一種三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型公開了一種三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條。該試紙條包括底板、樣品墊、過濾層、硒標(biāo)結(jié)合墊、反應(yīng)墊、吸水墊。本實(shí)用新型通過對(duì)常規(guī)三聚氰胺試紙條結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化改進(jìn)，即在樣品墊和硒標(biāo)結(jié)合墊之間增加了一段濾膜作為過濾層，解決了現(xiàn)有試紙條在檢測(cè)奶粉時(shí)由于某些成分不易溶解，導(dǎo)致固體顆?；虼蠓肿佣氯た椎?，延長檢測(cè)時(shí)間、檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確的問題。使用本實(shí)用新型試紙條檢測(cè)三聚氰胺，可以提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性，防止假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，可廣泛用于實(shí)驗(yàn)室、家庭和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。
【專利說明】一種三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于一種檢測(cè)奶粉中三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條，這種試紙條采取膠體硒免疫層析檢測(cè)技術(shù)，屬于食品安全檢測(cè)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]三聚氰胺(Melamine，MEL)又名蜜胺，氰尿三酰胺，是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料。由于食品工業(yè)中常需要測(cè)定食品中的蛋白質(zhì)含量，而由于直接測(cè)量蛋白質(zhì)技術(shù)比較復(fù)雜，所以常用凱氏定氮法間接確定食品中蛋白質(zhì)的含量。由于三聚氰胺分子含氮量很高，只要添加到食品中就可在檢測(cè)中造成蛋白質(zhì)含量較高的假象。目前在飼料、牛奶、奶粉、餅干、奶糖等相關(guān)產(chǎn)品均發(fā)現(xiàn)有三聚氰胺殘留現(xiàn)象。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，三聚氰胺的攝入可能會(huì)導(dǎo)致膀胱炎、慢性腎炎、腎結(jié)石、甚至膀胱癌。
[0003]因此，目前乳制品中三聚氰胺添加劑的殘留已經(jīng)成為消費(fèi)者關(guān)注的焦點(diǎn)問題，為使牛奶中三聚氰胺添加劑殘留問題得到有效監(jiān)控，各類三聚氰胺檢測(cè)試紙條相繼開發(fā)，主要集中在應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)的原理。然而現(xiàn)有的檢測(cè)三聚氰胺的試紙條，沒有過濾層，在檢測(cè)奶粉時(shí)，由于某些成分不易溶解，常常發(fā)生固體顆粒或大分子堵塞膜孔道，延長了檢測(cè)時(shí)間且易出現(xiàn)假陰性的檢測(cè)結(jié)果。本實(shí)用新型通過對(duì)常規(guī)三聚氰胺試紙條結(jié)構(gòu)的優(yōu)化改進(jìn)，增加了一段濾膜作為過濾層，解決了現(xiàn)有試紙條在檢測(cè)奶粉時(shí)由于某些成分不易溶解，導(dǎo)致固體顆?；虼蠓肿尤菀锥氯た椎溃娱L檢測(cè)時(shí)間、檢測(cè)不準(zhǔn)確的問題。使用本實(shí)用新型試紙條檢測(cè)三聚氰胺，可以提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性，防止假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，可廣泛用于實(shí)驗(yàn)室、家庭和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本實(shí)用新型的目的是提供一種能夠快速檢測(cè)三聚氰胺的試紙條。
[0005]一種三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條，該試紙條包括底板1、樣品墊3、硒標(biāo)結(jié)合墊5、反應(yīng)墊2、吸水墊8 ;所述的樣品墊3和吸水墊8分別設(shè)置在底板I兩端，硒標(biāo)結(jié)合墊5設(shè)置在樣品墊3 —端，硒標(biāo)結(jié)合墊5上有膠體硒標(biāo)記的鼠源抗三聚氰胺單克隆抗體，反應(yīng)墊2設(shè)置在吸水墊8 —端，且設(shè)置在硒標(biāo)結(jié)合墊5和吸水墊8之間，其中反應(yīng)墊2上設(shè)置有一條檢測(cè)線6和一條質(zhì)控線7，檢測(cè)線6用檢測(cè)線(T)表示，質(zhì)控線7用質(zhì)控線(C)表示，檢測(cè)線6和質(zhì)控線7互相平行，并且與試紙條的長相垂直，檢測(cè)線6靠近樣品墊3 —端，質(zhì)控線7靠近吸水墊8 —端，檢測(cè)線6包被有三聚氰胺抗原，質(zhì)控線7包被有羊抗鼠IgG，其中該試紙條在樣品墊3和硒標(biāo)結(jié)合墊5之間還設(shè)置有一段過濾層4。
