本發(fā)明涉及生物芯片
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種小分子芯片、其構(gòu)建方法、其應(yīng)用及其檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：小分子芯片也稱小分子微陣列，是生物芯片研究的重要分支之一。自從哈佛大學(xué)schreiber課題組1999年首次報(bào)道小分子微陣列以來(lái)，小分子芯片得到了廣泛的應(yīng)用。目前小分子芯片的研究主要有兩個(gè)方向，一是基于小分子芯片載體表面化學(xué)修飾及小分子化合物固定化策略為主的基礎(chǔ)性研究，二是拓展小分子芯片的應(yīng)用范圍。近年來(lái)，小分子芯片已經(jīng)成功應(yīng)用于各種蛋白質(zhì)配體的篩選、蛋白質(zhì)與小分子之間的相互作用、酶的抑制劑篩選、酶活性圖譜研究、高通量藥物篩選、食品和臨床檢測(cè)及細(xì)胞表面與小分子的相互關(guān)系等領(lǐng)域。阿爾茨海默氏癥又稱早老性癡呆，是威脅人類壽命的一種常見(jiàn)疾病。它們主要影響六十歲以上的老年人的認(rèn)知和行為能力，患病周期可長(zhǎng)達(dá)數(shù)十年。目前人們對(duì)于阿爾茨海默氏癥的基本病因仍未完全了解。研究發(fā)現(xiàn)，丁酰膽堿脂酶(bche蛋白)和人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(bace1蛋白)均與阿爾茨海默氏病有關(guān)，因此，檢測(cè)bche蛋白和bace1蛋白對(duì)于科研具有重要的意義?，F(xiàn)有技術(shù)中，主要采用elisa法來(lái)檢測(cè)bche蛋白和bace1蛋白。此方法首先采用bche蛋白和bace1蛋白生產(chǎn)抗體，利用抗原與抗體的特異反應(yīng)來(lái)檢測(cè)待測(cè)樣品中的bche蛋白和bace1蛋白。此方法靈敏度高、強(qiáng)，但也具有一定的缺點(diǎn)。例如，elisa試劑盒中所采用的抗體制備過(guò)程復(fù)雜，生產(chǎn)成本高；且抗體易變性失活，性能不穩(wěn)定，運(yùn)輸和存儲(chǔ)成本也較高。針對(duì)以上缺點(diǎn)，研發(fā)一種成本低廉，性能穩(wěn)定的檢測(cè)bche蛋白或bace1蛋白的產(chǎn)品和方法具有重要的意義。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明提供了一種小分子芯片，可檢測(cè)待測(cè)樣品中的bche蛋白或bace1蛋白，此小分子芯片成本低廉，性能穩(wěn)定，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確；此外，本發(fā)明還提供了此小分子芯片的構(gòu)建方法和檢測(cè)方法。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一種小分子芯片，由光交聯(lián)芯片和小分子化合物組成，小分子化合物與光交聯(lián)芯片化學(xué)鍵合；其中，小分子化合物包含2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯、(2s,5r,6r)-3,3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷-2-甲酸鈉鹽或4-氨基-2-羥基苯甲酸中的任意一種或兩者以上的化合物；和/或；n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺?；野坊?甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺、三環(huán)癸胺或(4-(2-氯-4-硝基苯基)哌啶-1-基)(5-甲基-3-苯基異噁唑-4-基)酮中的任意一種或兩者以上的化合物。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，小分子化合物為2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯、(2s,5r,6r)-3,3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷-2-甲酸鈉鹽或4-氨基-2-羥基苯甲酸中的任意一種或兩者以上的化合物。在本發(fā)明的另一些實(shí)施例中，小分子化合物為n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺酰基乙胺基)甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺、三環(huán)癸胺或(4-(2-氯-4-硝基苯基)哌啶-1-基)(5-甲基-3-苯基異噁唑-4-基)酮中的任意一種或兩者以上的化合物。在本發(fā)明的另一些實(shí)施例中，小分子芯片上的小分子化合物包含2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯、(2s,5r,6r)-3,3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷-2-甲酸鈉鹽或4-氨基-2-羥基苯甲酸中的任意一種或兩者以上的化合物；且包含n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺酰基乙胺基)甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺、三環(huán)癸胺或(4-(2-氯-4-硝基苯基)哌啶-1-基)(5-甲基-3-苯基異噁唑-4-基)酮中的任意一種或兩者以上的化合物。優(yōu)選地，本發(fā)明提供的小分子芯片中，連接小分子化合物與光交聯(lián)芯片的化學(xué)鍵為c-c，c-o或c-n鍵，即小分子化合物與光交聯(lián)芯片通過(guò)c-c,c-o或c-n鍵鍵合。小分子芯片為無(wú)標(biāo)記的小分子芯片，在使用時(shí)不需要任何標(biāo)記試劑，工作效率高。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，光交聯(lián)芯片還與空白對(duì)照化學(xué)鍵合。作為優(yōu)選，空白對(duì)照為dmso；dmso的用量為1μl～2μl。作為優(yōu)選，光交聯(lián)芯片還與陽(yáng)性對(duì)照化學(xué)鍵合。作為優(yōu)選，陽(yáng)性對(duì)照為雷帕霉素。作為優(yōu)選，光交聯(lián)芯片還與陰性對(duì)照化學(xué)鍵合。作為優(yōu)選，陰性對(duì)照為bsa。光交聯(lián)芯片為用紫外交聯(lián)技術(shù)即可固定小分子化合物的芯片。作為優(yōu)選，光交聯(lián)芯片為二維光交聯(lián)芯片或三維光交聯(lián)芯片。作為優(yōu)選，二維光交聯(lián)芯片包括固體支持物、兩端修飾的聚乙二醇和光交聯(lián)劑；兩端修飾的聚乙二醇為一端由鉚定基團(tuán)修飾，另一端由結(jié)合基團(tuán)修飾的聚乙二醇，固體支持物與鉚定基團(tuán)連接，光交聯(lián)劑與結(jié)合基團(tuán)連接；鉚定基團(tuán)選自-sh、-s-s-或-sicl3；結(jié)合基團(tuán)選自-cooh、-oh、-nh2或-och3。作為優(yōu)選，三維光交聯(lián)芯片包括固體支持物、引發(fā)組合物、引發(fā)單體和光交聯(lián)劑；引發(fā)單體通過(guò)引發(fā)組合物與固體支持物連接；光交聯(lián)劑與引發(fā)單體連接，引發(fā)組合物包括引發(fā)劑和稀釋劑，引發(fā)劑為雙硫醇引發(fā)劑。本發(fā)明還提供了一種小分子芯片的構(gòu)建方法，包括以下步驟：取小分子化合物與光交聯(lián)芯片混合，干燥，光交聯(lián)，清洗，干燥，得到芯片，封閉未結(jié)合位點(diǎn)，清洗，干燥，即得。作為優(yōu)選，取小分子化合物之后，小分子化合物與光交聯(lián)芯片混合步驟之前還包含溶解小分子化合物的步驟。作為優(yōu)選，溶解小分子化合物的溶劑為dmso。