鑒別具有治療性皮脂抑制活性的ahr受體的配體的方法以及所述配體的制作方法
【專利摘要】一種分選物質以便測定其在表面皮膚治療中具皮脂抑制活性的能力的方法，其包含體內測試，所述體內測試包含以下步驟：從AhR受體的配體之中選擇物質；選擇表達CYP1A1基因的哺乳動物；用包含所述物質的組合物按照劑量/響應/響應時間方案經由表面途徑治療所述哺乳動物包含皮脂腺的皮膚的部分；通過免疫組織化學染色來檢查所述哺乳動物的所述皮膚的所述部分的皮脂腺中的CYP1A的表達；依據在所述皮脂腺的數(shù)種不同類型的細胞中的免疫組織化學染色起始的順序選擇所述物質。表面使用打算減少皮脂生成的醫(yī)藥組合物，其特征在于其含有5,6苯并黃酮作為活性物質。
【專利說明】鑒別具有治療性皮脂抑制活性的AHR受體的配體的方法以 及所述配體

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種物質的分選方法以便測定其在表面皮膚治療中具皮脂抑制活性 (sebossuppressive activity)的能力。本發(fā)明還涉及通過所述分選可鑒別的物質。
[0002] 本發(fā)明更具體地涉及一種表面使用的醫(yī)藥組合物，其打算用于治療和/或預防皮 脂分泌過多以及由此相關的皮膚疾病，如痤瘡、脂溢性皮炎和紅斑痤瘡。

【背景技術】
[0003] 許多物質能夠作為配體與AhR受體（芳基烴受體）相互作用，所述AhR受體顯著地 由上皮和間充質皮膚細胞表達。文獻WO 2004/041758、W0 2007/060256和WO 2007/128725 描述了確定所述配體的詰抗劑或激動劑（agonist)性質的體外測試且提出將詰抗劑配體 用于皮膚學治療。在現(xiàn)有技術水平中最經常使用的這種類型的體外測試是CALUX和EROD 測試。文獻WO 2009/093207還公開了這類體外測試。
[0004] 作為激動劑配體與AhR受體相互作用的化合物（其原型是2, 3, 7, 8-四氯二苯 并-對-二噁英（TCDD))大多是誘導不同類型組織病變的外源毒性化合物。出于這個原因， 在現(xiàn)有技術水平中似乎排除了所述激動劑化合物作為調變皮膚功能的活性劑的治療性和/ 或預防性用途。
[0005] 相反地， 申請人:已在文獻WO 2009/093207(其內容特此以引用的方式并入）中展 示了，向皮膚施用AhR受體的某些激動劑配體可有利地調變一些皮膚功能，如皮脂腺功能、 抗感染防御、創(chuàng)傷愈合、涉及皮膚疏松癥和雌激素剝奪的皮膚萎縮。在所述文獻中， 申請人: 展示了這種特性可用于治療這些皮膚功能的不良機能以及應如何選擇這些配體以使其不 會引起由外源毒性配體（如二噁英）造成的過度AhR活化的主要并發(fā)癥之一，即增生性囊 性病變。這些囊性病變以前被稱為"氯痤瘡"且此后稱為MADISH(J. H.索拉特（J. H. Saurat) 等人二卩惡英暴露的皮膚病變：從V.尤先科中毒的得到的教訓（The cutaneous lesions of dioxin exposure: Lessons from the poisoning of V. Yushchenko),毒理學科學 (Toxicological Sciences)2012 ;125 ;310-317)。為了預防施用治療性 AhR 配體引起 MADISH，必須選擇在體內具有數(shù)小時/數(shù)天的半衰期的激動劑以使其快速代謝，與原型激 動劑二噁英相反，其在人類皮膚中的半衰期可以按年計數(shù)。
[0006] 根據文獻WO 2009/093207,配體優(yōu)選地經選擇使得其符合四條準則：
