本發(fā)明涉及石蠟切片技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及鴨茅根部組織石蠟切片的方法。

背景技術(shù)：

石蠟切片法是以石蠟作為包埋劑，經(jīng)一系列處理制作永久裝片的方法。它不僅可將材料切成極薄的切片（4 μm以下），而且能制成連續(xù)切片，并永久保存，清晰度好，亦適合作細(xì)胞學(xué)研究。石蠟切片是植物顯微技術(shù)上最重要最常用的一種方法，在植物解剖學(xué)及其相關(guān)領(lǐng)域的生產(chǎn)和科研中有著廣泛應(yīng)用。

尤其是近年來，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展與植物生態(tài)解剖學(xué)的興起，石蠟切片成為了不同生境植物或演替系列優(yōu)勢(shì)種生態(tài)適應(yīng)性研究的重要手段。但是，傳統(tǒng)的石蠟切片方法存在制片周期長，易受條件限制，制片中使用化學(xué)試劑較多，對(duì)人有一定的毒害，易使材料變脆、變硬或變形，某些內(nèi)含物易于消失，常使組織變小，甚至使組織扭轉(zhuǎn)變形，細(xì)胞所含物質(zhì)縮小而折光性增強(qiáng)，影響觀察正確性，且制片成本較高等問題，加上若所取的組織塊較小，則如何快速準(zhǔn)確的包埋成功也是制片的關(guān)鍵之處。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于提供一種鴨茅根部組織石蠟切片的制備方法。該方法制得的鴨茅根部組織石蠟切片組織完整、細(xì)胞邊界清晰。

本發(fā)明目的通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種鴨茅根部組織石蠟切片的制備方法，包括對(duì)新鮮鴨茅根部組織塊的殺死與固定，沖洗，脫水與透明，浸蠟與包埋，修塊與切片，展片與烤片，脫蠟、復(fù)水與番紅染色，固綠染色、脫水與透明，以及封片步驟；其特征在于：在沖洗步驟后、脫水與透明步驟前，還進(jìn)行瓊脂糖預(yù)包埋，所述瓊脂糖預(yù)包埋是將沖洗后的鴨茅根部組織塊包埋在經(jīng)熬化后的5%瓊脂糖凝膠中、以質(zhì)量百分含量計(jì)（5 g瓊脂糖溶于100 mL蒸餾水中）。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，進(jìn)行所述的瓊脂糖預(yù)包埋處理解決了因鴨茅根部組織過小難以快速準(zhǔn)確包埋的問題。

進(jìn)一步優(yōu)化，在殺死與固定后、沖洗前，還進(jìn)行酸化，具體是將固定好的鴨茅根部組織塊置于0.5 mol/L三氯乙酸溶液中，酸化6-7 d，在酸化過程中，3-4 d時(shí)，更換一次0.5 mol/L三氯乙酸溶液。

更進(jìn)一步，上述殺死與固定步驟中，采用的固定液為FAA混合固定液，即為福爾馬林：冰醋酸：70 %乙醇（體積濃度）=1:1:18、以體積比計(jì)。

優(yōu)選地，脫水與透明步驟是將經(jīng)上述瓊脂糖預(yù)包埋后的鴨茅根部組織塊依次置于體積比為1:5:4的正丁醇、體積濃度為95%乙醇、蒸餾水混合液中2 h，置于體積比為2:5:3的正丁醇、體積濃度為95%乙醇、蒸餾水混合液中2 h，置于體積比為3:5:2的正丁醇、體積濃度為95%乙醇、蒸餾水混合液中2 h，置于體積比為5:4:1的正丁醇、體積濃度為100%乙醇、蒸餾水混合液中2 h，置于體積比15:4:1的正丁醇、體積濃度為100%乙醇、蒸餾水混合液中2 h，置于分析純正丁醇中2 h，再置于新的分析純正丁醇中2 h。

