通過光學路徑檢測和直接鑒定生物學樣品中的微生物的方法
【專利摘要】本發(fā)明大體上涉及分析領域，例如生物學分析。更具體地，本發(fā)明涉及一種檢測至少一種存在于樣品中的微生物的方法，所述方法主要包括下述步驟：a)在第一容器中，使所述樣品與至少一種培養(yǎng)基接觸；b)將第一容器放置于合適的條件下以允許一種或多種微生物的生長；c)在所述第一容器中或在第二容器中，使一些或全部包含所述樣品與所述培養(yǎng)基的混合物與反應混合物和用于捕獲所述微生物基材接觸，所述反應混合物包含用于檢測所述微生物的檢測劑；d)在所述第一或第二容器中，檢測通過檢測劑所檢測到的并固定在捕獲基材上的微生物的存在。
【專利說明】通過光學路徑檢測和直接鑒定生物學樣品中的微生物的方 法
[0001] 本發(fā)明大體上涉及分析領域，例如生物學分析。更具體地，本發(fā)明涉及一種通過光 學路徑在生物學樣品中檢測和直接鑒定至少一種微生物的方法，任選地，所述生物學樣品 是富集的。
[0002] 微生物學分析需要精確的方法，其中獲得結果的時間需要盡量縮短。
[0003] 在醫(yī)學領域，預測和診斷感染的風險是必需的：診斷越快越精確，對病人的管理越 有效，從而使傳染的風險最小化。對于動物健康，方法是相似的。
[0004] 在食品工業(yè)中有相同的問題。然而，在下列目標之間是有區(qū)別的：
[0005] -病原微生物及其毒素，其研究應用于原材料、中間產物和銷售的最終產品，
[0006] -非病原微生物，其用作生產流程質量的指示物，從原材料到最終產品，貫穿生產 鏈，以及
[0007] -技術上感興趣的細菌，例如酵母。
[0008] 快速而精確地檢測可疑污染物，使得控制它們并實施矯正措施成為可能。
[0009] 技術上，微生物學分析可以采用一或多個預富集和/或富集步驟，一或多個檢測 步驟，以及一或多個微生物計數步驟。對于特殊應用例如食品工業(yè)中的微生物學控制，可能 也需要確認步驟，以便符合本領域的有效標準。
[0010]目前，沒有不采用富集步驟，而在大初始量的樣品中檢測目標微生物的方法。
[0011] 所述富集步驟采用選擇性或非選擇性培養(yǎng)基，其目的是促進生物學樣品或環(huán)境樣 品中的目標微生物生長，同時限制非目標群（flora)的生長。培養(yǎng)基通常在消毒的塑料袋 型的容器中使用，在其中所述培養(yǎng)基與食物樣品或環(huán)境樣品接觸，從而對待測微生物進行 重懸和富集。為了符合檢測一些樣品中的至少一種目標微生物的潛在的初始存在的要求， 這一步是必需的，所述一些樣品通常是可變的并且范圍是很大的，例如25克（g)至357g稀 釋到225至3375毫升（mL)的培養(yǎng)基中。在富集步驟結束時，取一份富集產物（從5微升 (yL)至5mL)實施檢測目標微生物的步驟?，F在，這一份富集產物必須包含足夠量的目標 微生物以確保其被系統(tǒng)地檢測到。于是可能需要二次富集或再次培養(yǎng)的步驟。
[0012] 從前，檢測步驟是基于在瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)微生物，以檢測待測微生物的代謝特 征。常規(guī)地，使用特定的酶底物。這些酶底物一般包含兩部分，第一部分具有待測的酶活性 的特異性，也稱為目標部分，第二部分作為標記物，稱為標記部分，通常包含發(fā)色團或熒光 團?；谶@些底物的選擇，取決于是否有反應，可以表征微生物的特性或區(qū)分不同組的微生 物。因此，染色或熒光的出現與否將是一個屬或一類微生物的標志。在這方面，使用產色的 培養(yǎng)基使得可以對待測微生物同時進行檢測和鑒定。其簡化了流程并極大縮短了獲得結果 的時間。舉一個具體的實例， 申請人:的ChromID?培養(yǎng)基。這些產色的培養(yǎng)基基于檢測待 測微生物的特定代謝特征，例如用于大腸桿菌（Esherichia coli)的β-葡萄糖醒酸酶酶 活性。