[0007] 1.活化AhR受體的能力。
[0008] 2.調變由AhR調節(jié)的特定基因的能力。
[0009] 3.在人類生物體中優(yōu)選地在2小時與96小時之間、且更確切地說在6小時與24 小時之間的短半衰期。
[0010] 4.可測量的對這些皮膚功能的不良機能的公認準則的陽性作用。
[0011] 具有激動劑特征的配體有許多。文獻WO 2009/093207列出數(shù)種這類激動劑配體。 其中一些屬于所謂的被稱為NAhRA (天然AhR激動劑）的《天然配體》AhR類別。
[0012] 如何從這些很可能賦予在人中治療上有效的皮脂抑制作用的配體中真正地鑒別 最佳候選物也是未知的。當前方法需要適合的動物物種中的皮脂腺的分化區(qū)域的萎縮誘導 測試。這些測試涉及復雜的解釋且有待靈敏，其可能需要經多周延長施用研宄中的配體。
[0013] 因此，本發(fā)明的目標是提出一種如前文中定義的分選方法，其靈敏、快速且提供分 選結果與所選物質對人類皮膚的皮脂抑制性質之間的高相關性。


【發(fā)明內容】

[0014] 為此目的，本發(fā)明提出一種分選物質以便測定其在表面皮膚治療中具皮脂抑制活 性的能力的方法，其包含體內測試，所述體內測試包含以下步驟：
[0015] -從AhR受體的配體之中選擇物質；
[0016] -選擇其中CYPlAl基因可以在皮膚中誘導的哺乳動物；
[0017] -用含有所述物質的組合物按照劑量/響應/響應時間方案經由表面途徑治療關 于其皮脂腺選擇的所述哺乳動物的皮膚的部分；
[0018] -通過免疫組織學染色來檢查所述哺乳動物的所述皮膚的所述部分的皮脂腺中的 CYPlAl的表達；
[0019] -關于所述皮脂腺的數(shù)種不同類型（隔室）的細胞中免疫組織化學標記起始的順 序選擇所述物質。
[0020] 尤其有可能選擇耳朵的皮膚，已知其包含皮脂腺，使其本身充分適合分析，且其中 最有可能誘導CYPlAl基因。
[0021] 如果所述體內測試在確定的時間段內在多種細胞類型中展現(xiàn)染色，那么選擇所述 物質；
[0022] 所述待測試的物質優(yōu)選地是基于至少一種體外測試從具有激動劑性質的AhR受 體的配體中選出的。
[0023] 因此，從NAhRA之中選擇最佳天然候選物最初需要基于體外測試（例如使用CALUX 和EROD測試）論證足夠的AhR激動劑作用，并論證短體內半衰期。
[0024] 根據本發(fā)明方法的一個實施例，所述哺乳動物是小鼠。有可能選擇C57/B6小鼠品 系。
[0025] 根據這一實施例，更具體地說，所述小鼠的耳朵經由表面途徑治療，接著取樣，并 使用抗體通過免疫組織化學分析檢查CYPlAl的表達；具體來說（但并不限于此），所用抗 體可能是兔抗大鼠CYPlAl多克隆抗體（Millipore AB1247)。
[0026] 在這個實施例中，檢查皮脂腺中CYPlAl的表達可包含：
[0027] -檢查峽部區(qū)域，具體地說檢查所述祖細胞；
[0028] -檢查所述腺體的外周區(qū)域，具體地說檢查所述未分化細胞；
[0029] -檢查所述腺體的中間區(qū)域，具體地說檢查所述分化細胞；
[0030]-檢查所述腺體的中央區(qū)域，具體地說檢查所述成熟細胞。
[0031] 在檢查這四種細胞類型之后，如果在一周的治療之后在至少兩種細胞類型中標記 CYPlAl的表達，那么可以選擇所述物質。
[0032] 在檢查這些四種細胞類型之后，如果在一周的治療之后在4種細胞類型中標記 CYPlAl的表達，那么優(yōu)選地選擇所述物質。
