而日本規(guī)定為20pg/kg，并且具有逐步嚴(yán)格控制的發(fā)展趨勢(shì)。長(zhǎng)期食用有這些藥物殘留的動(dòng)物性食品可能有害健康，引起慢性中毒。因此，各國(guó)政府對(duì)磺胺類藥物在動(dòng)物性食品中使用嚴(yán)格規(guī)定了MRL或ADI。2002年12月我國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)文規(guī)定在所有食品動(dòng)物的肌肉、脂肪、肝和腎中最高殘留限量為100pg/kg，并將其列為獸藥殘留監(jiān)控的重點(diǎn)。目前，針對(duì)磺胺類獸藥殘留的檢測(cè)方法有薄層色譜法(TLC)、高壓液相色譜(HPLC)法、液質(zhì)聯(lián)用(HPLC/MS)、氣相色譜法(GC)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和毛細(xì)管電泳法(HPCE)等。由于復(fù)雜的儀器設(shè)備和繁瑣的前處理過(guò)程，儀器分析方法不適合現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控和大量樣本的篩選，其中ELISA方法作為一種新型的動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物殘留篩選方法已被使用，如中國(guó)專利申請(qǐng)(200510086777)，該方法與儀器分析技術(shù)相比雖然具有快速、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，但是它采用的是單克隆抗體及二抗酶技術(shù)和間接競(jìng)爭(zhēng)免疫檢測(cè)方法，在二抗酶技術(shù)中，二抗-酶與一抗結(jié)合反應(yīng)、位點(diǎn)交叉問(wèn)題，易引起非特異性結(jié)合，導(dǎo)致結(jié)合偏差致使靈敏度較差，而間接競(jìng)爭(zhēng)免疫檢測(cè)方法穩(wěn)定性較差。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種具有特異、靈敏、準(zhǔn)確、快速、方便、廉價(jià)的動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的一種動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測(cè)試劑盒，由盒體、包被板以及托架構(gòu)成，包被板和托架固裝在盒體內(nèi)，其特征在于該托架上設(shè)置有-(1)磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液凹孔其磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為812mg/L，使用時(shí)用稀釋液稀釋至卯105ng/L后，再按l:3稀釋六個(gè)梯度；(2)酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原工作液凹孔其酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原工作液使用時(shí)用酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原稀釋液按1:200倍稀釋；(3)酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原稀釋液凹孔其酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原稀釋液為磷酸鹽緩沖溶液，pH7.4，使用時(shí)用二次水按1:5稀釋；(4)底物顯色劑A液凹孔其底物顯色劑A液為含過(guò)氧化氫脲的醋酸鈉緩沖液；(5)底物顯色劑B液凹孔其底物顯色劑B液為含3，3'，5，5'-四甲基對(duì)二氨基聯(lián)苯(TMB)的二甲基亞砜溶液；(6)終止液凹孔其終止液為1.25mol/LH2S04;(7)濃縮洗滌液凹孔其濃縮洗滌液為1%吐溫的磷酸鹽緩沖液。而且，所述的包被板為96孔抗磺胺類藥物多克隆抗體預(yù)包被板，并且其由微孔條組成，其制備是由含多抗的磷酸鹽緩沖液(pH9.6)，包被2226小時(shí)，加入封閉液封閉、凍干、真空包裝。而且，所述的封閉液為含牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液。而且，所述的多克隆抗體是選用雌性大白兔進(jìn)行五次免疫后，由兔子的耳緣靜脈采集血液進(jìn)行效價(jià)檢測(cè)，并離心獲得抗血清，使用G-Sepharose蛋白親和層析柱對(duì)抗血清進(jìn)行純化。而且，所述的托架為泡沫塑料材質(zhì)或者紙制材質(zhì)。一種動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)方法包括以下步驟(1).室溫下樣品的前處理；(2).所有試劑及標(biāo)本在檢測(cè)實(shí)驗(yàn)前必須置室溫(20'Ci5。C左右)，將試劑盒打開，平衡12小時(shí)；(3).將酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原工作液用酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原稀釋液l:200稀釋(1份加199份稀釋液)，再將PBS加入空白孔，對(duì)磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液及待測(cè)樣品進(jìn)行雙孔平行加樣，同時(shí)加入稀釋后的酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原工作液，封板振蕩混勻13分鐘，室溫孵育0.51.5小時(shí)；(4).洗板機(jī)洗包被板4次，將孔內(nèi)液體甩掉，用吸水紙扣干，每孔加入底物顯色劑A液和底物顯色劑B液按14.6:0.45比例的混合液，室溫顯色25~35分鐘；(5).向孔中加入終止液，輕輕振蕩混勻，讀取450nm吸光值。本發(fā)明的有益效果和優(yōu)點(diǎn)是1.本發(fā)明具有特異、靈敏、準(zhǔn)確、快速、方便、廉價(jià)等特點(diǎn)，而且適用范圍較廣。主要適用于動(dòng)物肌肉、組織、肝臟、蛋類、牛奶及制品、水產(chǎn)品等各種動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物殘留量的檢測(cè)。其抗體具有良好的廣譜性和靈敏度，檢測(cè)極限低于100p^kg，所得抗體和酶標(biāo)抗原穩(wěn)定，具有常溫保藏時(shí)間長(zhǎng)的優(yōu)點(diǎn)。2.本發(fā)明提供的快速檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)便、快速，完成全部檢測(cè)操作過(guò)程只需1.5-2小時(shí)，而且檢測(cè)的精確度可達(dá)90%以上，非常適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的需要。由于抗體和酶標(biāo)抗原，在常溫下可以保藏1周、酶標(biāo)抗原包備的酶標(biāo)板在4t:下可以保藏6個(gè)月以上，從而為進(jìn)行大規(guī)模樣品的集中檢測(cè)，提供了極大的方便。3.本發(fā)明成本低廉、檢測(cè)效率高、操作簡(jiǎn)便，既有經(jīng)濟(jì)效益又有社會(huì)效益，是一種創(chuàng)新性較高的具有良好的應(yīng)用前景的動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測(cè)的試劑盒。圖1為本發(fā)明動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測(cè)試劑盒托架的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為本發(fā)明動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測(cè)試劑盒包被板的結(jié)構(gòu)示意圖；圖3為本發(fā)明七種磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體實(shí)施方式本發(fā)明通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步詳述，下述實(shí)施例是說(shuō)明性的，不是限定性的，不能以下述實(shí)施例來(lái)限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測(cè)試劑盒，由盒體(未視出)、包被板9以及托架1構(gòu)成，包被板采用96孔抗磺胺類藥物多克隆抗體預(yù)包被板和托架固裝在盒體內(nèi)，其中托架上設(shè)置有磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液凹孔5，其磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為10mg/L，使用時(shí)用稀釋液稀釋至100)ig/L后，再按1:3稀釋六個(gè)梯度；酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原工作液凹孔3，其酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原工作液使用時(shí)用酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原稀釋液按1:200倍稀釋；酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原稀釋液凹孔6，其酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原稀釋液為50mmol/L磷酸鹽-0.9%NaCl緩沖溶液，pH7.4，使用時(shí)用二次水按1:5稀釋；底物顯色劑A液凹孔7:其底物顯色劑A液含過(guò)氧化氫脲的醋酸鈉緩沖液；底物顯色劑B液凹孔8:其底物顯色劑B液含3,3'，5,5'-四甲基對(duì)二氨基聯(lián)苯(TMB)的二甲基亞砜溶液；終止液凹孔4，其終止液為1.25mol/LH2S04;濃縮洗滌液凹孔2，其濃縮洗滌液為1%吐溫的磷酸鹽緩沖液。一種應(yīng)用在動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)方法包括以下步驟1.室溫下樣品的前處理稱取樣品與緩沖液劇烈混勻2min，濾紙過(guò)濾，用移液器取濾液以l:4倍稀釋，樣品稀釋倍數(shù)20倍。2.所有試劑及標(biāo)本在檢測(cè)實(shí)驗(yàn)前必須置室溫(2(TC士5'C左右)，將試劑盒打開，平衡l小時(shí)以上；3.將酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原工作液用酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原稀釋液1:200稀釋(l份加199份稀釋液)，再將PBS加入空白孔，對(duì)磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液及待測(cè)樣品進(jìn)行雙孔平行加樣，同時(shí)加入稀釋后的酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原工作液，封板振蕩混勻2分鐘，室溫孵育l小時(shí)；4.洗板機(jī)洗包被板4次，將孔內(nèi)液體甩掉，用吸水紙扣千，每孔加入底物顯色劑A液和底物顯色劑B液按14.6:0.45比例的混合液，室溫顯色30分鐘；5.向孔中加入終止液，輕輕振蕩混勻，讀取450nm吸光值。下面通過(guò)一具體實(shí)例，對(duì)本發(fā)明的效果進(jìn)行敘述。檢測(cè)豬肉樣品中殘留的的磺胺類藥物l.樣品處理稱取4克樣品與20mLPBS緩沖液劇烈混勻2min，濾紙過(guò)濾，用移液器取濾液以1:4倍稀釋(50PBS緩沖液加150pL濾液)。樣品稀釋倍數(shù)20倍。其中以上所有試劑和樣品處理必須室溫下進(jìn)行。樣品檢測(cè)所有試劑及標(biāo)本在檢測(cè)實(shí)驗(yàn)前必須置室溫(2(TC士5X:左右)，將試劑盒打開，平衡1小時(shí)以上；取出框架及需要數(shù)量的微孔條，將不用的微孔條放入自封袋，保存于4'C;根據(jù)所需用量將酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原工作液用酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原稀釋液l:200稀釋(l份加199份稀釋液)，僅供現(xiàn)檢測(cè)用。(未經(jīng)稀釋的酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原于4'C保存)；加樣設(shè)空白孔一孔，加PBS100iiL;將標(biāo)準(zhǔn)溶液及待測(cè)樣品進(jìn)行雙孔平行加樣100^iL，同時(shí)加入稀釋后的酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原工作液100mL;封板振蕩混勻2分鐘，室溫孵育1小時(shí)；洗板機(jī)洗板4次，將孔內(nèi)液體甩掉，用吸水紙扣干，每孔加入顯色劑A和顯色劑B按0.45:14.6比例混合(用前15分鐘內(nèi)混合)的混合液150jiL，室溫顯色30分鐘；每孔加入終止液5(HiL，輕輕振蕩混勻，讀取450nm吸光值(以空白孔作零吸光值，建議用雙波長(zhǎng)450/650nm檢測(cè)，在加入終止液15分鐘內(nèi)讀完數(shù)據(jù))。2.結(jié)果的計(jì)算(1)計(jì)算抑制率值按公式(A)計(jì)算不同濃度磺胺藥物對(duì)抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的抑制率IC%=;^樣品-zJ空白—,4對(duì)照-^空白x100....................................(A)式中IC%一磺胺藥物對(duì)抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的抑制率；A——450nm吸光值與650nrn吸光值的差值；A樣品一磺胺藥物標(biāo)準(zhǔn)液或樣液的平均吸光度值；A空白——不加入酶標(biāo)及磺胺藥物標(biāo)準(zhǔn)液的平均吸光度值。(2)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線以抑制率為縱坐標(biāo)，磺胺藥物濃度對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)繪制校正曲線。每次試驗(yàn)均應(yīng)重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖3。(3)結(jié)果計(jì)算從圖1繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣液抑制率所對(duì)應(yīng)的磺胺藥物濃度(C)，按公式(B)計(jì)算試樣中的磺胺藥物殘留量X=CxR....................................(B)式中X——試樣中磺胺藥物殘留量，單位為微克每千克(^g/kg);C——根據(jù)樣品孔的抑制率查得試樣中磺胺藥物濃度，單位為微克每升R——某類樣品換算系數(shù)，分別為豬肉25;雞肉25;豬肝20;雞蛋25;牛奶40;魚25;3.試劑盒靈敏度、特異性、精密度、準(zhǔn)確度和保存期試驗(yàn)a)試劑盒靈敏度試驗(yàn)50%抑制濃度(即IC5o，指O標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值的50%處所對(duì)應(yīng)的藥物濃度)常作為評(píng)價(jià)競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒靈敏度的指標(biāo)，分別測(cè)定20次標(biāo)準(zhǔn)曲線的50%抑制濃度，確定該試劑盒七種磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)曲線ICsc應(yīng)在1.314pg/L的范圍之內(nèi)。