分離測定利伐沙班及其雜質(zhì)的方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種同時(shí)分離測定利伐沙班及其雜質(zhì)的方法 及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 利伐沙班（Rivaroxaban，商品名：Xarelto)是德國拜耳制藥開發(fā)的一種新的 口服抗凝藥物，主要用于擇期髖關(guān)節(jié)或膝關(guān)節(jié)置換手術(shù)的成年患者，以預(yù)防靜脈血栓 形成。本品具有高度的選擇性和競爭性，出血風(fēng)險(xiǎn)低，安全性好。利伐沙班化學(xué)名為： 5_氯-氮_ ({(5S) -2-氧-3-[4- (3-氧-4-嗎啉基）苯基]-1，3-唑烷-5-基}甲基）-2-噻 吩-羧酰胺，分子式為C19H1SC1N305S。利伐沙班結(jié)構(gòu)式為：
[0003]
[0004] 通常來說，一種藥物雜質(zhì)總含量應(yīng)小于1.0%，單個(gè)雜質(zhì)含量應(yīng)小于0. 1%，對(duì)于 制備利伐沙班過程中產(chǎn)生的雜質(zhì)或引入的有關(guān)物質(zhì)，不論是在原料藥還是制劑中均需要 進(jìn)行嚴(yán)格控制。申請(qǐng)?zhí)枮镃N103558326A的專利公開了一種測定利伐沙班片中利伐沙班 含量的方法，在該方法中只能檢測產(chǎn)品中利伐沙班的含量，不能達(dá)到同時(shí)分離及檢測利 伐沙班及其相關(guān)雜質(zhì)的目的；申請(qǐng)?zhí)枮閃02012035057的專利公開了一種用液相色譜法 分離測定利伐沙班及其相關(guān)雜質(zhì)的方法，檢測的雜質(zhì)為兩個(gè)相關(guān)雜質(zhì)（結(jié)構(gòu)式參見專利 W02012035057)，其中公開的雜質(zhì)A與本發(fā)明雜質(zhì)列表中的雜質(zhì)B結(jié)構(gòu)相同，其余均不同，且 在這個(gè)專利中，利用高效液相色譜法完全分離利伐沙班的相關(guān)雜質(zhì)需要56分鐘。因此到目 前為止，還沒有公開的方法報(bào)道可快速測定同時(shí)分離利伐沙班及其10種制劑雜質(zhì)。因此開 發(fā)一種快速有效分離分析利伐沙班及其制劑工藝雜質(zhì)的方法，對(duì)于藥物的質(zhì)量控制及降解 途徑研究都是十分有意義的工作。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種同時(shí)分離測定利伐沙班及其雜質(zhì)的試劑組 合物及方法，該方法可快速同時(shí)實(shí)現(xiàn)利伐沙班及其雜質(zhì)的分離和檢測，精密度和靈敏度高， 為利伐沙班原料藥和制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定及提尚有重要的意義。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：
[0007] 用于分離測定利伐沙班及其雜質(zhì)的試劑組合物，由以下試劑組成：
[0008] 試劑A:加有酸性離子對(duì)試劑的無機(jī)鹽緩沖體系，所述酸性離子對(duì)試劑的濃度為 0. 2g/L-4.Og/L；
[0009] 試劑B:有機(jī)溶劑；
[0010] 所述酸性離子對(duì)試劑為：i-戊烷磺酸鈉、1-己烷磺酸鈉、1-庚烷磺酸鈉、1-辛烷磺 酸鈉和1-癸烷磺酸鈉中的一種或多種；
[0011] 所述有機(jī)溶劑為乙腈。
[0012] 優(yōu)選離子對(duì)試劑的濃度為0. 4g/L-2. 0g/L。
