一種低聚肽含量快速檢測(cè)的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及低聚肽技術(shù)加工領(lǐng)域，具體的是一種低聚肽含量快速檢測(cè)的方法，其特征是利用三氯乙酸對(duì)不同分子量大小的多肽鏈的沉淀效果的差異，對(duì)低聚肽生產(chǎn)過(guò)程中肽的水解程度及低聚肽含量進(jìn)行快速檢測(cè)，從而可以有效的獲得低聚肽。本發(fā)明所述方法快捷簡(jiǎn)便，檢測(cè)過(guò)程易于控制，大大縮短了檢測(cè)時(shí)間，減少了環(huán)境污染，降低了檢測(cè)成本?？捎糜诘途垭漠a(chǎn)品生產(chǎn)控制，適宜于工業(yè)化生產(chǎn)中控控制。
【專利說(shuō)明】一種低聚肽含量快速檢測(cè)的方法
[0001]

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明涉及低聚肽加工【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種在低聚肽酶解生產(chǎn)過(guò)程中，進(jìn)行 低聚肽含量快速檢測(cè)、控制水解程度的方法。
[0003]

【背景技術(shù)】
[0004] 氨基酸是蛋白質(zhì)的基本構(gòu)成單位。不同種類的氨基酸，按照特定的順序，構(gòu)成結(jié)構(gòu) 不同、功能各異的蛋白質(zhì)。一般認(rèn)為蛋白質(zhì)是由51個(gè)以上的氨基酸構(gòu)成。而在生命體中， 還有由2?50個(gè)氨基酸構(gòu)成的物質(zhì)，科學(xué)界將其稱為"肽"。肽是介于氨基酸和蛋白質(zhì)之 間的物質(zhì)。氨基酸的分子最小，蛋白質(zhì)最大，兩個(gè)或以上的氨基酸脫水縮合形成若干個(gè)肽鍵 從而組成一個(gè)肽，多個(gè)肽進(jìn)行多級(jí)折疊就組成一個(gè)蛋白質(zhì)分子。通常，將由2?10個(gè)氨基 酸構(gòu)成的稱為低聚肽，將由11?50個(gè)氨基酸組成的稱為多肽。在物質(zhì)構(gòu)成上，肽與蛋白質(zhì) 具有同質(zhì)性，卻具有不同氨基酸和蛋白質(zhì)的獨(dú)特的生理功能，尤其是低聚肽，它具有分子量 小、水溶性好、熱穩(wěn)定性好、酸穩(wěn)定性好、直接吸收性、安全性強(qiáng)等特性?？梢詰?yīng)用于具有營(yíng) 養(yǎng)療效的食品及低致敏性食品、保健食品、運(yùn)動(dòng)食品、高蛋白食品、焙烤食品、糖果、糕點(diǎn)、冷 飲等。
[0005] 目前低聚肽生產(chǎn)，主要采用蛋白酶水解蛋白方式，定向切割長(zhǎng)鏈蛋白質(zhì)或多肽，直 至形成2?10個(gè)氨基酸構(gòu)成的低聚肽方式生產(chǎn)。但是蛋白酶水解程度不易控制，水解程度 過(guò)淺則導(dǎo)致酶解液中殘存大量大分子多肽，如水解程度過(guò)深則又會(huì)產(chǎn)生大量游離氨基酸。 需后續(xù)采用超濾、納濾等方式對(duì)酶解液處理，獲得特定分子量的低聚肽，生產(chǎn)周期長(zhǎng)，且影 響產(chǎn)品收率及品質(zhì)。而使用常規(guī)的凝膠色譜等方式進(jìn)行分子量檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)，無(wú)法同步監(jiān)視 水解程度、在線監(jiān)控?？梢?jiàn)急需一種能夠?qū)崟r(shí)、快速、準(zhǔn)確的的方法來(lái)測(cè)定生產(chǎn)過(guò)程中低聚 肽的含量。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種低聚肽含量快速檢測(cè)的方法，同步控制蛋白液水解程 度，在線監(jiān)視酶解效果。有效生產(chǎn)低聚肽產(chǎn)品，無(wú)需進(jìn)行后續(xù)超濾、納濾操作，縮短了工藝流 程、提高了產(chǎn)品收率，解決了現(xiàn)有檢測(cè)方法周期長(zhǎng)、影響產(chǎn)品品質(zhì)等問(wèn)題。
[0007] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種低聚肽含量的快速檢測(cè)方法，其 步驟包括： 一、 酶解液預(yù)處理：酶解液過(guò)濾后，加三氯乙酸沉淀后離心，得到澄清上清液； 二、 透光率檢測(cè)：離心上清液用分光光度計(jì)檢測(cè)透光率。
[0008] 優(yōu)選的，步驟一所述的一種低聚肽含量快速檢測(cè)的方法，其特征在于步驟（1)所述 的酶解液為正在進(jìn)行水解的、未滅酶的酶解液，酶解液使用3M中速濾紙過(guò)濾得澄清濾液。 過(guò)程中使用固形物含量檢測(cè)儀檢測(cè)酶解液中固形物含量，調(diào)節(jié)溶液固形物含量在5-15%范 圍內(nèi)。所用三氯乙酸濃度30%，至溶液中三氯乙酸濃度為10-20%，混勻，處理液常溫條件下， 4000rpm離心lOmin，得到澄清上清液。
[0009] 優(yōu)選的，步驟二所述的一種低聚肽含量快速檢測(cè)的方法，其特征在于步驟（2)所述 的透光率檢測(cè)波長(zhǎng)為500nm，使用步驟一獲得的未加三氯乙酸處理的澄清過(guò)濾液作為參比。 如進(jìn)行離心后的樣品管底或壁上無(wú)肉眼可見(jiàn)沉淀，且使用分光光度計(jì)檢測(cè)透光率達(dá)到85% 以上,則可判定原酶解液清液中的低聚肽含量超過(guò)蛋白總量的90%。
[0010] 本發(fā)明的有益效果是：使用本發(fā)明方法檢測(cè)酶解液中的低聚肽含量，具有快捷、簡(jiǎn) 單且準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，可用于生產(chǎn)中間環(huán)節(jié)控制，有效縮短檢測(cè)周期，提高生產(chǎn)效率。

