本發(fā)明涉及農(nóng)藥殘留量的檢測方法領(lǐng)域，具體涉及一種通用型的氯蟲苯甲酰胺殘留量的定量檢測方法，該定量檢測方法是采用多壁碳納米管（MWCNTS）與PSA作為吸附劑的改進(jìn)QuEChERS方法對樣品除雜凈化，再用氣相色譜-電子捕獲檢測器（GC-ECD）測定不同種類樣品中的氯蟲苯甲酰胺，以達(dá)到快速、簡便、可靠的目的。

背景技術(shù)：

近年來隨著世界各國對有機(jī)磷、有機(jī)氯等高毒農(nóng)藥的禁用和限用，以及害蟲對現(xiàn)有殺蟲劑抗藥性的快速發(fā)展，尋找開發(fā)新的作用機(jī)制的農(nóng)藥成為國內(nèi)外關(guān)注的焦點(diǎn)。氯蟲苯甲酰胺（CAS No.：500008-45-7），又名氯蟲酰胺，商品名稱康寬、普尊、奧得騰，化學(xué)名稱3-溴-N-{4-氯-2-甲基-6-[(甲氨基甲酰基)苯}-1-(3-氯-2-吡啶基)-1-氫-吡啶-5-甲酰胺，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為，是美國杜邦公司研發(fā)的新型鄰甲酰氨基苯甲酰胺類殺蟲劑。氯蟲苯甲酰胺以昆蟲魚尼丁受體（ryanodine receptor, RyR）為作用靶標(biāo)，通過高效激活昆蟲細(xì)胞中的RyR，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)源鈣離子釋放失控和大量流失，引起昆蟲肌肉調(diào)節(jié)衰弱、麻痹、癱瘓，直至最終死亡。氯蟲苯甲酰胺具有優(yōu)良的耐雨水沖刷性、高效的滯留活性和超高的殺蟲性能，對危害水稻、蔬菜、瓜果等作物的幾乎所有的鱗翅目害蟲具有快速、長效的防治作用，并能有效控制傳統(tǒng)殺蟲劑產(chǎn)生抗性的害蟲，在我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。盡管氯蟲苯甲酰胺毒性較低，沒有“三致”作用以及神經(jīng)、生殖毒性，但是基于安全考慮，各國紛紛制定了嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)，以限制其在不同基體中的最大殘留量（maximum residue limit, MRL），如日本對稻米、魚和奶品的MRL為0.05 mg/kg，我國強(qiáng)制性食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) GB 2763-2014《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中規(guī)定谷物（糙米、麥類、玉米）、蔬菜、水果等農(nóng)產(chǎn)品中氯蟲苯甲酰胺的臨時(shí)最大殘留限量為0.02～20 mg/kg。

在氯蟲苯甲酰胺殘留檢測的樣品前處理中，現(xiàn)有的報(bào)道大多采用普適性較強(qiáng)的QuEChERS方法或改良QuEChERS方法。原始QuEChERS方法采用乙二胺-N-丙基硅烷(PSA) 對樣品提取液進(jìn)行分散固相凈化，改良QuEChERS方法以PSA為主，與石墨化碳(GCB) 、十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）和中性氧化鋁的1～2種混合使用以提高凈化效率、改善凈化效果。在QuEChERS方法中，吸附劑是決定方法選擇性和靈敏度的關(guān)鍵因素，傳統(tǒng)的商品化吸附劑由于重復(fù)使用率低、選擇性差、價(jià)格較貴，已滿足不了當(dāng)前農(nóng)藥殘留樣品分析技術(shù)發(fā)展的要求。