進(jìn)一步，上述浸蠟與包埋步驟中，將脫水與透明處理后的鴨茅根部組織塊放于42℃的體積比為1:1的二甲苯和軟蠟混合劑中，分Ⅰ、Ⅱ兩級(jí)，各1小時(shí)；然后轉(zhuǎn)移至53℃純軟蠟中浸蠟6小時(shí)，分Ⅰ、Ⅱ兩級(jí)，各3小時(shí)；再轉(zhuǎn)移至63℃純硬蠟中浸蠟3小時(shí)，分Ⅰ、Ⅱ兩級(jí)，各1.5小時(shí)；所述軟蠟為熔點(diǎn)46-48℃的石蠟，所述硬蠟為熔點(diǎn)為56-58℃的石蠟。上述Ⅰ、Ⅱ兩級(jí)是指重復(fù)兩次，每次換上新的沒使用過的相應(yīng)蠟液。

進(jìn)一步，上述展片與烤片步驟中，在用于展片的載玻片上涂上蛋白甘油粘貼劑，所述蛋白甘油粘貼劑由體積比為1:1的雞蛋清和甘油組成。

進(jìn)一步，上述脫蠟、復(fù)水與番紅染色步驟中，采用二甲苯脫蠟三次，每次25分鐘；所述復(fù)水依次進(jìn)入無水乙醇Ⅰ級(jí)、無水乙醇Ⅱ級(jí)、無水乙醇Ⅲ級(jí)、95%乙醇、85%乙醇、70%乙醇中、乙醇均為體積百分濃度，每步停留4-5分鐘，然后蒸餾水洗5秒后進(jìn)入1%水溶液番紅染液、質(zhì)量濃度，密封過夜。上述Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)是指重復(fù)三次，每次換上新的沒使用過的無水乙醇。

更進(jìn)一步，上述固綠染色、脫水與透明步驟中，將經(jīng)脫蠟、復(fù)水與番紅染色處理的切片在95%乙醇中漂去浮色5-10秒，然后進(jìn)入質(zhì)量濃度為0.5%的95%乙醇固綠染液，保持30秒，所述95%乙醇為體積百分濃度；然后進(jìn)行脫水：經(jīng)三級(jí)分析純無水乙醇處理，即為進(jìn)入無水乙醇Ⅰ級(jí)、無水乙醇Ⅱ級(jí)、無水乙醇Ⅲ級(jí)，每級(jí)30秒-1分鐘；脫水后進(jìn)入透明處理：經(jīng)三級(jí)分析純二甲苯處理，即為進(jìn)入二甲苯Ⅰ級(jí)、二甲苯Ⅱ級(jí)、二甲苯Ⅲ級(jí)，每級(jí)20分鐘。上述Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)是指重復(fù)三次，每次換上新的沒使用過的無水乙醇或二甲苯。

最優(yōu)選地說，一種鴨茅根部組織石蠟切片的制備方法，按如下步驟：

（1）殺死與固定

剪取新鮮鴨茅根部，用一次性雙面刀片切取鴨茅根部組織塊，約2~3 mm，后立即輕輕置于FAA混合固定液中固定、所述FAA混合固定液為體積比為1:1:18的福爾馬林、冰醋酸、70 %乙醇；固定液體積應(yīng)為鴨茅根部組織塊總體積的10~15倍。材料經(jīng)固定后，若不及時(shí)使用需要保存下來備用；鴨茅根部組織在上述FAA混合固定液中且置于冰箱4℃可保存半年至一年，材料的結(jié)構(gòu)不會(huì)發(fā)生變化也不至于變壞。所述殺死與固定有效防止了細(xì)胞組織發(fā)生自溶現(xiàn)象。

（2）酸化

將固定好的鴨茅根部組織塊置于0.5 mol/L三氯乙酸溶液中，酸化6-7 d，在酸化過程中，3-4 d時(shí)，更換一次0.5 mol/L三氯乙酸溶液。

（3）沖洗

剪取干凈雙層紗布折成方形，采用細(xì)小鑷子將經(jīng)酸化的鴨茅根部組織塊置于紗布中央，用2 B鉛筆做好材料名稱及編號(hào)標(biāo)記后，將紗布合攏，用尼龍繩將紗布綁好，以材料在流動(dòng)的水中不漏出為準(zhǔn)；將紗布小團(tuán)置于流動(dòng)的水中，沖洗約24 h。