[0013] 使用液相色譜法分析電離能力比較強(qiáng)的樣品時(shí)，樣品在反相色譜柱上的保留時(shí)間 很短或者根本不保留，這時(shí)要加入相應(yīng)的離子對(duì)試劑，將分析物上的離子進(jìn)行結(jié)合，形成在 柱子上有保留的分子，在選擇離子對(duì)試劑時(shí)，要考慮色譜柱的填料和樣品的酸堿性，根據(jù)本 發(fā)明中色譜柱的填料和樣品的性質(zhì)，所以選用了上述酸性離子對(duì)試劑。
[0014] 本發(fā)明的目的之二在于提供一種分離測定利伐沙班及其雜質(zhì)的方法，具體包括以 下步驟：
[0015] 1)取利伐沙班溶于乙腈水溶液得樣品溶液；
[0016] 2)配制流動(dòng)相：
[0017] a配制所述試劑A得流動(dòng)相A;
[0018] b所述試劑B做流動(dòng)相B;
[0019] 3)將步驟1)所述樣品溶液注入分離檢測系統(tǒng)中，用步驟2)所述流動(dòng)相對(duì)步驟1) 所述樣品溶液進(jìn)行洗脫分離得洗脫液；
[0020] 4)步驟3)所述洗脫液進(jìn)入檢測器測定。
[0021] 所述雜質(zhì)包括工藝雜質(zhì)和降解雜質(zhì)，為雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D、雜質(zhì)E、雜質(zhì) F、雜質(zhì)G、雜質(zhì)H、雜質(zhì)I和雜質(zhì)J的一種或多種，具體名稱及結(jié)構(gòu)為：
[0022]
[0023]
[0024] 上述方法能快速同時(shí)實(shí)現(xiàn)上述雜質(zhì)的分離和檢測，精密度和靈敏度高，可在25分 鐘內(nèi)將利伐沙班及其10種制劑雜質(zhì)A-J完全分離并進(jìn)行檢測，提供了現(xiàn)有技術(shù)未能解決的 利伐沙班及其相關(guān)雜質(zhì)的分離測定問題，從而確保了利伐沙班及其制劑的質(zhì)量可控，并最 終確定產(chǎn)品的安全有效。
[0025] 進(jìn)一步，步驟1)所述乙腈水溶液中：乙腈和水的體積比為25-30:75-70,優(yōu)選 30:70。
[0026] 所述樣品溶液中每1ml含利伐沙班0. 05-0. 5mg。進(jìn)樣量會(huì)影響色譜柱分離效果和 分析結(jié)果。進(jìn)樣量影響：進(jìn)樣量過大會(huì)造成色譜柱超負(fù)荷，多組分色譜峰重疊，分離效果差； 進(jìn)樣量過少，又會(huì)使含量低的組分因檢測器靈敏度不夠而不出峰。最大允許的進(jìn)樣量應(yīng)控 制在峰高或峰面積與進(jìn)樣量呈線性關(guān)系的范圍內(nèi)。
[0027] 進(jìn)一步，步驟2)中所述無機(jī)鹽緩沖體系的pH值為3-5。優(yōu)選pH值為3. 7-4. 2。用 氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)磷酸-離子對(duì)試劑溶液pH值，在此pH值區(qū)間內(nèi)均能很好地 分離利伐沙班及其雜質(zhì)。
[0028] 進(jìn)一步，步驟2)中所述無機(jī)鹽緩沖體系為磷酸緩沖體系，磷酸的濃度為 0? 005mol/L-0.lmol/L，優(yōu)選為 0? 01-0. 05mol/L。
[0029] 進(jìn)一步，步驟3)所述分離檢測系統(tǒng)為高效液相色譜儀，其色譜柱填料為十八烷基 硅烷鍵合硅膠，色譜柱柱箱溫度為25-45 °C。十八烷基硅烷鍵合硅膠，完全球型、表面光滑的 多孔硅膠，具有非常高的表面鍵合覆蓋率。一般用在高效液相色譜中的固定相。該硅膠整 體柱鍵合效果良好，具有較好的反相色譜性能，在pH2-8之間穩(wěn)定性好，柱壓降、柱效受流 速影響較小，對(duì)多種心血管系統(tǒng)用藥可以達(dá)到快速、有效的分離。
[0030] 進(jìn)一步，步驟3)所述流動(dòng)相流速為0. 5-1. 5ml/min。進(jìn)樣速度也會(huì)影響色譜柱分 離效果和分析結(jié)果。進(jìn)樣速度的影響：進(jìn)樣速度慢則會(huì)使色譜峰形加寬，影響分離效果。
