無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感器的制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感器的制備方法，屬于新型納米功能材料和生物傳感器領(lǐng)域。本發(fā)明首先在二氧化鈦納米顆?；咨?，利用光電化學(xué)合成方法，制備核殼結(jié)構(gòu)的枝晶納米棒狀的貴金屬合金納米材料，進(jìn)而制得了成本低、靈敏度高、特異性好、檢測快速、制備簡單的檢測瘦肉精的無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器。
【專利說明】無標(biāo)巧電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感器的制備方法和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及采用一種快速、靈敏檢測瘦肉精的無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的 制備方法和應(yīng)用，屬于新型納米功能材料與生物傳感器【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 瘦肉精是一類叫做0 -興奮劑的藥物，而不是某一種特定的藥物。該類藥物具有 實現(xiàn)促進(jìn)瘦肉生長、抑制肥肉生長的功能，所W統(tǒng)稱為"瘦肉精"。根據(jù)國務(wù)院食品安全委員 會辦公室r瘦肉精"專項整治方案》（食安辦〔2011) 14號）規(guī)定的"瘦肉精"品種目錄為16 種，包括：萊克多己胺Ractopamine ;克倫特羅Clenbuterol ;沙了胺醇Sa化utamol ;硫酸沙 了胺醇 Sa化utamol Sulfate ;鹽酸多己胺 Dopamine Hy化ochloride ;西馬特羅 Cimaterol ; 硫酸特布他林Terbutaline Sulfate ;苯己醇胺APhenylethanolamine A ;班布特羅 Bambuterol ;鹽酸齊帕特羅 Zilpaterol Hy化ochloride ;鹽酸氯丙那林 Clo巧renaline Hy化ochloride ;馬布特羅Mabuterol ;西布特羅Cimbuterol ;漠布特羅化ombuterol ;酒石 酸阿福特羅 Arformoterol Tartrate ;富馬酸福莫特羅 F'ormoterol Fumatrate。
[0003] 瘦肉精可W提高豬的瘦肉率，但如果人們食用含有大量瘦肉精的豬肉后，會造成 屯、血管系統(tǒng)的損壞，并可能出現(xiàn)嚴(yán)重的神經(jīng)癥狀。針對瘦肉精中毒事件頻發(fā)該一嚴(yán)重現(xiàn)象， 2001年12月27日、2002年2月9日、4月9日，農(nóng)業(yè)部分別下發(fā)文件禁止食品動物禁止使 用0 -興奮劑類藥物作為飼料添加劑(農(nóng)業(yè)部176號、193號公告、1519號條例）。
[0004] 目前，檢測瘦肉精的方法有高效液相色譜法HPLC、氣相色譜一質(zhì)譜法GC-MS和酶 聯(lián)免疫法化ISA。該些方法，雖具有一定的靈敏度，但存在樣品處理時間長，檢測過程煩瑣、 難于操作，或者重現(xiàn)性差等缺點，在實際應(yīng)用中受到一定的限制。
[0005] 電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器由于其靈敏度高、特異性好、操作簡便等優(yōu)點被廣泛應(yīng)用 于臨床診斷、藥物分析、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域。制備性能優(yōu)越的電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器，其最關(guān) 鍵技術(shù)就是發(fā)光強度及穩(wěn)定性和免疫分子的有效固定及重現(xiàn)性等性能的提高。
