以flrg作為標(biāo)志物制備檢測(cè)工具的應(yīng)用及檢測(cè)工具的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開將可以作為孕婦患有的子癇前期也即先兆子癇疾病的檢測(cè)標(biāo)志物應(yīng)用于制備相應(yīng)疾病的檢測(cè)工具以及通過該應(yīng)用方式獲得的相應(yīng)檢測(cè)工具等；具體涉及將FLRG作為用于妊娠的子癇前期的生物標(biāo)志物的應(yīng)用及檢測(cè)工具。采用將FLRG作為用于妊娠的子癇前期疾病的生物標(biāo)志物的應(yīng)用。本發(fā)明提供一種生物標(biāo)志物的新的應(yīng)用方式，該生物標(biāo)志物在預(yù)測(cè)、預(yù)后、診斷妊娠的子癇前期疾病可以更加便利化，從而避免血液采集的繁瑣步驟。
【專利說明】以FLRG作為標(biāo)志物制備檢測(cè)工具的應(yīng)用及檢測(cè)工具
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及將可以作為孕婦患有的子癇前期也即先兆子癇疾病的檢測(cè)標(biāo)志物應(yīng)用于制備相應(yīng)疾病的檢測(cè)工具以及通過該應(yīng)用方式獲得的相應(yīng)檢測(cè)工具等；具體涉及以FLRG作為檢測(cè)、診斷子癇前期疾病的標(biāo)志物制備相應(yīng)檢測(cè)工具的應(yīng)用及檢測(cè)工具。
【背景技術(shù)】
[0002]高血壓是妊娠期間遇到的最常見的醫(yī)療問題，使2-3%的妊娠復(fù)雜化。妊娠期間的高血壓疾病被分為4類:1、慢性高血壓；2、先兆子癇；3、先兆子癇加慢性高血壓以及4、妊娠期或妊娠性高血壓。慢性高血壓被定義為在妊娠前或懷胎20周之前，血壓超過140/90mmHg。在婦女妊娠期間首次鑒定到高血壓而且懷胎不足20周的時(shí)候，血壓升高通常表示慢性高血壓。相反，在懷胎20周后新發(fā)的血壓讀數(shù)升高則要求考慮并排除先兆子癇，也即子癇前期。子癇前期以高達(dá)所有妊娠的5%、首次妊娠的10%以及有慢性高血壓史的婦女的20-25%的比率發(fā)生。妊娠時(shí)的高血壓疾病可能造成母體和胎兒的發(fā)病率,并且它們?nèi)匀皇悄阁w死亡率的主要來源。
[0003]妊娠期高血壓所指的是高血壓出現(xiàn)在妊娠后半部分(懷胎>20周)，沒有任何其他子癇前期的特征，并且隨后是產(chǎn)后血壓正?；?。在起初表現(xiàn)出明顯的妊娠期高血壓的婦女中，約三分之一發(fā)展出子癇前期綜合癥。正因?yàn)槿绱耍瑧?yīng)該密切觀察這些患者這方面的進(jìn)展。妊娠期高血壓的病理生理學(xué)是未知的，但在沒有子癇前期的特征的情況下，母體和胎兒的結(jié)果一般是正常的。但是妊娠期高血壓可能是以后生命中高血壓的先兆。
[0004]子癇前期是妊娠中的多系統(tǒng)疾病，主要在于先前血壓正常的婦女在懷胎20周后發(fā)展出的新發(fā)高血壓(收縮壓和舒張壓分別> 140和90mmHg)以及蛋白尿(在24小時(shí)的尿液收集中蛋白排泄> 300mg，或者浸量尺> 2+)。子癇前期還可分為輕度子癇前期和重度子癇前期(收縮壓> 160mmHg或舒張壓> IlOmmHg,蛋白尿>5g/24小時(shí)),并且在最嚴(yán)重的情況下可以發(fā)展成為子癇。
[0005]盡管目前仍未清楚的了解先兆子癇確切的病理生理機(jī)制，但其主要是一種胎盤功能障礙疾病，導(dǎo)致伴隨有血管痙攣的內(nèi)皮功能障礙綜合征。
[0006]雖然缺乏針對(duì)子癇前期的預(yù)防和治療方法，但是尋求可以預(yù)測(cè)該危及生命的妊娠疾病的發(fā)展或者有助于該疾病的檢測(cè)的非侵入性生物標(biāo)志物仍然是最重要的。