[0013] 免疫分析構成用于檢測測試的另一種技術。其使用待測微生物的免疫特性。非窮 舉地，例如熒光免疫技術，ELISA(酶交聯免疫吸附試驗）技術，競爭性的或三明治型的。這 些技術采用一種叫做間接檢測的步驟，所述間接檢測采用與酶綴合的二抗，通過所述酶的 特異性底物進行后續(xù)檢測。
[0014] 例如文獻EP-B-1 440 316描述了一種用于檢測微生物的裝置。該裝置包括固體 基材，其上固定了目標微生物特異性的捕獲伴侶（partner)，例如抗體。隨后將捕獲基材置 于包含待分析樣品和進行ELISA反應的各種反應試劑的各種容器中。
[0015] 這一稱作間接檢測的步驟涉及（在富集步驟之后）在篩選/檢測步驟之前對樣品 執(zhí)行各種處理步驟（取樣、加熱、離心、洗滌等），結果導致操作方案更加復雜，分析更不方 便，增加獲得結果的時間。
[0016] 最后，基于待測微生物的基因組特性，也采用分子生物學技術檢測和鑒定目標微 生物，例如，常規(guī)擴增技術諸如PCR (聚合酶鏈式反應）和NASBA (基于核苷酸序列的擴增）， 其可以和本領域技術人員已知的實時檢測技術結合。然而，這些技術所需的制備樣品的步 驟是費力的，其包括分離微生物，將其裂解以釋放核苷酸，以及最后純化核酸。這也對操作 方案的復雜性有直接影響，使分析更不方便，增加獲得結果的時間。
[0017] 確認步驟尤其與食品工業(yè)中的微生物學分析有關。實際上，當之前開發(fā)的方法結 果呈陽性時，需要確認待測病原的存在。這需要進行額外的測試并使用與第一次分析中所 用的不同的檢測原理。上述技術用于有空閑時進行確認。
[0018] 因此完全且精確地鑒定樣品中的微生物需要幾個連續(xù)步驟：富集、任選地再次培 養(yǎng)、檢測和確認。標準化常規(guī)使用的測試使檢測方法可以自動化進行，但仍需要花費很長時 間?，F有技術的缺點實際上是這些步驟順序執(zhí)行且需要大量費時的操作，因此影響獲得結 果的時間。
[0019] 考慮到上述提到的現有技術存在的技術問題，本發(fā)明的一個主要目的是提供一種 檢測、鑒定和確認存在于樣品中，尤其是食物樣品中，的微生物的簡化的方法。
[0020] 本發(fā)明的另一個目的是提供一種檢測和鑒定微生物的方法，其可以減少樣品分析 所必需的時間和成本。
[0021] 其中，這些目的通過本發(fā)明實現。本發(fā)明首先涉及檢測至少一種微生物的方法，所 述方法主要包含以下步驟：
[0022] a)在第一容器中，使所述樣品與至少一種培養(yǎng)基接觸，
[0023] b)將第一容器放置于合適的條件下以使得一種或多種微生物的生長，
[0024] c)在所述第一容器中或在第二容器中，使一些或所有包含樣品與培養(yǎng)基的混合物 與反應混合物和基材接觸用來捕獲所述一種（多種）微生物，所述反應混合物包含用于檢 測所述微生物的檢測劑（means)，
[0025] d)在所述第一或第二容器中，檢測通過檢測劑（detecting means)所檢測到的并 固定到捕獲基材上的一種或多種微生物的存在。
[0026] 根據一個具體的實施方式，本發(fā)明的方法包括中間步驟c'），其包括將第一或第二 容器放置于合適的條件下以使得一種或多種微生物生長。
[0027] 根據另一個具體的實施方式，本發(fā)明的方法包括附加步驟e)，其包括對所檢測到 的一種或多種微生物的確認檢測。優(yōu)選地，確認步驟e)使用與檢測步驟相同或不同的檢測 劑來實施。
[0028] 有利地，將一種或多種微生物的至少一種特異性或非特異性的結合伴侶固定在捕 獲基材上。根據本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方式，所述特異性的結合伴侶選自：抗體、Fab片段、 Fab'片段、適體（aptamer)、重組或非重組噬菌體蛋白質、噬菌體或本領域技術人員已知的 任何其他配體。