[0006] 魯米諾-過氧化氨Luminol-H2〇2發(fā)光體系由于成本低廉、發(fā)光強度高，已被廣泛 應(yīng)用到電致化學(xué)發(fā)光的分析方法中，但由于Luminol-H2〇2發(fā)光體系的發(fā)光需要借助一定的 催化劑，才能有快速、靈敏、高強度的光信號響應(yīng)，因此一般常加入辣根過氧化物酶HRP來 進(jìn)行催化反應(yīng)。而HRP的使用對反應(yīng)條件要求苛刻，不利于Luminol-H2〇2發(fā)光體系的普及 使用。因此開發(fā)新型納米材料模擬酶來代替HRP，會相比于HRP具有較寬泛的使用條件。另 夕F，貴金屬納米材料具有比表面積大、易于與多種生物分子(核酸、蛋白質(zhì)和生物分子等）結(jié) 合、對人體無害等特點，可被應(yīng)用于電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的制備中。
[0007] 為了解決上述問題，本發(fā)明采用W光化學(xué)合成方法，直接在電極上實現(xiàn)了 Ti化 NPs負(fù)載的核殼結(jié)構(gòu)的金銀鈕合金納米椿-殼聚糖復(fù)合材料Ti化-Au@Ag-Pd NDRs-C服，使 之與Ti化NPs的復(fù)合材料共同修飾的電極，一方面增加了電極比表面積，增強電極導(dǎo)電能 力和抗體的負(fù)載量，提高傳感器的檢測限，另一方面二者可W產(chǎn)生協(xié)同催化作用，可W無需 使用&化，僅利用水溶液中的溶解氧即可使魯米諾產(chǎn)生電致化學(xué)發(fā)光，并且該體系具有更好 的催化響應(yīng)速度和電致化學(xué)發(fā)光強度。由此，成功的發(fā)明了無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免 疫傳感器的制備方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[000引本發(fā)明的目的在于避免現(xiàn)有檢測方法中存在的儀器設(shè)備復(fù)雜、操作過程繁瑣及對 檢驗人員的技能要求高等缺點，提供了一種快速、靈敏檢測瘦肉精的無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光 免疫傳感器的制備方法，所制備的傳感器具有靈敏度高、特異性強的特點，且制備簡單、操 作方便，可應(yīng)用于瘦肉精的快速、靈敏檢測。
[0009] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下； 1.無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感器的制備方法，其特征在于，制備步驟為： (OW直徑4 mm的玻碳電極為工作電極，在電極表面滴涂5?10 uL二氧化鐵納米 粒子溶膠Ti〇2 NPs，室溫下驚干后，滴涂5?10化的金銀納米椿-殼聚糖復(fù)合材料Au@Ag NRs-C服溶液，并在室溫下驚干； (2) 將步驟（1)中得到的電極超純水清洗，室溫下驚干成膜，表面滴涂5?lOuL 0.01 mol/L的氯鈕酸溶液H2PCICI4,立刻使用高壓隸燈照射30?90秒，制得Ti〇2 NPs負(fù)載的金銀 鈕合金納米椿-殼聚糖復(fù)合材料Ti〇2-Au@Ag-Pd NDRs-C服修飾的工作電極，室溫下驚干； (3) 將步驟（2)中得到的電極用超純水清洗，室溫下驚干后，將電極浸入到邸C/N服溶 液中，1小時后取出； (4) 將步驟（3)中得到的電極用超純水清洗，在電極表面滴涂5?10化10嗦/mL的瘦 肉精抗體溶液，4 °C冰箱中保存驚干； (5) 將步驟（4)中得到的電極用超純水清洗，繼續(xù)在電極表面滴涂5?10化100嗦/mL 的牛血清白蛋白BSA溶液，4 °C冰箱中保存驚干，超純水清洗，4 °C冰箱中驚干成膜，審U 得無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感器； 所述的Ti化NPs為Img/mL的二氧化鐵納米粒子水溶液； 所述的Au@Ag NRs-C服為金@銀核殼納米椿與殼聚糖復(fù)合材料的水溶液，所述金@銀核 殼納米椿是W椿狀金納米粒子為核、W銀納米粒子為殼層的核殼結(jié)構(gòu)的椿狀納米粒子，所 述椿狀納米粒子的長度為20?50nm，所述殼聚糖為將殼聚糖純品加入到體積分?jǐn)?shù)為1%的 醋酸中制備而成的殼聚糖水溶液； 所述的^PdCL為抑值為1?2的氯鈕酸水溶液； 所述的Au@Ag-Pd NDRs為金銀鈕合金納米椿，所述的金銀鈕合金納米椿為金@銀鈕核 殼枝晶狀的納米椿，所述金@銀鈕核殼枝晶狀的納米椿是W椿狀金納米粒子為核、W枝晶 狀銀鈕合金納米粒子為殼層的核殼結(jié)構(gòu)的納米粒子，所述納米椿的長度為20?50nm ; 所述的邸C/N服為1- (3-二甲氨基丙基）-3-己基碳二亞胺鹽酸鹽邸C和N-哲基了二 酷亞胺N服的混合溶液，所述混合溶液中邸C的濃度為0. Olmol/L，N服的濃度為0. 002mol/ L。
