1.一種用半粒測(cè)定水稻直鏈淀粉和支鏈淀粉含量的方法,其特征在于該方法包括如下步驟:
步驟1:稻米粉制備:取單粒稻谷手工脫殼后用刀片刮去種皮和糊粉層,得到精米,然后將其橫切成兩個(gè)半粒,取沒(méi)有胚芽部分的半粒用碾磨棒碾磨成精米粉;
步驟2:精米粉脫除脂肪和可溶性糖
稱取步驟1得到精米粉與100%色譜純甲醇混勻并于100℃加熱10分鐘后于10,000 g離心5分鐘后收集沉淀物,此步驟重復(fù)2-3次,并合并沉淀物;精米粉與甲醇的用量比為0.6 mg/1.0 ml;
步驟3: 糊化淀粉和直、支鏈分離
步驟4: 凝膠滲透色譜儀器參數(shù)
采用TSK gel pwxl 3000和pwxl 4000串聯(lián)雙柱,采用0.1 mol/L 磷酸氫二鈉和0.05 mol/L磷酸二氫鈉為緩沖液,流速為1.0 ml/min, 柱溫箱為40℃和采用示差檢測(cè)器;
步驟5:根據(jù)直鏈淀粉和支鏈淀粉的兩成分出峰面積之比而直接得到直鏈淀粉/支鏈淀粉含量之比。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:糊化的方法是沸水浴5-10分鐘或50℃烘箱2-3小時(shí)或室溫過(guò)夜至溶液清澈。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:醋酸鈉溶液的加入量為糊化后得到產(chǎn)物重量的120-130倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于步驟3的具體過(guò)程為:取沉淀物加入0.25 mol/L NaOH溶液中,沉淀物與NaOH溶液的比例為50 mg:1.0 ml,糊化完全,混勻后加入適量 pH=4.0的0.5 mol/L 醋酸鈉溶液,再入適量異淀粉酶(酶活大于250 U)于40℃ 反應(yīng)2 hr以上,直至反應(yīng)完全;然后,沸水加熱5分鐘,10,000 g 離心5-10分鐘,取上清液;加入適量離子交換樹(shù)脂AG501-X8,于50℃水浴搖床30 min, 后16000 g 離心10分鐘,過(guò)0.45μm PVDF小柱,保持40℃后進(jìn)行凝膠滲透色譜進(jìn)樣測(cè)定。