（4）瓊脂糖預(yù)包埋

配制質(zhì)量百分濃度為5 %的瓊脂糖凝膠（取5 g瓊脂糖溶于100 mL蒸餾水中），經(jīng)多次熬化后，倒入預(yù)先放置的4孔打孔器的平板上，厚度約5~7 mm，以備材料放入后進(jìn)行封口；待瓊脂糖冷凝后，取出打孔器，從流動(dòng)的水中取出紗布團(tuán)并打開紗布團(tuán)，將沖洗完成后的鴨茅根部組織塊橫切面向上，依次用細(xì)小鑷子輕放至凝膠孔底部（打孔器不會(huì)將孔打穿，鴨茅根部組織塊不會(huì)從凝膠孔底部漏出），并將瓊脂糖修整成規(guī)則的長條形，切去左上角以示材料編號(hào)，然后在酒精燈上進(jìn)行瓊脂孔的封口、避免在孔內(nèi)密封大量空氣。

（5）脫水與透明

用鑷子輕輕夾取包埋著的鴨茅根部組織瓊脂塊依次置于體積比為1:5:4的正丁醇、體積濃度為95%乙醇、蒸餾水混合液中2 h，置于體積比為2:5:3的正丁醇、體積濃度為95%乙醇、蒸餾水混合液中2 h，置于體積比為3:5:2的正丁醇、體積濃度為95%乙醇、蒸餾水混合液中2 h，置于體積比為5:4:1的正丁醇、體積濃度為100%乙醇、蒸餾水混合液中2 h，置于體積比15:4:1的正丁醇、體積濃度為100%乙醇、蒸餾水混合液中2 h，置于分析純正丁醇中2 h，再置于新的分析純正丁醇中2 h。

（6）浸蠟與包埋

在烘干的燒杯中倒入二甲苯，再倒入等量的液態(tài)軟蠟制得體積比為1：1的二甲苯、軟蠟混合劑，置于42℃恒溫箱中備用；用細(xì)鑷子夾取透明完全的鴨茅根部組織瓊脂糖塊輕放于42℃恒溫箱中的二甲苯、軟蠟混合劑，分I、II兩級(jí)，各1 h；然后將瓊脂糖塊轉(zhuǎn)移至純軟蠟在53℃恒溫箱中浸蠟6 h，分I、II兩級(jí)，各3 h；再轉(zhuǎn)移至純硬蠟在63℃恒溫箱中浸蠟3 h，分I、II兩級(jí)，各1.5 h。上述Ⅰ、Ⅱ兩級(jí)是指重復(fù)兩次，每次換上新的沒使用過的相應(yīng)蠟液。

在備好的包埋紙盒中，倒入純硬蠟II中的硬蠟，同時(shí)夾取浸蠟完成的瓊脂糖塊，擺正切面，待包埋紙盒中的硬蠟表面開始冷凝成固體，則立即將整個(gè)包埋紙盒置于冷水中，使其立刻凝固成蠟塊。

上述石蠟平滑均勻而無雜質(zhì)，均由上海永華石蠟有限公司提供。上述軟蠟為熔點(diǎn)46~48℃的石蠟，硬蠟為熔點(diǎn)56~58℃的石蠟。

（7）修塊與切片

剪開包埋紙盒，將石蠟塊取出，用修塊刀將石蠟塊修成棱臺(tái)形狀，上、下切面平行，避開組織塊，防止損傷組織塊，然后固定在堅(jiān)硬的小木方塊上；用切片機(jī)夾夾緊木塊，使蠟塊與刀口平行，然后進(jìn)行切片，切片厚度以5~7μm為宜。

（8）展片與烤片

經(jīng)上述修塊、切片后的蠟塊成一連續(xù)條帶狀的蠟帶，選取完整的蠟帶分切成小段，先在洗凈的載玻片上涂抹上一層由體積比為1:1的雞蛋清和甘油組成的蛋白甘油粘貼劑、有效防止展片過程蠟帶脫落，再用細(xì)小鑷子輕輕地將蠟帶放置于盛有蒸餾水的大燒杯內(nèi)（預(yù)先放置于49~50℃恒溫水浴鍋內(nèi)，保持大燒杯內(nèi)水溫與恒溫水浴鍋水溫一致）進(jìn)行展片，用覆有所述蛋白甘油的載玻片進(jìn)行撈片，用小鑷子擺正蠟帶位置（位于載玻片下1/3~2/3處），用吸水紙吸去多余的水分，并用2B鉛筆做好標(biāo)記；然后將覆有蠟帶的載玻片置于切片架上，于37℃恒溫箱中烘片24 h，或自然風(fēng)干。