[0006]本實(shí)用新型提供的一種三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條，其中所述的過濾層4為聚醚砜(PES)。聚醚砜濾膜為水系膜，具有較高的化學(xué)和熱穩(wěn)定性，流速快，耐酸堿能力強(qiáng)(pH范圍1-14)，具有高機(jī)械強(qiáng)度的優(yōu)點(diǎn)。
[0007]本實(shí)用新型提供的一種三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條，所述底板I為硬質(zhì)塑膠條或不吸水的硬紙條；所述樣品墊3為玻璃纖維棉、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜；所述硒標(biāo)結(jié)合墊5為玻璃纖維素膜，所述反應(yīng)墊2為硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜，所述吸水墊8為吸水濾紙或?yàn)V油紙。
[0008]現(xiàn)有的試紙條沒有過濾層4，在檢測(cè)奶粉時(shí)，由于某些成分不易溶解，常常發(fā)生固體顆粒或大分子堵塞膜孔道，致使檢測(cè)樣品溶液不能夠充分滲透到樣品硒標(biāo)結(jié)合墊5 —段，并在試紙條上進(jìn)行層析的速度十分緩慢，導(dǎo)致檢測(cè)樣品中的物質(zhì)不能夠與檢測(cè)線6上包被的抗原充分接觸，可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果，致使試紙條的準(zhǔn)確度下降。
[0009]本實(shí)用新型試紙條比現(xiàn)有試紙條檢測(cè)的準(zhǔn)確度高，由于本實(shí)用新型試紙條在樣品墊3和硒標(biāo)結(jié)合墊5之間還設(shè)置有一段過濾層4，當(dāng)樣品經(jīng)過過濾層4時(shí)固體顆?；虼蠓肿游镔|(zhì)被截留，而由于所檢測(cè)的三聚氰胺是小分子可以迅速通過到達(dá)硒標(biāo)結(jié)合墊5而不影響檢測(cè)，并且過濾后的樣品在試紙條上的層析速度比較快，使樣品中的待檢物質(zhì)能夠充分的與檢測(cè)線6上包被的抗原結(jié)合，從而提高了試紙條的檢測(cè)準(zhǔn)確度。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1為本實(shí)用新型試紙條剖面圖，其中，1.底板；3.樣品墊；2.反應(yīng)墊；4.過濾層；5.硒標(biāo)結(jié)合墊；6.檢測(cè)線；7.質(zhì)控線；8.吸水墊。
[0011]圖2為本實(shí)用新型試紙條結(jié)構(gòu)圖。
[0012]圖3中a、b、C、d為本實(shí)用新型三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條的性能檢測(cè)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果圖。檢測(cè)線用檢測(cè)線(T)表示，質(zhì)控線用質(zhì)控線(C)表示。3表示含有0，1，5，1(^8/1的標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺樣品檢測(cè)的結(jié)果山表示含有50μ g/L的標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺樣品的檢測(cè)結(jié)果；c表示含有100，500 μ g/L的標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺樣品的檢測(cè)結(jié)果，d表示試紙條無效時(shí)的檢測(cè)結(jié)果。
[0013]圖4中a、b、C、d、e為本實(shí)用新型市售奶粉交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)試紙條檢測(cè)結(jié)果圖。檢測(cè)線用檢測(cè)線(T)表示，質(zhì)控線用質(zhì)控線(C)表示。a表示含有O μ g/L的標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺樣品的檢測(cè)結(jié)果；b表示含有500 μ g/L的標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺樣品的檢測(cè)結(jié)果；c表示含有500 μ g/L的標(biāo)準(zhǔn)三聚氰酸樣品的檢測(cè)結(jié)果，d表示含有500 μ g/L的標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺一酰胺的樣品檢測(cè)結(jié)果，e表示含有500 μ g/L的標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺二酰胺樣品的檢測(cè)結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0014]下面結(jié)合實(shí)施例并對(duì)照附圖對(duì)本實(shí)用新型做進(jìn)一步說明。