[0033] 因此，根據本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明的一個目的是治療和/或預防人類的皮膚 疾病、具體地說痤瘡、脂溢性皮炎和紅斑痤瘡的組合物，其中所述組合物被配置成借助于 將所述組合物表面施用在皮膚上來治療和/或預防皮脂分泌過多，所述組合物包含選自由 AhR激動劑配體組成的群組的活性物質，所述AhR激動劑配體具有：
[0034] -活化AhR受體的能力；
[0035] -調變由AhR調節(jié)的基因的能力；
[0036] -在人類生物體中在2小時與96小時之間的短半衰期；
[0037] -可測量的對公認的皮脂分泌過多準則的陽性作用，
[0038] 并且
[0039] 其中所述活性物質是通過如上文所定義的體內測試以陽性方式選擇的。
[0040] 本發(fā)明具體地提出5, 6苯并黃酮（5, 6 benzoflavone) (5, 6 BZF)(也稱為β -萘 黃酮）作為用于表面使用的皮脂抑制組合物中的優(yōu)選的活性物質。
[0041] 本發(fā)明還提出吳茱萸次堿（rutecarpine)作為用于表面使用的皮脂抑制組合物 中的活性物質。
[0042] 根據另一方面，本發(fā)明的一個目的是一種治療和/或預防人類的皮膚疾病、如痤 瘡、脂溢性皮炎和紅斑痤瘡的治療方法，其包含提供組合物，所述組合物被配置成借助于 將所述組合物表面施用在皮膚上來治療和/或預防皮脂分泌過多，所述組合物包含選自由 AhR激動劑配體組成的群組的活性物質，所述AhR激動劑配體具有：
[0043] -活化AhR受體的能力；
[0044]-調變由AhR調節(jié)的基因的能力；
[0045] -在人類生物體中在2小時與96小時之間的短半衰期；
[0046] -可測量的對公認的皮脂分泌過多準則的陽性作用，
[0047] 其中所述活性物質是通過如上文所定義的體內測試以陽性方式選擇的物質，
[0048] 以及將所述組合物表面投與所述人類。
[0049] 因此，本發(fā)明的一個具體目的是一種治療和/或預防人類的皮脂分泌過多誘發(fā)的 皮膚病況的方法，其包含提供組合物，所述組合物被配置成將所述組合物表面施用在皮膚 上，其中所述組合物含有5,6苯并黃酮（5,6 BZF)作為活性物質，以及將所述組合物表面投 與所述人類。
[0050] 所屬領域的技術人員參考附圖經由給出的本發(fā)明的具體實施例的以下詳細說明， 將了解如何可確定用于鑒別具有治療性表面皮脂抑制活性的AhR受體的配體的新穎方法。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0051] 圖1包含認、24、34、4八部分，其是能夠表達0￥?認1基因的四種類型細胞的皮脂 腺內部位置的示意性圖示，這四種類型細胞即：
[0052]-祖細胞（1)
[0053] -未分化細胞（2);
[0054] -分化細胞（3);
[0055] -成熟細胞（4)。
[0056] 圖2包含川、28、38、48部分，其是對應于圖認、24、34、44的顯微照相觀察結果； IC展示區(qū)域IB ( S卩，祖細胞）的不同視角和放大；
[0057] 圖3示出了在表面施用AhR受體的數(shù)種配體之后，圖1和2中的皮脂細胞的所 有亞群中隨時間而變的CYPlAl活性的起始；
[0058] 圖4是展示圖3中配體的根據本發(fā)明的體外測試、體內測試與人中皮脂抑制活 性的臨床檢查之間的相關性的表；
[0059] 圖5是展示三種黃酮的根據本發(fā)明的體外測試、體內測試與人中皮脂抑制活性 的臨床檢查之間的相關性的表；
[0060] 圖6是三種黃酮對皮脂生成酶的基因轉錄的抑制的比較表；
[0061] 圖7是在用三種不同濃度的5, 6 BZF治療之后，被真皮中的皮脂腺占據的相對 表面的比較表；