【具體實(shí)施方式】
[0011] 實(shí)施例1 將正在進(jìn)行水解的酶解液使用3M中速濾紙過(guò)濾得澄清濾液。使用固形物含量檢測(cè)儀 檢測(cè)酶解液中的固形物含量，調(diào)節(jié)溶液固形物含量為5%。在澄清過(guò)濾液中加入30%三氯乙 酸溶液至三氯乙酸終濃度10%，混勻，裝入透明尖底離心管內(nèi)，常溫、轉(zhuǎn)數(shù)4000 rpm條件下 離心lOmin ;上清液在500 nm條件下進(jìn)行透光率檢測(cè)。
[0012] 實(shí)施例2 將正在進(jìn)行水解的酶解液使用3M中速濾紙過(guò)濾得澄清濾液。使用固形物含量檢測(cè)儀 檢測(cè)酶解液中的固形物含量，調(diào)節(jié)溶液固形物含量為10%。在澄清過(guò)濾液中加入30%三氯乙 酸溶液至三氯乙酸終濃度15%，混勻，裝入透明尖底離心管內(nèi)，常溫、轉(zhuǎn)數(shù)4000 rpm條件下 離心lOmin,上清液在500 nm條件下進(jìn)行透光率檢測(cè)。
[0013] 實(shí)施例3 將正在進(jìn)行水解的酶解液使用3M中速濾紙過(guò)濾得澄清濾液。使用固形物含量檢測(cè)儀 檢測(cè)酶解液中的固形物含量，調(diào)節(jié)溶液固形物含量為15%。在澄清過(guò)濾液中加入30%三氯乙 酸溶液至三氯乙酸終濃度20%，混勻，裝入透明尖底離心管內(nèi)，常溫、轉(zhuǎn)數(shù)4000 rpm條件下 離心lOmin ;上清液在500 nm條件下進(jìn)行透光率檢測(cè)。
[0014] 以上所述，僅為本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】，并不局限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技 術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范 圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1. 一種低聚肽含量快速檢測(cè)的方法，包括以下步驟： (1) 酶解液預(yù)處理，酶解液過(guò)濾后，加三氯乙酸沉淀離心； (2) 透光率檢測(cè)，離心上清液用分光光度計(jì)檢測(cè)透光率。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種低聚肽含量快速檢測(cè)的方法，其特征在于步驟（1)所述 的酶解液為正在進(jìn)行水解的、未滅酶的酶解液，酶解液使用3M中速濾紙過(guò)濾得澄清濾液， 過(guò)程中使用固形物含量檢測(cè)儀檢測(cè)酶解液中固形物含量，調(diào)節(jié)溶液固形物含量在5-15%范 圍內(nèi)，所用三氯乙酸濃度30%，至溶液中三氯乙酸濃度為10-20%，混勻，處理液常溫條件下， 4000rpm離心lOmin，得到澄清上清液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種低聚肽含量快速檢測(cè)的方法，其特征在于步驟（2)所述 的透光率檢測(cè)波長(zhǎng)為500nm，使用步驟一獲得的未加三氯乙酸處理的澄清過(guò)濾液作為參比， 如進(jìn)行離心后的樣品管底或壁上無(wú)肉眼可見(jiàn)沉淀，且使用分光光度計(jì)檢測(cè)透光率達(dá)到85% 以上,則可判定原酶解液清液中的低聚肽含量超過(guò)蛋白總量的90%。
【文檔編號(hào)】G01N21/31GK104215590SQ201410410849
【公開(kāi)日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2014年8月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月20日
【發(fā)明者】楊慶利, 金海明, 曹榮軍, 周忠云 申請(qǐng)人:青島貝爾特生物科技有限公司