[0015]本三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的:如圖1、2所示，該試紙條包括底板1、樣品墊3、過濾層4、硒標(biāo)結(jié)合墊5、反應(yīng)墊2、吸水墊8 ;所述的樣品墊3和吸水墊8分別設(shè)置在底板兩端，硒標(biāo)結(jié)合墊5設(shè)置在樣品墊3 —端，硒標(biāo)結(jié)合墊5上有膠體硒標(biāo)記的鼠源抗三聚氰胺單克隆抗體，反應(yīng)墊2設(shè)置在吸水墊8 一端，且設(shè)置在硒標(biāo)結(jié)合墊5和吸水墊8之間，其中反應(yīng)墊2上設(shè)置有一條檢測(cè)線6和一條質(zhì)控線7，檢測(cè)線6用檢測(cè)線(T)表示，質(zhì)控線7用質(zhì)控線(C)表示，檢測(cè)線6和質(zhì)控線7互相平行，并且與試紙條的長相垂直，檢測(cè)線6靠近樣品墊3 —端，質(zhì)控線7靠近吸水墊8 一端，檢測(cè)線6包被有三聚氰胺抗原，質(zhì)控線7包被有羊抗鼠IgG。
[0016]實(shí)施例一三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條的制作
[0017]試紙條制備是基于膠體硒免疫層析檢測(cè)技術(shù)，由于三聚氰胺是小分子，只有一個(gè)抗原表位，因此本實(shí)施例三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條的制備選擇競爭法。[0018]1、膠體硒顆粒標(biāo)記鼠源抗三聚氰胺單克隆抗體
[0019]膠體硒分別加入終濃度為0.5-30 μ g/mL的鼠源抗三聚氰胺單克隆抗體(可于廣州沃維生物科技有限公司公司購得)，輕輕混勻10分鐘，于透射電鏡觀察膠體硒被鼠源抗三聚氰胺抗體包埋的程度，從而確定最佳標(biāo)記量。
[0020]吸取5ml制備的膠體硒顆粒,用碳酸鉀溶液調(diào)節(jié)適宜pH ；
[0021]向上述膠體硒溶液中攪拌、緩慢加入鼠源抗三聚氰胺單克隆抗體，該標(biāo)記量按上述方法確定；
[0022]輕輕混勻，反應(yīng)10分鐘后，加入牛血清白蛋白(BSA)以穩(wěn)定體系，繼續(xù)攪拌至標(biāo)記完全;
[0023]制得的硒標(biāo)單克隆抗體進(jìn)行高速低溫(12000rpm、4°C)離心30分鐘,棄上清,沉淀用等體積含BSA和蔗糖的TBS緩沖液重懸，重復(fù)三次；若加入適量疊氮鈉，則可4°C長期保存。
[0024]通過該標(biāo)記方法可以將膠體硒與抗體成功結(jié)合。
[0025]2、三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條的組裝
[0026]如圖1所示，試紙條包括底板1，樣品墊3，過濾層4，硒標(biāo)結(jié)合墊5，反應(yīng)墊2和吸水墊8六部分組成，其中反應(yīng)墊2上包被有檢測(cè)線6和質(zhì)控線7，硒標(biāo)結(jié)合墊5上包被有結(jié)合了抗體的膠體硒。
[0027]將經(jīng)過含牛血清白蛋白(BSA)和Tween-20 10 mM pH 7.4的PBS活化的玻璃纖維，干燥備用；
[0028]在硝酸纖維素膜上適宜距離噴涂0.1-2.0mg/mL的三聚氰胺完全抗原檢測(cè)線和
0.5-2.0mg/mL的羊抗鼠IgG質(zhì)控線，該完全抗原與抗體制備免疫小鼠所用完全抗原不同；
[0029]將上述制備的膠體硒標(biāo)記的鼠源抗三聚氰胺單克隆抗體噴于硒標(biāo)結(jié)合墊上，干燥備用;
[0030]于底板I (硬質(zhì)塑膠條)上依次粘貼吸水墊8 (吸水濾紙)、反應(yīng)墊2 (硝酸纖維素膜)、硒標(biāo)結(jié)合墊5 (玻璃纖維素膜)、過濾層4 (聚醚砜(PES))、樣品墊3 (玻璃纖維素棉)，得三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條，干燥條件保存?zhèn)溆谩?br> [0031]實(shí)施例二三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
[0032]1、三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條的性能檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
[0033]在經(jīng)鑒定無三聚氰胺的市售奶粉中加入不同濃度標(biāo)準(zhǔn)的三聚氰胺，通過三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條檢測(cè)樣品中三聚氰胺濃度，從而驗(yàn)證三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條的有效性。
[0034]市售奶粉中三聚氰胺檢測(cè)實(shí)驗(yàn):于50mL離心管中加入奶粉和40mL蒸餾水混勻，并用配置好的2mg/mL標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺溶液逐級(jí)稀釋獲得分別含有O，1,5,10，50，100和500 μ g/L的標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺樣品，供試紙條檢測(cè)使用。
[0035]將試紙標(biāo)有箭頭標(biāo)記端向下，插入樣品奶粉溶液中，試紙條與樣品溶液充分接觸5min后觀察結(jié)果。結(jié)果顯示:檢測(cè)含有0、1、5、10 μ g/L的標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺樣品的試紙條,反應(yīng)膜上的三聚氰胺檢測(cè)線顯示一條紅色條帶，同時(shí)質(zhì)控線也顯示一條紅色條帶，表示樣品中不含三聚氰胺或低于試紙條對(duì)三聚氰胺的最低檢測(cè)限(如圖3中a);檢測(cè)50 μ g/L的標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺樣品的試紙條，反應(yīng)膜上的三聚氰胺檢測(cè)線開始不顯色，而質(zhì)控線顯示一條紅色條帶，表示檢測(cè)樣品中三聚氰胺含量等于試紙條對(duì)三聚氰胺的最低檢測(cè)限(如圖3中b);檢測(cè)100，500 μ g/L的標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺樣品的試紙條，反應(yīng)膜上的三聚氰胺檢測(cè)線完全不顯色，而質(zhì)控線顯示一條紅色條帶，表示檢測(cè)樣品中三聚氰胺含量高于試紙條對(duì)三聚氰胺的最低檢測(cè)限(如圖3中c)。因此，三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條在檢測(cè)奶粉過程中，靈敏度可達(dá)到50 μ g/L。
