一種腫瘤特異性生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種腫瘤特異性生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒，包括R1試劑、R2試劑以及標(biāo)準(zhǔn)品溶液，所述R1試劑包括磷酸鹽、乙二胺四乙酸二鈉、凱松以及4-羥乙基哌嗪丙磺酸，其溶劑為純化水；所述R2試劑包括顯色劑、凱松、檸檬酸鈉以及甘油，其溶劑為純化水；所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液包括A液和B液，所述A液為純化水，所述B液為唾液酸、同型半胱氨酸以及果糖胺的混合液。本發(fā)明大大簡(jiǎn)化了檢測(cè)步驟，不僅節(jié)省費(fèi)用，而且實(shí)際操作簡(jiǎn)便，無需貴重儀器，極易推廣。
【專利說明】一種腫瘤特異性生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及試劑盒，具體涉及一種腫瘤特異性生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002]由于糖類物質(zhì)可構(gòu)成糖脂、糖蛋白、寡聚糖等廣泛分布于細(xì)胞內(nèi)外和各種體液中，在細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí)其代謝紊亂可引起體液中的含量升高，是國際公認(rèn)的腫瘤標(biāo)志物；氨基酸及其代謝產(chǎn)物也由于其瘤種特異性小而適用于普查篩選。經(jīng)長(zhǎng)期研究，在這幾種小分子的腫瘤標(biāo)志物中，選定幾種標(biāo)志組合在一起合稱為TSGF (Tumor Specific Growth ofFactor，腫瘤特異性生長(zhǎng)因子)。當(dāng)腫瘤產(chǎn)生時(shí)，血液中腫瘤特異性生長(zhǎng)因子含量升高，是腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、術(shù)后及放、化療、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的重要線索。臨床試驗(yàn)證明，測(cè)定血清中腫瘤特異性生長(zhǎng)因子的含量，將為腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、篩查，良惡性腫瘤的鑒別和患者病情變化的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)提供有效的參考依據(jù)。
[0003]聯(lián)合檢測(cè)幾種相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物可提高腫瘤檢測(cè)靈敏度已成為臨床的廣泛共識(shí)。福建新大陸生物技術(shù)股份有限公司于2000年初成功開發(fā)TSGF檢測(cè)試劑盒，已在我國幾十個(gè)大、中城市的各級(jí)醫(yī)院進(jìn)行了幾百萬例的臨床驗(yàn)證，因其特異性及靈敏度較高而被廣泛使用，發(fā)表了相關(guān)論文近五百篇。隨著市場(chǎng)大單體檢使用量的不斷提高，逐漸暴露出該試劑盒使用操作的缺點(diǎn):1)試劑有鹽酸和醋酸成份，具有一定的刺激性，對(duì)環(huán)境及操作者都有影響；2)水浴溫度精度要求高，100°C ±1°C，海拔變化及加熱器的差異均會(huì)導(dǎo)致溫度的波動(dòng)，波動(dòng)幅度極有可能超過1°C，致使試驗(yàn)結(jié)果不可靠；3)手工加樣，手動(dòng)比色，不僅操作繁瑣，而且隨機(jī)誤差較大。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種準(zhǔn)確、快速、自動(dòng)化的腫瘤特異性生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:一種腫瘤特異性生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒，包括Rl試劑、R2試劑以及標(biāo)準(zhǔn)品溶液；
所述Rl試劑各組分及其在Rl試劑中的質(zhì)量體積比如下:
磷酸鹽3.00-3.20g/100mL
乙二胺四乙酸二鈉0.59-0.6lg/1OOmL
凱松0.10-0.50g/100mL
4-羥乙基哌嗪丙磺酸0.02 -0.10 g/1OOmL