分別測(cè)定20份豬肉、雞肉、魚、雞蛋、豬肝、牛奶的空白樣品及20份磺胺0標(biāo)準(zhǔn)品，并將測(cè)定平均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)差作為最低檢測(cè)限。結(jié)果判定該試劑盒對(duì)磺胺二甲異噁唑，磺胺噻唑，磺胺甲氧嘧啶，磺胺甲氧噠嗪，磺胺吡啶，磺胺甲基硫代二嗪，磺胺氯達(dá)嗪的檢出限分別為0.1，0.2，0.4，1.5，1.6，2.1，3.0ng/L。對(duì)實(shí)際樣品的最低檢測(cè)限見表1，除牛奶中的磺胺氯達(dá)嗪外，均能滿足最大殘留限量的要求。表l實(shí)際樣品中七種磺胺類藥物的最低檢測(cè)限<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>(2)試劑盒特異性試驗(yàn)以抗體與結(jié)構(gòu)類似化合物的交叉反應(yīng)程度，以抑制抗體最大結(jié)合率的50^所需目標(biāo)分析物的濃度IC5。i與所需各種結(jié)構(gòu)類似化合物的濃度IC5。m之比的百分?jǐn)?shù)表示，即交叉反應(yīng)率C.R(X)。C.R(%)=IC50i/IC50m*100交叉反應(yīng)越小，抗體特異性越高，交叉反應(yīng)越大，抗體廣譜性越高。試劑盒廣譜性試驗(yàn)結(jié)果如表2所示，結(jié)果表明該試劑盒對(duì)7種磺胺類藥物的交叉反應(yīng)率均210%，說(shuō)明該試劑盒針對(duì)磺胺類藥物的廣譜性較好，可保證對(duì)動(dòng)物源性食品中七種磺胺類藥物的同時(shí)檢測(cè)。表216種磺胺類藥物對(duì)磺胺二甲異噁唑的交叉反應(yīng)率<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>磺胺甲氧噠嗪8.415磺胺吡啶1013磺胺甲基硫代二嗪12.810磺胺氣達(dá)嗪149磺胺甲基嘧啶19"7磺胺多辛314磺胺嘧啶324磺胺喹沙啉卯1.4磺胺二甲嘧啶1301磺胺甲噁唑1351磺胺噁唑1500.9磺胺地索辛1900.7磺胺異噁挫>200<0.7(3)試劑盒精密度試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)可重復(fù)性從三批酶標(biāo)板中，每板各抽出20個(gè)微孔，測(cè)定同一濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值(OD值)，重復(fù)測(cè)定10次，計(jì)算變異系數(shù)，變異系數(shù)范圍在0.89%13.02%。樣品可重復(fù)性取不同濃度的磺胺標(biāo)樣，添加到樣品中，分別取三個(gè)不同批次的試劑盒各三個(gè)，每個(gè)濃度重復(fù)5次，分別計(jì)算板內(nèi)，批內(nèi)，批間變異系數(shù)。動(dòng)物組織的變異系數(shù)均低于15%，肝臟的變異系數(shù)均低于21%，蛋類的變異系數(shù)均低于16%，牛奶的變異系數(shù)均低于18%。試劑盒的準(zhǔn)確度-取3個(gè)濃度的磺胺標(biāo)樣，對(duì)樣品進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，每個(gè)濃度設(shè)4個(gè)平行，分別計(jì)算回收率，見表3。表3不同樣品中磺胺類藥物的加標(biāo)回收率待測(cè)物添加水平樣品豬肉雞肉豬肝蛋類牛奶魚磺胺二甲異噁唑5076.699.8131.5103.7104.981.51008U92.398.896.7111.995.720081.6訓(xùn)84.9113.6119.080.3磺胺噻唑50120.0102.065.0110.5115.998.5100103.189.682.4105.8113.6105.2200跳8101.588.5122.0104.0歸磺胺甲氧嘧啶5082.5135.8131.9125.4111.277.610080.0118.0113.1U4.7124.483.620077.995.613U121.5130.975.7磺胺甲氧噠嗪5099.5132.4134.7122.1117.8119.510079.3115.5107.8101.3119.299.220068.2122.5109.9116.8123.581.0<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>(4)試劑盒保存期試驗(yàn)試劑盒保存條件為2-8°C，經(jīng)過(guò)6個(gè)月的測(cè)定，試劑盒的最大吸光度值(零標(biāo)準(zhǔn))、50%抑制濃度、磺胺添加實(shí)際測(cè)定值均在正常范圍之內(nèi)。考慮在運(yùn)輸和使用過(guò)程中，會(huì)有非正常保存條件出現(xiàn)，將試劑盒在37'C保存的條件下放置6天，進(jìn)行加速老化實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明該試劑盒各項(xiàng)指標(biāo)完全符合要求?？紤]到試劑盒冷凍情況發(fā)生，將試劑盒放入-20'C冰箱冷凍5天，測(cè)定結(jié)果也表明試劑盒各項(xiàng)指標(biāo)完全正常。從以上結(jié)果可得出試劑盒可以在2-8'C至少可以保存6個(gè)月以上。權(quán)利要求1.