（9）脫蠟、復(fù)水與番紅染色

將上述干燥后的切片用二甲苯脫蠟三次，每次25分鐘；脫蠟完畢后，即進(jìn)入復(fù)水與番紅染色系列：依次進(jìn)入無水乙醇Ⅰ級(jí)、無水乙醇Ⅱ級(jí)、無水乙醇Ⅲ級(jí)、95%乙醇、85%乙醇、70%乙醇中、乙醇均為體積百分濃度，每步停留4-5分鐘，然后蒸餾水洗5秒后進(jìn)入1%水溶液番紅染液、質(zhì)量濃度，密封過夜。上述Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)是指重復(fù)三次，每次換上新的沒使用過的無水乙醇。

（10）固綠染色、脫水與透明

將經(jīng)脫蠟、復(fù)水與番紅染色處理的切片在95%乙醇中漂去浮色5-10秒，然后進(jìn)入質(zhì)量濃度為0.5%的95%乙醇固綠染液，保持30秒，所述95%乙醇為體積百分濃度；然后進(jìn)行脫水：經(jīng)三級(jí)分析純無水乙醇處理，即為進(jìn)入無水乙醇Ⅰ級(jí)、無水乙醇Ⅱ級(jí)、無水乙醇Ⅲ級(jí)，每級(jí)30秒-1分鐘；脫水后進(jìn)入透明處理：經(jīng)三級(jí)分析純二甲苯處理，即為進(jìn)入二甲苯Ⅰ級(jí)、二甲苯Ⅱ級(jí)、二甲苯Ⅲ級(jí)，每級(jí)20分鐘。上述Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)是指重復(fù)三次，每次換上新的沒使用過的無水乙醇或二甲苯。

（11）封片

將上述透明好的切片從二甲苯中取出，用紗布擦干凈多余的二甲苯，然后用中性樹膠封片，即在要觀察的組織塊附近滴上封片劑，沿著一邊輕輕地蓋上蓋玻片（防止產(chǎn)生氣泡），最后自然風(fēng)干后即可在Olympus顯微鏡下觀察和攝像。

本發(fā)明有益效果如下：

本發(fā)明方法制得的鴨茅根部組織石蠟切片，其組織完整、細(xì)胞界限清晰、色彩鮮艷、顏色對(duì)比鮮明、切片干凈，表明該法適用于鴨茅根部組織石蠟切片制作，比傳統(tǒng)植物石蠟切片制作方法能具有更好的效果。且能夠在較短時(shí)間內(nèi)完成較大批量鴨茅根部組織石蠟切片的制作，試驗(yàn)效果佳。

附圖說明

圖1：‘滇北’鴨茅側(cè)根組織切片圖；

圖2：‘PI 594994’鴨茅初生根組織切片圖；

圖3：‘PG 49’鴨茅初生根組織切片圖；

圖4：‘黔草4號(hào)’鴨茅初生根組織切片圖。

具體實(shí)施方式

下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述，在此指出以下實(shí)施例只用于對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明，不能理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，本領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員可以根據(jù)上述發(fā)明內(nèi)容對(duì)本發(fā)明做出一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整。

以下實(shí)施例中采用的‘滇北’、‘PI 594994’、‘PG 49’、‘黔草4號(hào)’為鴨茅品種（系）名稱，分別來源于四川農(nóng)業(yè)大學(xué)、美國牧草種質(zhì)資源庫、新西蘭、貴州省草業(yè)研究所；為本領(lǐng)域所公知的品種（系）。

實(shí)施例1

一種鴨茅根部組織石蠟切片的制備方法，按如下步驟：

（1）殺死與固定

剪取新鮮‘滇北’鴨茅側(cè)根部，用一次性雙面刀片切取鴨茅根部組織塊，約2~3 mm，后立即輕輕置于FAA混合固定液中固定、所述FAA混合固定液為體積比為1:1:18的福爾馬林、冰醋酸、70 %乙醇；固定液體積應(yīng)為鴨茅根部組織塊總體積的10~15倍。材料經(jīng)固定后，若不及時(shí)使用需要保存下來備用；鴨茅根部組織在上述FAA混合固定液中且置于冰箱4℃可保存半年至一年，材料的結(jié)構(gòu)不會(huì)發(fā)生變化也不至于變壞。所述殺死與固定有效防止了細(xì)胞組織發(fā)生自溶現(xiàn)象。