[0029] 所述捕獲基材可以是能夠檢測所述微生物的任何合適的基材。尤其是微?；?， 任選地，其是磁性的，或單片基材，任選地，其是孔狀的。所述基材可以非常簡單地是惰性基 材，例如由塑料或玻璃纖維制成的板。有利地，所述捕獲基材可以用結合伴侶進行敏化，任 選地，所述結合伴侶是特異性的。所述捕獲基材也可以是可壓縮的單片基材。
[0030] 有利地，基材可以用保護膜保護。
[0031] 根據另一個具體的實施方式，可以用相同的技術實行檢測和確認。
[0032] 優(yōu)選地，對一種或多種微生物實施實時檢測。然而，作為另一個選擇，可以在結束 點，在所述微生物的生長步驟結束時對一種或多種微生物實施檢測。
[0033] 根據本發(fā)明方法的一個具體的實施方式，所述第一和/或第二容器是均質化袋。 它們也可以是剛性容器，如燒瓶、瓶或平板容器。
[0034] 根據本發(fā)明方法的另一個具體的實施方式，所述檢測步驟可以使用讀取器實施。 這種讀取器可以包括，例如，對著捕獲基材的照相機，其用于記錄或分析支持物的圖像。
[0035] 根據下面給出的詳細描述結合附圖將會更好地理解本發(fā)明的目的和優(yōu)點，其中：
[0036] -圖1是本發(fā)明第一實施方式的方法的不同步驟的示意圖。
[0037]-圖2是敏化的捕獲基材的示意圖。
[0038] -圖3是圖2中敏化的捕獲基材分析后呈陽性結果的示意圖。
[0039] 根據本發(fā)明的第一實施方式，用于檢測或鑒定微生物的方法包括采用滅菌的塑料 均質化袋，通常稱為Stomacher?袋。這種袋在圖1A中標記為10。袋10包含兩個大致是 矩形的塑料片，其三條邊接合在一起，以限定內部空間，用來接納培養(yǎng)基和待分析樣品。所 述袋10還包含大致是矩形的濾器12,連接于片的一側，把內部空間一分為二。
[0040] 在步驟A中，關閉的均質化袋10與食物樣品14 一起溫育，所述食物樣品在此種情 況下包含未用巴氏法滅菌的奶酪樣品。該食物樣品14浸沒于富集培養(yǎng)基16中，所述培養(yǎng) 基可以是選擇性的或非選擇性的?？梢栽?5到44°C的溫度溫育6到48小時。
[0041] 在步驟B中，隨后取均質化袋10中的一部分富集培養(yǎng)基并轉移到第二容器中，此 處包括管20。管20包含反應混合物22。所述反應混合物22包含能夠維持目標微生物完 整性的稀釋劑（例如胰蛋白胨鹽液體培養(yǎng)基）以及至少一種檢測劑。所述檢測劑可以是一 種染料，其能夠將從食物樣品14中獲取的、存在于所轉移的部分富集培養(yǎng)基中的微生物染 色。所述檢測劑也可以是能夠使所述微生物發(fā)熒光的熒光化合物。當我們希望在管20中 進行再次培養(yǎng)時，反應混合物除了含有營養(yǎng)劑，還可以含有選擇系統(tǒng)，其使得目標細菌的種 群數量可以增加。
[0042] 根據一個具體的實施例，所述檢測劑是氯化三苯基2-3-5四氮唑（TTC)，其會被微 生物還原。隨著微生物的生長，TTC(在非還原狀態(tài)下無色）被所述微生物內吞，然后在細 胞質中被細胞質還原成三苯基甲瓚（紅色），從而將所述微生物染成紅色，這樣就能夠在所 述基材上檢測所述微生物。也可以使用其他四氮唑鹽（CTC，MTT等）。此外，可以在反應混 合物中添加加快四氮唑鹽還原反應的化合物。
[0043] 也可以考慮使用細胞膜染色劑，例如龍膽紫或品紅。
[0044] 在檢測劑是熒光化合物的情況下，其可以是吖啶橙或熒光素二乙酸酯。
[0045] 在步驟C中，將敏化的捕獲基材24放于管20中，并通過任何合適手段浸沒于反 應混合物22中。用待測的目標微生物的至少一種特異性結合伴侶對所述敏化的捕獲基材 24進行功能化。所述捕獲基材可以含有任何適用于固定特異性結合伴侶的且為本領域技 術人員所熟知的基材。作為一個非限制性實例，合適的捕獲基材可由經輻射的聚苯乙烯，例 如Nunc/Thermo Scientific公司銷售的產品（Cat.No. 472230)，制成。在圖2中圖示了這 種類型的捕獲基材，標記為24。根據一優(yōu)選的實施方式，有利地，下面部分可以分為兩個區(qū) 域。標記為241的區(qū)域可以用結合伴侶（多克隆抗體、單克隆抗體、Fab'或Fab'2片段、適 體、噬菌體蛋白質）進行敏化，而上部242保持空白不結合任何伴侶，從而發(fā)揮陰性對照的 作用。用特異性結合伴侶敏化基材的技術是本領域技術人員所熟知的。