其溶劑為純化水；
所述R2試劑各組分及其在R2試劑中的質(zhì)量體積比如下:
顯色劑0.08-0.25g/100mL
凱松0.10-0.50g/100mL
檸檬酸鈉1.50-3.50g/100mL 甘油1.00-8.00g/100mL
其溶劑為純化水；
所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液包括A液和B液，所述A液為純化水，所述B液各組分及其在B液中的質(zhì)量體積比如下:
唾液酸0.10-0.20g/100mL
同型半胱氨酸0.01~0.03g/100mL
果糖胺0.05-0.08/g/100mL
其溶劑為純化水。
[0006]優(yōu)選地，所述Rl試劑各組分及其在Rl試劑中的質(zhì)量體積比如下:
磷酸鹽3.10g/100mL
乙二胺四乙酸二鈉0.60g/100mL
凱松0.26g/100mL
4-輕乙基哌嗪丙磺酸0.05 g/1OOmL
其溶劑為純化水；
所述R2試劑各組分及其在R2試劑中的質(zhì)量體積比如下:
顯色劑0.15g/100mL
凱松0.26g/100mL
檸檬酸鈉2.10g/100mL
甘油5.00g/100mL
其溶劑為純化水；
所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的B液各組分及其在B液中的質(zhì)量體積比如下:
唾液酸0.145g/100mL
同型半胱氨酸0.023g/100mL
果糖胺0.068g/100mL
其溶劑為純化水。
[0007]所述磷酸鹽為磷酸二氫鈉。
[0008]所述顯色劑為茚三酮。
[0009]本試劑盒檢測(cè)腫瘤特異性生長(zhǎng)因子的原理是，利用試劑盒內(nèi)的混合液在37°C檢測(cè)條件下與待測(cè)樣品中的腫瘤特異性生長(zhǎng)因子(特定帶氨基基團(tuán)的糖脂、糖蛋白的代謝產(chǎn)物及游離α-氨基酸等物質(zhì))進(jìn)行疊加偶聯(lián)反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物又與試劑盒中的顯色劑在同一反應(yīng)條件下進(jìn)行顯色反應(yīng)，形成藍(lán)色產(chǎn)物，在波長(zhǎng)570nm處測(cè)定該顯色產(chǎn)物的吸光度值，并通過標(biāo)準(zhǔn)濃度曲線及公式(TSGF臨床濃度=100-0.18TSGF當(dāng)量濃度)換算出待測(cè)樣品中的腫瘤特異性生長(zhǎng)因子含量。
[0010]本發(fā)明可在全自動(dòng)生化分析儀上使用，實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)加樣，自動(dòng)比色，提高了檢測(cè)的精度和效率，順應(yīng)了臨床檢驗(yàn)自動(dòng)化發(fā)展趨勢(shì)，具有自動(dòng)化程度高、測(cè)試時(shí)間短、重復(fù)性好、誤差小的優(yōu)勢(shì)，能夠滿足大樣品體檢的需求。
[0011]本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，在同一檢測(cè)體系下，采用試劑盒，對(duì)血清中數(shù)種惡性腫瘤生長(zhǎng)相關(guān)的特定帶氨基基團(tuán)的糖脂、糖蛋白代謝產(chǎn)物及游離α -氨基酸等物質(zhì)一次性共同顯色，通過聯(lián)合檢測(cè)提高了檢測(cè)的靈敏度和特異性，可在全自動(dòng)生化分析儀上檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)了由手工操作轉(zhuǎn)向準(zhǔn)確、快速、方便的自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化的操作，檢測(cè)效率大為提高，順應(yīng)了目前產(chǎn)品自動(dòng)化的潮流。與其他腫瘤特異性生長(zhǎng)因子的檢測(cè)相比，本發(fā)明大大簡(jiǎn)化了檢測(cè)的步驟，不僅節(jié)省費(fèi)用，而且實(shí)際操作簡(jiǎn)便，無需貴重儀器，極易推廣。

【具體實(shí)施方式】
[0012]一種腫瘤特異性生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒，包括Rl試劑、R2試劑以及標(biāo)準(zhǔn)品溶液；