在儀器檢測方面，已報(bào)道的不同樣本基質(zhì)中氯蟲苯甲酰胺殘留檢測方法主要有液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜法和酶聯(lián)免疫吸附分析法。液相色譜法是目前最為成熟且容易推廣使用的一種檢測方法，但溶劑消耗大，使用成本高，而且對樣品的凈化程度要求很高；液相色譜-質(zhì)譜法樣品用量少，對樣品前處理要求低，但是質(zhì)譜儀價(jià)格昂貴，運(yùn)行成本高，操作要求也高，基層檢測單位和普通實(shí)驗(yàn)室難以配備和使用，而且液相色譜-質(zhì)譜法沒有商品化標(biāo)準(zhǔn)譜庫檢索，只能自己建庫或解析譜圖，定性定量分析仍需借助于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；酶聯(lián)免疫吸附分析法操作簡便，特異靈敏，不需要大型儀器設(shè)備以及專業(yè)人員操作，對前處理要求低，但是該方法只能用于定性和半定量檢測，準(zhǔn)確性和可靠性仍需借助色譜法進(jìn)行驗(yàn)證。除以上方法外，中國專利“一種蔬菜和水果中氯蟲苯甲酰胺殘留量的測定方法”(CN 104502504 B)和“一種果蔬中氯蟲苯甲酰胺殘留量的測定方法”(CN 104459001 B)報(bào)道了用于檢測蔬菜和水果中氯蟲苯甲酰胺殘留量的氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜方法和氣相色譜-負(fù)化學(xué)離子源-質(zhì)譜方法。該專利報(bào)道方法雖然操作簡單、能夠定性定量，但樣品采用均質(zhì)提取，樣品數(shù)量較多時(shí)，處理效率較低，且容易產(chǎn)生交叉污染，同時(shí)氣質(zhì)聯(lián)用儀價(jià)格較貴，普及率較低，推廣使用難度較大。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種通用型的氯蟲苯甲酰胺殘留量的定量檢測方法，該定量檢測方法操作簡單、快速、準(zhǔn)確、成本低，易于掌握普及，為不同樣本基質(zhì)中氯蟲苯甲酰胺殘留分析提供了一種快速可靠的方法。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種通用型的氯蟲苯甲酰胺殘留量的定量檢測方法，其特征在于：所述定量檢測方法有兩部分組成：

第一部分，用氣相色譜-電子捕獲法建立已知梯度濃度的被測的氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線；所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立由以下步驟組成：

第一步，制備空白基質(zhì)樣品，制備方法由以下步驟組成：

（1）準(zhǔn)確稱取5.0~10.0 g經(jīng)測定不含被測的氯蟲苯甲酰胺的空白供試樣品，置于50 mL離心管中，當(dāng)所述空白供試樣品為含水率小于10%的干性樣品時(shí)，預(yù)先加入適量超純水浸潤5～10min，然后加入10~20 mL乙腈溶劑，混勻，超聲提取15～30 min，加入1~2 g氯化鈉和3 g無水硫酸鎂，渦旋2 min，以7000 r/min轉(zhuǎn)速離心4min，取上清液即為待凈化的空白基質(zhì)提取液；

（2）另取一支10 mL離心管，加入0.06~0.08g 多壁碳納米管、0.1~0.15g PSA和0.3g無水硫酸鎂，加入4mL所述待凈化的空白基質(zhì)提取液，渦旋2min，以9000 r/min轉(zhuǎn)速離心5min；離心后移取2.0 mL上清液，在70℃水浴下氮?dú)饩徛抵两桑玫娇瞻谆|(zhì)樣品；

第二步，向所述第一步中得到的空白基質(zhì)樣品中分別加入1mL梯度質(zhì)量濃度的氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，振蕩混勻，過0.22μm有機(jī)濾膜，得到相應(yīng)質(zhì)量濃度的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，所述基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中氯蟲苯甲酰胺的質(zhì)量濃度分別為1 mg/kg、0.5 mg/ kg、0.2 mg/ kg、0.1 mg/ kg以及0.05 mg/ kg；

第三步，用氣相色譜-電子捕獲法測定所述基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中氯蟲苯甲酰胺的色譜峰保留時(shí)間和色譜峰面積，以色譜峰保留時(shí)間定性，然后以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制出氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

其中，測定氯蟲苯甲酰胺的色譜條件為：

色譜柱：型號為HP-5的毛細(xì)管色譜柱，規(guī)格為30m×0.32mm×0.25μm；柱升溫程序：初始溫度80℃，保持1min，30℃/min升至180℃，保持5min，20℃/min升至260℃，保持18min；ECD溫度：300℃；進(jìn)樣口溫度：240℃，隔墊吹掃3mL/min；載氣：氮?dú)?，純度?9.999%，流速1mL/min；尾吹氣：高純氮?dú)猓?0mL/min；進(jìn)樣量：1.0μL，不分流進(jìn)樣；