[0010] 2. -種如本發(fā)明所述的制備方法所制備的無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感 器，所述的無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感器應(yīng)用于瘦肉精的檢測，其特征在于，檢測 步驟為： (1)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：配制一組包括空白標(biāo)樣在內(nèi)的不同濃度的瘦肉精標(biāo)準(zhǔn)溶液，底液為 pH 7. 4的磯酸鹽緩沖溶液； (2) 工作電極修飾：將本發(fā)明所述的無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感器為工作電 極，將步驟（1)中配制的不同濃度的瘦肉精標(biāo)準(zhǔn)溶液分別滴涂到工作電極表面，4 °C冰箱 中保存； (3) 工作曲線繪制：將飽和甘隸電極作為參比電極，銷絲電極作為輔助電極，與步驟 (2)所修飾好的工作電極組成=電極系統(tǒng)，連接到電致化學(xué)發(fā)光設(shè)備上；在電解槽中先后加 入15血抑=7. 4的PBS緩沖溶液和1血5 mmol/L的魯米諾溶液luminol ;用循環(huán)伏安法對 組裝的工作電極施加循環(huán)電壓；根據(jù)所得的電致化學(xué)發(fā)光的光信號強度與瘦肉精抗原標(biāo)準(zhǔn) 溶液濃度之間的關(guān)系，繪制工作曲線；空白標(biāo)樣的光信號強度記為4,含有不同濃度的瘦肉 精標(biāo)準(zhǔn)溶液的光信號強度記為A，響應(yīng)光信號強度降低的差值為= 4-q，瘦肉精 標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度Ct間成線性關(guān)系，繪制A C-幻C作曲線； (4) 瘦肉精的檢測；用待測樣品代替步驟（1)中的瘦肉精標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照步驟（2)和（3) 中的方法進(jìn)行檢測，根據(jù)響應(yīng)光信號強度降低的差值A(chǔ)巧日工作曲線，得到待測樣品中瘦 肉精的含量。
[0011] 3.本發(fā)明所述的無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感器的制備方法和應(yīng)用，其特 征在于所述瘦肉精選自下列之一；萊克多己胺、克倫特羅、沙了胺醇、硫酸沙了胺醇、鹽酸多 己胺、西馬特羅、硫酸特布他林、苯己醇胺A、班布特羅、鹽酸齊帕特羅、鹽酸氯丙那林、馬布 特羅、西布特羅、漠布特羅、酒石酸阿福特羅、富馬酸福莫特羅。
[001引本發(fā)明的有益成果 (1) 本發(fā)明所述的無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器制備簡單，操作方便，并通過納米 材料的增效和增敏作用，可實現(xiàn)對實際樣品的快速、靈敏、高選擇性檢測，具有市場發(fā)展前 景； (2) 本發(fā)明首次將光化學(xué)合成方法制備Ti02-Au@Ag-Pd NDRs-C服復(fù)合材料，并應(yīng)用于 電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的制備，所制備的傳感器無需使用&02便可實現(xiàn)對luminol電致 化學(xué)發(fā)光的增敏、增效，極大地提高了檢測靈敏度和重現(xiàn)性，獲得了較低的檢出限，具有重 要的科學(xué)意義。

【具體實施方式】