[0007]現(xiàn)有技術(shù)中已有多種可用于預(yù)測(cè)子癇前期該種疾病的生物標(biāo)志物，例如在專利申請(qǐng)?zhí)枮镃N201180019135.7、CN201180030104.1的專利文件中公開了多種可用于診斷、預(yù)測(cè)、預(yù)后和/或監(jiān)測(cè)該種疾病的生物標(biāo)志物，同時(shí)還公開了將各種生物標(biāo)志物制備成的可檢測(cè)子癇前期疾病的檢測(cè)工具，例如試劑盒。
[0008]但是現(xiàn)有已經(jīng)公開的子癇前期檢測(cè)工具的檢測(cè)對(duì)象大多為血液樣品，多數(shù)生物或化學(xué)標(biāo)志物均存在于妊娠婦女的血液中。通過檢測(cè)血液樣品中的生物或化學(xué)標(biāo)志物的方式往往比較費(fèi)時(shí)費(fèi)力。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]有鑒于此，本發(fā)明提供一種應(yīng)用方式，具體為以FLRG作為檢測(cè)、診斷子癇前期疾病的標(biāo)志物制備相應(yīng)檢測(cè)工具的應(yīng)用；該應(yīng)用方式提供一種生物標(biāo)志物的新的應(yīng)用方式，該生物標(biāo)志物在預(yù)測(cè)、預(yù)后、診斷妊娠的子癇前期疾病可以更加便利化，從而避免血液采集的繁瑣步驟。
[0010]為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是采用以FLRG作為檢測(cè)、診斷子癇前期疾病的標(biāo)志物制備相應(yīng)檢測(cè)工具的應(yīng)用。
[0011]優(yōu)選的，所述檢測(cè)工具的檢測(cè)對(duì)象為妊娠婦女的尿液。
[0012]優(yōu)選的，所述檢測(cè)工具為定性檢測(cè)工具。
[0013]優(yōu)選的，所述定性檢測(cè)工具為免疫層析試紙。
[0014]優(yōu)選的，所述免疫層析試紙為膠體金免疫層析試紙。
[0015]優(yōu)選的，所述膠體金免疫層析試紙?jiān)O(shè)置有檢測(cè)線和控制線，膠體金濃度設(shè)置為0.5-2g/100ml，檢測(cè)線設(shè)置有以鼠抗人FLRG抗體為檢測(cè)抗體的檢測(cè)工作液，所述檢測(cè)工作液中鼠抗人FLRG抗體的濃度為0.5-3mg/ml ;控制線設(shè)置有以羊抗鼠IgG多克隆抗體為控制抗體的控制工作液，所述控制工作液中羊抗鼠IgG多克隆抗體的濃度為0.2-lmg/ml。
[0016]優(yōu)選的，所述檢測(cè)工具為重度子癇前期檢測(cè)工具。
[0017]優(yōu)選的，所述重度子癇前期檢測(cè)工具對(duì)于FLRG的檢測(cè)限濃度為10-12ng/mL。
[0018]優(yōu)選的，所述檢測(cè)限濃度為10ng/mL。
[0019]本發(fā)明還同時(shí)提供了前述任一應(yīng)用方式制備得到的子癇前期檢測(cè)工具。
[0020]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其詳細(xì)說明如下:
[0021]本發(fā)明采用的核心技術(shù)方案為:以FLRG作為檢測(cè)、診斷子癇前期疾病的標(biāo)志物制備相應(yīng)檢測(cè)工具的應(yīng)用