第二部分，測定供試樣品中氯蟲苯甲酰胺殘留量，所述供試樣品為土壤、茶葉或葉類蔬菜，定量檢測方法包括以下步驟：

第一步，對供試樣品進(jìn)行提取；

稱取供試樣品于50 mL離心管中，當(dāng)所述供試樣品為含水率小于10%的干性樣品時(shí)，預(yù)先加入適量超純水浸潤5～10min，然后加入乙腈溶劑，其中，所述供試樣品與所述乙腈溶劑的投入比為向每0.5g供試樣品中投入1mL乙腈溶劑，混勻，超聲提取15～30 min，加入氯化鈉和無水硫酸鎂，其中，所述供試樣品、氯化鈉以及無水硫酸鎂的質(zhì)量比為5~10:1:3，渦旋1~3 min，以6000~8000 r/min的轉(zhuǎn)速離心3~5min，取上清液即為待凈化的供試樣品提取液；

第二步，對所述待凈化的供試樣品提取液進(jìn)行凈化；

另取一支10 mL離心管，加入多壁碳納米管、PSA以及無水硫酸鎂，加入所述待凈化的供試樣品提取液，投入的多壁碳納米管、PSA以及無水硫酸鎂在待凈化的供試樣品提取液中的含量分別為0.015~0.02mg/mL、0.025~0.0375mg/mL、0.075 mg/mL，渦旋1~3min，以9000~10000 r/min轉(zhuǎn)速離心4~6min；離心后移取2.0 mL上清液至試管中，在65~75℃水浴下氮?dú)饩徛抵两?，用丙?正己烷混合溶劑定容至1.0 mL，過有機(jī)系濾膜，得到用于測定氯蟲苯甲酰胺殘留量的供試樣品提取凈化液；

第三步，用氣相色譜-電子捕獲法測定所述供試樣品提取凈化液中的氯蟲苯甲酰胺殘留量，記錄色譜峰保留時(shí)間和色譜峰面積，通過色譜峰保留時(shí)間定性后，將所述供試樣品提取凈化液檢測出的色譜峰面積與所述第一部分得到的氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，得到所述供試樣品提取凈化液中含有的氯蟲苯甲酰胺的測定值；再將所述測定值帶入到定量計(jì)算公式中，最終得到待測供試樣品中氯蟲苯甲酰胺殘留量；

定量計(jì)算公式：ω=（ρ×v×f）/m，式中ω為待測供試樣品中氯蟲苯甲酰胺殘留量，單位為mg/kg，ρ為測定值，單位為mg/L，m為稱取的樣品量，單位為g，v為定容體積，單位為mL，f為稀釋倍數(shù)；

其中，測定所述供試樣品提取凈化液中的氯蟲苯甲酰胺殘留量的色譜條件與所述第一部分的第三步中的氯蟲苯甲酰胺的色譜條件相同。

上述技術(shù)方案中的有關(guān)內(nèi)容解釋如下：

1、上述方案中，在所述第一部分的第二步中，配制成的所述標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中氯蟲苯甲酰胺的梯度質(zhì)量濃度分別為1 mg/L、0.5 mg/L、0.2 mg/L、0.1 mg/L以及0.05 mg/L。在實(shí)際操作中，先配制標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，再由標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液配制成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的配制：將新購置的溶解在甲醇溶劑中的1mL 100mg/L氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，在氮吹儀下緩慢吹至近干，用丙酮-正己烷（體積比1:1）稀釋定容，此時(shí)使用丙酮-正己烷混合溶劑對甲醇進(jìn)行溶劑交換，配成質(zhì)量濃度為10 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，置于4℃冰箱中保存。

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：將上述標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液從冰箱中取出回復(fù)到室溫，以丙酮-正己烷（體積比1:1）為溶劑逐級稀釋，配制成質(zhì)量濃度為1 mg/L、0.5 mg/L、0.2 mg/L、0.1 mg/L、0.05 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