作為優(yōu)選，小分子化合物與光交聯(lián)芯片混合時(shí)，每一種小分子化合物的濃度為5mmol/l～10mmol/l。作為優(yōu)選，小分子化合物與光交聯(lián)芯片混合時(shí)，每一種小分子化合物的體積為1μl～2μl。作為優(yōu)選，小分子化合物與光交聯(lián)芯片混合之后，光交聯(lián)之前，干燥的溫度為25℃～30℃。作為優(yōu)選，小分子化合物與光交聯(lián)芯片混合之后，光交聯(lián)之前，干燥的時(shí)間為1h～2h。作為優(yōu)選，光交聯(lián)的具體步驟為：用紫外光照射2～4次，每次照射的時(shí)間為1min～3min。作為優(yōu)選，紫外光的波長(zhǎng)為340nm～380nm，紫外光的能量為0～9999uj/cm2。更優(yōu)選地，紫外光的波長(zhǎng)為365nm，紫外光的能量為0～9999uj/cm2。作為優(yōu)選，光交聯(lián)之后、干燥之前的清洗的洗液為分析純的有機(jī)溶劑和去離子水。作為優(yōu)選，洗液中，有機(jī)溶劑為dmso、dmf、thf、dcm、mecn或etoh中的任意一種或兩者以上的溶劑。作為優(yōu)選，光交聯(lián)之后，干燥之前，清洗為超聲波清洗。作為優(yōu)選，光交聯(lián)之后，干燥之前，清洗時(shí)，每種洗液清洗的次數(shù)為3次～4次，每次清洗的時(shí)間為5min～10min。作為優(yōu)選，每次清洗的時(shí)間為5min。作為優(yōu)選，清洗之后，得到芯片之前，干燥為氮?dú)獯蹈?。作為?yōu)選，封閉未結(jié)合位點(diǎn)具體為：取芯片與濃度為1mol/l、ph值為8.5的乙醇胺溶液混合。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供的小分子芯片的構(gòu)建方法中，封閉未結(jié)合位點(diǎn)所用的乙醇胺溶液的溶劑為dmf。作為優(yōu)選，混合的溫度為25℃～30℃，混合的時(shí)間為30min～60min。作為優(yōu)選，混合的時(shí)間為30min。作為優(yōu)選，封閉未結(jié)合位點(diǎn)之后，干燥之前，清洗的洗液為乙醇和去離子水。作為優(yōu)選，清洗之后，得到小分子芯片之前，干燥為氮?dú)獯蹈伞１景l(fā)明還提供了小分子芯片在制備檢測(cè)bche蛋白或bace1蛋白產(chǎn)品中的應(yīng)用。小分子芯片中，若小分子化合物為2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯、(2s,5r,6r)-3,3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷-2-甲酸鈉鹽或4-氨基-2-羥基苯甲酸中的任意一種或兩者以上的化合物時(shí)，該小分子芯片可用來(lái)檢測(cè)bche蛋白。小分子芯片中，若小分子化合物為n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺?；野坊?甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺、三環(huán)癸胺或(4-(2-氯-4-硝基苯基)哌啶-1-基)(5-甲基-3-苯基異噁唑-4-基)酮中的任意一種或兩者以上的化合物時(shí)，該小分子芯片可用來(lái)檢測(cè)bace1蛋白。小分子芯片中，若小分子化合物包含2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯、(2s,5r,6r)-3,3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷-2-甲酸鈉鹽或4-氨基-2-羥基苯甲酸中的任意一種或兩者以上的化合物，而且包含n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺酰基乙胺基)甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺、三環(huán)癸胺或(4-(2-氯-4-硝基苯基)哌啶-1-基)(5-甲基-3-苯基異噁唑-4-基)酮中的任意一種或兩者以上的化合物時(shí)，該小分子芯片 可用來(lái)檢測(cè)bche蛋白和bace1蛋白。本發(fā)明還提供了小分子芯片非診斷目的的檢測(cè)bche蛋白或bace1蛋白的方法，包括以下步驟：取小分子芯片與待測(cè)樣品混合，孵育，清洗，得到小分子化合物孵育后產(chǎn)物和空白對(duì)照孵育后產(chǎn)物，再經(jīng)表面等離子體共振成像技術(shù)檢測(cè)，若小分子化合物孵育后產(chǎn)物和空白對(duì)照孵育后產(chǎn)物相比有顯著(p<0.05)的spr信號(hào)，表明待測(cè)樣品中含有相應(yīng)的蛋白。作為優(yōu)選，小分子化合物為2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯、(2s,5r,6r)-3,3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷-2-甲酸鈉鹽或4-氨基-2-羥基苯甲酸中的任意一種或兩者以上化合物時(shí)，相應(yīng)的蛋白為bche蛋白。作為優(yōu)選，小分子化合物為n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺酰基乙胺基)甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺、三環(huán)癸胺或(4-(2-氯-4-硝基苯基)哌啶-1-基)(5-甲基-3-苯基異噁唑-4-基)酮中任意一種或兩者以上的化合物時(shí)，相應(yīng)的蛋白為bace1蛋白。作為優(yōu)選，小分子化合物包含2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯、(2s,5r,6r)-3,3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷-2-甲酸鈉鹽或4-氨基-2-羥基苯甲酸中的任意一種或兩者以上化合物，且包含n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺?；野坊?甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺、三環(huán)癸胺或(4-(2-氯-4-硝基苯基)哌啶-1-基)(5-甲基-3-苯基異噁唑-4-基)酮中任意一種或兩者以上的化合物時(shí)，相應(yīng)的蛋白為bche蛋白和bace1蛋白。從實(shí)施例12中可知，通過(guò)小分子芯片對(duì)已知成分的樣品a～樣品f的檢測(cè)，所得檢測(cè)結(jié)果和實(shí)際情況一致，準(zhǔn)確率達(dá)到100％，由此說(shuō)明，本發(fā)明的小分子芯片可用來(lái)檢測(cè)bche蛋白或bace1蛋白，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。從實(shí)施例13中可知，相比于現(xiàn)有的elisa試劑盒，本發(fā)明提供的小分子芯片檢測(cè)性能穩(wěn)定，便于儲(chǔ)藏和運(yùn)輸。此外，本發(fā)明小分子芯片和elisa試劑盒相比，還具有成本低廉的優(yōu)點(diǎn)。作為優(yōu)選，孵育的時(shí)間為300s～600s，孵育的溫度為25℃～30℃。更優(yōu)選的，孵育的時(shí)間為300s。作為優(yōu)選，清洗的溶劑為甘氨酸、鹽酸和水的混合溶液，混合溶液的ph值為2.0。更優(yōu)選的，清洗的溶劑中甘氨酸的濃度為10mmol/l。本發(fā)明提供了一種小分子芯片，由光交聯(lián)芯片和小分子化合物組成，小分子化合物與光交聯(lián)芯片化學(xué)鍵合；其中，小分子化合物包含2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯、(2s,5r,6r)-3,3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷-2-甲酸鈉鹽或4-氨基-2-羥基苯甲酸中的任意一種或兩者以上的化合物；和/或；n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺?；野坊?甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺、三環(huán)癸胺或(4-(2-氯-4-硝基苯基)哌啶-1-基)(5-甲基-3-苯基異噁唑-4-基)酮中的任意一種或兩者以上的化合物。由實(shí)施例11可知，2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯、(2s,5r,6r)-3,3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷-2-甲酸鈉鹽或4-氨基-2-羥基苯甲酸可與bche蛋白結(jié)合，包含有以上小分子化合物的小分子芯片可用來(lái)檢測(cè)bche蛋白；n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺?；野坊?甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺、三環(huán)癸胺或(4-(2-氯-4-硝基苯基)哌啶-1-基)(5-甲基-3-苯基異噁唑-4-基)酮可與bace1蛋白結(jié)合，包含有以上小分子化合物的小分子芯片可用來(lái)檢測(cè)bace1蛋白。本發(fā)明還提供了小分子芯片的構(gòu)建方法，由實(shí)施例10可知，運(yùn)用本發(fā)明方法構(gòu)建的小分子芯片，光交聯(lián)芯片與小分子化合物之間的固定效率高，固定效果好。本發(fā)明還提供了一種利用小分子芯片檢測(cè)bche蛋白或bace1蛋白的方法及應(yīng)用，由實(shí)施例12可知，本發(fā)明的小分子芯片可用來(lái)檢測(cè)bche蛋白或bace1蛋白，檢測(cè)方法簡(jiǎn)單，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，準(zhǔn)確率達(dá)到為100％。由實(shí)施例13可知，相比于elisa試劑盒，本發(fā)明提供的小分子芯片檢測(cè)性能穩(wěn)定，便于儲(chǔ)藏和運(yùn)輸。本發(fā)明提供的小分子芯片采用與bche蛋白或bace1蛋白結(jié)合的小分子化合物來(lái)檢測(cè)bche蛋白或bace1蛋白，避免了抗體的使用，由于抗體屬于蛋白質(zhì)，易變性，生產(chǎn)成本高，小分子化合物具有性質(zhì)穩(wěn)定、成本低廉的優(yōu)點(diǎn)，因此，本發(fā)明提供的小分子芯片成本低廉，性能穩(wěn)定。附圖說(shuō)明圖1為實(shí)施例10中10mmol/l的雷帕霉素與fkbp12蛋白的spr信號(hào)圖。具體實(shí)施方式本發(fā)明提供了一種小分子芯片、其構(gòu)建方法、其應(yīng)用及其檢測(cè)方法。本 領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。本發(fā)明提供的實(shí)施例中所用到的試劑及原料均可由市場(chǎng)購(gòu)得。在本發(fā)明實(shí)施例中，原料來(lái)源具體如下：bche蛋白：生產(chǎn)廠家為sigma。bace1蛋白：生產(chǎn)廠家為sigma。bcheelisa試劑盒：生產(chǎn)廠家為ek-bioscience。bace1elisa試劑盒：生產(chǎn)廠家為ek-bioscience。其他原料及試劑均由市場(chǎng)購(gòu)得。下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：實(shí)施例1小分子芯片的構(gòu)建取小分子化合物2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯、(2s,5r,6r)-3,3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷-2-甲酸鈉鹽和4-氨基-2-羥基苯甲酸，陽(yáng)性對(duì)照雷帕霉素，將小分子化合物和陽(yáng)性對(duì)照分別溶于dmso中，濃度均為10mmol/l，純dmso作為空白對(duì)照，利用高精度自動(dòng)化點(diǎn)樣儀分別取小分子化合物及陽(yáng)性對(duì)照、空白對(duì)照2μl點(diǎn)樣于二維光交聯(lián)芯片表面，25℃(干燥，室溫)下放置1h；待芯片完全干燥后，在紫外光(波長(zhǎng)365nm，9999uj/cm2)下暴露2次，每次時(shí)間為3min，光交聯(lián)固定待測(cè)物；將芯片分別浸泡于分析純dmso、dmf、thf、dcm、mecn、etoh和去離子水中，超聲波清洗5min，每種溶劑各清洗3次，每次清洗時(shí)間為5min，以除去未固定的待測(cè)物。充分清洗完畢，氮?dú)獯蹈珊?，?5℃下浸泡于1ml乙醇胺(1m，ph＝8.5)30min，封閉未結(jié)合位點(diǎn)。用乙醇、去離子水分別清洗，氮?dú)獯蹈桑w上流通池，獲得無(wú)標(biāo)記的小分子芯片。實(shí)施例2小分子芯片的構(gòu)建取小分子化合物n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺?；野坊?甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺、三環(huán)癸胺和(4-(2-氯-4-硝基苯基)哌啶-1-基)(5-甲基-3-苯基異噁唑-4-基)酮，陽(yáng)性對(duì)照雷帕霉素，將小分子化合物和陽(yáng) 性對(duì)照分別溶于dmso中，濃度為5mmol/l，純dmso作為空白對(duì)照，利用高精度自動(dòng)化點(diǎn)樣儀分別取小分子化合物及陽(yáng)性對(duì)照、空白對(duì)照2μl點(diǎn)樣于三維光交聯(lián)芯片表面，30℃(干燥室溫)下放置1h；待芯片完全干燥后，在紫外光(波長(zhǎng)340nm，9999uj/cm2)下暴露4次，每次時(shí)間為3min，光交聯(lián)固定待測(cè)物；將芯片分別浸泡于分析純dmso、dmf、thf和去離子水中，超聲波清洗5min，每種溶劑各清洗4次，每次清洗時(shí)間為5min，以除去未固定的待測(cè)物。充分清洗完畢，氮?dú)獯蹈珊螅?5℃下浸泡于1ml乙醇胺(1m，ph＝8.5)60min，封閉未結(jié)合位點(diǎn)。用乙醇、去離子水分別清洗，氮?dú)獯蹈?，蓋上流通池，獲得無(wú)標(biāo)記的小分子芯片。實(shí)施例3小分子芯片的構(gòu)建取小分子化合物2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯、(2s,5r,6r)-3,3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷-2-甲酸鈉鹽、4-氨基-2-羥基苯甲酸、n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺?；野坊?甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺、三環(huán)癸胺和(4-(2-氯-4-硝基苯基)哌啶-1-基)(5-甲基-3-苯基異噁唑-4-基)酮，陽(yáng)性對(duì)照雷帕霉素，將小分子化合物和陽(yáng)性對(duì)照分別溶于dmso中，濃度為10mmol/l，純dmso作為空白對(duì)照，利用高精度自動(dòng)化點(diǎn)樣儀分別取小分子化合物及陽(yáng)性對(duì)照、空白對(duì)照1μl點(diǎn)樣于二維光交聯(lián)芯片表面，25℃(干燥室溫)下放置2h；待芯片完全干燥后，在紫外光(波長(zhǎng)365nm，0～9999uj/cm2)下暴露4次，每次時(shí)間為1min，光交聯(lián)固定待測(cè)物；將芯片分別浸泡于分析純的dmso、dmf、thf、dcm、mecn和去離子水中，超聲波清洗5min，每種溶劑各清洗3次，每次清洗時(shí)間為10min，以除去未固定的待測(cè)物。充分清洗完畢，氮?dú)獯蹈珊?，?0℃下浸泡于1ml乙醇胺(1m，ph＝8.5)45min，封閉未結(jié)合位點(diǎn)。用乙醇、去離子水分別清洗，氮?dú)獯蹈?