[0022]卵泡抑素相關(guān)基因(follistatin related-gene, FLRG),是一種富含半胱氨酸的單鏈糖基化蛋白，與卵泡抑素(follistatin，F(xiàn)S)具有高度的同源性，屬于卵泡抑素家族。FLRG結(jié)構(gòu)具有高度的保守性，全長(zhǎng)約7kb，包括5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子，分別編碼信號(hào)肽、N末端、兩個(gè)FS區(qū)域、C末端。信號(hào)肽為23個(gè)氨基酸，含有兩個(gè)起始密碼子。在N末端存在兩個(gè)糖基化位點(diǎn)使FLRG在成熟過程中N端發(fā)生糖基化。FLRG的基本結(jié)構(gòu)域是FS區(qū)，由大約70個(gè)氨基酸組成，其中含有10個(gè)半胱氨酸殘基。本發(fā)明人經(jīng)過長(zhǎng)期研究后發(fā)現(xiàn)該生物因子可存在于人尿液中，尤其是患有子癇前期的妊娠婦女和健康妊娠婦女的尿液中，該生物因子的含量差別較大。在患有子癇前期的妊娠婦女的尿液中，F(xiàn)LRG的含量可高達(dá)15.47±21.40ng/ml，而健康妊娠婦女的尿液中，F(xiàn)LRG的含量通常為0.18±0.37ng/ml。這使得FLRG作為子癇前期疾病檢測(cè)標(biāo)志物成為可能。
[0023]本發(fā)明人還研究了患有子癇前期的妊娠婦女和健康妊娠婦女的血液中FLRG的含量差異；通過研究顯示，患有子癇前期的妊娠婦女和健康妊娠婦女的血液中FLRG的含量差異較??；因此，采用血液作為檢測(cè)對(duì)象并不能得到很好的檢測(cè)效果。
[0024]通過本發(fā)明人的上述研究可知，F(xiàn)LRG在作為預(yù)測(cè)、預(yù)后、診斷妊娠的子癇前期疾病的應(yīng)用中，可優(yōu)選采用將該生物標(biāo)志物應(yīng)用為制備成定性檢測(cè)子癇前期的工具，也即快速檢測(cè)工具，該工具可實(shí)現(xiàn)患者便利地自行對(duì)該疾病進(jìn)行預(yù)測(cè)，從而可更加有效地確保母體和胎兒的安全。[0025]另外，當(dāng)將FLRG作為生物標(biāo)志物，并用于制備妊娠的子癇前期疾病的檢測(cè)工具，所述檢測(cè)工具的檢測(cè)對(duì)象為生物體的尿液時(shí)，由于檢測(cè)對(duì)象為生物體的尿液，特別是妊娠婦女的尿液，因而可實(shí)現(xiàn)無創(chuàng)檢測(cè)的方法；并且該檢測(cè)工具可實(shí)現(xiàn)對(duì)該疾病的定性檢測(cè)，無需大型的醫(yī)療檢測(cè)設(shè)備，因此其檢測(cè)一個(gè)樣品通常僅需要5-10分鐘，操作簡(jiǎn)單，孕婦可自行操作，與現(xiàn)有的臨床檢測(cè)方式相比，其檢測(cè)速度大幅度提高。
[0026]進(jìn)一步的，本發(fā)明還在前述的定性檢測(cè)工具上進(jìn)一步研究，以達(dá)到更好的檢測(cè)效果?，F(xiàn)有定性檢測(cè)工具中，最為常用的為免疫層析試紙，更優(yōu)選可采用膠體金免疫層析試紙。當(dāng)本發(fā)明應(yīng)用方式所得的定性檢測(cè)妊娠的子癇前期疾病的檢測(cè)工具采用以下優(yōu)選設(shè)置時(shí):采用膠體金免疫層析試紙，其設(shè)置有檢測(cè)線和控制線，膠體金濃度設(shè)置為0.5-2g/100ml，檢測(cè)線設(shè)置有以鼠抗人FLRG抗體為檢測(cè)抗體的檢測(cè)工作液，所述檢測(cè)工作液中鼠抗人FLRG抗體的濃度為0.5-3mg/ml ;控制線設(shè)置有以羊抗鼠IgG多克隆抗體為控制抗體的控制工作液，所述控制工作液中羊抗鼠IgG多克隆抗體的濃度為0.2-lmg/ml。該具體設(shè)置的應(yīng)用方式所得的檢測(cè)工具在檢測(cè)效果上，靈敏度和特異性均可達(dá)到80%以上。