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:一種腫瘤特異性生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒，包括Rl試劑、R2試劑以及標(biāo)準(zhǔn)品溶液；
所述Rl試劑各組分及其在Rl試劑中的質(zhì)量體積比如下:
磷酸鹽3.00-3.20g/100mL
乙二胺四乙酸二鈉0.59-0.6lg/1OOmL
凱松0.10-0.50g/100mL
4-羥乙基哌嗪丙磺酸0.02 -0.10 g/1OOmL
其溶劑為純化水；
所述R2試劑各組分及其在R2試劑中的質(zhì)量體積比如下:
顯色劑0.08-0.25g/100mL
凱松0.10-0.50g/100mL
檸檬酸鈉1.50-3.50g/100mL
甘油1.00-8.00g/100mL
其溶劑為純化水；
所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液包括A液和B液，所述A液為純化水，所述B液各組分及其在B液中的質(zhì)量體積比如下:
唾液酸0.10-0.20g/100mL
同型半胱氨酸0.01~0.03g/100mL
果糖胺0.05-0.08/g/100mL
其溶劑為純化水。
[0013]優(yōu)選地，所述Rl試劑各組分及其在Rl試劑中的質(zhì)量體積比如下:
磷酸鹽3.10g/100mL
乙二胺四乙酸二鈉0.60g/100mL
凱松0.26g/100mL
4-輕乙基哌嗪丙磺酸0.05 g/1OOmL
其溶劑為純化水；
所述R2試劑各組分及其在R2試劑中的質(zhì)量體積比如下:
顯色劑0.15g/100mL
凱松0.26g/100mL
檸檬酸鈉2.10g/100mL
甘油5.00g/100mL
其溶劑為純化水；
所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的B液各組分及其在B液中的質(zhì)量體積比如下: 唾液酸0.145g/100mL
同型半胱氨酸0.023g/100mL
果糖胺0.068g/100mL
其溶劑為純化水。
[0014]所述磷酸鹽為磷酸二氫鈉。
[0015]所述顯色劑為茚三酮。
[0016]使用該試劑盒檢測(cè)樣品時(shí)，Rl試劑和R2試劑的體積比為1:1。
[0017]所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液中A液和B液的當(dāng)量濃度分別為OU/mL和200U/mL，所述lU/mL當(dāng)量濃度對(duì)應(yīng)的吸光度值為0.00011，即每單位標(biāo)準(zhǔn)品反應(yīng)后標(biāo)準(zhǔn)吸光度值為0.00011。
[0018]實(shí)施例1
Rl試劑的配制:稱取如下成分
磷酸二氫鈉3.0Og
乙二胺四乙酸二鈉0.59g
凱松0.30g
4-輕乙基哌嗪丙磺酸0.1Og
用純化水溶解，配制成10mL的溶液，即為Rl試劑；
R2試劑的配制:稱取如下成分茚三酮 0.08g 凱松0.50g
朽1檬酸鈉 2.50g 甘油1.0Og
用純化水溶解，配制成10mL的溶液，即為R2試劑；
標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制:
A液(當(dāng)量濃度為OU/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液)的配制:即純化水；
B液(當(dāng)量濃度為200U/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液)的配制:稱取如下成分
唾液酸0.1Og
同型半胱氨酸0.03g
果糖胺0.065g
用純化水溶解,配制成10mL的溶液,即為B液。
[0019]實(shí)施例2
Rl試劑的配制:稱取如下成分
磷酸二氫鈉3.1Og
乙二胺四乙酸二鈉0.61g
凱松0.50g
4-輕乙基哌嗪丙磺酸0.02g
用純化水溶解，配制成10mL的溶液，即為Rl試劑；
R2試劑的配制:稱取如下成分茚三酮 0.25g 凱松0.30g 朽1檬酸鈉 3.50g 甘油4.50g
用純化水溶解，配制成10mL的溶液，即為R2試劑；
標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制:
A液(當(dāng)量濃度為OU/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液)的配制:即純化水；
B液(當(dāng)量濃度為200U/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液)的配制:稱取如下成分
