高效液相色譜法測(cè)定阿哌沙班清洗殘留量的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種高效液相色譜法測(cè)定阿哌沙班清洗殘留量，屬于化學(xué)制藥檢測(cè)領(lǐng)域。本發(fā)明的目的是提供一種操作簡(jiǎn)單、快速，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠阿哌沙班清洗殘留的測(cè)定方法，來(lái)評(píng)價(jià)清潔效果，以保證藥品質(zhì)量和用藥安全。本發(fā)明的這種高效液相色譜法測(cè)定阿哌沙班清洗殘留量，操作簡(jiǎn)單、快速，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，從而能有效地評(píng)價(jià)設(shè)備清洗效果；本發(fā)明在流動(dòng)相的選擇上采用了280nm，有效降低檢測(cè)限度；本發(fā)明在色譜柱溫度選擇上，使用40℃，能夠有效改善峰型和有效檢測(cè)微量殘留，在溶劑的選擇上選擇甲醇，甲醇該波長(zhǎng)無(wú)吸收，避免溶劑對(duì)檢測(cè)的干擾，提高檢測(cè)方法的可靠性。
【專(zhuān)利說(shuō)明】高效液相色譜法測(cè)定阿哌沙班清洗殘留量

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種高效液相色譜法測(cè)定阿哌沙班清洗殘留量，屬于化學(xué)制藥檢測(cè)領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002]原料藥生產(chǎn)工藝中不可避免的涉及到共有設(shè)備的問(wèn)題，共有環(huán)節(jié)中切換產(chǎn)品，如果設(shè)備清洗不完全，上一次生產(chǎn)的物料殘留必然會(huì)帶入下一次生產(chǎn)的物料中，由于藥物毒性的不同，殘留量的大小會(huì)直接影響到藥物的安全性和藥品質(zhì)量，故控制清洗殘留達(dá)到合理限度是非常必要性的，且也是作為最低制藥要求的GMP法規(guī)要求的。一般的，產(chǎn)品中允許雜質(zhì)在安全允許的范圍內(nèi)存在，因此，采用一定的儀器分析方法檢測(cè)產(chǎn)品中的阿哌沙班的清洗殘留評(píng)價(jià)清洗效果和用藥安全是非常必須的，也是非常緊迫的。
[0003]目前，國(guó)內(nèi)尚未有藥典和相關(guān)文獻(xiàn)提出該物質(zhì)的檢測(cè)方法，對(duì)微量殘留的檢測(cè)更不相關(guān)報(bào)道。
[0004]對(duì)于阿哌沙班殘留量的的檢測(cè)，依靠化學(xué)或一般紫外設(shè)備是很難達(dá)到微量ppm級(jí)別檢測(cè)要求，同時(shí)還要保證良好的線性范圍，良好的穩(wěn)定性，較好的準(zhǔn)確度和精確度，該研究的方法可以操作簡(jiǎn)單、快速，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，從而可以有效的控制阿哌沙班的殘留量，保證藥用的安全性和可靠性。
[0005]因此，本研究采用HPLC法，建立了一種阿哌沙班清洗殘留量的測(cè)定方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種操作簡(jiǎn)單、快速，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠阿哌沙班清洗殘留的測(cè)定方法，來(lái)評(píng)價(jià)清潔效果，以保證藥品質(zhì)量和用藥安全。
[0007]本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:高效液相色譜法測(cè)定阿哌沙班清洗，其創(chuàng)新點(diǎn)在于:包括樣品配制、樣品測(cè)定和含量計(jì)算步驟；所述樣品配制步驟如下:
(O空白溶液配制:清洗用溶劑甲醇；
(2)對(duì)照溶液貯備液(0.5mg/mL)配制:稱(chēng)取阿哌沙班對(duì)照品25mg于50mL量瓶中，用稀釋劑溶解，定容至刻度，過(guò)濾得對(duì)照溶液；
(3)對(duì)照溶液(0.0005mg/mL)配制:精密量取對(duì)照貯備液1.0mL于10mL量瓶中，定容至刻度，搖勻；再精密量取上述溶液ImL于1mL量瓶中，定容至刻度，搖勻；