[0036]另外，如果反應(yīng)膜上的質(zhì)控線沒有顯示紅色條帶，無論三聚氰胺檢測(cè)線是否顯示紅色條帶，試紙條檢測(cè)結(jié)果均視為無效(如圖3中d)。
[0037]根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出以下結(jié)論:本實(shí)用新型三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條不僅可以靈敏、準(zhǔn)確的檢測(cè)樣品中是否含有三聚氰胺，同時(shí)三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條結(jié)果清晰可辨。
[0038]2、市售奶粉交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn):于250mL燒杯中加入經(jīng)鑒定無三聚氰胺的市售奶粉和IOOmL蒸餾水混勻，并用配置好的2mg/mL標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺溶液逐級(jí)稀釋獲得含有O和500 μ g/L的標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺樣品，同樣的方法獲得含有三聚氰胺同系物:三聚氰酸、三聚氰胺一酰胺和三聚氰胺二酰胺樣品，供試紙條檢測(cè)使用。
[0039]通過市售奶粉中三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條交叉反應(yīng)試驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果(圖4中a、b、C、d、e)可以看出，各個(gè)三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條的質(zhì)控線均顯色，只有檢測(cè)含有三聚氰胺的市售奶粉的三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條的檢測(cè)線不顯色，其他檢測(cè)含有三聚氰胺同系物的試紙條的檢測(cè)線均顯色，且顏色強(qiáng)度相當(dāng)。
[0040]因此，三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條同三聚氰胺同系物三聚氰酸、三聚氰胺一酰胺和三聚氰胺二酰胺沒有交叉反應(yīng)，可以特異性檢測(cè)樣品中的三聚氰胺。
[0041]通過三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條對(duì)含有標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺的樣品奶粉檢測(cè)實(shí)驗(yàn)及市售奶粉交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)可以看出，該試紙條特異性強(qiáng)、檢測(cè)準(zhǔn)確度高，結(jié)果清晰易辨，可方便的用于檢測(cè)固體奶粉，而防止假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。
【權(quán)利要求】
1.一種三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條，該試紙條包括底板(I)、樣品墊(3)、硒標(biāo)結(jié)合墊(5)、反應(yīng)墊(2)、吸水墊(8);所述的樣品墊(3)和吸水墊(8)分別設(shè)置在底板(I)兩端,硒標(biāo)結(jié)合墊(5)設(shè)置在樣品墊(3) —端，反應(yīng)墊(2)設(shè)置在吸水墊(8) —端，且設(shè)置在硒標(biāo)結(jié)合墊(5)和吸水墊(8)之間，其中反應(yīng)墊(2)上設(shè)置有一條檢測(cè)線(6)和一條質(zhì)控線(7)，檢測(cè)線(6)和質(zhì)控線(7)互相平行，并且與試紙條的長相垂直，檢測(cè)線(6)靠近樣品墊(3) —端，質(zhì)控線(7)靠近吸水墊(8)—端，其特征在于該試紙條在樣品墊(3)和硒標(biāo)結(jié)合墊(5)之間還設(shè)置有一段過濾層(4 )。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三聚氰胺快速檢測(cè)試紙條，其特征在于所述的過濾層(4)為聚醚砜(PES)。
【文檔編號(hào)】G01N33/04GK203772846SQ201420139229
【公開日】2014年8月13日 申請(qǐng)日期:2014年3月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月25日
【發(fā)明者】不公告發(fā)明人 申請(qǐng)人:蘭州紅蟲生物工程有限責(zé)任公司