唾液酸0.15g
同型半胱氨酸0.0lg
果糖胺0.08g
用純化水溶解,配制成10mL的溶液,即為B液。
[0020]實(shí)施例3
Rl試劑的配制:稱取如下成分
磷酸二氫鈉3.20g
乙二胺四乙酸二鈉0.60g
凱松0.1Og
4-輕乙基哌嗪丙磺酸0.06g
用純化水溶解，配制成10mL的溶液，即為Rl試劑；
R2試劑的配制:稱取如下成分茚三酮 0.16g 凱松0.1Og
朽1檬酸鈉 1.50g 甘油8.0Og
用純化水溶解，配制成10mL的溶液，即為R2試劑；
標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制:
A液(當(dāng)量濃度為OU/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液)的配制:即純化水；
B液(當(dāng)量濃度為200U/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液)的配制:稱取如下成分
唾液酸0.20g
同型半胱氨酸0.02g
果糖胺0.05g
用純化水溶解,配制成10mL的溶液,即為B液。
[0021]實(shí)施例4
Rl試劑的配制:稱取如下成分
磷酸二氫鈉3.1Og
乙二胺四乙酸二鈉0.60g
凱松0.26g
4-輕乙基哌嗪丙磺酸0.05g
用純化水溶解，配制成10mL的溶液，即為Rl試劑；
R2試劑的配制:
茚三酮 0.15g 凱松0.26g
檸檬酸鈉 2.1Og 甘油5.0Og
用純化水溶解，配制成10mL的溶液，即為R2試劑；
標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制:
A液(當(dāng)量濃度為OU/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液)的配制:即純化水；
B液(當(dāng)量濃度為200U/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液)的配制:稱取如下成分
唾液酸0145g
同型半胱氨酸0.023g
果糖胺0.068g
用純化水溶解,配制成10mL的溶液,即為B液。
[0022]采用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí)的參數(shù)選擇如下:
主波長(zhǎng):570nm (也可選擇560nm?580nm范圍內(nèi)的波長(zhǎng))
副波長(zhǎng):不設(shè)定(若儀器要求必須設(shè)定，則在700nm?800nm范圍內(nèi)設(shè)定)
反應(yīng)方法:速率法反應(yīng)方向:向上溫度:37°C
待測(cè)樣品體積與Rl、R2試劑總體積的比例根據(jù)不同型號(hào)的全自動(dòng)生化分析儀選擇。
[0023]延遲時(shí)間/測(cè)定時(shí)間:根據(jù)加入試劑R2后樣品反應(yīng)曲線中的直線區(qū)段酌情選定。
[0024]標(biāo)準(zhǔn)曲線采用兩點(diǎn)線性定標(biāo)。
[0025]采用以上實(shí)施例1的試劑盒對(duì)樣品中的腫瘤特異性生長(zhǎng)因子含量的檢測(cè)如下:在全自動(dòng)生化分析儀上的操作步驟如下:
(1)將Rl試劑及R2試劑放入對(duì)應(yīng)的試劑位，Rl試劑和R2試劑的體積比為1:1;
(2)根據(jù)機(jī)型參數(shù)表設(shè)置上機(jī)參數(shù)；
(3)取出當(dāng)量濃度分別為OU/mL(A液)以及200U/mL (B液)的標(biāo)準(zhǔn)品溶液(對(duì)應(yīng)臨床濃度分別為100U/mL以及64U/mL)放入標(biāo)準(zhǔn)品(校準(zhǔn)品)固定架上，上機(jī)定標(biāo)；
(4)將樣品放入樣本架上，上機(jī)檢測(cè)。
[0026]上機(jī)檢測(cè)時(shí)分三種情況:
(I)若全自動(dòng)生化分析儀標(biāo)準(zhǔn)曲線設(shè)置允許負(fù)斜率定標(biāo)時(shí)(如日立系列、奧林巴斯系列等)，先用公式=TSGF臨床濃度=100-0.18TSGF當(dāng)量濃度，將標(biāo)準(zhǔn)品由當(dāng)量濃度(OU/ml和200U/ml)換算成臨床濃度(100U/ml和64U/ml)后，再進(jìn)行兩點(diǎn)線性定標(biāo)，所測(cè)值即為TSGF臨床濃度值。