，蓋上流通池，獲得無(wú)標(biāo)記的小分子芯片。實(shí)施例4小分子芯片的構(gòu)建取小分子化合物2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺?；野坊?甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺，陽(yáng)性對(duì)照雷帕霉素，將小分子化合物和陽(yáng)性對(duì)照分別溶于dmso中，濃度為10mmol/l，純dmso作為空白對(duì)照，利用高精度自動(dòng)化點(diǎn)樣儀分別取小分子化合物及陽(yáng)性對(duì)照、空白對(duì)照2μl點(diǎn)樣于三維光交聯(lián)芯片表面，25℃(干 燥室溫)下放置1h；待芯片完全干燥后，在紫外光(波長(zhǎng)365nm，9999uj/cm2)下暴露4次，每次時(shí)間為3min，光交聯(lián)固定待測(cè)物；將芯片分別浸泡于分析純(dmso、dmf、thf、dcm和去離子水中，超聲波清洗5min，每種溶劑各清洗3次，每次清洗時(shí)間為5min，以除去未固定的待測(cè)物。充分清洗完畢，氮?dú)獯蹈珊?，?5℃下浸泡于1ml乙醇胺(1m，ph＝8.5)30min，封閉未結(jié)合位點(diǎn)。用乙醇、去離子水分別清洗，氮?dú)獯蹈?，蓋上流通池，獲得無(wú)標(biāo)記的小分子芯片。實(shí)施例5小分子芯片的構(gòu)建取小分子化合物2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯、三環(huán)癸胺和(4-(2-氯-4-硝基苯基)哌啶-1-基)(5-甲基-3-苯基異噁唑-4-基)酮，陽(yáng)性對(duì)照雷帕霉素，將小分子化合物和陽(yáng)性對(duì)照分別溶于dmso中，濃度為10mmol/l，純dmso作為空白對(duì)照，利用高精度自動(dòng)化點(diǎn)樣儀分別取小分子化合物及陽(yáng)性對(duì)照、空白對(duì)照2μl點(diǎn)樣于二維光交聯(lián)芯片表面，25℃(干燥室溫)下放置1h；待芯片完全干燥后，在紫外光(波長(zhǎng)365nm，9999uj/cm2)下暴露3次，每次時(shí)間為3min，光交聯(lián)固定待測(cè)物；將芯片分別浸泡于分析純的dmso和去離子水中，超聲波清洗5min，每種溶劑各清洗3次，每次清洗時(shí)間為5min，以除去未固定的待測(cè)物。充分清洗完畢，氮?dú)獯蹈珊?，?5℃下浸泡于1ml乙醇胺(1m，ph＝8.5)30min，封閉未結(jié)合位點(diǎn)。用乙醇、去離子水分別清洗，氮?dú)獯蹈桑w上流通池，獲得無(wú)標(biāo)記的小分子芯片。實(shí)施例6小分子芯片的構(gòu)建取小分子化合物(2s,5r,6r)-3,3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷-2-甲酸鈉鹽、4-氨基-2-羥基苯甲酸，陽(yáng)性對(duì)照雷帕霉素，將小分子化合物和陽(yáng)性對(duì)照分別溶于dmso中，濃度為10mmol/l，純dmso作為空白對(duì)照，利用高精度自動(dòng)化點(diǎn)樣儀分別取小分子化合物及陽(yáng)性對(duì)照、空白對(duì)照2μl點(diǎn)樣于三維光交聯(lián)芯片表面，25℃(干燥室溫)下放置1h；待芯片完全干燥后，在紫外光(波長(zhǎng)365nm，9999uj/cm2)下暴露4次，每次時(shí)間為3min，光交聯(lián)固定待測(cè)物；將芯片分別浸泡于分析純dmf和去離子水中，超聲波清洗5min，每種溶劑各清洗3次，每次清洗時(shí)間為5min，以除去未固定的待測(cè)物。充分清洗完畢，氮?dú)獯蹈珊?，?5℃下浸泡于1ml乙醇胺(1m，ph＝8.5)30min，封閉未結(jié)合位點(diǎn)。用乙醇、去離子水分別清洗，氮?dú)獯蹈?，蓋上流通池，獲得無(wú)標(biāo)記的小分子芯片。實(shí)施例7小分子芯片的構(gòu)建取小分子化合物n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺酰基乙胺基)甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺，陽(yáng)性對(duì)照雷帕霉素，將小分子化合物和陽(yáng)性對(duì)照分別溶于dmso中，濃度為10mmol/l，純dmso作為空白對(duì)照，利用高精度自動(dòng)化點(diǎn)樣儀分別取小分子化合物及陽(yáng)性對(duì)照、空白對(duì)照2μl點(diǎn)樣于二維光交聯(lián)芯片表面，25℃(干燥室溫)下放置1h；待芯片完全干燥后，在紫外光(波長(zhǎng)365nm，9999uj/cm2)下暴露2次，每次時(shí)間為3min，光交聯(lián)固定待測(cè)物；將芯片分別浸泡于分析純的mecn、etoh和去離子水中，超聲波清洗5min，每種溶劑各清洗3次，每次清洗時(shí)間為5min，以除去未固定的待測(cè)物。充分清洗完畢，氮?dú)獯蹈珊?，?5℃下浸泡于1ml乙醇胺(1m，ph＝8.5)30min，封閉未結(jié)合位點(diǎn)。用乙醇、去離子水分別清洗，氮?dú)獯蹈?，蓋上流通池，獲得無(wú)標(biāo)記的小分子芯片。實(shí)施例8小分子芯片的構(gòu)建取小分子化合物4-氨基-2-羥基苯甲酸，雷帕霉素作為陽(yáng)性對(duì)照，將小分子化合物和陽(yáng)性對(duì)照分別溶于dmso中，濃度為10mmol/l，純dmso作為空白對(duì)照，bsa作為陰性對(duì)照，利用高精度自動(dòng)化點(diǎn)樣儀分別取小分子化合物及陽(yáng)性對(duì)照、空白對(duì)照、陰性對(duì)照2μl點(diǎn)樣于二維光交聯(lián)芯片表面，25℃(干燥室溫)下放置1h；待芯片完全干燥后，在紫外光(波長(zhǎng)365nm，0～9999uj/cm2。)下暴露4次，每次時(shí)間為3min，光交聯(lián)固定待測(cè)物；將芯片分別浸泡于分析純的etoh和去離子水中，超聲波清洗5min，每種溶劑各清洗4次，每次清洗時(shí)間為5min，以除去未固定的待測(cè)物。充分清洗完畢，氮?dú)獯蹈珊?，?5℃下浸泡于1ml乙醇胺(1m，ph＝8.5)30min，封閉未結(jié)合位點(diǎn)。用乙醇、去離子水分別清洗，氮?dú)獯蹈?，蓋上流通池，獲得無(wú)標(biāo)記的小分子芯片。實(shí)施例9小分子芯片的構(gòu)建取小分子化合物2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯和4-氨基-2-羥基苯甲酸，純dmso作為空白對(duì)照，利用高精度自動(dòng)化點(diǎn)樣儀分別取小分子化合物和空白對(duì)照2μl點(diǎn)樣于二維光交聯(lián)芯片表面，25℃(干燥室溫)下放置1h；待芯片完全干燥后，在紫外光(波長(zhǎng)365nm，9999uj/cm2)下暴露2次，每次時(shí)間為3min，光交聯(lián)固定待測(cè)物；將芯片分別浸泡于分析純dmso、dmf、thf、dcm、mecn、etoh和去離子水中，超聲波清洗5min，每種 溶劑各清洗3次，每次清洗時(shí)間為5min，以除去未固定的待測(cè)物。充分清洗完畢，氮?dú)獯蹈珊螅?5℃下浸泡于1ml乙醇胺(1m，ph＝8.5)30min，封閉未結(jié)合位點(diǎn)。用乙醇、去離子水分別清洗，氮?dú)獯蹈?，蓋上流通池，獲得無(wú)標(biāo)記的小分子芯片。實(shí)施例10小分子芯片固定效率的檢測(cè)實(shí)施例1制備的小分子芯片固定效率的檢測(cè)：取實(shí)施例1制備的小分子芯片，按照spri儀器的操作手冊(cè)安裝小分子芯片，以pbst緩沖溶液(ph＝7.4,0.05％tween)作為流動(dòng)相，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。之后設(shè)定進(jìn)樣方法，通入靶標(biāo)蛋白fkbp12(100nm)300s，之后使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。