2、上述方案中，所述丙酮-正己烷混合溶劑中丙酮與正己烷的體積比1:1。

3、上述方案中，涉及到的氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度100 mg/L，購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所；多壁碳納米管（英文簡稱MWCNTS），外徑10～20nm，生產(chǎn)廠家為中國Agela Technologies公司；乙二胺-N-丙基硅烷（英文簡稱PSA），粒度40～60μm，生產(chǎn)廠家為中國Agela Technologies公司；正己烷，色譜純，生產(chǎn)廠家為瑞典Oceanpak公司；丙酮，色譜純，生產(chǎn)廠家為上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乙腈、氯化鈉、無水硫酸鎂（使用前620℃下灼燒4h，備用），均為分析純，生產(chǎn)廠家為上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；實(shí)驗(yàn)用水為超純水（18.4 MΩ）。

本發(fā)明的設(shè)計(jì)特點(diǎn)以及有益效果是：本發(fā)明首次建立了使用多壁碳納米管（MWCNTS）和乙二胺- N-丙基硅烷（PSA）作為吸附劑的改進(jìn)QuEChERS-氣相色譜-電子捕獲法快速檢測不同樣品基質(zhì)中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法。供試樣品基質(zhì)中殘留的氯蟲苯甲酰胺采用乙腈溶劑超聲提取，以適量MWCNTS和PSA作為聯(lián)合吸附劑去除雜質(zhì)，上清液氮吹濃縮近干，用丙酮-正己烷（體積比1:1）定容，采用HP-5色譜柱程序升溫分離，電子捕獲檢測器（ECD）測定，基質(zhì)外標(biāo)法定量。

與現(xiàn)有樣品基質(zhì)中氯蟲苯甲酰胺殘留檢測方法相比，第一，本發(fā)明利用基于MWCNTS 與PSA作為聯(lián)合吸附劑的改進(jìn)QuEChERS方法對復(fù)雜基質(zhì)樣品除雜凈化，對復(fù)雜基質(zhì)樣品的除雜凈化更有針對性和通用性，供試樣品可以為土壤、茶葉或葉類蔬菜。相對于GCB和C18等QuEChERS方法中常見的吸附劑而言，多壁碳納米管（MWCNTS）是碳六元環(huán)構(gòu)成的類石墨平面卷曲而成的納米中空管，作為一種新型吸附材料，其與PSA、GCB、C18相比具有更大的比表面積，吸附容量更大，具有快速吸附和去除色素能力，對目標(biāo)農(nóng)藥氯蟲苯甲酰胺的吸附量不大，但MWCNTS對茶多酚、有機(jī)酸類物質(zhì)、脂肪酸、一些糖類物質(zhì)等吸附效果一般，與此同時(shí)，PSA可以有效去除茶多酚、脂肪酸、甾醇、有機(jī)酸以及一些糖類物質(zhì)，PSA去除色素效果一般，這表明單獨(dú)用MWCNTS或PSA對供試樣品進(jìn)行吸附可能都達(dá)不到去除雜質(zhì)、凈化提取好的目的，因此，將MWCNTS與PSA聯(lián)用，對于茶葉、土壤、葉類蔬菜等復(fù)雜基質(zhì)樣品而言更有針對性，凈化效果更好，吸附容量更大，吸附劑的總使用量明顯減少，并且MWCNTS的市售價(jià)格低廉，大大節(jié)約樣品檢測成本。