[0046] 根據本發(fā)明方法的一種替代方法，捕獲基材24浸沒于反應混合物22之后，實施 再次培養(yǎng)的步驟可能是有利的。再次培養(yǎng)包括將管20在25到44°C的溫度溫育1到18小 時。根據這種替代方法，由于反應混合物中含有檢測劑，使得微生物染色的強度隨著其生長 同時增加。分析可以實時實施。
[0047] 有效地捕獲一定量的染色的或發(fā)熒光的目標微生物（在樣品為陽性的情況下）之 后，通過基材上的著色或熒光的出現，基材的光學特性發(fā)生改變（即生物學信號轉導）。隨 后，捕獲基材的著色或熒光可以肉眼觀察或使用例如照相機的自動讀取器測量。圖3圖示 了在具有陽性結果的分析后捕獲基材的示意圖。可以看到，區(qū)域241由于在特異性結合伴 侶上固定目標微生物而顯色。作為陰性對照的部分，即區(qū)域242,仍然具有捕獲基材的初始 顏色。
[0048] 為了有助于讀取，優(yōu)選地，敏化的捕獲基材應該不再與反應混合物接觸。為此，可 以設想，例如，通過任何合適的手段從所述反應混合物移除捕獲基材24,如圖1步驟D中所 清楚顯示的。如上所述，可以在結束點進行讀取，如虛線所示或實時讀取。
[0049] 根據本發(fā)明方法的另一替代方法，所述捕獲基材包括敏化顆粒，即包含一種或多 種待測微生物的特異性或非特異性結合伴侶。優(yōu)選地，檢測由初始無色的敏化顆粒著色或 熒光的出現進行指示的，所述著色或熒光的出現由于在反應中目標微生物與所述敏化顆粒 結合而產生的。
[0050] 根據一【具體實施方式】，所述敏化顆?？梢允谴判灶w粒。讀取可以使用能夠聚集磁 性顆粒的磁化系統(tǒng)手動且可視地進行，所述磁性顆粒上捕獲了染色的或發(fā)熒光的微生物， 所述磁性顆粒在容器壁上成簇聚集。將磁化系統(tǒng)垂直向上移動使得磁性顆粒簇能夠從反應 混合物中移除，從而幫助分析。也可以設想將磁化系統(tǒng)直接浸沒于容器中，以收集其上固定 有微生物的磁性顆粒。在這種情況下，所述磁性顆粒將會直接固定在磁化系統(tǒng)上，隨后顯色 或發(fā)熒光。
[0051] 根據本發(fā)明方法的另一實施方式，如上所述的反應混合物和捕獲基材在富集步驟 結束時直接添加到所述第一容器中。由此，所述檢測步驟在所述第一容器中進行，而不需將 部分或全部包含培養(yǎng)基和待分析樣品的混合物轉移到第二容器。在檢測步驟之前，任選地， 可以實施再次培養(yǎng)以增加目標微生物的種群數量。
[0052] 有利地，應該注意的是，所述捕獲基材可以用保護膜保護。使用該膜的目的是防止 捕獲基材污染。實際上，這種污染會影響所述基材的捕獲性能。這種膜可以永久置于捕獲 基材上?；蛘?，其可以是一種與液體培養(yǎng)基接觸一段時間后能偶溶解的膜。
[0053] 本發(fā)明的方法是特別有利的，因為在分析結束時，只打開通過檢測系統(tǒng)（下面描 述的）鑒定為陽性的容器以實施附加的分析來確定獲得的假定結果。確認步驟可以采用與 本發(fā)明方法不同的技術手段來實施。
[0054] 下面介紹的實施例的目的是呈現根據本發(fā)明方法的不同實施方式和所獲得的結 果。其并不以任何方式限制本發(fā)明。 實施例
[0055] 實施例1 :通過敏化基材光學檢測食物樣品中的那不勒斯沙門氏菌（Salmonella Napoli)，所述食物樣品在反應混合物中進行再次培養(yǎng)