所述的樣品測(cè)定步驟為選用型號(hào)為島津Inertsil 0DS-3V 5ym 250X4.6mm的色譜柱，采用雙泵系統(tǒng)，所用流動(dòng)相A:30mmol/L乙酸銨水溶液(稱(chēng)取2.31g乙酸銨至IL水中，混勻)B:乙腈，設(shè)定色譜檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，流速為1.0 HiLmirT1 ;靈敏度為1.0 AUFS ;柱溫為40V ;進(jìn)樣量為10 PL，分別將樣品溶液、對(duì)照溶液和空白溶液進(jìn)行樣品測(cè)定；
所述含量測(cè)定步驟為以外標(biāo)法計(jì)算樣品阿哌沙班的殘留量。
[0008]進(jìn)一步的，所述流動(dòng)相A為30mmol/L乙酸銨水溶液(稱(chēng)取2.31g乙酸銨至IL水中，混勻),水為2次重蒸水，符合HPLC要求。
[0009]進(jìn)一步的，流動(dòng)相B乙腈溶液為色譜純乙腈。
[0010]進(jìn)一步的，所述波長(zhǎng)為280nm，改波長(zhǎng)為阿哌沙班的最大吸收波長(zhǎng)，且對(duì)溶劑甲醇等無(wú)干擾。
[0011]進(jìn)一步的，檢測(cè)柱溫為40°C，能夠有效改善峰型和有效檢測(cè)微量殘留。
[0012]有益效果:本發(fā)明的這種高效液相色譜法測(cè)定阿哌沙班清洗殘留量，操作簡(jiǎn)單、快速，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，從而能有效地評(píng)價(jià)設(shè)備清洗效果；本發(fā)明在流動(dòng)相的選擇上采用了 280nm，有效降低檢測(cè)限度；本發(fā)明在色譜柱溫度選擇上，使用40°C，能夠有效改善峰型和有效檢測(cè)微量殘留，在溶劑的選擇上選擇甲醇，甲醇該波長(zhǎng)無(wú)吸收，避免溶劑對(duì)檢測(cè)的干擾，提高檢測(cè)方法的可靠性。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0013]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明。
[0014]圖1為本發(fā)明專(zhuān)屬性試驗(yàn)圖譜。
[0015]圖2為精密度試驗(yàn)圖譜。
[0016]圖3為檢測(cè)限圖譜。
[0017]圖4為對(duì)照溶液為0.00005的圖譜。
[0018]圖5為1000%的對(duì)照溶液的圖譜。
[0019]圖6為100%的對(duì)照溶液的圖譜。
[0020]圖7為150%的對(duì)照溶液的圖譜。
[0021 ]圖8為120%的對(duì)照溶液的圖譜。
[0022]圖9為80%的對(duì)照溶液的圖譜。

【具體實(shí)施方式】
[0023]下面的實(shí)施列可以使本專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員更全面的理解本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍之中。
[0024]實(shí)施例1
高效液相色譜法測(cè)定阿哌沙班清洗殘留方法:
儀器與試藥:LC一2010A高效液相色譜儀(四元泵、脫氣單元、UV檢測(cè)器、柱箱、自動(dòng)進(jìn)樣器、系統(tǒng)監(jiān)測(cè)器、LCsolut1n)(日本島津公司)；供試品(生產(chǎn)廠家:江蘇寶眾寶達(dá)藥業(yè)有限公司，乙腈、甲醇(merck色譜純)，其它試劑分析純，水為自制新鮮重蒸水。
[0025]色譜條件選擇:色譜柱:Inertsil0DS-3V 5 μ m 250X4.6mm ;流動(dòng)相 A:30mmol/L乙酸銨水溶液，流動(dòng)相B:乙腈，等度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng):280nm ;計(jì)算方法:外標(biāo)法；流速:1.0mLmiiT1 ;靈敏度:1.0 AUFS ;進(jìn)樣量:10 μ? ;柱溫 40°C。
[0026]專(zhuān)屬性試驗(yàn):分別進(jìn)樣設(shè)備淋洗用甲醇、對(duì)照溶液配樣用甲醇和對(duì)照溶液，考察方法的專(zhuān)屬性，確認(rèn)本驗(yàn)證方法空白對(duì)阿哌沙班的測(cè)定不存在干擾；每天進(jìn)樣對(duì)照溶液，確認(rèn)阿哌沙班的保留時(shí)間及系統(tǒng)適用性符合可接受標(biāo)準(zhǔn)?？瞻兹芤褐袩o(wú)干擾；對(duì)照溶液中主峰的信噪比不低于30。
