專利名稱：一種檢測(cè)人心力衰竭新型標(biāo)志物st2的快速診斷試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及ー種快速定性/定量檢測(cè)人全血、血清和/或血漿中心力衰竭標(biāo)志物人可溶性ST2濃度的快速診斷檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
心力衰竭是一種復(fù)雜的臨床癥狀群，是各種心臟病的嚴(yán)重階段，其發(fā)病率高，五年存活率與惡性腫瘤相仿。據(jù)我國(guó)五十家醫(yī)院住院病例調(diào)查，心力衰竭住院率占同期心血管病的20%，死亡率卻占40%，提示預(yù)后嚴(yán)重。就整個(gè)歐洲來(lái)說(shuō)，估計(jì)有癥狀的心カ衰竭病人占總?cè)丝诘?. 4% _2%，隨著年齡的增加，心力衰竭的患病率迅速増加。心力衰竭已經(jīng)成為美國(guó)主要的公共衛(wèi)生問(wèn)題。美國(guó)患有心力衰竭的病人大約有500萬(wàn)人，毎年新增50萬(wàn)人。毎年因心力衰竭而就診者達(dá)到1200-1500萬(wàn)，總住院天數(shù)達(dá)到650萬(wàn)。 ST2是白介素-1 (IL-I)受體家族成員之一，有跨膜ST2 (ST2L)和可溶性ST2(sST2)兩種，白介素-33(IL-33)是ST2L的功能配體。心肌細(xì)胞和纖維原細(xì)胞受到機(jī)械牽張后，ST2和IL-33產(chǎn)生增加。近年研究發(fā)現(xiàn)ST2水平升高和BNP或NT-proBNP —祥，可以反映心臟的負(fù)荷。在急性心肌梗死患者，TMI 14和TMI 23研究中的810例患者進(jìn)行了外周血ST2水平測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)30天內(nèi)死亡和發(fā)生心衰的患者外周血ST2水平顯著升高。在急性呼吸困難患者，Januzzi等對(duì)593例急診患者的研究發(fā)現(xiàn),心衰患者ST2的中位數(shù)高于非心衰患者,并且I年內(nèi)死亡的患者ST2中位數(shù)也高于存活的患者，ST2水平的升高是I年死亡率的獨(dú)立和強(qiáng)力預(yù)測(cè)指標(biāo)。還有研究在慢性心衰患者發(fā)現(xiàn)，ST2水平的升高和心衰嚴(yán)重程度相關(guān)并預(yù)測(cè)心臟猝死的發(fā)生，并且嚴(yán)重心衰患者升高ST2在2周時(shí)的變化也是死亡和需要心臟移植的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)。SaskiaBoisot等對(duì)150名急性不穩(wěn)定HF住院患者進(jìn)行研究,通過(guò)應(yīng)用與心臟相關(guān)的多參數(shù)(包括ST2，BNP, NT-proBNP及血尿素氮)進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，患者住院期間的ST2水平變化可預(yù)測(cè)90天時(shí)死亡率，且該作用獨(dú)立于BNP和NT-proBNP。總之，人可溶性ST2作為生物標(biāo)志物已反復(fù)被證實(shí)具有潛在的價(jià)值。測(cè)量急性呼吸困難或心肌梗死的急診患者血清ST2水平可能為分層護(hù)理提供ー些有用的預(yù)后信息。