（2）酸化

將固定好的鴨茅根部組織塊置于0.5 mol/L三氯乙酸溶液中，酸化6-7 d，在酸化過程中，3-4 d時(shí)，更換一次0.5 mol/L三氯乙酸溶液。

（3）沖洗

剪取干凈雙層紗布折成方形，采用細(xì)小鑷子將經(jīng)酸化的鴨茅根部組織塊置于紗布中央，用2 B鉛筆做好材料名稱及編號(hào)標(biāo)記后，將紗布合攏，用尼龍繩將紗布綁好，以材料在流動(dòng)的水中不漏出為準(zhǔn)；將紗布小團(tuán)置于流動(dòng)的水中，沖洗約24 h。

（4）瓊脂糖預(yù)包埋

配制質(zhì)量百分濃度為5 %的瓊脂糖凝膠（取5 g瓊脂糖溶于100 mL蒸餾水中），經(jīng)多次熬化后，倒入預(yù)先放置的4孔打孔器的平板上，厚度約5~7 mm，以備材料放入后進(jìn)行封口；待瓊脂糖冷凝后，取出打孔器，從流動(dòng)的水中取出紗布團(tuán)并打開紗布團(tuán)，將沖洗完成后的鴨茅根部組織塊橫切面向上，依次用細(xì)小鑷子輕放至凝膠孔底部（打孔器不會(huì)將孔打穿，鴨茅根部組織塊不會(huì)從凝膠孔底部漏出），并將瓊脂糖修整成規(guī)則的長條形，切去左上角以示材料編號(hào)，然后在酒精燈上進(jìn)行瓊脂孔的封口、避免在孔內(nèi)密封大量空氣。

（5）脫水與透明

用鑷子輕輕夾取包埋著的鴨茅根部組織瓊脂塊依次置于體積比為1:5:4的正丁醇、體積濃度為95%乙醇、蒸餾水混合液中2 h，置于體積比為2:5:3的正丁醇、體積濃度為95%乙醇、蒸餾水混合液中2 h，置于體積比為3:5:2的正丁醇、體積濃度為95%乙醇、蒸餾水混合液中2 h，置于體積比為5:4:1的正丁醇、體積濃度為100%乙醇、蒸餾水混合液中2 h，置于體積比15:4:1的正丁醇、體積濃度為100%乙醇、蒸餾水混合液中2 h，置于分析純正丁醇中2 h，再置于新的分析純正丁醇中2 h。

（6）浸蠟與包埋

在烘干的燒杯中倒入二甲苯，再倒入等量的液態(tài)軟蠟制得體積比為1：1的二甲苯、軟蠟混合劑，置于42℃恒溫箱中備用；用細(xì)鑷子夾取透明完全的鴨茅根部組織瓊脂糖塊輕放于42℃恒溫箱中的二甲苯、軟蠟混合劑，分I、II兩級(jí)，各1 h；然后將瓊脂糖塊轉(zhuǎn)移至純軟蠟在53℃恒溫箱中浸蠟6 h，分I、II兩級(jí)，各3 h；再轉(zhuǎn)移至純硬蠟在63℃恒溫箱中浸蠟3 h，分I、II兩級(jí)，各1.5 h。上述Ⅰ、Ⅱ兩級(jí)是指重復(fù)兩次，每次換上新的沒使用過的相應(yīng)蠟液。

在備好的包埋紙盒中，倒入純硬蠟II中的硬蠟，同時(shí)夾取浸蠟完成的瓊脂糖塊，擺正切面，待包埋紙盒中的硬蠟表面開始冷凝成固體，則立即將整個(gè)包埋紙盒置于冷水中，使其立刻凝固成蠟塊。