[0013] 實施例1無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感器的制備 (OW直徑4 mm的玻碳電極為工作電極，在電極表面滴涂5 uL Ti化NPs，室溫下驚干 后，滴涂5化的Au@Ag NRs-C服溶液，并在室溫下驚干； (2) 將步驟（1)中得到的電極超純水清洗，室溫下驚干成膜，表面滴涂加L 0.01 mol/L 的HsPclCl"立刻使用高壓隸燈照射30秒，制得Ti化-Au@Ag-Pd NDRs-C服修飾的工作電極， 室溫下驚干； (3) 將步驟（2)中得到的電極用超純水清洗，室溫下驚干后，將電極浸入到邸C/N服溶 液中，1小時后取出； (4) 將步驟（3)中得到的電極用超純水清洗，在電極表面滴涂5化10嗦/mL的瘦肉精 抗體溶液，4 °C冰箱中保存驚干； (5) 將步驟（4)中得到的電極用超純水清洗，繼續(xù)在電極表面滴涂5化100嗦/mL的 BSA溶液，4 °C冰箱中保存驚干，超純水清洗，4 °C冰箱中驚干成膜，制得無標(biāo)記電致化學(xué) 發(fā)光瘦肉精免疫傳感器； 所述的Ti化NPs為Img/mL的二氧化鐵納米粒子水溶液； 所述的Au@Ag NRs-C服為金@銀核殼納米椿與殼聚糖復(fù)合材料的水溶液，所述金@銀 核殼納米椿是W椿狀金納米粒子為核、W銀納米粒子為殼層的核殼結(jié)構(gòu)的椿狀納米粒子， 所述椿狀納米粒子的長度為20nm，所述殼聚糖為將殼聚糖純品加入到體積分?jǐn)?shù)為1%的醋 酸中制備而成的殼聚糖水溶液； 所述的H2PCICI4為抑值為1的氯鈕酸水溶液； 所述的Au@Ag-Pd NDRs為金銀鈕合金納米椿，所述的金銀鈕合金納米椿為金@銀鈕核 殼枝晶狀的納米椿，所述金@銀鈕核殼枝晶狀的納米椿是W椿狀金納米粒子為核、W枝晶 狀銀鈕合金納米粒子為殼層的核殼結(jié)構(gòu)的納米粒子，所述納米椿的長度為20nm ; 所述的邸C/N服為1- (3-二甲氨基丙基）-3-己基碳二亞胺鹽酸鹽邸C和N-哲基了二 酷亞胺N服的混合溶液，所述混合溶液中邸C的濃度為0. Olmol/L，N服的濃度為0. 002mol/ L。
[0014] 實施例2無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感器的制備 (OW直徑4 mm的玻碳電極為工作電極，在電極表面滴涂8 uL Ti化NPs，室溫下驚干 后，滴涂8化的Au@Ag NRs-C服溶液，并在室溫下驚干； (2) 將步驟（1)中得到的電極超純水清洗，室溫下驚干成膜，表面滴涂8uL 0.01 mol/L 的H2PCICI4,立刻使用高壓隸燈照射60秒，制得Ti化-Au@Ag-Pd NDRs-C服修飾的工作電極， 室溫下驚干； (3) 同實施例1 ; (4) 將步驟（3)中得到的電極用超純水清洗，在電極表面滴涂8化10嗦/mL的瘦肉精 抗體溶液，4 °C冰箱中保存驚干； (5) 將步驟（4)中得到的電極用超純水清洗，繼續(xù)在電極表面滴涂8化100嗦/血的 BSA溶液，4 °C冰箱中保存驚干，超純水清洗，4 °C冰箱中驚干成膜，制得無標(biāo)記電致化學(xué) 發(fā)光瘦肉精免疫傳感器； 所述的Au@Ag NRs-C服中金納米椿的長度為40皿； 所述的畔(1化的抑值為1.5 ; 所述的Au@Ag-Pd NDRs的長度為40nm ; 其余同實施例1。
[0015] 實施例3無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感器的制備 (OW直徑4 mm的玻碳電極為工作電極，在電極表面滴涂10 uL Ti化NPs，室溫下驚 干后，滴涂10化的Au@Ag NRs-C服溶液，并在室溫下驚干； (2) 將步驟（1)中得到的電極超純水清洗，室溫下驚干成膜，表面滴涂lOuL 0.01 mol/L 的H2PCICI4,立刻使用高壓隸燈照射90秒，制得Ti化-Au@Ag-Pd NDRs-C服修飾的工作電極， 室溫下驚干； (3) 同實施例1 ; (4) 將步驟（3)中得到的電極用超純水清洗，在電極表面滴涂10化10嗦/mL的瘦肉 精抗體溶液，4 °C冰箱中保存驚干； (5)將步驟（4)中得到的電極用超純水清洗，繼續(xù)在電極表面滴涂10化100嗦/mL的 BSA溶液，4 °C冰箱中保存驚干，超純水清洗，4 °C冰箱中驚干成膜，制得無標(biāo)記電致化學(xué) 發(fā)光瘦肉精免疫傳感器； 所述的Au@Ag NRs-C服中金納米椿的長度為50皿； 所述的H2PCICI4的抑值為2 ; 所述的Au@Ag-Pd NDRs的長度為50nm ; 其余同實施例1。