[0031] 進(jìn)一步，所述檢測器的檢測波長為210-280nm。
[0032] 本發(fā)明的目的還在于提供一種所述試劑組合物在其他藥品及其雜質(zhì)分離測定的 應(yīng)用。
[0033] 本發(fā)明的目的還在于提供一種上述方法在分離測定利伐沙班原料藥及制劑中各 有關(guān)物質(zhì)含量的應(yīng)用。提供了現(xiàn)有技術(shù)未能解決的利伐沙班及其相關(guān)雜質(zhì)的分離測定問 題，從而確保了利伐沙班及其制劑的質(zhì)量可控，并最終確定產(chǎn)品的安全有效。
[0034] 本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明用酸性離子對(duì)試劑及有機(jī)溶劑為流動(dòng)相采用高效 液相色譜法分離測定利伐沙班及其雜質(zhì)，該方法在25分鐘內(nèi)可同時(shí)將利伐沙班及其雜質(zhì) 完全分離并進(jìn)行檢測；本發(fā)明中方法簡便可行，靈敏度高，分析時(shí)間短，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性 好，可以有效測定利伐沙班原料藥及制劑中各有關(guān)物質(zhì)含量，提供了現(xiàn)有技術(shù)未能解決的 利伐沙班及其相關(guān)雜質(zhì)的分離測定問題，從而確保了利伐沙班及其制劑的質(zhì)量可控，并最 終確定產(chǎn)品的安全有效。
【附圖說明】
[0035] 圖1為空白溶劑的高效液相色譜圖。
[0036] 圖2為利伐沙班及雜質(zhì)A-J的混合溶液高效液相色譜圖。
[0037] 圖3為對(duì)比試驗(yàn)的高效液相色譜圖。
[0038] 圖4為利伐沙班片輔料空白的高效液相色譜圖。
[0039] 圖5為利伐沙班片的高效液相色譜圖。
[0040] 圖6為利伐沙班堿降解的高效液相色譜圖。
[0041] 圖7為利伐沙班氧化降解的高效液相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0042] 以下將參照附圖，對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)描述。優(yōu)選實(shí)施例中未注明具 體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，所舉實(shí)施例是為了更好地對(duì)本發(fā)明的內(nèi)容進(jìn)行說 明，但并不是本發(fā)明的內(nèi)容僅限于所舉實(shí)施例。所以熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)上述發(fā)明 內(nèi)容對(duì)實(shí)施方案進(jìn)行非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整，仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0043] 以下實(shí)施例中，采用的儀器及色譜條件如下：
[0044] 高效液相色譜儀：島津LC-20AT
[0045] 色譜柱：PurospherStarRP-18 (f5f5X4臟，3ym)
[0046] 檢測器檢測波長：250nm
[0047] 進(jìn)樣量：10yl
[0048] 稀釋劑（溶解對(duì)照品和待測樣品的溶劑）：30%乙腈。
[0049] 實(shí)施例1分離測定利伐沙班及其雜質(zhì)的方法
[0050] (1)取利伐沙班及雜質(zhì)對(duì)照品各適量，用30%乙腈水溶液溶解樣品得樣品溶液；
[0051] (2)流動(dòng)相A的配制：稱取戊烷磺酸鈉2. 0g、移取磷酸2. 0ml于1000ml容量瓶中， 加水溶解并稀釋至刻度，用lmol/L的