保存完整的數(shù)據(jù)，然后使用數(shù)據(jù)分析軟件離線處理所得數(shù)據(jù)，扣除空白背景后，即得雷帕霉素與靶標(biāo)蛋白相互作用所產(chǎn)生的spr信號(hào)，檢測(cè)結(jié)果如圖1所示，其包括了6個(gè)不同監(jiān)測(cè)點(diǎn)(6個(gè)重復(fù))所得的曲線(即曲線1-6)、1個(gè)控制點(diǎn)(即dmso空白對(duì)照，即曲線7)，其中6個(gè)不同檢測(cè)點(diǎn)所得曲線基本吻合、無(wú)顯著性差異，說(shuō)明本發(fā)明的檢測(cè)方法穩(wěn)定性好、重現(xiàn)性高；且有明顯的spr信號(hào)值，與空白對(duì)照spr信號(hào)相比較，差異顯著(p＜0.05)。由圖1可知，雷帕霉素與fkbp12蛋白有顯著(p<0.05)的spr信號(hào)，這說(shuō)明雷帕霉素已被固定在光交聯(lián)芯片上，由此還可知，用同樣方法固定的其余小分子化合物也固定在了光交聯(lián)芯片上，因此，采用本發(fā)明實(shí)施例1的方法構(gòu)建的小分子芯片，光交聯(lián)芯片與小分子化合物之間的固定效率高，固定效果好。實(shí)施例2～實(shí)施例9制備的小分子芯片的固定效率的檢測(cè)：取實(shí)施例2～實(shí)施例9制備的小分子芯片均進(jìn)行固定效率的檢測(cè)，檢測(cè)方法和上述實(shí)施例1小分子芯片的檢測(cè)方法相同，所得檢測(cè)結(jié)果與上述實(shí)施例1小分子芯片的檢測(cè)結(jié)果相似，即本發(fā)明實(shí)施例2～實(shí)施例9提供方法構(gòu)建的小分子芯片，光交聯(lián)芯片與小分子化合物之間的固定效率高，固定效果好。實(shí)施例11小分子芯片與bace1蛋白和bche蛋白結(jié)合試驗(yàn)樣品制備：樣品?。喝ace1蛋白與生理鹽水混合，得到濃度為37nm的bace1蛋白溶液。樣品ii：取bche蛋白與生理鹽水混合，制得濃度為21nm的bche蛋 白溶液。樣品iii：生理鹽水。試驗(yàn)組1：取實(shí)施例3制備的小分子芯片，按照spri儀器的操作手冊(cè)安裝小分子芯片，以pbst緩沖溶液(ph＝7.4,0.05％tween20)作為流動(dòng)相，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。待基線穩(wěn)定后，首先通入蛋白fkbp12(100nm)300s后，實(shí)時(shí)在線觀察，陽(yáng)性對(duì)照雷帕霉素相比于空白對(duì)照有明顯的相互作用。然后，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液將該小分子芯片重生數(shù)次，待基線穩(wěn)定后，樣品(2μl/s,300s)，重生液(3μl/s300s)，緩沖液(2μl/s,300s)，在溫度為25℃下，通入制得的樣品ⅰ300s，之后使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。保存完整的數(shù)據(jù)，然后使用數(shù)據(jù)分析軟件離線處理所得數(shù)據(jù)，扣除空白背景后，觀察spr信號(hào)，計(jì)算kd值。試驗(yàn)組2：與試驗(yàn)組1相比，通入制得的樣品ii代替樣品ⅰ，其余制備方法和采用的小分子芯片與試驗(yàn)組1完全相同。試驗(yàn)組3：與試驗(yàn)組1相比，通入制得的樣品iii代替樣品ⅰ，其余制備方法和采用的小分子芯片與試驗(yàn)組1完全相同。所得試驗(yàn)結(jié)果如下表所示：表1小分子化合物與所測(cè)物質(zhì)孵育后相對(duì)于空白對(duì)照孵育后的spr信號(hào)顯著(p<0.05)表2小分子化合物與所測(cè)試物質(zhì)孵育后的kd值由以上數(shù)據(jù)可知，小分子化合物n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺酰基乙胺基)甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺、三環(huán)癸胺、(4-(2-氯-4-硝基苯基)哌啶-1-基)(5-甲基-3-苯基異噁唑-4-基)酮和樣品ⅰ孵育后，與空白對(duì)照孵育后相比具有顯著(p<0.05)的spr信號(hào)，kd值分別為24nm、7.9nm、11nm，樣品iii和上述小分子化合物孵育后沒(méi)有spr信號(hào)。由于樣品ⅰ和樣品iii相比 增加了bace1蛋白，上述小分子化合物和樣品ⅰ孵育后相對(duì)于空白對(duì)照孵育后有顯著spr信號(hào)，與樣品iii孵育后沒(méi)有spr信號(hào)，由此可知，小分子化合物n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺?；野坊?甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺、三環(huán)癸胺、(4-(2-氯-4-硝基苯基)哌啶-1-基)(5-甲基-3-苯基異噁唑-4-基)酮可與bace1蛋白結(jié)合。以上數(shù)據(jù)還顯示，小分子化合物2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯、(2s,5r,6r)-3,3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷-2-甲酸鈉鹽、4-氨基-2-羥基苯甲酸與樣品ii孵育后，與空白對(duì)照孵育后相比有顯著(p<0.05)的spr信號(hào)，kd值分別為5.1nm、0.1nm、0.6nm、5.0nm，樣品iii和上述小分子化合物孵育后沒(méi)有spr信號(hào)。由于樣品ii相對(duì)于樣品iii增加了bche蛋白，上述小分子化合物和樣品ii孵育后相對(duì)于空白對(duì)照孵育后有顯著spr信號(hào)，與樣品iii孵育后沒(méi)有spr信號(hào)，由此可知，小分子化合物2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯、(2s,5r,6r)-3,3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷-2-甲酸鈉鹽、4-氨基-2-羥基苯甲酸可以與bche蛋白結(jié)合。實(shí)施例12小分子芯片準(zhǔn)確性的檢測(cè)取樣品a～樣品f，已知樣品a～樣品f中的bche蛋白和bace1蛋白情況如下：表3已知樣品a～樣品f中的bche蛋白和bace1蛋白情況蛋白樣品a樣品b樣品c樣品d樣品e樣品fbche蛋白++--+-bace1蛋白-++--+“+”表示含有；“-”表示不含。取待測(cè)樣品a～待測(cè)樣品f，分別采用實(shí)施例3制備的小分子芯片進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)方法如下：試驗(yàn)組1：取實(shí)施例3制備的小分子芯片，按照spri儀器的操作手冊(cè)安裝小分子芯片，以pbst緩沖溶液(ph＝7.4,0.05％tween20)作為流動(dòng)相，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。待基線穩(wěn)定后，首先通入蛋白fkbp12(100nm)300s后，實(shí)時(shí)在線觀察，陽(yáng)性對(duì)照雷帕霉素相比于空白對(duì)照有明顯的相互作用。然后，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液將該小分子芯片重生數(shù)次，待基線穩(wěn)定后，樣品(2μl/s,300s)，重生液(3μl/s300s)，緩沖液(2μl/s,300s)，在溫度為25℃下，通入上述樣品a300s，之后使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。保存完整的數(shù)據(jù)，然后使用數(shù)據(jù)分析軟件離線處理所得數(shù)據(jù)，扣除空白背景后，觀察spr信號(hào)，計(jì)算kd值。試驗(yàn)組2：與試驗(yàn)組1相比，通入上述樣品b代替樣品a，其余制備方法和采用的小分子芯片與試驗(yàn)組1完全相同。