另夕卜，ST2的預(yù)測(cè)價(jià)值不受年齡、腎功能損害和體重指數(shù)的影響，而B(niǎo)NP、NT-proBNP的檢測(cè)通常受到這些因素的影響，因此，ST2的測(cè)定結(jié)合BNP或NT-pix)BNP的測(cè)定可以更好的提高心衰預(yù)后判斷的準(zhǔn)確性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及ー種快速定性/定量檢測(cè)人全血、血清和/或血漿，尤其是外周血中心力衰竭標(biāo)志物-人可溶性ST2的膠體金試紙條檢測(cè)試劑盒。本試紙條可對(duì)人心力衰竭標(biāo)志物-人可溶性ST2進(jìn)行定性/定量檢測(cè)，具有較高的特異性和靈敏度，操作簡(jiǎn)捷，也可以用配套儀器進(jìn)行定量檢測(cè)。
本發(fā)明的另ー個(gè)目的是在于提供了ー種人心力衰竭標(biāo)志物-人可溶性ST2免疫快速診斷試紙條的制備方法，包括抗可溶性ST2特異性抗體和/或抗原特異片段的制備、ST2免疫檢測(cè)試紙條的制備及其檢測(cè)方法和/或使用。該試紙條操作簡(jiǎn)捷、快速、高效、準(zhǔn)確，全過(guò)程只需要10分鐘，不受環(huán)境條件干擾，特異性好，且檢測(cè)靈敏度高，最低檢測(cè)級(jí)別可為ng/ml。本發(fā)明適用于醫(yī)院和急診單位等，可實(shí)現(xiàn)心力衰竭等心肌疾病的快速檢測(cè)和/或現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。本發(fā)明的檢測(cè)人可溶性ST2免疫膠體金試紙條由樣品墊、涂覆膠體金標(biāo)記的抗-人可溶性ST2抗體的金標(biāo)墊、在檢測(cè)線和質(zhì)控線包被有抗-人可溶性ST2抗體和IgG的硝酸纖維素膜、吸水墊依次構(gòu)成(見(jiàn)圖I)。在該P(yáng)VC底板的兩端，分別設(shè)有樣品墊和吸收墊；在該P(yáng)VC底板中部設(shè)有硝酸纖維素膜檢測(cè)層，在硝酸纖維素膜檢測(cè)層與樣品墊交界處，設(shè)有包被金標(biāo)記抗-人可溶性ST2抗體的金標(biāo)墊，在金標(biāo)墊一端部分設(shè)置在樣品墊之下，另一端部分設(shè)置在檢測(cè)層之上；在與樣品墊延續(xù)的檢測(cè)層上設(shè)有檢測(cè)線和質(zhì)控線，在該檢測(cè)線和質(zhì)控線上分別包被有抗-人可溶性ST2抗體和羊抗IgG。所述的膠體金標(biāo)記的結(jié)合墊按照以下方法制備得到將抗-人可溶性ST2抗體和 羊抗鼠IgG分別用金溶液標(biāo)記后，包被于玻璃纖維上即得；其中所述的硝酸纖維素膜可以用尼龍膜等代替。所述的背襯可以是各種硬質(zhì)的支持物，只要具有一定的硬度，具有附載或支持的功能都可用于本發(fā)明，例如可以是塑料板(PVC)、硬紙板等，優(yōu)選為PVC。本發(fā)明試劑盒的使用方法及評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)(I)檢測(cè)對(duì)象具有特征性病癥和/或胸痛或不舒服、呼吸困難、惡心、嘔吐、噯氣、出汗、心悸、頭暈、疲勞、暈厥等非特征性癥狀的患者和/或普通人群。(2)樣本患者和/或普通人群的全血、血清和/或血漿，尤其是外周血。