[0062] 圖8是在用與圖7中相同濃度的5, 6BZF治療之后，皮脂腺中分化指數(shù)的比較 表；
[0063] 圖9是在用與圖7中相同濃度的5, 6BZF治療之后，分化和成熟皮脂腺細胞的數(shù) 量的比較表；
[0064] 圖10是在用與圖7中相同濃度的5, 6BZF治療之后，活躍皮脂腺的數(shù)量的比較 表。

【具體實施方式】
[0065] 根據本發(fā)明分選打算用于人的皮脂抑制療法的AhR配體分子的方法是基于在表 面和全身投與WO 2009/093207中所列出的數(shù)種AhR配體時獲得的偶然的出人意料的觀察 結果。
[0066] 因此，所屬領域的技術人員可理解本發(fā)明的最出人意料的性質，必須回顧以下現(xiàn) 有技術水平的要素，關于通過施用核受體（如AhR，或如另一實例，視黃酸受體（RAR)、維生 素D受體（VDR))的配體來觸發(fā)的皮膚中生物現(xiàn)象的分布。
[0067] 根據現(xiàn)有技術水平，通過表面或全身性投與配體觸發(fā)的生物活性應均勻：
[0068] -位于表達所述受體的所有身體部分；和
[0069] -所述配體以足夠的定量方式且以非代謝活性形式在這些部分中擴散。
[0070] 在這種情況下，向皮膚施用AhR配體應首先在表皮的表面層中均勻地活化這種受 體的路徑，接著根據配體進入更深層的表皮、和接著可能的真皮和附屬器頭發(fā)和皮脂腺的 進入梯度逐漸地擴散。有效地已知且這已被 申請人:證實，AhR受體均勻地表達在皮膚的所 有這些隔室中。
[0071] 但， 申請人:已以最出人意料的方式發(fā)現(xiàn)，向皮膚施用AhR配體會以局部方式在皮 脂腺上活化這種受體的路徑，所述皮脂腺開始于祖細胞，即位于毛囊皮脂腺泡的峽區(qū)中的 皮脂干細胞，之后依序是非分化皮脂細胞、分化皮脂細胞且最后是成熟細胞。這些觀察結果 示出于圖1和2中。
[0072] 更出人意料的是，賦予強皮脂抑制活性的配體是在AhR受體的體外活化測試期間 未必是最具活性的那些、在早期階段快速且完全地遵循這種原位活化順序的那些，如由圖4 中的表和圖3所示。
[0073] 這些觀察結果實際上是出人意料的，因為其不同于羅MJ(Rowe MJ)等人（研宄性 皮膚病學雜志（J. Invest. Derm. )2008:128 ; 1866-68)的那些。這些作者已展示在轉基因小 鼠（CYP1A1-GFP啟動子）中，由經由全身途徑投與的AhR配體誘導的生物活性可局限于皮 脂腺，但以均勻方式處于后者中：
[0074] -首先，在 申請人:的觀察結果中，投與途徑是經皮，且優(yōu)先分布由于上文解釋的經 表皮擴散的原因而是完全出人意料的。在由羅MJ等人進行的工作中，配體3-甲基膽蒽是 經由需要經血液途徑進入皮膚的全身途徑投與的，這意味著親脂性配體在皮脂腺中的分布 并不出人意料；
[0075] -其次，且更特別地，本發(fā)明的活化順序：在基部的祖細胞〉未分化細胞〉分化細 胞〉成熟細胞并非是由羅MJ等人（研宄性皮膚病學雜志2008:128, 1866-68)觀察到的，羅 MJ等人展示了在皮脂腺區(qū)域中擴散的生物活性。由羅等人展示的這一方面將不允許測定或 建議分選本發(fā)明的皮脂抑制配體標的物的方法。
[0076] 皮脂腺中連續(xù)局部厭域的AhR #體活化的論證
[0077] 這里描述的實施例需要用AhR受體的配體按照劑量/響應/響應時間方案經由表 面途徑治療C57/B6小鼠的耳朵，先前已例如使用這一領域中廣泛使用的CALUX和EROD方 法表征所述配體的體外受體活化特性（參見表1)。