試驗(yàn)組3：與試驗(yàn)組1相比，通入上述樣品c代替樣品a，其余制備方法和采用的小分子芯片與試驗(yàn)組1完全相同。試驗(yàn)組4：與試驗(yàn)組1相比，通入上述樣品d代替樣品a，其余制備方法和采用的小分子芯片與試驗(yàn)組1完全相同。試驗(yàn)組5：與試驗(yàn)組1相比，通入上述樣品e代替樣品a，其余制備方法和采用的小分子芯片與試驗(yàn)組1完全相同。試驗(yàn)組6：與試驗(yàn)組1相比，通入上述樣品f代替樣品a，其余制備方法和采用的小分子芯片與試驗(yàn)組1完全相同。所得試驗(yàn)結(jié)果如下表所示：表4小分子化合物與所測(cè)物質(zhì)孵育后相比于空白對(duì)照孵育后的spr信號(hào)顯著(p<0.05)表5小分子化合物與所測(cè)試物質(zhì)孵育后的kd值由以上數(shù)據(jù)可知，樣品b、c、f與小分子化合物n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺?；野坊?甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺、三環(huán)癸胺、(4-(2-氯-4-硝基苯基)哌啶-1-基)(5-甲基-3-苯基異噁唑-4-基)酮孵育后，與空白對(duì)照孵育后相比有顯著(p<0.05)的spr信號(hào)，kd值分別為24nm、7.9nm、11nm，由此可知，樣品b、c、f中含有可與上述小分子化合物結(jié)合的bace1蛋白，與樣品中含有該蛋白的實(shí)際情況一致；樣品a、d、e與上述小分子化合物孵育后，無(wú)spr信號(hào)，表明樣品a、d、e中不含bace1蛋白，與樣品不含有該蛋白的實(shí)際情況一致。由以上數(shù)據(jù)還可知，樣品a、b、e與小分子2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯、(2s,5r,6r)-3,3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷-2-甲酸鈉鹽和4-氨基-2-羥基苯甲酸孵育后，與空白對(duì)照孵育后相比有顯著(p<0.05)的spr信號(hào)，kd值分別為5.1nm、0.1nm、0.6nm、5.0nm，由此可知，樣品a、b、e中含有可與上述小分子結(jié)合的bche蛋白，與樣品中含有該蛋白的實(shí)際情況一致；樣品c、d、f與上述小分子化合物孵育后，無(wú)spr信號(hào)，表明樣品c、d、f中不含bche蛋白，與樣品中不含有該蛋白的情況一致。綜合上述試驗(yàn)結(jié)果，本發(fā)明提供的小分子芯片可以用來(lái)檢測(cè)bche蛋白或bace1蛋白，檢測(cè)準(zhǔn)確率為100％。將本發(fā)明實(shí)施例1～實(shí)施例2以及實(shí)施例4～實(shí)施例8的小分子芯片均用同樣的方法檢測(cè)樣品a～樣品f的bche蛋白或bace1蛋白，檢測(cè)結(jié)果和上述檢測(cè)結(jié)果相同，檢測(cè)準(zhǔn)確率為100％。實(shí)施例13小分子芯片的穩(wěn)定性檢測(cè)試驗(yàn)組：取實(shí)施例1～實(shí)施例9制備的小分子芯片180個(gè)，分為3組，3組中小分子芯片數(shù)量和種類完全相同，每組設(shè)置有60個(gè)小分子芯片，其中實(shí)施例1制備的小分子芯片8個(gè)，實(shí)施例2中制備的小分子芯片8個(gè)，實(shí)施例3制備的小分子芯片8個(gè)，實(shí)施例4～實(shí)施例9制備的小分子芯片均為6個(gè)。對(duì)照組：取ek-bioscience公司生產(chǎn)的bcheelisa試劑盒和bace1elisa試劑盒180個(gè)，分為3組，3組中試劑盒的種類和數(shù)量完全相同，每組設(shè)置30個(gè)bcheelisa試劑盒和30個(gè)bace1elisa試劑盒。所檢測(cè)樣品：樣品b，已知樣品b中含有bche蛋白，含有bace1蛋白。將上述試驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行如下檢測(cè)：檢測(cè)1：取1組試驗(yàn)組的小分子芯片和1組對(duì)照組的elisa試劑盒，每 個(gè)小分子芯片和試劑盒均在生產(chǎn)當(dāng)天進(jìn)行樣品b的檢測(cè)。檢測(cè)2：取1組試驗(yàn)組的小分子芯片和1組對(duì)照組的elisa試劑盒，每個(gè)小分子芯片和試劑盒均在生產(chǎn)后，常溫下放置30天，30天后進(jìn)行樣品b的檢測(cè)。檢測(cè)3：取1組試驗(yàn)組的小分子芯片和1組對(duì)照組的elisa試劑盒，每個(gè)小分子芯片和試劑盒均在生產(chǎn)后，60℃下放置60天，60天后進(jìn)行樣品b的檢測(cè)。統(tǒng)計(jì)檢測(cè)結(jié)果，并計(jì)算檢測(cè)的準(zhǔn)確率，如果檢測(cè)結(jié)果和實(shí)際情況一致，說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確；如果檢測(cè)結(jié)果和實(shí)際情況相反或檢測(cè)失敗，說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。所得檢測(cè)結(jié)果及準(zhǔn)確率數(shù)據(jù)計(jì)算如下表所示：表6檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)由以上結(jié)果可知，試驗(yàn)組的小分子芯片在檢測(cè)1～檢測(cè)3中，隨著小分子 芯片放置時(shí)間的增長(zhǎng)和溫度的升高，小分子芯片檢測(cè)待測(cè)樣品的準(zhǔn)確率未變化，均為100％，由此說(shuō)明，小分子芯片檢測(cè)的準(zhǔn)確率受周圍環(huán)境的影響較小，檢測(cè)性能穩(wěn)定。此表還可看出，對(duì)照組采用elisa試劑盒來(lái)檢測(cè)樣品，在檢測(cè)1～檢測(cè)3中，隨著放置時(shí)間的增長(zhǎng)和溫度的升高，elisa試劑盒檢測(cè)的準(zhǔn)確率從100％下降為30％，由此說(shuō)明，elisa試劑盒檢測(cè)的準(zhǔn)確率受周圍環(huán)境影響較大，檢測(cè)性能不穩(wěn)定。綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，相比于elisa試劑盒，本發(fā)明提供的小分子芯片檢測(cè)性能穩(wěn)定，便于儲(chǔ)藏和運(yùn)輸。實(shí)施例14小分子芯片用于bche蛋白和bace1蛋白的檢測(cè)待測(cè)樣品1的制備：從血型、大小相同的成年大鼠的左心房中抽取血液0.1ml，用pbst稀釋10倍至1ml，向其中添加bche蛋白，使bche的最終濃度為1μg/ml，即得待測(cè)樣品。該生物樣品中含有bche蛋白，來(lái)源于sigma-aldrich中國(guó)，大鼠來(lái)源于廣州生物醫(yī)藥與健康研究院。取實(shí)施例1制備的小分子芯片，按照spri儀器的操作手冊(cè)安裝小分子芯片，以pbst緩沖溶液(ph＝7.4,0.05％tween20)作為流動(dòng)相，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。樣品(2μl/s,300s)，重生液(3μl/s300s)，緩沖液(2μl/s,300s)，在溫度為25℃下，通入上述待測(cè)樣品1300s，之后使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。保存完整的數(shù)據(jù)，然后使用數(shù)據(jù)分析軟件離線處理所得數(shù)據(jù)，扣除空白背景后，觀察spr信號(hào)，計(jì)算kd值。所得試驗(yàn)結(jié)果如下：表7小分子化合物與所測(cè)物質(zhì)孵育后相對(duì)于空白對(duì)照孵育后的spr信號(hào)顯著(p<0.05)由以上數(shù)據(jù)可知：小分子化合物與待測(cè)樣品1孵育后，與空白對(duì)照孵育后相比有顯著(p<0.05)spr信號(hào)和kd值，表明待測(cè)樣品1中含有bche蛋白。