上述石蠟平滑均勻而無雜質(zhì)，均由上海永華石蠟有限公司提供。上述軟蠟為熔點(diǎn)46~48℃的石蠟，硬蠟為熔點(diǎn)56~58℃的石蠟。

（7）修塊與切片

剪開包埋紙盒，將石蠟塊取出，用修塊刀將石蠟塊修成棱臺(tái)形狀，上、下切面平行，避開組織塊，防止損傷組織塊，然后固定在堅(jiān)硬的小木方塊上；用切片機(jī)夾夾緊木塊，使蠟塊與刀口平行，然后進(jìn)行切片，切片厚度以5~7μm為宜。

（8）展片與烤片

經(jīng)上述修塊、切片后的蠟塊成一連續(xù)條帶狀的蠟帶，選取完整的蠟帶分切成小段，先在洗凈的載玻片上涂抹上一層由體積比為1:1的雞蛋清和甘油組成的蛋白甘油粘貼劑、有效防止展片過程蠟帶脫落，再用細(xì)小鑷子輕輕地將蠟帶放置于盛有蒸餾水的大燒杯內(nèi)（預(yù)先放置于49~50℃恒溫水浴鍋內(nèi)，保持大燒杯內(nèi)水溫與恒溫水浴鍋水溫一致）進(jìn)行展片，用覆有所述蛋白甘油的載玻片進(jìn)行撈片，用小鑷子擺正蠟帶位置（位于載玻片下1/3~2/3處），用吸水紙吸去多余的水分，并用2B鉛筆做好標(biāo)記；然后將覆有蠟帶的載玻片置于切片架上，于37℃恒溫箱中烘片24 h，或自然風(fēng)干。

（9）脫蠟、復(fù)水與番紅染色

將上述干燥后的切片用二甲苯脫蠟三次，每次25分鐘；脫蠟完畢后，即進(jìn)入復(fù)水與番紅染色系列：依次進(jìn)入無水乙醇Ⅰ級(jí)、無水乙醇Ⅱ級(jí)、無水乙醇Ⅲ級(jí)、95%乙醇、85%乙醇、70%乙醇中、乙醇均為體積百分濃度，每步停留4-5分鐘，然后蒸餾水洗5秒后進(jìn)入1%水溶液番紅染液、質(zhì)量濃度，密封過夜。上述Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)是指重復(fù)三次，每次換上新的沒使用過的無水乙醇。

（10）固綠染色、脫水與透明

將經(jīng)脫蠟、復(fù)水與番紅染色處理的切片在95%乙醇中漂去浮色5-10秒，然后進(jìn)入質(zhì)量濃度為0.5%的95%乙醇固綠染液，保持30秒，所述95%乙醇為體積百分濃度；然后進(jìn)行脫水：經(jīng)三級(jí)分析純無水乙醇處理，即為進(jìn)入無水乙醇Ⅰ級(jí)、無水乙醇Ⅱ級(jí)、無水乙醇Ⅲ級(jí)，每級(jí)30秒-1分鐘；脫水后進(jìn)入透明處理：經(jīng)三級(jí)分析純二甲苯處理，即為進(jìn)入二甲苯Ⅰ級(jí)、二甲苯Ⅱ級(jí)、二甲苯Ⅲ級(jí)，每級(jí)20分鐘。上述Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)是指重復(fù)三次，每次換上新的沒使用過的無水乙醇或二甲苯。

（11）封片

將上述透明好的切片從二甲苯中取出，用紗布擦干凈多余的二甲苯，然后用中性樹膠封片，即在要觀察的組織塊附近滴上封片劑，沿著一邊輕輕地蓋上蓋玻片（防止產(chǎn)生氣泡），最后自然風(fēng)干后即在Olympus顯微鏡下觀察和攝像，見圖1。

實(shí)施例2-4

分別采用‘PI 594994’鴨茅初生根，‘PG 49’鴨茅初生根，‘黔草4號(hào)’鴨茅初生根進(jìn)行制片。其他與實(shí)施例1方法同，結(jié)果如圖2-4所示。如圖3箭頭所示處：較老的初生根或可見外皮層細(xì)胞發(fā)生角質(zhì)化，呈現(xiàn)亮綠色的“魚鱗狀”。圖4箭頭所示處可見外皮層細(xì)胞的細(xì)胞壁木質(zhì)化與栓質(zhì)化，且其內(nèi)皮層細(xì)胞呈“馬蹄形”。其組織完整、切片干凈、細(xì)胞界限清晰、色彩鮮艷、顏色對(duì)比鮮明。