[0056] 本實驗的目的是直接檢測食物樣品中目標細菌那不勒斯沙門氏菌的存在，所述食 物樣品在反應混合物中再次培養(yǎng)，所述檢測通過敏化基材進行，所述敏化基材如圖2和3所 示，且由Nunc/Thermo Scientific公司銷售的經福射的聚苯乙烯（Cat. No. 472230)制成。
[0057] 如下所述，在反應步驟的期間通過將捕獲基材浸沒于含有富集樣品的管中進行檢 測，所述基材以具有沙門氏菌特異性的重組噬菌體蛋白質進行敏化，所述富集樣品在反應 混合物中稀釋到1/100。
[0058] 方案：
[0059] 步驟1 :在初級富集培養(yǎng)基中重懸樣品
[0060] 如下制備兩組樣品：
[0061] 樣品A:在均質化袋中，將具有5集落形成單位（CFU)的那不勒斯沙門氏菌的25g 未用巴氏消毒法消毒的奶酪重懸于225mL Buffered Peptone Water(BPW)(bioM6rieux， Ref. 42043)中，并補充 lml Supplement SPT(bioM6rieux，Ref. 42650);
[0062] 樣品B :在均質化袋中，將沒有那不勒斯沙門氏菌污染的25g未用巴氏消毒法 消毒的奶酪重懸于 225mL BPW(bioM6rieux，Ref. 42043)中，并添加 1ml Supplement SPT(bioM6rieux，Ref. 42650)。
[0063] 步驟2 :溫育16小時后，將0. lmL每份的樣品從均質化袋中轉移到反應管中
[0064] 將0· lmL樣品A從均質化袋中轉移到含有10mL SX2 (bioM6rieux，Ref. 42121)和 1.6g/L 的 TTC(bioM6rieux，Cat. No. 04568088)的反應管中。由此得到樣品 A'。
[0065] 對樣品B實施相似的操作。
[0066] 步驟3 :在再次培養(yǎng)和反應之前將敏化基材浸沒于反應管中
[0067] 將敏化的捕獲基材放到各管中（樣品A'和B'）。然后再次關閉管，在37°C溫箱中 溫育6h。
[0068] 步驟4 :在溫育時間結束時讀取捕獲基材
[0069] 在溫育結束時（37°C，6h)以及由樣品中存在的所有細菌（即屬于附加群和目標 群）非特異性還原TTC后，反應混合物變成紅色。因此，為了觀察捕獲基材，顯示所分析的 樣品是陽性還是陰性，將管傾斜以便從反應混合物中分離所述捕獲基材。
[0070] 根據實驗設計，置于樣品A'中的捕獲基材呈現紅色，確認樣品A'是陽性的； 而置于樣品B'中的捕獲基材保持無色，確認樣品B'是陰性的。通過 申請人:銷售的 VIDAS?SPT (ref. 30707)方法分析這些相同的樣品，導致相同的結果，從而確認通過光 學讀取敏化捕獲基材而獲得的結果。
[0071] 實施例2 :通過將敏化基材浸沒于反應混合物，在富集的生物學樣品中光學檢測 那不勒斯沙門氏菌。
[0072] 本實驗的目的是直接檢測富集的食物樣品中目標細菌那不勒斯沙門氏菌的存 在，所述檢測通過敏化基材的方法進行，所述敏化基材如圖2和3所示，且由Nunc/Thermo Scientific公司銷售的經輻射的聚苯乙烯（Cat. No. 472230)制成。
[0073] 如下所述，在反應步驟的期間通過將捕獲基材浸沒于含有富集樣品的管中進行檢 測，所述基材以抗沙門氏菌的重組噬菌體蛋白質進行敏化，所述富集樣品在反應混合物中 稀釋到1/2。
[0074] 方案：
[0075] 步驟1 :在初級富集培養(yǎng)基中重懸樣品
[0076] 如下制備兩組樣品：
[0077] 樣品A :在均質化袋中，將由那不勒斯沙門氏菌污染的25g切碎的牛排重 懸于 225mL 的 Buffered Peptone Water (BPW) (bioM6rieux，Ref. 42043)中，并添加 lmlSupplement SPT(bioMerieux, Ref.42650)；
[0078] 樣品B :在均質化袋中，將沒有拿破力（Napoli)沙門氏菌污染的25g切碎的牛排 重懸于 225mL 的 BPW(bioM6rieux，Ref. 42043)中，并添加 lml 添加劑 SPT(bioM6rieux， Ref. 42650) 〇