實(shí)施例15小分子芯片用于bche蛋白和bace1蛋白的檢測(cè)待測(cè)樣品2的制備：從血型、大小相同的成年大鼠的左心房中抽取血液0.1ml，用pbst稀釋10倍至1ml，向其中添加bche和bace1蛋白，使bche的最終濃度為1μg/ml，bace1的最終濃度為1μg/ml即得待測(cè)樣品。該生物樣品中含有bche蛋白和bace1蛋白，均來(lái)源于sigma-aldrich中國(guó)，大鼠來(lái)源于廣州生物醫(yī)藥與健康研究院。取實(shí)施例6制備的小分子芯片，按照spri儀器的操作手冊(cè)安裝小分子芯片，以pbst緩沖溶液(ph＝7.4,0.05％tween20)作為流動(dòng)相，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。樣品(2μl/s,300s)，重生液(3μl/s300s)，緩沖液(2μl/s,300s)，在25℃下通入上述待測(cè)樣品2600s，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。保存完整的數(shù)據(jù)，然后使用數(shù)據(jù)分析軟件離線處理所得數(shù)據(jù)，扣除空白背景后，觀察spr信號(hào)，計(jì)算kd值。試驗(yàn)結(jié)果如下：表8小分子化合物與所測(cè)物質(zhì)孵育后相對(duì)于空白對(duì)照孵育后的spr信號(hào)和kd值由以上數(shù)據(jù)可知：小分子化合物與待測(cè)樣品2孵育后，與空白對(duì)照孵育后相比有顯著(p<0.05)的spr信號(hào)和kd值，表明待測(cè)樣品2中含有bche蛋白。實(shí)施例16小分子芯片用于bche蛋白和bace1蛋白的檢測(cè)待測(cè)樣品3的制備：從血型、大小相同的成年大鼠的左心房中抽取血液0.1ml，用pbst稀釋10倍至1ml，向其中添加bace1蛋白，使bace1的最終濃度為1μg/ml即得待測(cè)樣品。該生物樣品中含有bace1蛋白但不含bche蛋白，bace1蛋白來(lái)源于sigma-aldrich中國(guó)，大鼠來(lái)源于廣州生物醫(yī)藥與健康研究院。取實(shí)施例8制備的小分子芯片，按照spri儀器的操作手冊(cè)安裝小分子芯片，以pbst緩沖溶液(ph＝7.4,0.05％tween20)作為流動(dòng)相，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。待基線穩(wěn)定后，首先通入蛋白fkbp12(100nm)300s后，實(shí)時(shí)在線觀察，陽(yáng)性對(duì)照雷帕霉素相比于空白對(duì)照有明顯的相互作用。然后，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液將該小分子芯片重生數(shù)次，待基線穩(wěn)定后，樣品(2μl/s,300s)，重生液(3μl/s300s)，緩沖液(2μl/s,300s)，在30℃下通入上述待測(cè)樣品3300s，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。保存完整的數(shù)據(jù)，然后使用數(shù)據(jù)分析軟件離線處理所得數(shù)據(jù)，扣除空白背景后，觀察spr信號(hào)，計(jì)算kd值。試驗(yàn)結(jié)果如下：表9小分子化合物與所測(cè)物質(zhì)孵育后相對(duì)于空白對(duì)照孵育后的spr信號(hào)和kd值由以上數(shù)據(jù)可知：小分子化合物與待測(cè)樣品3孵育后不具有spr信號(hào)，陰性對(duì)照孵育后未顯示spr信號(hào)，表明待測(cè)樣品3中不含bche蛋白。實(shí)施例17小分子芯片用于bche蛋白和bace1蛋白的檢測(cè)待測(cè)樣品4的制備：從血型、大小相同的成年大鼠的左心房中抽取血液0.1ml，用pbst稀釋10倍至1ml，向其中添加bace1蛋白，使bace1的最終濃度為2ug/ml即得待測(cè)樣品。該生物樣品中含有bace1蛋白但不含bche蛋白，bace1蛋白來(lái)源于sigma-aldrich中國(guó)，大鼠來(lái)源于廣州生物醫(yī)藥與健康研究院。取實(shí)施例9制備的小分子芯片，按照spri儀器的操作手冊(cè)安裝小分子芯片，以pbst緩沖溶液(ph＝7.4,0.05％tween20)作為流動(dòng)相，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。樣品(2μl/s,300s)，重生液(3μl/s300s)，緩沖液(2μl/s,300s)，在25℃下通入上述待測(cè)樣品4300s，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。保存完整的數(shù)據(jù)，然后使用數(shù)據(jù)分析軟件離線處理所得數(shù)據(jù)，扣除空白背景后，觀察spr信號(hào)，計(jì)算kd值。試驗(yàn)結(jié)果如下：表10小分子化合物與所測(cè)物質(zhì)孵育后相對(duì)于空白對(duì)照孵育后的spr信號(hào)和kd值由以上數(shù)據(jù)可知：小分子化合物與待測(cè)樣品4孵育后不具有spr信號(hào)，表明待測(cè)樣品4中不含bche蛋白。實(shí)施例18小分子芯片用于bche蛋白和bace1蛋白的檢測(cè)待測(cè)樣品5的制備：從血型、大小相同的成年大鼠的左心房中抽取血液0.1ml，用pbst稀釋10倍至1ml，向其中添加bace1蛋白，使bace1的最終濃度為1μg/ml，即得待測(cè)樣品。該生物樣品中含有bace1蛋白，來(lái)源于sigma-aldrich中國(guó)，大鼠來(lái)源于廣州生物醫(yī)藥與健康研究院。取實(shí)施例2制備的小分子芯片，按照spri儀器的操作手冊(cè)安裝小分子芯片，以pbst緩沖溶液(ph＝7.4,0.05％tween20)作為流動(dòng)相，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。待基線穩(wěn)定后，首先通入蛋白fkbp12(100nm)300s后，實(shí)時(shí)在線觀察，陽(yáng)性對(duì)照雷帕霉素相比于空白對(duì)照孵育后有明顯的相互作用。然后，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液將該小分子芯片重生數(shù)次，待基線穩(wěn)定后，樣品(2μl/s,300s)，重生液(3μl/s300s)，緩沖液(2μl/s,300s)，在25℃下通入上述待測(cè)樣品5300s，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。保存完整的數(shù)據(jù)，然后使用數(shù)據(jù)分析軟件離線處理所得數(shù)據(jù)，扣除空白背景后，觀察spr信號(hào)，計(jì)算kd值。試驗(yàn)結(jié)果如下：表11小分子化合物與所測(cè)物質(zhì)孵育后相對(duì)于空白對(duì)照孵育后的spr信號(hào)由以上數(shù)據(jù)可知：小分子化合物與待測(cè)樣品5孵育后，與空白對(duì)照孵育后相比有顯著(p<0.05)spr信號(hào)和kd值，表明待測(cè)樣品5中含有bace1蛋白。實(shí)施例19小分子芯片用于bche蛋白和bace1蛋白的檢測(cè)待測(cè)樣品6的制備：從血型、大小相同的成年大鼠的左心房中抽取血液0.1ml，用pbst稀釋10倍至1ml，向其中添加bche蛋白，使bche的最終濃度為2μg/ml，即得待測(cè)樣品。該生物樣品中含有bche蛋白，不含bace1蛋白，bche蛋白來(lái)源于sigma-aldrich中國(guó)，大鼠來(lái)源于廣州生物醫(yī)藥與健康研究院。取實(shí)施例7制備的小分子芯片，按照spri儀器的操作手冊(cè)安裝小分子芯片，以pbst緩沖溶液(ph＝7.4,0.05％tween20)作為流動(dòng)相，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。