[0078] 對耳朵進行取樣，且使用特異性抗體利用免疫組織化學分析檢查CYPlAl表達。圖 1展示了所觀察到的不同類型標記。圖2中免疫組織化學陽性（S卩，細胞染成棕色）指示所 述區(qū)域表達CYPlAl蛋白質。
[0079] 1.在基礎狀態(tài)，蛋白質不可檢測。
[0080] 2.在所用AhR配體引起CYPlAl免疫組織化學陽性的每一情況中，及時被染色（表 明通過活化AhR受體誘導的CYPlAl蛋白質的增加）的第一區(qū)域是定位有皮脂腺的《祖細 胞》細胞的峽部區(qū)域（圖IA和1B):第1階段。這對應于多能克隆源性細胞，因此一般對應 于《皮脂干細胞》。除了峽部區(qū)域的具體表面形態(tài)之外，這些細胞的特征在于表達角蛋白15 和L-RIGl (峽部多能克隆源性細胞的一種標記物）。使用雙CYPlAl和L-RIGl雙染色，可確 定由表面來源的AhR配體活化的細胞有效地對應于這一峽區(qū)處的這一群體。
[0081] 3.之后的階段是染色擴展到未分化細胞，所述未分化細胞不含有脂質且一般定位 在皮脂腺的外周上（圖2A和2B):第2階段。
[0082] 4.之后的階段是染色擴展到分化細胞，所述分化細胞含有脂質且一般定位在皮脂 腺的中間部分（圖3A和3B):第3階段。
[0083] 5.之后的階段是染色擴展到成熟細胞，所述成熟細胞含有脂質且一般定位在皮脂 腺的中央部分（圖4A和4B):第4階段。
[0084] 連續(xù)活化階段與配體的皮脂抑制特件之間的對應關系
[0085] 圖4中的表指示局部活化表達階段與皮脂抑制指數(shù)與對人類皮膚的作用之間的 對應關系。皮脂抑制指數(shù)通過相對于皮脂腺中細胞總數(shù)計數(shù)成熟和分化細胞的數(shù)量來計 算。成熟和分化細胞減少指示對皮脂生成的阻斷。對人類皮膚作用通過使用被稱為《臨時 水準》者進行皮脂計量檢查來測定（美容皮膚學雜志（J C〇SmetDermat〇l.)2007年6月； 6(2) :113-8) 〇
[0086] 在圖3和圖4的表1中，所用縮寫具有以下含義：
[0087] NSAl :吳茱萸次堿
[0088] NSA2 : β 萘黃酮
[0089] NSA3 :TCDD
[0090] NSA4 ：FICZ
[0091] NSA5 :硬毛素（Hispidine)
[0092] NSA6 : β 咔啉
[0093] NSA7 :埃索美拉挫（esomeprazole)
[0094] 圖3與圖4之間的比較（表1)展示了。兩種配體，S卩β萘黃酮（也稱為5, 6-苯 并黃酮或5, 6BZF)和TCDD (其在不到一周的時間內活化四個細胞亞群中的AhR路徑），也是 在人中呈現(xiàn)最強皮脂抑制活性的那些?；罨瘍蓚€細胞亞群中AhR路徑的吳茱萸次堿具有潛 在有用的皮脂抑制活性，不過與5, 6 BZF的皮脂抑制活性相比較弱。相反地，僅在一個細胞 亞群中活化AhR受體且即使這種活化達到高水平的其他配體僅在人中發(fā)揮不良皮脂抑制 活性。
[0095] 5, 6 BZF和結構類似物的皮脂抑制特性的描述
[0096] 根據本發(fā)明和在人中的臨床檢查（如上述的那些）在相同條件（即體外測試、體 內測試）下比較5, 6BZF的皮脂抑制活性與7, 8BZF(7, 8-苯并黃酮）和黃酮的皮脂抑制活 性。結果在圖5中給出。可見，5,6苯并黃酮而非7,8BZF或黃酮以與最具活性的AhR激動 劑（TCDD)類似的方式將其激動劑活性分布在皮脂腺中，而黃酮和7, 8苯并黃酮不具有這些 作用。在不希望受任何理論束縛的情況下，會呈現(xiàn)出這種組織分布的能力并非完全與分子 對AhR受體的親和力有關聯(lián)，因為具有較強親和力的分子（如FICZ)并不像5, 6 BZF -樣 分布在皮脂腺中。與其以下闡述的其他特性組合，這種靶向皮脂腺的特性能夠闡明受歡迎 的治療作用。