[0079] 步驟2 :溫育16小時之后，將1-mL每份的樣品從均質化袋中轉移到反應管中
[0080] lmL樣品A從均質化袋中轉移到含有l(wèi)mL胰蛋白胨鹽（bioM6rieux，Ref. 42076)并 加有10 μ L龍膽紫（bioM6rieux，Ref. 55545)的反應管中。由此得到樣品A'。
[0081] 對樣品B實施相似的操作。
[0082] 步驟3 :在反應之前將敏化基材浸沒于反應管中
[0083] 如下所述，將敏化的捕獲基材放到各管中（樣品A'和B'）。然后反應期間再次關 閉管，
[0084] 步驟4 :在溫育時間結束時讀取捕獲基材
[0085] 在反應結束時（室溫下40min)，樣品中存在的所有細菌（即屬于附加群和目標 群）被染成紫色。因此，為了能夠觀察捕獲基材，顯示分析的樣品是陽性還是陰性，將管傾 斜以便從反應混合物中分離所述捕獲基材。
[0086] 根據實驗設計，置于樣品A'中的捕獲基材呈現紫色，確認樣品A'是陽性的； 而置于樣品B'中的捕獲基材保持無色，確認樣品B'是陰性的。通過 申請人:銷售的 VIDAS?SPT (ref. 30707)方法，分析這些相同的樣品，導致相同的結果，因此確認通過 肉眼讀取敏化的捕獲基材所獲得的結果。
【權利要求】
1. 檢測至少一種存在于樣品中的微生物的方法，所述方法主要包括下述步驟： a) 在第一容器中，使所述樣品與至少一種培養(yǎng)基接觸， b) 將所述第一容器放置于合適的條件下以使得一種或多種微生物生長， c) 在所述第一容器中或在第二容器中，使一些或所有包含樣品與培養(yǎng)基的混合物與反 應混合物和用于捕獲所述微生物的基材接觸，所述反應混合物包含用于檢測所述微生物的 檢測劑； d) 在所述第一或第二容器中，檢測通過檢測劑所檢測到的并固定在捕獲基材上的一種 或多種微生物的存在。
2. 根據前述權利要求所述的方法，包括中間步驟c'），其包括將所述第一或第二容器 放置于合適的條件下以使得一種或多種微生物生長。
3. 根據前述權利要求之一所述的方法，包括附加步驟e)，其包括對所檢測到的一種或 多種微生物的確認檢測。
4. 根據權利要求3所述的方法，其中確認步驟e)使用與用于檢測的檢測劑相同或不同 的檢測劑實施。
5. 根據前述權利要求之一所述的檢測方法，其中將所述微生物的至少一種特異性或非 特異性結合伴侶固定在捕獲基材上。
6. 根據前述權利要求所述的檢測方法，其中所述特異性結合伴侶選自：抗體、Fab片 段、Fab'片段、適體、重組或非重組噬菌體蛋白質、噬菌體。
7. 根據前述權利要求之一所述的方法，其中實時實施對一種或多種微生物的檢測。
8. 根據前述權利要求之一所述的檢測方法，其中在所述微生物的生長步驟結束時實施 對一種或多種微生物的檢測。
9. 根據前述權利要求之一所述的檢測方法，其中所述第一和/或第二容器是均質化 袋、燒瓶、瓶或平板容器。
10. 根據前述權利要求之一所述的方法，其中所述捕獲基材是單片基材或微?；?，任 選地，所述基材是多孔的。
11. 根據權利要求10所述的方法，其中所述捕獲基材被保護膜保護。
12. 根據權利要求10或11所述的方法，其中微粒支持物包括敏化顆粒。
13. 根據前述權利要求所述的方法，其中所述敏化顆粒是磁性的。
14. 根據權利要求10或11所述的方法，其中所述單件捕獲基材是可壓縮的基材。
【文檔編號】G01N33/543GK104115010SQ201380005118
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2013年1月9日 優(yōu)先權日:2012年1月10日
【發(fā)明者】J-C·雷蒙, D·莫斯蒂科內, A·維蒙, F·巴里爾, J-P·弗朗德羅瓦, T·朱尼永, B·馬朗 申請人:生物梅里埃公司