(3)檢測(cè)用吸滴管將標(biāo)本(全血、血清和/或血漿，尤其是外周血)收集在加樣本中，將試紙刻度線(標(biāo)記)一下浸入樣本中，等候5-10分鐘，樣本被完全吸附之后，便可判讀結(jié)果。(4)檢測(cè)原理本發(fā)明檢測(cè)試劑盒采用免疫層析法定性檢測(cè)人外周血中人可溶性ST2蛋白的濃度。在試劑盒的檢測(cè)區(qū)分別包被有抗-人可溶性ST2抗體結(jié)合片段，質(zhì)控區(qū)包被有羊抗鼠IgG抗體。檢測(cè)時(shí)，人外周血中的人可溶性ST2蛋白與試劑盒上事先包被有膠體金標(biāo)記抗-人可溶性ST2抗體和/抗原結(jié)合片段結(jié)合形成結(jié)合物，出現(xiàn)一條顔色條帶。無(wú)論樣本中是存在和/或較低濃度人可溶性ST2抗體，當(dāng)液面遷移至固定有羊抗鼠IgG抗體的質(zhì)控區(qū)時(shí)，質(zhì)控區(qū)應(yīng)該會(huì)出現(xiàn)一條顔色的條帶。如果檢測(cè)區(qū)出現(xiàn)一條顔色檢測(cè)帶，表示陽(yáng)性(+)結(jié)果，即在質(zhì)控區(qū)內(nèi)和測(cè)試區(qū)內(nèi)均出現(xiàn)一條顔色條帶。(注意由于待檢樣本中人可溶性ST2的濃度有所不同，因而測(cè)試區(qū)內(nèi)的顔色條帶可能出現(xiàn)顏色深淺的現(xiàn)象。但是，在一定時(shí)間內(nèi)，不論測(cè)試區(qū)內(nèi)的顔色條帶顏色深淺，都可判定為陽(yáng)性。)則表明患者已經(jīng)患有心力衰竭等心肌疾病，和/或具有發(fā)展為心力衰竭等心肌疾病的風(fēng)險(xiǎn)。如果只有質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)一條顔色條帶，而檢測(cè)區(qū)無(wú)顔色條帶，則說(shuō)明患者沒(méi)有患有心力衰竭等心肌疾病，和/或沒(méi)有具有發(fā)展為心力衰竭等心肌疾病的風(fēng)險(xiǎn)。如果質(zhì)控區(qū)沒(méi)有出現(xiàn)顏色條帶，則需要重新判定樣本量是否足夠或需要分析層析過(guò)程是否正常等。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)(1)檢測(cè)速度快，全過(guò)程只需10分鐘，可以實(shí)現(xiàn)單個(gè)樣品或大量樣本的檢測(cè)；(2)靈敏度高，最低檢測(cè)單位為ng/ml ; (3)特異性強(qiáng)，和其它心カ衰竭標(biāo)志物無(wú)交叉干擾；(4)操作簡(jiǎn)捷，操作人員無(wú)需經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)，按說(shuō)明書即可完成操作，易于推廣使用；(5)不需要任何儀器，特別適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)；(6)將側(cè)樣本范圍廣，全血、血清和/或血漿均可用作試驗(yàn)樣本，尤其是外周血，所需試劑和樣本量少，樣本量最低可至50-100ul。心力衰竭是一個(gè)復(fù)雜的臨床綜合癥,單ー標(biāo)記物不能反映心カ衰竭全部特征。人可溶性ST2蛋白作為ー個(gè)新的心カ衰竭標(biāo)記物，它和心肌肌鈣蛋白I、BNP具有同等重要的地位。因?yàn)锽NP的濃度似乎不能解釋心カ衰竭的嚴(yán)重性，因此人可溶性ST2蛋白和心肌肌鈣蛋白I和/或BNP的聯(lián)合測(cè)定，將為心力衰竭病情分級(jí)、治療提供一個(gè)可靠的評(píng)斷標(biāo)準(zhǔn)。在心力衰竭治療過(guò)程中，除根據(jù)患者的臨床癥狀外還可以根據(jù)患者人可溶性ST2蛋白水平和/或心肌肌鈣蛋白I水平和/或BNP的水平，制定和調(diào)整治療策略。因此人可溶性ST2蛋白水平和/或心肌肌鈣蛋白I水平和/或BNP的水平聯(lián)合，或者人可溶性ST2蛋白水平 獨(dú)立測(cè)定可以為心カ衰竭患者提供一個(gè)客觀的評(píng)估方法。本發(fā)明所述的方法在醫(yī)療領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。例如，本方法可以用來(lái)普通人群篩查，包括被醫(yī)生篩查，包括醫(yī)院、門診院所和緊急醫(yī)療部門。