[0027](2)若全自動(dòng)生化分析儀標(biāo)準(zhǔn)曲線設(shè)置不允許負(fù)斜率定標(biāo)時(shí)，如果儀器允許輸入公式，則輸入公式(TSGF臨床濃度=100-0.18TSGF當(dāng)量濃度)后，進(jìn)行兩點(diǎn)線性定標(biāo)，所測(cè)值也為TSGF臨床濃度值。
[0028](3)若全自動(dòng)生化分析儀標(biāo)準(zhǔn)曲線設(shè)置不允許負(fù)斜率定標(biāo)時(shí)，且儀器不允許輸入公式，則所測(cè)值為TSGF當(dāng)量濃度值，將當(dāng)量濃度值通過公式(TSGF臨床濃度=100-0.18TSGF當(dāng)量濃度)換算成臨床濃度值。
[0029]檢測(cè)543例正常人血清的被測(cè)物含量，檢測(cè)結(jié)果呈正態(tài)分布，平均值X=49.30U/ml，標(biāo)準(zhǔn)偏差SD=7.47U/ml，采用X+l.96S來確定下限，得出參考值范圍:TSGF臨床濃度彡64U/ml為陽性，TSGF臨床濃度< 64U/ml為陰性，各實(shí)驗(yàn)室可建立自己的參考范圍。
[0030]采用以上實(shí)施例2至4的試劑盒對(duì)樣品中的腫瘤特異性生長(zhǎng)因子含量的檢測(cè)步驟同實(shí)施例1類似，本發(fā)明不再做詳細(xì)描述。
【權(quán)利要求】
1.一種腫瘤特異性生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒，其特征在于:其包括Rl試劑、R2試劑以及標(biāo)準(zhǔn)品溶液； 所述Rl試劑各組分及其在Rl試劑中的質(zhì)量體積比如下: 磷酸鹽3.00-3.20g/100mL 乙二胺四乙酸二鈉0.59-0.6lg/1OOmL 凱松0.10-0.50g/100mL 4-羥乙基哌嗪丙磺酸0.02 -0.10 g/1OOmL 其溶劑為純化水； 所述R2試劑各組分及其在R2試劑中的質(zhì)量體積比如下: 顯色劑0.08-0.25g/100mL 凱松0.10-0.50g/100mL 檸檬酸鈉1.50-3.50g/100mL 甘油1.00-8.00g/100mL 其溶劑為純化水； 所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液包括A液和B液，所述A液為純化水，所述B液各組分及其在B液中的質(zhì)量體積比如下: 唾液酸0.10-0.20g/100mL 同型半胱氨酸0.01~0.03g/100mL 果糖胺0.05-0.08/g/100mL 其溶劑為純化水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腫瘤特異性生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述Rl試劑各組分及其在Rl試劑中的質(zhì)量體積比如下: 磷酸鹽3.10g/100mL 乙二胺四乙酸二鈉0.60g/100mL 凱松0.26g/100mL 4-輕乙基哌嗪丙磺酸0.05 g/1OOmL 其溶劑為純化水； 所述R2試劑各組分及其在R2試劑中的質(zhì)量體積比如下: 顯色劑0.15g/100mL 凱松0.26g/100mL 檸檬酸鈉2.10g/100mL 甘油5.00g/100mL 其溶劑為純化水； 所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的B液各組分及其在B液中的質(zhì)量體積比如下: 唾液酸0.145g/100mL 同型半胱氨酸0.023g/100mL 果糖胺0.068g/100mL 其溶劑為純化水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種腫瘤特異性生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述磷酸鹽為磷酸二氫鈉。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種腫瘤特異性生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述顯色劑為茚三酮。
【文檔編號(hào)】G01N21/78GK104515768SQ201410435931
【公開日】2015年4月15日 申請(qǐng)日期:2014年8月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月29日
【發(fā)明者】宋光運(yùn), 林惠, 高冬, 林芳 申請(qǐng)人:湖南新大陸生物技術(shù)有限公司