[0097] 圖6給出實驗結果，在所述實驗期間，C57BL/6小鼠的耳朵用以上三種不同黃酮以 0. 5%處理5周。參考活性物質是濃度小1000倍的T⑶D。
[0098] 在提取RNA之后，針對皮脂脂質產生中的三種主要酶執(zhí)行RTqPCR反應。結果與用 媒劑處理的對照小鼠比較：圖6展示在3種黃酮之中僅5, 6苯并黃酮引發(fā)對編碼三種酶的 mRNA的表達的主要抑制，而7, 8苯并黃酮實際上更具有略微刺激作用且黃酮不具有顯著作 用。5, 6苯并黃酮而非7, 8苯并黃酮強烈抑制小鼠中皮脂的脂質特征性產生中關鍵酶基因 (如AWAT 1、EL0VL3和FADS2)的表達，這部分解釋了其皮脂抑制作用?，F(xiàn)有技術中尚未公 開這些目標。
[0099] 分子結構中的這些差異引起首先與受體活化特性有關且其次與溶解特性有光的 變化。這些后面的特性可以是如前文中所描述的靶向皮脂腺的決定因素。
[0100] 5. 6 BZF劑量與皮脂抑制作用之間的關系
[0101] 獲得對皮脂生成顯著抑制的5, 6苯并黃酮的劑量必須經具體定義以確保良好耐 受性且預防如上文所提及的MDISH型胞囊的發(fā)作，這可為劑量相關的且與本身部分取決 于這種情形內劑量的藥物動力學相關。
[0102] 這一必需的步驟以數(shù)個階段達到。
[0103] 1.小鼠中的劑量作用
[0104] 初步研宄展示高于0. 05%的濃度的良好耐受性以及在上述連續(xù)體內活化測試中 的活性。對于這些劑量-作用測試，在耳朵上且以三種濃度（即0.1%、0.5%和1%)的 5, 6 BZF治療C57BL/6小鼠3到5周，每周5天。
[0105] a.在第3周分析皮脂抑制作用，盡管其表達在一周之后開始。圖7-10展示極顯著 的作用，除如TCDD的毒素以外很少有物質能夠在關于由皮脂腺占據的相對表面和其活性 以及關于非分化、分化和成熟皮脂腺細胞之間的比率兩者的這一模型中誘導。具體來說，觀 察到腺體的分化隔室的減少，這與皮脂脂肪生成酶的基因的抑制作用充分一致，因為皮脂 細胞的分化由細胞質脂質過載定義。
[0106] b.在不存在MADISH型胞囊產生的情況下，在5周處理之后評估耐受性。在這些高 濃度下為觀察到囊性病變。在這些小鼠中利用HPLC進行的5, 6 BZF的血液分析未檢測到 任何可測量水平（5 nM靈敏性），這證實了 WO 2009/093207與在體內具有較短壽命的激動 劑的用途有關的教示。
[0107] 2.在人中的耐受性和作用：
[0108] a.定義5, 6 BZF的穩(wěn)定0. 5 %調配物。
[0109] i.調配物：5, 6 BZF 0.5 g/100 ml 于乙醇/PEG 400(1:1)中。
[0110] 溶劑：乙醇 EMSURE?. Merck 目錄號 1. 00983,批次 K42754183。
[0111] 聚乙烯 400, Fluka 目錄號 81170,批次 260154286 或 PEG 400, Aldrich 目錄號 202398〇
[0112] ii.穩(wěn)定性：在制備之后6個月未觀察到降解產物。
[0113] b.在人中的使用。向罹患強烈皮脂溢出且不符合用異維甲酸（Isotretinoin) 口 服治療條件的i^一名患者、患有痤瘡的六名患者、患有紅斑痤瘡的四名患者以及患有脂溢 性皮炎的一名患者的面部每天一次施加調配物。