[0027]本發(fā)明人在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究了輕度子癇前期和重度子癇前期妊娠婦女患者的尿液中FLRG含量差異；通過研究發(fā)現(xiàn)，雖然輕度子癇前期妊娠婦女患者中尿液中的FLRG含量與重度子癇前期妊娠婦女患者中FLRG的含量差別不是特別明顯，但通過控制本申請(qǐng)應(yīng)用方式中檢測(cè)工具對(duì)于FLRG的檢測(cè)限濃度可以對(duì)重度子癇前期妊娠患者達(dá)到更好的檢測(cè)效果，其靈敏度和特異性可以分別達(dá)到90%和80%以上。具體為控制檢測(cè)工具對(duì)于FLRG的檢測(cè)限濃度為10-12ng/mL,特別優(yōu)選為10ng/mL。
[0028]本發(fā)明所述定性檢測(cè)工具，其可以采用標(biāo)志物FLRG與反應(yīng)底物反應(yīng)后得到產(chǎn)物的顏色區(qū)別，或與底物結(jié)合后產(chǎn)物的顏色區(qū)別來定性區(qū)分子癇前期或健康妊娠婦女人群。
[0029]本發(fā)明所述對(duì)于FL RG的檢測(cè)限濃度應(yīng)理解為，本發(fā)明所述應(yīng)用方法得到的檢測(cè)工具在檢測(cè)子癇前期疾病時(shí)，檢測(cè)樣品中FLRG的濃度高于或等于該檢測(cè)限濃度時(shí)，定性或定量檢測(cè)結(jié)果為陽性，即患有子癇前期；當(dāng)檢測(cè)樣品中FLRG的濃度低于該檢測(cè)限濃度時(shí)，定性或定量檢測(cè)結(jié)果為陰性，即未患有子癇前期。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0030]圖1是健康對(duì)照組與子癇前期組中各兩例妊娠婦女的尿液樣本的細(xì)胞因子/趨化因子抗體芯片檢測(cè)結(jié)果圖；其中，B、D為子癇前期組，A、C為健康對(duì)照組。
【具體實(shí)施方式】
[0031]為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
[0032]以下實(shí)施例均為在華西第二醫(yī)院采集的試驗(yàn)樣品，
[0033]實(shí)施例1
[0034]子癇前期組:124例子癇前期妊娠婦女；
[0035]健康對(duì)照組:135例健康妊娠婦女；
[0036]實(shí)驗(yàn)對(duì)象臨床篩選標(biāo)準(zhǔn):
[0037]子癇前期組一 (i)收縮壓≥HOmmHg ；[0038](i i )舒張壓≥ 90mmHg ；
[0039](iii)在24小時(shí)的尿液收集中蛋白排泄≥300mg，或者浸量尺≥2+。
[0040]健康對(duì)照組一(i)收縮壓<140mmHg ;
[0041](ii)舒張壓 <90mmHg ;
[0042](iii)在24小時(shí)的尿液收集中蛋白排泄<300mg，或者浸量尺〈2+。
[0043]實(shí)驗(yàn)對(duì)象 年齡分布:124例子癇前期組妊娠婦女平均年齡28歲(年齡范圍19_35歲)，健康對(duì)照組平均年齡30歲(年齡范圍18-43歲)。
[0044]樣本收集方法:取各實(shí)驗(yàn)組的尿液樣本。
[0045]A、實(shí)驗(yàn)方法:細(xì)胞因子/趨化因子抗體芯片定性檢測(cè)
[0046]實(shí)驗(yàn)條件:
[0047]I)將預(yù)先標(biāo)記有174個(gè)細(xì)胞因子抗體的膜(RayBiotech，美國)放入檢測(cè)盒中，然后加入2ml封閉液,室溫封閉6小時(shí)；
[0048]2)棄去封閉液，加入1.2ml待檢樣本1份，4°C過夜孵育；
[0049]3)棄去樣本，用2ml洗滌緩沖液清洗5次；
[0050]4)加入Iml生物素偶聯(lián)的檢測(cè)抗體，室溫孵育2小時(shí)；