樣品(2μl/s,300s)，重生液(3μl/s300s)，緩沖液(2μl/s,300s)，在25℃下通入上述待測(cè)樣品6300s，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。保存完整的數(shù)據(jù)，然后使用數(shù)據(jù)分析軟件離線處理所得數(shù)據(jù)，扣除空白背景后，觀察spr信號(hào)，計(jì)算kd值。試驗(yàn)結(jié)果如下：表12小分子化合物與所測(cè)物質(zhì)孵育后相對(duì)于空白對(duì)照孵育后的spr信號(hào)和kd值由以上數(shù)據(jù)可知：小分子化合物與待測(cè)樣品6孵育后不具有spr信號(hào)，表明待測(cè)樣品6中不含bace1蛋白。實(shí)施例20小分子芯片用于bche蛋白和bace1蛋白的檢測(cè)待測(cè)樣品3的制備：從血型、大小相同的成年大鼠的左心房中抽取血液0.1ml，用pbst稀釋10倍至1ml，向其中添加bace1蛋白，使bace1的最終濃度為1μg/ml即得待測(cè)樣品。該生物樣品中含有bace1蛋白但不含bche蛋白，bace1蛋白來(lái)源于sigma-aldrich中國(guó)，大鼠來(lái)源于廣州生物醫(yī)藥與健康研究院。制得的待測(cè)樣品3和實(shí)施例16中的待測(cè)樣品3相同。取實(shí)施例3制備的小分子芯片，按照spri儀器的操作手冊(cè)安裝小分子芯片，以pbst緩沖溶液(ph＝7.4,0.05％tween20)作為流動(dòng)相，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。待基線穩(wěn)定后，首先通入蛋白fkbp12(100nm)300s后，實(shí)時(shí)在線觀察，陽(yáng)性對(duì)照雷帕霉素相比于空白對(duì)照孵育后有明顯的相互作用。然后，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液將該小分子芯片重生數(shù)次，待基線穩(wěn)定后，樣品(2μl/s,300s)，重生液(3μl/s300s)，緩沖液(2μl/s,300s)，在25℃下通入待測(cè)樣品3300s，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。保存完整的數(shù)據(jù)，然后使用數(shù)據(jù)分析軟件離線處理所得數(shù)據(jù)，扣除空白背景后，觀察spr信號(hào)，計(jì)算kd值。所得試驗(yàn)結(jié)果如下：表13小分子化合物與所測(cè)物質(zhì)孵育后相對(duì)于空白對(duì)照孵育后的spr信號(hào)由以上試驗(yàn)結(jié)果可知，小分子化合物n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺酰基乙胺基)甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺、三環(huán)癸胺、(4-(2-氯-4-硝基苯基)哌啶-1-基)(5-甲基-3-苯基異噁唑-4-基)酮與待測(cè)樣品3孵育后，與空白對(duì)照孵育后相比有顯著(p<0.05)的spr信號(hào)和kd值，說(shuō)明待測(cè)樣品3中含有bace1蛋白。以上數(shù)據(jù)還顯示，小分子化合物2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯、(2s,5r,6r)-3,3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚烷-2-甲酸鈉鹽、4-氨基-2-羥基苯甲酸與待測(cè)樣品3孵育后，無(wú)spr信號(hào)，說(shuō)明待測(cè)樣品3中不含bche蛋白。綜合上述試驗(yàn)結(jié)果，待測(cè)樣品3中含有bace1蛋白，不含bche蛋白。實(shí)施例21小分子芯片用于bche蛋白和bace1蛋白的檢測(cè)待測(cè)樣品7的制備：從健康、血型、大小相同的成年大鼠的左心房中抽取血液0.1ml，用pbst稀釋10倍至1ml。該生物樣品中既不含bace1蛋白也不含bche蛋白，大鼠來(lái)源于廣州生物醫(yī)藥與健康研究院。取實(shí)施例4制備的小分子芯片，按照spri儀器的操作手冊(cè)安裝小分子芯片，以pbst緩沖溶液(ph＝7.4,0.05％tween20)作為流動(dòng)相，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。樣品(2μl/s,300s)，重生液(3μl/s300s)，緩沖液(2μl/s,300s)，在25℃下通入上述待測(cè)樣品7300s，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。保存完整的數(shù)據(jù)，然后使用數(shù)據(jù)分析軟件離線處理所得數(shù)據(jù)，扣除空白背景后，觀察spr信號(hào)，計(jì)算kd值。試驗(yàn)結(jié)果如下：表14小分子化合物與所測(cè)物質(zhì)孵育后相對(duì)于空白對(duì)照孵育后的spr信號(hào)和kd值由以上數(shù)據(jù)可知：2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽與待測(cè)樣品7孵育后不具有spr信號(hào)表明待測(cè)樣品7中不含bche蛋白。n-(3-氯-4-(3-氟苯甲氧基))苯基-6-(5-((2-甲磺酰基乙胺基)甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺與待測(cè)樣品7孵育后不具有spr信號(hào)，表明待測(cè)樣品7中不含bace1蛋白。綜合上述試驗(yàn)結(jié)果，待測(cè)樣品7中不含bace1蛋白，不含bche蛋白。實(shí)施例22小分子芯片用于bche蛋白和bace1蛋白的檢測(cè)待測(cè)樣品8的制備：從血型、大小相同的成年大鼠的左心房中抽取血液0.1ml，用pbst稀釋10倍至1ml，向其中添加bche和bace1蛋白，使bche的最終濃度為1ug/ml，bace1的最終濃度為2ug/ml即得待測(cè)樣品。該生物樣品中含有bche蛋白和bace1蛋白，均來(lái)源于sigma-aldrich中國(guó)，大鼠來(lái)源于廣州生物醫(yī)藥與健康研究院。取實(shí)施例5制備的小分子芯片，按照spri儀器的操作手冊(cè)安裝小分子芯片，以pbst緩沖溶液(ph＝7.4,0.05％tween20)作為流動(dòng)相，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。樣品(2μl/s,300s)，重生液(3μl/s300s)，緩沖液(2μl/s,300s)，在25℃下通入上述待測(cè)樣品8300s，使用甘氨酸+鹽酸(ph＝2.0)水溶液(甘氨酸的濃度為10mmol/l，添加鹽酸調(diào)至ph＝2.0)重生數(shù)次，直至基線平穩(wěn)。保存完整的數(shù)據(jù)，然后使用數(shù)據(jù)分析軟件離線處理所得數(shù)據(jù)，扣除空白背景后，觀察spr信號(hào)，計(jì)算kd值。試驗(yàn)結(jié)果如下：表15小分子化合物與所測(cè)物質(zhì)孵育后相對(duì)于空白對(duì)照孵育后的spr信號(hào)和kd值由以上數(shù)據(jù)可知：2-(1-(2,3-二氮雜萘基))肼羧酸乙酯鹽酸鹽、6-甲基-2-(2-氨基乙氧基)甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯與待測(cè)樣品8孵育后，與空白對(duì)照孵育后相比有顯著(p<0.05)spr信號(hào)和kd值，表明待測(cè)樣品8中含有bche蛋白。三環(huán)癸胺、(4-(2-氯-4-硝基苯基)哌啶-1-基)(5-甲基-3-苯基異噁唑-4-基)酮與待測(cè)樣品8孵育后，與空白對(duì)照孵育后相比有顯著(p<0.05)spr信號(hào)和kd值，表明待測(cè)樣品8中含有bace1蛋白。綜合上述試驗(yàn)結(jié)果，待測(cè)樣品8中含有bace1蛋白，含有bche蛋白。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)12