圖I膠體金試紙條結(jié)構(gòu)示意圖順序依次為■:樣本墊■:金標(biāo)墊□:背襯□:硝酸纖維素膜□:吸水紙圖2檢測(cè)結(jié)果判讀示意圖依次為陽(yáng)性、陰性、無(wú)效、無(wú)效。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)ー步說(shuō)明，但這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明目的，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解為，在不偏離本發(fā)明精神和范圍的前提下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。實(shí)施例I本發(fā)明膠體金診斷試劑盒的制備制備抗-人可溶性ST2單克隆抗體分別用純化的人可溶性ST2抗體和/或抗原結(jié)合片段免疫純系小鼠，小鼠血清產(chǎn)生相應(yīng)的抗體吋，即可將小鼠脾細(xì)胞和SP2/0細(xì)胞融合。利用HAT選擇雜交瘤細(xì)胞，并用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)或者WB對(duì)McAb進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)于檢測(cè)抗體陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞應(yīng)用有限稀釋液進(jìn)行克隆，同時(shí)保存陽(yáng)性細(xì)胞株，利用BALB/c純系小鼠制備大量的單克隆抗體，同時(shí)對(duì)抗體特異性的鑒定、識(shí)別抗原表位的鑒定、親和力的鑒定及配對(duì)試驗(yàn)，篩選出效果最好的一對(duì)細(xì)胞株。將篩選到的細(xì)胞株重新植入小鼠腹腔中，過(guò)5-6天取出腹水，利用硫酸銨鹽析及親和層析純化得到的單克隆抗體。膠體金試紙條的制備膠體金的制備(I)用5暈升微量移液器取3暈升I %四氯金酸于500暈升的圓底燒瓶中，量取297毫升的超純水亦加入燒瓶中，配制成0.01%的四氯金酸反應(yīng)液，充分?jǐn)嚢杌靹颍?2)連接上蛇形冷凝管，開(kāi)啟冷凝水，并置于磁力加熱攪拌器上，加熱煮沸；(3)放入攪拌子，劇烈攪拌，然后一次性快速準(zhǔn)確地加入3毫升檸檬酸銨溶液；(4)金黃色的氯金酸水溶液首先變成灰色，約2分鐘后變成紫紅色，繼續(xù)煮沸5分 鐘；(5)關(guān)閉磁力加熱攪拌器,待膠體金冷卻后,分裝于500毫升的玻璃試劑瓶中,夕卜面覆上鋁箔，按規(guī)定貼上標(biāo)簽；制備的膠體金應(yīng)呈現(xiàn)透亮的紫紅色，沒(méi)有聚合物及肉眼可見(jiàn)的沉淀；取適量于530納米波長(zhǎng)處測(cè)定，紫外吸收值在I. 1-1. 3之間。制備膠體金結(jié)合物(I)根據(jù)用擬標(biāo)記的膠體金的總量計(jì)算出所需要的待標(biāo)記蛋白質(zhì)的總量，エ本藝姆暈升膠體金標(biāo)記12微克/抗體，標(biāo)記的抗體量為3. 6暈克；(2)用0. IM的碳酸鉀或0. IM鹽酸調(diào)節(jié)膠體金的pH值為7. 