[0027]溶液配制:
對(duì)照溶液貯備液(0.5mg/mL):取阿哌沙班對(duì)照品25mg于50mL量瓶中，用稀釋劑溶解，定容至刻度，搖勻。
[0028]對(duì)照溶液(0.0005mg/mL):精密量取對(duì)照貯備液1.0mL于10mL量瓶中，定容至刻度，搖勻；再精密量取上述溶液ImL于1mL量瓶中，定容至刻度，搖勻。
[0029]空白溶液:清洗用溶劑
供試品溶液:取終洗液過(guò)濾后直接進(jìn)樣樣品測(cè)定:
1)待系統(tǒng)穩(wěn)定后，進(jìn)一針空白溶劑:設(shè)備淋洗用甲醇
2)進(jìn)一針對(duì)照溶液
3)進(jìn)一針供試品溶液實(shí)施例2
本發(fā)明方法的精密度試驗(yàn):
系統(tǒng)精密度:取對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算阿哌沙班的保留時(shí)間和峰面積的RSD。實(shí)際測(cè)得保留時(shí)間的RSD為0.03% ;峰面積的RSD為0.59%
方法精密度:重復(fù)配制6份對(duì)照溶液，每份溶液進(jìn)樣I次，阿哌沙班的峰面積/稱(chēng)樣量的 RSD 為 0.68%ο
[0030]中間精密度:由另一名分析人員，在另一天，另一臺(tái)儀器上重復(fù)方法精密度測(cè)試，阿哌沙班的峰面積/稱(chēng)樣量的RSD為6.87%。
[0031 ] 表明重現(xiàn)性良好，方法可靠。
[0032]實(shí)施例3
本發(fā)明方法的檢測(cè)限試驗(yàn):
通過(guò)進(jìn)樣低濃度的阿哌沙班對(duì)照品溶液，當(dāng)信噪比(S/N)為3時(shí)，該濃度為其檢測(cè)限，檢測(cè)限溶液進(jìn)樣3針，計(jì)算并報(bào)告峰面積的RSD。最終確定S/N約為2.8時(shí)的濃度0.0125ug/ml，為檢測(cè)限。面積RSD為4.6%。
[0033]實(shí)施例4
本發(fā)明方法的定量限試驗(yàn):
通過(guò)進(jìn)樣低濃度的阿哌沙班對(duì)照溶液，當(dāng)信噪比為10時(shí)，該濃度為其定量限，定量限溶液進(jìn)樣6針，計(jì)算并報(bào)告峰面積的RSD。最終確定S/N約為9.4時(shí)候0.05ug/ml為定量限，面積RSD為3.3%ο
[0034]實(shí)施例5
本發(fā)明方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)。
[0035]通過(guò)模擬實(shí)際的清洗條件，用經(jīng)驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法檢測(cè)淋洗液中阿哌沙班的濃度?？蛇x擇定量限、50%、100%、150%四個(gè)濃度，每個(gè)濃度重復(fù)進(jìn)行3次，驗(yàn)證取樣方法的回收率及重復(fù)性，以驗(yàn)證淋洗液的取樣方法能夠符合要求。
[0036]阿哌沙班貯備溶液:稱(chēng)取阿哌沙班對(duì)照品25mg于50mL量瓶中，用稀釋劑溶解，定容，搖勻。
[0037]0.005mg/ml阿哌沙班溶液:精密量取對(duì)照貯備液1.0mL于10mL量瓶中，定容至刻度，fe勾。
[0038]50% 濃度:
準(zhǔn)備一個(gè)潔凈的50mL的玻璃圓底燒瓶，精密量取1.5mL的0.005mg/mL的阿哌沙班甲醇溶液，盡量均勻的淋在圓底燒瓶的內(nèi)壁，讓圓底燒瓶自然干燥。向圓底燒瓶中加入30mL的甲醇，并升溫至回流，保溫至少I(mǎi)小時(shí)。降溫至停止回流，直接取淋洗液。重復(fù)以上操作3次，取3份淋洗液。
[0039]100% 濃度:
準(zhǔn)備一個(gè)潔凈的50mL的玻璃圓底燒瓶，精密量取3.0mL的0.005mg/mL的阿哌沙班甲醇溶液，盡量均勻的淋在圓底燒瓶的內(nèi)壁，讓圓底燒瓶自然干燥。向圓底燒瓶中加入30mL的甲醇，并升溫至回流，保溫至少I(mǎi)小時(shí)。降溫至停止回流，直接取淋洗液。重復(fù)以上操作3次，取3份淋洗液。
[0040]1δ0% 濃度:
準(zhǔn)備一個(gè)潔凈的50mL的玻璃圓底燒瓶，精密量取4.5mL的0.005mg/mL的阿哌沙班甲醇溶液，盡量均勻的淋在圓底燒瓶的內(nèi)壁，讓圓底燒瓶自然干燥。向圓底燒瓶中加入30mL的甲醇，并升溫至回流，保溫至少I(mǎi)小時(shí)。降溫至停止回流，直接取淋洗液。重復(fù)以上操作3次，取3份淋洗液。
[0041]定量限:根據(jù)定量限測(cè)定項(xiàng)下，確定溶液的濃度。
[0042]用經(jīng)驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法檢測(cè)淋洗液中阿哌沙班的濃度，待系統(tǒng)穩(wěn)定后，進(jìn)樣空白溶液、阿哌沙班標(biāo)準(zhǔn)溶液、淋洗液溶液，計(jì)算12個(gè)樣品的濃度，并分別計(jì)算回收率。
[0043]定量限水平的實(shí)際回收率為88.9，50%水平的回收率為90.8%，100%水平的回收率為92.3%, 150%水平的回收率為90.2%，平均回收率為90.6%
實(shí)施例6
本發(fā)明方法的溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)
通過(guò)分析放置不同時(shí)間(至少48h)的對(duì)照溶液，論證阿哌沙班溶液的穩(wěn)定性。以下時(shí)間點(diǎn)需被考察:0，3h，6h，24h及48h，如果發(fā)現(xiàn)溶液不穩(wěn)定，需縮短時(shí)間間隔。溶液外觀應(yīng)澄清；與Oh時(shí)對(duì)照溶液主峰面積的最大偏差為< 0.89%，即視為溶液穩(wěn)定。
【權(quán)利要求】
1.高效液相色譜法測(cè)定阿哌沙班清洗殘留，其特征在于:包括樣品配制、樣品測(cè)定和含量計(jì)算步驟；所述樣品配制步驟如下: (1)空白溶液配制:清洗用溶劑甲醇； (2)對(duì)照溶液貯備液(0.5mg/mL)配制:稱(chēng)取阿哌沙班對(duì)照品25mg于50mL量瓶中，用稀釋劑溶解，定容至刻度，過(guò)濾得對(duì)照溶液； (3)對(duì)照溶液(0.0005mg/mL)配制:精密量取對(duì)照貯備液1.0mL于10mL量瓶中，定容至刻度，搖勻；再精密量取上述溶液ImL于1mL量瓶中，定容至刻度，搖勻； 所述的樣品測(cè)定步驟為選用型號(hào)為島津Inertsil ODS-3V 5ym 250X4.6mm的色譜柱，采用雙泵系統(tǒng)，所用流動(dòng)相A:30mmol/L乙酸銨水溶液(稱(chēng)取2.31g乙酸銨至IL水中，混勻)B:乙腈，設(shè)定色譜檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，流速為1.0 mL-min^1 ;靈敏度為1.0 AUFS ;柱溫為40V ;進(jìn)樣量為10 PL，分別將樣品溶液、對(duì)照溶液和空白溶液進(jìn)行樣品測(cè)定； 所述含量測(cè)定步驟為以外標(biāo)法計(jì)算樣品阿哌沙班的殘留量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜法測(cè)定阿哌沙班殘留量，其特征在于:所述流動(dòng)相A為30mmol/L乙酸銨水溶液(稱(chēng)取2.31g乙酸銨至IL水中，混勻)，水為2次重蒸水，符合HPLC要求。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜法測(cè)定阿哌沙班殘留量，其特征在于:流動(dòng)相B甲醇溶液為色譜純甲醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜法測(cè)定阿哌沙班殘留量，其特征在于:所述波長(zhǎng)為280nm，改波長(zhǎng)為阿哌沙班的最大吸收波長(zhǎng)，且對(duì)溶劑甲醇等無(wú)干擾。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜法測(cè)定阿哌沙班清洗殘留量，其特征在于:檢測(cè)柱溫為40°C，能夠有效改善峰型和有效檢測(cè)微量殘留。
【文檔編號(hào)】G01N30/88GK104316637SQ201410596393
【公開(kāi)日】2015年1月28日 申請(qǐng)日期:2014年10月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月30日
【發(fā)明者】丁海宏, 王琳, 張智紅 申請(qǐng)人:江蘇寶眾寶達(dá)藥業(yè)有限公司