[0114] i.注意到無副作用，且具體地說無表明微囊發(fā)作的臨床征象。這在人中給出了對 在動物中進行的觀察結果的證實。在這個AhR受體活化領域中，物質的敏感度具有必不可 少的重要性；即使選擇用于測試的小鼠品系對TCDD和5, 6 BZF的表面作用最敏感。這種在 人中的耐受性因此相當于最為重要的原始數(shù)據。其證實了 W02009/093207中與在體內使用 短壽命激動劑有關的教示的準確性且給出對其精確施用的說明。
[0115] ii.皮脂溢在施用2-3周之后以外形截然不同的作用顯著減少。痤瘡、紅斑痤瘡和 脂溢性皮炎的癥狀被顯著改進或清除。先前已以0. 4-0. 5mg/bw/天的中間劑量服用口服異 維甲酸的患者認為其獲得與由此調配的表面5, 6BZF類似的作用，且刺激和不適較少。
[0116] iii.使用Sebutape? (CUDerm)貼片測試來測定治療之后6個個體中產生的皮脂 量指示對應于正常皮脂溢范圍的臨時水準。
[0117] 本發(fā)明的表面醫(yī)藥組合物可具有在所述組合物的0. 005重量％與1重量％之間、 且更具體地說在〇. 1重量％與1重量％之間的5, 6苯并黃酮（5, 6BZF)濃度。
[0118] 結論：除了關于所涉及的皮脂腺的病理生理學的新穎信息之外，本發(fā)明允許針對 治療性用途快速分選候選皮脂抑制分子。
[0119] 所屬領域的技術人員將容易地理解本發(fā)明的方法可在不脫離本發(fā)明的范圍的情 況下在不為C57/B6小鼠品系的另一種實驗室哺乳動物中實施，限制條件為所述活化順序 被再現(xiàn)。
[0120] 代表受體活化能力的體外數(shù)據與體內作用之間的差異可能反映為每一分子所特 有的組織內動力學要素。本發(fā)明的方法標的物因此是有史以來第一次經描述，這允許皮膚 組織內皮脂細胞的特異性靶向的研宄。
[0121] 能夠在臨床水平誘導顯著皮脂抑制作用的配體是早在第一周治療時就超過第2 階段的那些。最具活性者早在第一周治療就達到第4階段。
[0122] 在上述測試期間，在根據本發(fā)明的體內測試之后選擇的5, 6苯并黃酮證實了其在 人類中以表面施用形式用于皮脂抑制治療的能力。
【權利要求】
1. 一種分選物質w便測定其在表面皮膚治療中具皮脂抑制活性的能力的方法，其特征 在于所述方法包含體內測試，所述體內測試包含W下步驟： 從AhR受體的配體之中選擇物質； 選擇表達CYP1A1基因的哺乳動物； 用含有所述物質的組合物按照劑量/響應/響應時間方案經由表面途徑治療所述哺乳 動物包含皮脂腺的皮膚的部分； 通過免疫組織化學染色來檢查所述哺乳動物的所述皮膚的所述部分的皮脂腺中的 CYP1A1的表達； 依據在所述皮脂腺的數(shù)種不同類型的細胞中的免疫組織化學染色起始的順序選擇所 述物質。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于如果所述體內測試在確定的時間間隔內在 多種細胞類型中展現(xiàn)染色，那么選擇所述物質。
3. 根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述物質是基于至少一種體外測試從 具有激動劑性質的AhR受體的配體中選出的。
4. 根據權利要求3所述的方法，其特征在于所述體外測試是從CALUX、EROD測試和其 組合中選出的。
5. 根據前述權利要求中任一權利要求所述的方法，其特征在于所述哺乳動物是經選擇 W使所述皮脂腺允許再現(xiàn)W下活化順序的小鼠品系： 祖細胞 未分化細胞 分化細胞 成熟細胞。
6. 根據前述權利要求中任一權利要求所述的方法，其特征在于所述哺乳動物是巧7/ B6小鼠品系。
7. 根據權利要求5或6所述的方法，其特征在于所述小鼠的耳朵經由表面途徑治療，接 著取樣，并使用抗體通過免疫組織化學檢查來檢查CYP1A1表達。
