一種苦瓜葉揮發(fā)性殺蟲組分的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種苦瓜葉揮發(fā)性殺蟲組分的檢測(cè)方法，即通過(guò)GC-MS技術(shù)鑒定苦瓜葉片化學(xué)成分的方法和結(jié)果。它是采用同時(shí)蒸餾法提取苦瓜葉片揮發(fā)性組分的方法得到提取液，經(jīng)過(guò)二氯甲烷萃取處理后再經(jīng)毛細(xì)管色譜柱分離，將所得樣品質(zhì)譜圖與標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫(kù)中的譜圖對(duì)比定性，并采用峰面積歸一化法計(jì)算相對(duì)含量。從苦瓜葉揮發(fā)性組分中鑒定出14種化學(xué)成分。結(jié)果顯示(Z)-牻牛兒醇醋酸酯、6-亞異丙基-1-甲基二環(huán)[3.1.0]己烷、N,N-二甲基-2-苯乙胺為苦瓜葉揮發(fā)性提取物中的主要化學(xué)成分，分別占總出峰面積的16.21%、2.18%和0.92%。本發(fā)明為苦瓜葉作為一種植物資源的開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)，提供了實(shí)證依據(jù)。
【專利說(shuō)明】一種苦瓜葉揮發(fā)性殺蟲組分的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物資源的綜合開發(fā)【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及采用現(xiàn)代分析檢測(cè)儀器檢測(cè)植物、蔬菜化學(xué)成分的檢測(cè)方法，更具體的說(shuō)是一種苦瓜葉揮發(fā)性殺蟲組分的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]苦瓜(Momordica Charantia L)又名錦蒸枝、癩葡萄、癩瓜、涼瓜等,系葫蘆科苦瓜屬蔓性草本植物，據(jù)《滇南本草》、《本草綱目》記載，苦瓜葉片具有治胃痛、痢疾、療瘡腫毒、驅(qū)蟲等功效，通過(guò)田間調(diào)查和實(shí)驗(yàn)證實(shí)苦瓜葉及其提取物還具有較強(qiáng)抗蟲性，K.Prabakar等對(duì)苦瓜、蛇瓜、絲瓜、冬瓜和西瓜這五種葫蘆科植物葉片的甲醇提取物對(duì)致倦庫(kù)蚊(CWmquinquefasciatus)幼蟲殺蟲活性進(jìn)行了研究,結(jié)果表明苦瓜葉甲醇提取物對(duì)致倦庫(kù)蚊的殺蟲活性最大，其LC5tl值為465.85ppm，低于其它四種葫蘆科植物。陳宏等采用乙醚、丙酮、乙醇、石油醚4種有機(jī)溶劑浸提和熱提苦瓜葉片，以提取液涂抹桑葉和甘藍(lán)葉分別飼喂家蠶和菜青蟲，試驗(yàn)結(jié)果表明:4種有機(jī)溶劑提取液處理試蟲，其取食量降低，生長(zhǎng)速率緩慢，存活率下降，其中以乙醚提取液的作用效果最強(qiáng)。除葉片浸提產(chǎn)物外，葉片揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)昆蟲也有一定的拒食性，但關(guān)于此方面研究至今未見相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種苦瓜葉揮發(fā)性殺蟲組分的檢測(cè)方法。本文通過(guò)氣相色譜-質(zhì)譜-計(jì)算機(jī)聯(lián)用系統(tǒng)對(duì)苦瓜葉揮發(fā)組分作了一個(gè)系統(tǒng)的分析，試圖揭示苦瓜葉抗蟲作用的化學(xué)本質(zhì)，為苦 瓜葉片抗蟲作用的進(jìn)一步研究提供參考，并為苦瓜葉作為一種植物資源的綜合開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。為實(shí)現(xiàn)此目的，本
【發(fā)明內(nèi)容】
提供如下的技術(shù)內(nèi)容:
一種苦瓜葉揮發(fā)性殺蟲組分的檢測(cè)方法，其特征在于包括如下的步驟:
(1)苦瓜葉揮發(fā)性組分:
將新鮮苦瓜葉用去離子水沖洗干凈，置于陰涼潔凈處晾去表面水分，稱取500g搗碎，進(jìn)行水蒸氣蒸餾，蒸餾時(shí)間2 h，溜出液速度為80-100滴/min。蒸餾液用IOOmL二氯甲烷萃取，每次20mL，萃取5次，粗提物經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至5 mL，得到淡黃色油狀提取物，備用；
(2)采用GC-MS進(jìn)行分析，氣相色譜條件:柱子初始溫度40°C保持3min，以5°C/min升至180°C保持2min，再以10°C /min升至280°C，保持2min，進(jìn)樣口溫度:250°C，質(zhì)譜連接線溫度:250°C，高純氦氣為載氣，流速l.0ml/min，分流比:10:1，進(jìn)樣量:1.ΟμL ;質(zhì)譜條件:質(zhì)譜電離方式為ΕΙ，電子轟擊源電子能量70eV，離子源溫度230°C，電子倍增器電壓1.0 X 105，溶劑延遲時(shí)間:3min，掃描范圍m/z: 35-1000aum ；