[0016] 實施例4上述實施例1 - 3所制備的無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器，應(yīng)用于瘦 肉精的檢測，步驟如下： (1) 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：配制一組包括空白標(biāo)樣在內(nèi)的不同濃度的瘦肉精標(biāo)準(zhǔn)溶液，底液為 pH 7. 4的磯酸鹽緩沖溶液； (2) 工作電極修飾：將本發(fā)明所述的無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感器為工作電 極，將步驟（1)中配制的不同濃度的瘦肉精標(biāo)準(zhǔn)溶液分別滴涂到工作電極表面，4 °C冰箱 中保存； (3) 工作曲線繪制：將飽和甘隸電極作為參比電極，銷絲電極作為輔助電極，與步驟 (2)所修飾好的工作電極組成=電極系統(tǒng)，連接到電致化學(xué)發(fā)光設(shè)備上；在電解槽中先后加 入15血抑=7. 4的PBS緩沖溶液和1血5 mmol/L的魯米諾溶液luminol ;用循環(huán)伏安法對 組裝的工作電極施加循環(huán)電壓；根據(jù)所得的電致化學(xué)發(fā)光的光信號強度與瘦肉精抗原標(biāo)準(zhǔn) 溶液濃度之間的關(guān)系，繪制工作曲線；空白標(biāo)樣的光信號強度記為4,含有不同濃度的瘦肉 精標(biāo)準(zhǔn)溶液的光信號強度記為A，響應(yīng)光信號強度降低的差值為= 4-q，瘦肉精 標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度Ct間成線性關(guān)系，繪制A C-幻C作曲線； (4) 瘦肉精的檢測；用待測樣品代替步驟（1)中的瘦肉精標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照步驟（2)和（3) 中的方法進(jìn)行檢測，根據(jù)響應(yīng)光信號強度降低的差值A(chǔ)巧日工作曲線，得到待測樣品中瘦 肉精的含量； 所述瘦肉精選自下列之一；萊克多己胺、克倫特羅、沙了胺醇、硫酸沙了胺醇、鹽酸多己 胺、西馬特羅、硫酸特布他林、苯己醇胺A、班布特羅、鹽酸齊帕特羅、鹽酸氯丙那林、馬布特 羅、西布特羅、漠布特羅、酒石酸阿福特羅、富馬酸福莫特羅。
[0017] 本發(fā)明所制備的免疫傳感器檢測16種瘦肉精的技術(shù)指標(biāo)見表1。
[001引表1本發(fā)明所制備的免疫傳感器檢測16種瘦肉精的技術(shù)指標(biāo)

【權(quán)利要求】
1. 無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感器的制備方法，其特征在于，制備步驟為： (1) 以直徑4 mm的玻碳電極為工作電極，在電極表面滴涂5~10 uL二氧化鈦納米 粒子溶膠Ti02 NPs，室溫下晾干后，滴涂5~10 ML的金銀納米棒-殼聚糖復(fù)合材料Au@Ag NRs-CHS溶液，并在室溫下晾干； (2) 將步驟（1)中得到的電極超純水清洗，室溫下晾干成膜，表面滴涂5~10uL 0.01 mol/L的氯鈀酸溶液H2PdCl4，立刻使用高壓汞燈照射30~90秒，制得Ti0 2 NPs負(fù)載的金銀 鈀合金納米棒-殼聚糖復(fù)合材料Ti02-Au@Ag-Pd NDRs-CHS修飾的工作電極，室溫下晾干； (3) 將步驟（2)中得到的電極用超純水清洗，室溫下晾干后，將電極浸入到EDC/NHS溶 液中，1小時后取出； (4) 將步驟（3)中得到的電極用超純水清洗，在電極表面滴涂5~10 ML 10 Pg/mL的瘦 肉精抗體溶液，4 °C冰箱中保存晾干； (5) 將步驟（4)中得到的電極用超純水清洗，繼續(xù)在電極表面滴涂5~10ML 100 Pg/mL 的牛血清白蛋白BSA溶液，4 °C冰箱中保存晾干，超純水清洗，4 °C冰箱中晾干成膜，制 得無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感器； 所述的Ti02 NPs為lmg/mL的二氧化鈦納米粒子水溶液； 