一種動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測(cè)試劑盒，由盒體、包被板以及托架構(gòu)成，包被板和托架固裝在盒體內(nèi)，其特征在于該托架上設(shè)置有(1)磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液凹孔其磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為8～12mg/L，使用時(shí)用稀釋液稀釋至90～105μg/L后，再按1∶3稀釋六個(gè)梯度；(2)酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原工作液凹孔其酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原工作液使用時(shí)用酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原稀釋液按1∶200倍稀釋；(3)酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原稀釋液凹孔其酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原稀釋液為磷酸鹽緩沖溶液，pH7.4，使用時(shí)用二次水按1∶5稀釋；(4)底物顯色劑A液凹孔其底物顯色劑A液為含過(guò)氧化氫脲的醋酸鈉緩沖液；(5)底物顯色劑B液凹孔其底物顯色劑B液為含3，3′，5，5′-四甲基對(duì)二氨基聯(lián)苯(TMB)的二甲基亞砜溶液；(6)終止液凹孔其終止液為1.25mol/LH2SO4；(7)濃縮洗滌液凹孔其濃縮洗滌液為1％吐溫的磷酸鹽緩沖液。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的包被板為96孔抗磺胺類藥物多克隆抗體預(yù)包被板，并且其由微孔條組成，其制備是由含多抗的磷酸鹽緩沖液(pH9.6)，包被22~26小時(shí)，加入封閉液封閉、凍千、真空包裝。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的封閉液為含牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的多克隆抗體是選用雌性大白兔進(jìn)行五次免疫后，由兔子的耳緣靜脈采集血液進(jìn)行效價(jià)檢測(cè)，并離心獲得抗血清，使用G-Sephamse蛋白親和層析柱對(duì)抗血清進(jìn)行純化。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的托架為泡沫塑料材質(zhì)或者紙制材質(zhì)。6.—種動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)方法包括以下步驟(1).室溫下樣品的前處理；(2).所有試劑及標(biāo)本在檢測(cè)實(shí)驗(yàn)前必須置室溫(2(TC士5'C左右)，將試劑盒打開，平衡12小時(shí)；(3).將酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原工作液用酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原稀釋液l:200稀釋(1份加199份稀釋液)，再將PBS加入空白孔，對(duì)磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液及待測(cè)樣品進(jìn)行雙孔平行加樣，同時(shí)加入稀釋后的酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原工作液，封板振蕩混勻1~3分鐘，室溫孵育0.5~1.5小時(shí)；(4).洗板機(jī)洗包被板4次，將孔內(nèi)液體甩掉，用吸水紙扣干，每孔加入底物顯色劑A液和底物顯色劑B液按14.6:0.45比例的混合液，室溫顯色25~35分鐘；(5).向孔中加入終止液，輕輕振蕩混勻，讀取450nm吸光值。全文摘要本發(fā)明屬于食品檢測(cè)分析
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其是一種動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法，該試劑盒由盒體、包被板以及托架構(gòu)成，包被板和托架固裝在盒體內(nèi)，其中該托架上設(shè)置有(1)磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液凹孔；(2)酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原工作液凹孔；(3)酶標(biāo)記的磺胺類藥物抗原稀釋液凹孔；(4)底物顯色劑A液凹孔；(5)底物顯色劑B液凹孔；(6)終止液凹孔；(7)濃縮洗滌液凹孔。本發(fā)明具有特異、靈敏、準(zhǔn)確、快速、方便、廉價(jià)等特點(diǎn)，而且適用范圍較廣，檢測(cè)效率高，操作簡(jiǎn)便，既有經(jīng)濟(jì)效益又有社會(huì)效益。文檔編號(hào)G01N33/543GK101221172SQ20071005643公開日2008年7月16日申請(qǐng)日期2007年1月11日優(yōu)先權(quán)日2007年1月11日發(fā)明者燕張,張鴻雁,碩王,磊王,鄭文杰申請(qǐng)人:天津科技大學(xué)