(3)利用峰面積歸一化法計(jì)算各峰面積的相對(duì)含量，從苦瓜葉揮發(fā)性組分中分析鑒定出14種化合物，主要成分有16.21% (Z)-櫳牛兒醇醋酸酯，16.21%6-亞異丙基-1-甲基二環(huán)[3.1.0]己烷，0.92%N, N-二甲基-2-苯乙胺。
[0004]本發(fā)明具更加體的試驗(yàn)方法如下:
1、材料與方法1.1儀器和試劑
GC-MS 聯(lián)用儀(Thermo, Focus GC, DSQ II，美國(guó))
TR-5MS 色譜柱(30mX 25mmX0.25Mm), NIST05 標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫(kù)
氯仿，丙酮、二氯甲烷、無(wú)水硫酸鈉和氫氧化鈉均為分析純(天津市元立化工有限公司)苦瓜葉采自天津市郊區(qū)，經(jīng)鑒定為葫蘆目葫蘆科苦瓜屬長(zhǎng)豐三號(hào)苦瓜的葉片，用去離子水洗凈后烘干備用。
[0005]1.2分析樣品的制備
采用同時(shí)蒸餾法。將新鮮苦瓜葉用去離子水沖洗干凈，置于陰涼潔凈處晾去表面水分，稱取500g搗碎，進(jìn)行水蒸氣蒸餾，蒸餾時(shí)間2 h，溜出液速度為80-100滴/min。蒸餾液用IOOmL二氯甲烷萃取，每次20mL，萃取5次，粗提物經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至5 mL,得到淡黃色油狀提取物作GC-MS分析。
[0006]1.3GC-MS 分析條件
氣相色譜條件:柱子初始溫度40°C保持3min,以5°C /min升至180°C保持2min,再以IO0C /min升至280°C，保持2min，進(jìn)樣口溫度:250°C，質(zhì)譜連接線溫度:250°C，高純氦氣為載氣，流速1.0ml/min,分流比:10:1,進(jìn)樣量:1.ΟμL ；
質(zhì)譜條件:質(zhì)譜電離方式為EI，電子轟擊源電子能量70eV，離子源溫度230°C，電子倍增器電壓1.0 X 105，溶劑延遲時(shí)間:3min，掃描范圍m/z:35-1000aum。
[0007]按上述GC-MS分析條件對(duì)苦瓜葉提取物上機(jī)測(cè)試，苦瓜葉揮發(fā)性組分的總離子流色譜圖(見圖1)。各峰的鑒定主要通過(guò)NIST05譜庫(kù)檢索，并根據(jù)有機(jī)化合物的質(zhì)譜斷裂一般規(guī)律和文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)分析確定，利用峰面積歸一化法計(jì)算各峰面積的相對(duì)含量(結(jié)果見表1)。
[0008]通過(guò)GC-MS技術(shù)，從苦瓜葉揮發(fā)性組分中分析簽定出14種化合物，結(jié)果顯示(Z)-櫳牛兒醇醋酸酯、6-亞異丙基-1-甲基二環(huán)[3.1.0]己烷、N，N-二甲基-2-苯乙胺為苦瓜葉揮發(fā)性提取物中的主要化學(xué)成分，分別占總出峰面積的16.21%、2.18%和0.92%。從化合物類型來(lái)看，苦瓜葉揮發(fā)性提取物的主要化學(xué)成分為酯類、脂肪酸、醇類、生物堿類和萜類等，其中以酯類的含量最為豐富。
[0009]表1苦瓜葉揮發(fā)性提取液化學(xué)成分的GC-MS分析結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種苦瓜葉揮發(fā)性殺蟲組分的檢測(cè)方法，其特征在于按如下的步驟進(jìn)行: (1)苦瓜葉揮發(fā)性組分: 將新鮮苦瓜葉用去離子水沖洗干凈，置于陰涼潔凈處晾去表面水分，稱取500g搗碎，進(jìn)行水蒸氣蒸餾，蒸餾時(shí)間2 h，溜出液速度為80-100滴/min ;蒸餾液用IOOmL二氯甲烷萃取，每次20mL，萃取5次，粗提物經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至5 mL，得到淡黃色油狀提取物，備用； (2)采用GC-MS進(jìn)行分析，氣相色譜條件:柱子初始溫度40°C保持3min，以5°C/min升至180°C保持2min，再以10°C /min升至280°C，保持2min，進(jìn)樣口溫度:250°C，質(zhì)譜連接線溫度:250°C，高純氦氣為載氣，流速l.0ml/min，分流比:10:1，進(jìn)樣量:1.ΟμL ;質(zhì)譜條件:質(zhì)譜電離方式為ΕΙ，電子轟擊源電子能量70eV，離子源溫度230°C，電子倍增器電壓1.0 X 105，溶劑延遲時(shí)間:3min，掃描范圍m/z: 35-1000aum ； (3)利用峰面積歸一化法計(jì)算各峰面積的相對(duì)含量，從苦瓜葉揮發(fā)性組分中分析鑒定出14種化合物，主要成分有16.21% (Z)-櫳牛兒醇醋酸酯，16.21%6-亞異丙基-1-甲基二環(huán)[3.1.0]己烷，0.92%N, N-二甲基-2-苯乙胺。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103954702SQ201410158780
【公開日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2014年4月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月18日
【發(fā)明者】陳宏 , 單少杰, 郭紅梅, 李翔, 姜虹羽, 雷盯函 申請(qǐng)人:天津師范大學(xué)