8. 根據前述權利要求中任一權利要求所述的方法，其特征在于所述皮脂腺中的 CYP1A1表達的所述檢查包含； 檢查峽部區(qū)域，具體地說檢查所述祖細胞； 檢查所述腺體的外周區(qū)域，具體地說檢查所述未分化細胞； 檢查所述腺體的中間區(qū)域，具體地說檢查所述分化細胞； 檢查所述腺體的中央區(qū)域，具體地說檢查所述成熟細胞。
9. 根據權利要求7所述的方法，其特征在于如果在一周的治療之后在兩種W上類型的 細胞中標記所述CYP1A1的表達，那么選擇所述物質。
10. 根據權利要求7所述的方法，其特征在于如果在一周的治療之后在4種類型的細胞 中標記所述CYP1A1的表達，那么選擇所述物質。
11. 一種治療和/或預防人類的皮膚疾病、具體地說瘦瘡、脂溢性皮炎和紅斑瘦瘡的組 合物，其中所述組合物被配置成借助于將所述組合物表面施用在皮膚上來治療和/或預防 皮脂分泌過多，所述組合物包含選自由AhR激動劑配體組成的群組的活性物質，所述AhR激 動劑配體具有： 活化AhR受體的能力； 調變由AhR調節(jié)的基因的能力； 在人類生物體中在2小時與96小時之間的短半衰期； 可測量的對公認的皮脂分泌過多準則的陽性作用， 并且 其中所述活性物質是通過根據權利要求1到10中任一權利要求所述的體內測試W陽 性方式選擇的。
12. -種表面使用打算減少皮脂生成的醫(yī)藥組合物，其特征在于其含有5, 6苯并黃酬 巧，6BZ巧作為活性物質。
13. -種治療和/或預防人類皮膚疾病、具體地說瘦瘡、脂溢性皮炎和紅斑瘦瘡的醫(yī)藥 組合物，其中所述組合物被配置成借助于將所述組合物表面施用在皮膚上來治療和/或預 防皮脂分泌過多，所述組合物包含5, 6苯并黃酬巧，6BZ巧作為活性物質。
14.根據權利要求12或13所述的醫(yī)藥組合物，其特征在于5, 6苯并黃酬巧，6BZ巧的 濃度是在所述組合物的0.005重量％與1重量％之間，且更具體地說在0.1重量％與1重 量％之間。
15. -種5, 6苯并黃酬巧，6BZ巧，其作為用于表面使用的皮脂抑制組合物中的活性物 質。
16.-種吳榮奧次堿，其作為用于表面使用的皮脂抑制組合物中的活性物質。
17. -種治療和/或預防人類的皮膚疾病、如瘦瘡、脂溢性皮炎和紅斑瘦瘡的治療方 法，其包含提供組合物，所述組合物被配置成借助于將所述組合物表面施用在皮膚上來治 療和/或預防皮脂分泌過多，所述組合物包含選自由AhR激動劑配體組成的群組的活性物 質，所述AhR激動劑配體具有； 活化AhR受體的能力； 調變由AhR調節(jié)的基因的能力； 在人類生物體中在2小時與96小時之間的短半衰期； 可測量的對公認的皮脂分泌過多準則的陽性作用， 其中所述活性物質是通過根據權利要求1到10中任一權利要求所述的體內測試W陽 性方式選擇的物質， W及將所述組合物表面投與所述人類。
18. -種治療和/或預防人類的皮脂分泌過多的方法，其包含提供組合物，所述組合物 被配置成將所述組合物表面施用在皮膚上，其中所述組合物含有5, 6苯并黃酬巧，6BZ巧作 為活性物質，W及將所述組合物表面投與所述人類。
19.根據權利要求18所述的方法，其中5, 6苯并黃酬化6BZ巧的濃度是在所述組合物 的0.005重量％與1重量％之間，且更具體地說在0.1重量％與1重量％之間。
【文檔編號】G01N33/68GK104471391SQ201380025088
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2013年5月15日 優(yōu)先權日:2012年5月15日
【發(fā)明者】吉恩·希萊爾·索拉特 申請人:賽斯安制藥公司