[0051]5)棄去抗體，用2ml洗滌緩沖液清洗5次；
[0052]6)加入2ml辣根過氧化物酶(HRP)偶聯(lián)的鏈霉素親和素，室溫孵育2小時(shí)；
[0053]7)棄去液體，用2ml洗滌緩沖液清洗5次；
[0054]8)在膜上加入化學(xué)發(fā)光試劑500 μ I,避光作用2分鐘,觀察結(jié)果。
[0055]從子癇前期組、健康對(duì)照組中收集的待測(cè)樣本均采用上述實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行檢測(cè)，所得結(jié)果如圖1所示。
[0056]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:圖1中的標(biāo)記I為Acrp30的表達(dá)信號(hào),標(biāo)記2為Adipsin的表達(dá)信號(hào)，標(biāo)記3為FLRG的表達(dá)信號(hào)。
[0057]圖1是健康對(duì)照組與子癇前期組中各兩例妊娠婦女的尿液樣本的細(xì)胞因子/趨化因子抗體芯片檢測(cè)結(jié)果圖；其中，B、D為子癇前期組，A、C為健康對(duì)照組。
[0058]從圖1中可以看出，子癇前期組中的Acrp30、Adipsin以及FLRG的表達(dá)較強(qiáng),而健康對(duì)照組中上述三者的表達(dá)較弱。
[0059]B、實(shí)驗(yàn)方法:酶聯(lián)免疫吸附法定量檢測(cè)
[0060]實(shí)驗(yàn)條件:
[0061]實(shí)驗(yàn)材料:FLRG ELISA檢測(cè)試劑盒(R&D公司)
[0062]1.試劑的配制
[0063]洗漆緩沖液(WashBuffer)
[0064]底物溶液(Substrate Solution):使用前,將試劑盒中的顯色劑A和顯色劑B等量、避光混合15分鐘，每個(gè)孔需要兩種顯色劑的混合物200 μ I。
[0065]FLRG標(biāo)準(zhǔn)品:用Iml去離子水將FLRG標(biāo)準(zhǔn)品稀釋。稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品原液濃度為250ng/ml。為確保標(biāo)準(zhǔn)品充分混勻，在進(jìn)一步稀釋前，將標(biāo)準(zhǔn)品放于搖床上輕輕晃動(dòng)混勻至少15分鐘以上。
[0066]分別將250ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品配置成濃度為 50ng/ml、25ng/ml、12.5ng/ml、6.25ng/ml,3.13ng/ml、l.56ng/ml的FLRG檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品；RD5_7校準(zhǔn)稀釋劑作為空白對(duì)照(Ong/ml)[0067]2.檢測(cè)程序
[0068]向每個(gè)微孔中加入100μ I FLRG Conjugate ;標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照物、樣本的加入量為ΙΟΟμΙ，并加入到對(duì)應(yīng)的微孔中。將微孔用試劑盒提供的膠條蓋好。將微孔板在室溫條件下置于水平搖床上500±50轉(zhuǎn)/分鐘培育1.5小時(shí)。洗板；每孔加底物溶液(SubstrateSolution) 200 μ I,室溫條件下，避光、平放培育30分鐘；每孔加50 μ I終止液(StopSolution)。孔中溶液的顏色將由藍(lán)色變?yōu)辄S色。如果孔中溶液顏色為綠色或顏色變化不一致，輕輕拍打平板，以確保溶液充分混勻；30分鐘內(nèi)測(cè)450nm吸光值。