8 ；(3)在電磁攪拌器下，將抗體蛋白質(zhì)溶液加入膠體金溶液中，加入蛋白質(zhì)時(shí)應(yīng)逐滴加入，I暈克蛋白質(zhì)大約5分鐘加完；(4)抗體和膠體金反應(yīng)5分鐘后，在磁力攪拌器下加入5%的牛血清蛋白(BSA)，使其終濃度為1% ;(5) 10分鐘后，加入3%的PEG2000，至終濃度為0. 3% ;(6)繼續(xù)反應(yīng)I小時(shí)或者過(guò)夜；(7)將標(biāo)記好的膠體金溶液于2000r/min，4°C離心10分鐘，吸出上清，棄去沉淀，以去除大的聚合物；(8)調(diào)整好離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為10000r/min，4°C離心30分鐘，棄上清，將沉淀以原體積的0. OlMPBS pH8. 2 (內(nèi)含1% BSA)溶解，重復(fù)離心三次；(9)最后一次小心棄去上清，沉淀溶于原體積的1/50PBS(內(nèi)含1% BSA)中，即得
免疫金。檢測(cè)線和對(duì)照線包被(將檢測(cè)抗體包被在硝酸纖維素膜上)(I)檢測(cè)線劃線分別將抗-人可溶性ST2單克隆抗體裝入噴膜機(jī)中(蛋白微量噴膜系統(tǒng))，在硝酸纖維素膜上按lul/cm的量劃上；(2)質(zhì)控劃線羊抗鼠IgG抗體包被液裝入噴膜機(jī)中(蛋白微量噴膜系統(tǒng))，在硝酸纖維素膜上按lul/cm的量劃上；(3)包被37°C包被2小時(shí)；(4)封閉37°C封閉30分鐘；(5)干燥將包被后的硝酸纖維素膜放入真空干燥器內(nèi)干燥20小時(shí)，密閉保存待用。結(jié)合墊制備(I)開(kāi)啟點(diǎn)膜儀，預(yù)熱30分鐘，用蒸餾水做10個(gè)循環(huán)；(2)調(diào)整免疫金的OD值為30，將免疫金加入機(jī)器左邊的塑料容器內(nèi)，設(shè)置程序，調(diào)整2#噴頭噴量為2ul/cm，將免疫金噴涂在玻璃纖維結(jié)合墊上，噴線的位置在結(jié)合墊的中央;(3)噴完結(jié)合墊后，置于37°C烘箱中干燥30 分鐘；(4)干燥將標(biāo)記后玻璃纖維放入真空干燥器內(nèi)干燥20小時(shí),取出密閉保存待用。檢測(cè)卡制備(I)在塑料底板的中央撕去覆于上面的膠帶，貼上包被好抗體的硝酸纖維素膜；(2)撕去塑料板中央下面的寬為5毫米的膠帶，貼上噴上膠體金的結(jié)合墊，結(jié)合墊前端的硝酸纖維素膜重疊2毫米；(3)撕去塑料板最下面寬為20毫米的膠帶，貼上經(jīng)過(guò)預(yù)處理的樣品墊，樣品墊的前端與結(jié)合墊重疊約5毫米；(4)撕去塑料底板的最上端約為25毫米的膠帶，貼上吸水紙，吸水紙與硝酸纖維素膜重疊約2毫米；(5)組裝完成后，將每ー個(gè)配件都?jí)簩?shí)，檢查粘貼結(jié)果，將組裝好的大卡用切條機(jī)切成3毫米寬的試紙條；(6)把切好的試紙條裝在測(cè)試卡中，即得。試劑盒的組裝將吸滴管、樣品加樣杯、一次性注射器、制備好的檢測(cè)卡和使用說(shuō)明書組裝在ー個(gè)盒子里，即得本發(fā)明的試劑盒。實(shí)施例2臨床試驗(yàn)研究樣本采集于晨起7 10時(shí)對(duì)20例心カ衰竭患者進(jìn)行空腹抽前臂血，立即加入EDTA和/或肝素等抗凝劑，離心后取血清置于-20°C備檢。檢測(cè)及結(jié)果將組裝完成的檢測(cè)試劑盒平放，用所配吸管吸取適量外周血，緩慢滴加4-5滴于檢測(cè)盒的加樣孔中(盡量滴加于加樣孔中部，以保證測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確)。在吸水材料的作用下，待檢樣品緩慢移動(dòng)到檢測(cè)區(qū)和質(zhì)控區(qū)，膜反應(yīng)體系啟動(dòng)。