所述的Au@Ag NRs-CHS為金@銀核殼納米棒與殼聚糖復(fù)合材料的水溶液，所述金@銀核 殼納米棒是以棒狀金納米粒子為核、以銀納米粒子為殼層的核殼結(jié)構(gòu)的棒狀納米粒子，所 述棒狀納米粒子的長度為20~50nm，所述殼聚糖為將殼聚糖純品加入到體積分?jǐn)?shù)為1%的 醋酸中制備而成的殼聚糖水溶液； 所述的H2PdCl4S pH值為1~2的氯鈀酸水溶液； 所述的Au@Ag-Pd NDRs為金銀鈕合金納米棒，所述的金銀鈕合金納米棒為金0銀I巴核 殼枝晶狀的納米棒，所述金@銀鈀核殼枝晶狀的納米棒是以棒狀金納米粒子為核、以枝晶 狀銀鈕合金納米粒子為殼層的核殼結(jié)構(gòu)的納米粒子，所述納米棒的長度為20~50nm ; 所述的EDC/NHS為1- (3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽EDC和N-羥基丁二 酰亞胺NHS的混合溶液，所述混合溶液中EDC的濃度為0? Olmol/L，NHS的濃度為0? 002mol/ L〇
2. -種如權(quán)利要求1所述的制備方法所制備的無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感 器，所述的無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感器應(yīng)用于瘦肉精的檢測，其特征在于，檢測 步驟為： (1) 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：配制一組包括空白標(biāo)樣在內(nèi)的不同濃度的瘦肉精標(biāo)準(zhǔn)溶液，底液為 pH 7. 4的磷酸鹽緩沖溶液； (2) 工作電極修飾：將本發(fā)明所述的無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感器為工作電 極，將步驟（1)中配制的不同濃度的瘦肉精標(biāo)準(zhǔn)溶液分別滴涂到工作電極表面，4 °C冰箱 中保存； (3) 工作曲線繪制：將飽和甘汞電極作為參比電極，鉑絲電極作為輔助電極，與步驟 (2 )所修飾好的工作電極組成三電極系統(tǒng)，連接到電致化學(xué)發(fā)光設(shè)備上；在電解槽中先后加 入15mL pH=7. 4的PBS緩沖溶液和lmL 5 mmol/L的魯米諾溶液luminol ;用循環(huán)伏安法對 組裝的工作電極施加循環(huán)電壓；根據(jù)所得的電致化學(xué)發(fā)光的光信號強度與瘦肉精抗原標(biāo)準(zhǔn) 溶液濃度之間的關(guān)系，繪制工作曲線；空白標(biāo)樣的光信號強度記為4,含有不同濃度的瘦肉 精標(biāo)準(zhǔn)溶液的光信號強度記為A，響應(yīng)光信號強度降低的差值為A j =斗-A，A i?與瘦肉精 標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度Ct間成線性關(guān)系，繪制A i? - CX作曲線； (4)瘦肉精的檢測：用待測樣品代替步驟（1)中的瘦肉精標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照步驟（2)和（3) 中的方法進(jìn)行檢測，根據(jù)響應(yīng)光信號強度降低的差值△腐P工作曲線，得到待測樣品中瘦 肉精的含量。
3.如權(quán)利要求1所述的無標(biāo)記電致化學(xué)發(fā)光瘦肉精免疫傳感器的制備方法，其特征 在于所述瘦肉精選自下列之一：萊克多巴胺、克倫特羅、沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、鹽酸多巴 胺、西馬特羅、硫酸特布他林、苯乙醇胺A、班布特羅、鹽酸齊帕特羅、鹽酸氯丙那林、馬布特 羅、西布特羅、溴布特羅、酒石酸阿福特羅、富馬酸福莫特羅。
【文檔編號】G01N21/76GK104502429SQ201510034905
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2015年1月25日 優(yōu)先權(quán)日:2015年1月25日
【發(fā)明者】張勇, 馬洪敏, 魏琴, 李燕, 吳丹, 龐雪輝 申請人:濟(jì)南大學(xué)