[0069]3.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本含量。
[0070]4.將計(jì)算所得的每個(gè)待測(cè)樣本的含量統(tǒng)計(jì)并繪制成圖表，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
[0071]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:FLRG在子癇前期組尿液樣本中的濃度最高，平均可達(dá)到15.47ng/mL ；FLRG在健康對(duì)照組尿液樣本中的濃度較低，平均為0.18ng/mL。
[0072]從實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，發(fā)生子癇前期的妊娠婦女的尿液中含有大量的FLRG,而健康對(duì)照組的妊娠婦女的尿液中的FLRG含量較少。
[0073]并且從實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，F(xiàn)LRG可以作為用于妊娠的子癇前期疾病的生物標(biāo)志物的應(yīng)用。并且優(yōu)選的，可將FLRG作為生物標(biāo)志物，并用于制備妊娠的子癇前期疾病的檢測(cè)工具，所述檢測(cè)工具的檢測(cè)對(duì)象為生物體的尿液，特別是妊娠婦女的尿液。
[0074]以下是以妊娠婦女尿液中FLRG為檢測(cè)目標(biāo)分子，并按照不同方式制備所得的定性或定量檢測(cè)工具的對(duì)照例，各對(duì)照例的制備方法如下:
[0075]對(duì)照例I——定量檢測(cè)工具I
[0076]采用試劑盒，該試劑盒設(shè)置有①鼠抗人FLRG單克隆抗體的多孔板，多孔板每孔包被鼠抗人FLRG單克隆抗體0.9 μ g?I μ g②生物素標(biāo)記的鼠抗人FLRG單克隆抗體檢測(cè)液，主要由生物素標(biāo)記的鼠抗人FLRG單克隆抗體、牛血清白蛋白、甘油和磷酸鹽緩沖液組成，生物素標(biāo)記的鼠抗人FLRG單克隆抗體的濃度為24mg/mL，牛血清白蛋白的濃度為1.5g?3g/100mL,甘油的濃度為50mL/100mL③生物素標(biāo)記的鼠抗人FLRG單克隆抗體結(jié)合的親和素-辣根過氧化物酶④顯色底物3'，3'，5，5'-四甲基聯(lián)苯胺和FLRG蛋白標(biāo)準(zhǔn)品。其對(duì)于妊娠婦女的尿液中FLRG的檢測(cè)限濃度為20ng/mL。
[0077]材料來源如下:
[0078]鼠抗人FLRG單克隆抗體:美國R&D公司
[0079]親和素-辣根過氧化物酶:上海雷浩信息科技有限公司
[0080]顯色底物3'，3'，5，5'-四甲基聯(lián)苯胺和FLRG蛋白標(biāo)準(zhǔn)品:美國R&D公司。
[0081]對(duì)照例2——定量檢測(cè)工具2
[0082]采用試劑盒，該試劑盒設(shè)置有A、磁性微球懸液:所述磁性微球?yàn)橹睆?br> 0.5 μ m-2 μ m的羥基化磁性微球與N-羥基硫代琥珀酸亞胺、碳二亞胺共同交聯(lián)所得；懸液中磁性微球的濃度為75-85個(gè)/ μ L ;Β、藻紅蛋白標(biāo)記的鏈霉親和素和生物素標(biāo)記的抗體檢測(cè)液:所述生物素為N-羥基琥珀酸亞胺酯；所述抗體為鼠抗人RFLG單克隆抗體；生物素標(biāo)記的抗體的濃度為1.7-2mg/mL。C、可溶性細(xì)胞間粘附分子-1蛋白標(biāo)準(zhǔn)品以及標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液。
[0083]材料來源如下:
[0084]1、RFLG蛋白標(biāo)準(zhǔn)品:購自R&D公司；[0085]2、鼠抗人RFLG單克隆抗體:購自R&D公司；
[0086]3、N-羥基硫代琥珀酸亞胺、N-羥基琥珀酸亞胺酯、2-嗎啉乙磺酸:購自Sigma公司；
[0087]4、藻紅蛋白標(biāo)記的鏈霉親和素:購自Molecular Probes公司；
[0088]5、碳二亞胺:購自Pierce公司；
[0089]6、牛血清白蛋白(BSA):Roche公司。
[0090]試劑盒對(duì)于妊娠婦女的尿液中FLRG的檢測(cè)限濃度為15ng/mL。
[0091]對(duì)照例3
[0092]采用現(xiàn)有制備膠體金免疫層析試紙的通用方法制備本發(fā)明所述的子癇前期定性檢測(cè)工具。
[0093]所述檢測(cè)工具設(shè)置有檢測(cè)線和控制線，膠體金濃度設(shè)置為0.5g/100ml，檢測(cè)線設(shè)置有以鼠抗人FLRG抗體為檢測(cè)抗體的檢測(cè)工作液，所述檢測(cè)工作液中鼠抗人FLRG抗體的濃度為0.5mg/ml ;控制線設(shè)置有以羊抗鼠IgG多克隆抗體為控制抗體的控制工作液,所述控制工作液中羊抗鼠IgG多克隆抗體的濃度為0.2mg/ml。
[0094]本對(duì)照例3中檢測(cè)工具對(duì)于妊娠婦女尿液中Adipsin的檢測(cè)限濃度為13ng/mL。
[0095]對(duì)照例4
[0096]采用現(xiàn)有制備膠體金免疫層析試紙的通用方法制備本發(fā)明所述的子癇前期定性檢測(cè)工具。
[0097]所述檢測(cè)工具設(shè)置有檢測(cè)線和控制線，膠體金濃度設(shè)置為2g/100ml，檢測(cè)線設(shè)置有以鼠抗人FLRG抗體為檢測(cè)抗體的檢測(cè)工作液，所述檢測(cè)工作液中鼠抗人FLRG抗體的濃度為3mg/ml ;控制線設(shè)置有以羊抗鼠IgG多克隆抗體為控制抗體的控制工作液,所述控制工作液中羊抗鼠IgG多克隆抗體的濃度為lmg/ml。
[0098]本對(duì)照例4中檢測(cè)工具對(duì)于妊娠婦女尿液中Adipsin的檢測(cè)限濃度為12ng/mL。
[0099]對(duì)照例5
[0100]采用現(xiàn)有制備膠體金免疫層析試紙的通用方法制備本發(fā)明所述的子癇前期定性檢測(cè)工具。
[0101]所述檢測(cè)工具設(shè)置有檢測(cè)線和控制線，膠體金濃度設(shè)置為1.2g/100ml，檢測(cè)線設(shè)置有以鼠抗人FLRG抗體為檢測(cè)抗體的檢測(cè)工作液，所述檢測(cè)工作液中鼠抗人FLRG抗體的濃度為1.5mg/ml ;控制線設(shè)置有以羊抗鼠IgG多克隆抗體為控制抗體的控制工作液，所述控制工作液中羊抗鼠IgG多克隆抗體的濃度為0.5mg/ml。
[0102]本對(duì)照例5中檢測(cè)工具對(duì)于妊娠婦女尿液中Adipsin的檢測(cè)限濃度為10ng/mL。
[0103]對(duì)照例6
[0104]采用現(xiàn)有制備膠體金免疫層析試紙的通用方法制備本發(fā)明所述的子癇前期定性檢測(cè)工具。
[0105]所述檢測(cè)工具設(shè)置有檢測(cè)線和控制線，膠體金濃度設(shè)置為1.5g/100ml，檢測(cè)線設(shè)置有以鼠抗人FLRG抗體為檢測(cè)抗體的檢測(cè)工作液，所述檢測(cè)工作液中鼠抗人FLRG抗體的濃度為2.5mg/ml ;控制線設(shè)置有以羊抗鼠IgG多克隆抗體為控制抗體的控制工作液，所述控制工作液中羊抗鼠IgG多克隆抗體的濃度為0.8mg/ml。
[0106]本對(duì)照例6中檢測(cè)工具對(duì)于妊娠婦女尿液中Adipsin的檢測(cè)限濃度為llng/mL。[0107]上述對(duì)照例3-6中的材料來源如下:
[0108]鼠抗人FLRG抗體:RD公司，美國
[0109]羊抗鼠IgG多克隆抗體:武漢博士德公司，中國
[0110]實(shí)施例2
[0111]將不同方法獲得的對(duì)照例1-6子癇前期定性檢測(cè)工具分別用于檢測(cè)實(shí)施例1中的妊娠婦女尿液的臨床樣本，包括有子癇前期組和健康對(duì)照組，其中子癇前期組中的124例根據(jù)收縮壓和舒張壓大小以及蛋白尿24小時(shí)量區(qū)分為重度子癇前期組(sPE，篩選標(biāo)準(zhǔn):收縮壓≥160mmHg，舒張壓≥1lOmmHg,蛋白尿>5g/24小時(shí))54例和輕度子癇前期組(mPE，收縮壓≥140mmHg,舒張壓≥90mmHg,在24小時(shí)的尿液收集中蛋白排泄≥300mg)70例。健康對(duì)照組為135例。
[0112]樣本收集:取妊娠婦女尿液樣本。
[0113]利用對(duì)照例1-6分別對(duì)所收集的259例樣本進(jìn)行檢測(cè)，所得檢測(cè)結(jié)果的陰性和陽性例數(shù)統(tǒng)計(jì)見表一:
[0114]表一
[0115]
【權(quán)利要求】
1.以FLRG作為檢測(cè)、診斷子癇前期疾病的標(biāo)志物制備相應(yīng)檢測(cè)工具的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述檢測(cè)工具的檢測(cè)對(duì)象為妊娠婦女的尿液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述檢測(cè)工具為定性檢測(cè)工具。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于:所述定性檢測(cè)工具為免疫層析試紙。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于:所述免疫層析試紙為膠體金免疫層析試紙。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于:所述膠體金免疫層析試紙?jiān)O(shè)置有檢測(cè)線和控制線，膠體金濃度設(shè)置為0.5-2g/100ml，檢測(cè)線設(shè)置有以鼠抗人FLRG抗體為檢測(cè)抗體的檢測(cè)工作液，所述檢測(cè)工作液中鼠抗人FLRG抗體的濃度為0.5-3mg/ml ;控制線設(shè)置有以羊抗鼠IgG多克隆抗體為控制抗體的控制工作液，所述控制工作液中羊抗鼠IgG多克隆抗體的濃度為0.2-lmg/ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述檢測(cè)工具為重度子癇前期檢測(cè)工具。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于:所述重度子癇前期檢測(cè)工具對(duì)于FLRG的檢測(cè)限濃度為10-12ng/mL。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于:所述檢測(cè)限濃度為10ng/mL。
10.一種權(quán)利要求1-9中任一應(yīng)用制備得到的妊娠的子癇前期疾病的檢測(cè)工具。
【文檔編號(hào)】G01N33/558GK103760340SQ201410042379
【公開日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2014年1月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月28日
【發(fā)明者】關(guān)祥乾, 胡懷忠 申請(qǐng)人:成都創(chuàng)宜生物科技有限公司