無(wú)論待檢樣本中有無(wú)人可溶性ST2，質(zhì)控區(qū)處都應(yīng)顯現(xiàn)一條顔色條帶，這是重要的判斷標(biāo)準(zhǔn)，可以確定是否加入足夠量的外周血，層析過(guò)程是否正常等，同時(shí)也可以作為判斷檢測(cè)盒是否合格的ー個(gè)內(nèi)在標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果判定通過(guò)觀察窗檢測(cè)待檢人可溶性ST2是否存在。(I)在層析過(guò)程中，若待測(cè)的外周血樣本中不含有人可溶性ST2或其濃度低于檢測(cè)靈敏度時(shí)，即樣本中沒(méi)有特異性抗原與膜上的檢測(cè)帶內(nèi)的單抗發(fā)生免疫反應(yīng)，因而檢測(cè)區(qū)內(nèi)不會(huì)出現(xiàn)一條顔色檢測(cè)帶，表示陰性(_)結(jié)果，即僅在質(zhì)控區(qū)內(nèi)出現(xiàn)一條顔色帯。(2)若待檢樣本中人可溶性ST2的濃度高于檢測(cè)閾值時(shí)，即樣本中的人特異性ST2與固定在膜上的檢測(cè)帶內(nèi)的單抗結(jié)合，因而檢測(cè)區(qū)內(nèi)會(huì)出現(xiàn)一條顔色檢測(cè)帶，表示陽(yáng)性(+)結(jié)果，即在質(zhì)控區(qū)內(nèi)和檢測(cè)區(qū)內(nèi)內(nèi)均出現(xiàn)一條顔色條帶。(注意由于待檢樣本中人可溶性ST2的濃度有所不同，因而測(cè)試區(qū)內(nèi)的顔色條帶可能出現(xiàn)顏色深淺的現(xiàn)象。但是，在一定時(shí)間內(nèi)，不論測(cè)試區(qū)內(nèi)的顔色條帶顏色深淺，都可判定為陽(yáng)性。)(3)若檢測(cè)區(qū)和質(zhì)控區(qū)未出現(xiàn)顏色條帶，則檢測(cè)過(guò)程失敗?？赡艿脑?yàn)椴僮鬟^(guò)程不正確、試劑盒已變質(zhì)損壞或出現(xiàn)質(zhì)量問(wèn)題。14例心カ衰竭確診患者和6例健康實(shí)驗(yàn)人員隨機(jī)采集外周血標(biāo)本，盲檢結(jié)果如下
權(quán)利要求
1.ー種快速定性/定量檢測(cè)人心力衰竭標(biāo)志物ST2的膠體金試劑盒，其特征在于試劑盒組分為可快速檢測(cè)人心力衰竭等心肌疾病的膠體金試紙條，所述條上包被有膠體金標(biāo)記的抗可溶性ST2抗體結(jié)合片段；設(shè)有檢測(cè)線和質(zhì)控線，檢測(cè)線上固定有抗可溶性ST2捕獲抗體或抗原結(jié)合片段；質(zhì)控線上固定有羊抗鼠IgG。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的新型心衰檢測(cè)試劑盒包括塑料襯墊、纖維素膜、金標(biāo)墊、樣本墊、吸收墊。
3.所述的檢測(cè)心衰的快速診斷試劑盒，其特征在于，所述顏色顆?？梢允签`種膠體金顆粒、或者其他銀、鉄、磁性、燃料、乳膠、熒光顆粒。
4.根據(jù)權(quán)利I所述的試劑盒，其特征在于試紙條上包被的膠體金標(biāo)記的抗ST2抗體或抗原結(jié)合片段，以及檢測(cè)線上固定的抗-人抗溶性ST2捕獲抗體或抗原結(jié)合片段，是經(jīng)過(guò)免疫非人類哺乳動(dòng)物，重組從人類細(xì)胞分離到的人類可溶性ST2產(chǎn)生的。
5.根據(jù)權(quán)利I所述的試劑盒，其特征在于質(zhì)控線上固定的IgG為能夠識(shí)別不同表位的單克隆抗體。
6.根據(jù)權(quán)利I所述的試劑盒，其特征在于用于快速檢測(cè)人心力衰竭標(biāo)志物ST2的實(shí)驗(yàn)樣本包括全血、血清或血漿，尤其是外周血。
7.根據(jù)權(quán)利要求4中，所述的抗體，可以是通過(guò)發(fā)酵法或免疫法制備的兔、鼠、羊、馬等的單克隆抗體或者或多克隆抗體。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于當(dāng)待測(cè)的外周血樣本中不含有人可溶性ST2或其濃度低于檢測(cè)靈敏度時(shí)，檢測(cè)區(qū)內(nèi)不會(huì)出現(xiàn)一條彩色檢測(cè)帶，而僅在質(zhì)控區(qū)內(nèi)出現(xiàn)一條彩色帶，表示陰性(_)結(jié)果。
9.根據(jù)權(quán)利7所述的試劑盒，其特征在于當(dāng)待檢樣本中人可溶性ST2的濃度高于檢測(cè)閾值時(shí)，檢測(cè)區(qū)內(nèi)會(huì)出現(xiàn)一條彩色檢測(cè)帶，同時(shí)在質(zhì)控區(qū)內(nèi)出現(xiàn)一條彩帶，表示陽(yáng)性(+)結(jié)果。
10.根據(jù)權(quán)利7所述的試劑盒，其特征在干由于待檢樣本中人可溶性ST2的濃度有所不同，因而檢測(cè)區(qū)內(nèi)的彩色條帶可能出現(xiàn)顏色深淺的現(xiàn)象。但是，在一定時(shí)間內(nèi)，不論檢測(cè)區(qū)內(nèi)的彩色條帶顏色深淺，都可判定為陽(yáng)性。
11.根據(jù)權(quán)利7所述的試劑盒，其特征在于當(dāng)質(zhì)控區(qū)未出現(xiàn)彩色條帶，即使檢測(cè)區(qū)出現(xiàn)彩色條帶，也判檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。
12.根據(jù)權(quán)利I所述的試劑盒，其特征在于本發(fā)明膠體金試紙條可以用于臨床及科研中的檢測(cè)人心力衰竭等心肌損傷性疾病，用以輔助指導(dǎo)治療、預(yù)后判斷和/或微量殘留心肌壞死(MDR)的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)等。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種快速檢測(cè)人全血、血清和/或血漿，尤其是外周血中心力衰竭標(biāo)志物人可溶性ST2的膠體金試紙條檢測(cè)試劑盒。試劑盒利用免疫學(xué)反應(yīng)原理，其通過(guò)顏色顆粒標(biāo)記的免疫層析法定性或半定量檢測(cè)樣本中的ST2。本發(fā)明的快速檢測(cè)試紙條是在底板上依次相互搭接，包括吸水紙、樣本墊、纖維素膜等組成的試紙條。其中顏色顆粒用于抗體的包被，試紙條包括質(zhì)控線和檢測(cè)線。本發(fā)明試紙條對(duì)人心力衰竭標(biāo)志物人可溶性ST2進(jìn)行定性/定量檢測(cè)，具有較高的特異性和靈敏度，操作簡(jiǎn)捷?？梢杂糜谂R床及科研中的檢測(cè)人心力衰竭等心肌損傷性疾病，用以輔助診斷、指導(dǎo)治療、預(yù)后判斷和微量殘留心肌壞死(MDR)的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)等。
文檔編號(hào)G01N33/68GK102830234SQ20121028822
公開(kāi)日2012年12月19日 申請(qǐng)日期2012年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月10日
發(fā)明者張開(kāi)山, 蘇廣宇, 高陽(yáng) 申請(qǐng)人:杭州華得森生物技術(shù)有限公司