第二，本發(fā)明的改進(jìn)QuEChERS方法大大縮短了樣品前處理時(shí)間，能夠在40分鐘之內(nèi)就完成對樣品的提取、凈化。

第三，本發(fā)明的改進(jìn)QuEChERS方法中采用超聲法提取樣品，速度快、效率高、操作簡單，可滿足大批量樣品分析對進(jìn)度的要求。

第四，QuEChERS方法一般推薦GC-MS或HPLC-MS對農(nóng)藥進(jìn)行檢測，然而，質(zhì)譜檢測器是通用型檢測器，受樣品背景干擾嚴(yán)重，價(jià)格昂貴，運(yùn)行成本高，操作要求也高，基層檢測單位和普通實(shí)驗(yàn)室難以配備和使用。與此同時(shí)，盡管電子捕獲檢測器（英文簡稱ECD）屬于專用型檢測器，對含氯或含溴的分子有相應(yīng)，但本領(lǐng)域技術(shù)人員普遍認(rèn)為GC-ECD受待測物背景的影響較大，定性可靠性不如質(zhì)譜方法高。本發(fā)明正是克服了現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)偏見，在結(jié)合了改進(jìn)的QuEChERS方法之后，利用氯蟲苯甲酰胺分子中含有2個(gè)氯原子和1個(gè)溴原子，在電子捕獲檢測器（ECD）上有靈敏的響應(yīng)，選用電子捕獲檢測器與氣相色譜進(jìn)行聯(lián)用。從最終本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在GC-ECD色譜圖上，氯蟲苯甲酰胺的色譜分離效果好，峰形對稱，在待測組分出峰處無雜質(zhì)干擾，不影響其定性分析的準(zhǔn)確性，氯蟲苯甲酰胺在ECD檢測器上具有較高的響應(yīng)值，檢測靈敏度也高，定量效果好，本發(fā)明選用GC-ECD對氯蟲苯甲酰胺進(jìn)行檢測是合理的。此外，GC-ECD的儀器價(jià)格便宜，操作維護(hù)簡單，技術(shù)要求不如色譜-質(zhì)譜聯(lián)用嚴(yán)格，特別適合在廣大基層檢測機(jī)構(gòu)和單位推廣使用。

總之，本發(fā)明的方法操作簡單、快速、準(zhǔn)確，易于普及掌握，且成本低，為不同樣品基質(zhì)中氯蟲苯甲酰胺殘留測定提供了一種通用的、快速可靠的方法，可滿足大批量樣品分析對質(zhì)量和進(jìn)度的要求。

附圖說明

附圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中氯蟲苯甲酰胺溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液GC-ECD色譜圖；

附圖2為本發(fā)明實(shí)施例1中氯蟲苯甲酰胺茶葉基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液GC-ECD色譜圖；

附圖3為本發(fā)明實(shí)施例1中茶葉空白樣品GC-ECD色譜圖；

附圖4為本發(fā)明實(shí)施例1中茶葉加標(biāo)樣品GC-ECD色譜圖；

附圖5為本發(fā)明實(shí)施例1中氯蟲苯甲酰胺在茶葉中的基質(zhì)效應(yīng)；

附圖6為本發(fā)明實(shí)施例1中氯蟲苯甲酰胺茶葉基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；

附圖7為本發(fā)明實(shí)施例2中氯蟲苯甲酰胺溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液GC-ECD色譜圖；

附圖8為本發(fā)明實(shí)施例2中氯蟲苯甲酰胺土壤基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液GC-ECD色譜圖；

附圖9為本發(fā)明實(shí)施例2中土壤空白樣品GC-ECD色譜圖；

附圖10為本發(fā)明實(shí)施例2中土壤加標(biāo)樣品GC-ECD色譜圖；

附圖11為本發(fā)明實(shí)施例2中氯蟲苯甲酰胺在土壤中的基質(zhì)效應(yīng)；

附圖12為本發(fā)明實(shí)施例2中氯蟲苯甲酰胺土壤基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述：

實(shí)施例1：一種茶葉中氯蟲苯甲酰胺殘留量的定量檢測方法

空白茶葉樣品取自江蘇太湖地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所茶葉試驗(yàn)田，在種植過程中未施加任何農(nóng)藥，采摘的鮮葉按照傳統(tǒng)綠茶加工工藝制成干茶。

實(shí)際檢測茶葉樣品購自超市，產(chǎn)地為蘇州東洞庭山茶園。將茶葉樣品用粉碎機(jī)粉碎，混勻，儲存在4℃的冰箱。

所述定量檢測方法有兩部分組成：

第一部分，用氣相色譜-電子捕獲法建立已知梯度濃度的被測的氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線；所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立由以下步驟組成：

第一步，制備空白基質(zhì)樣品，制備方法由以下步驟組成：

（1）準(zhǔn)確稱取5.0 g經(jīng)測定不含被測的氯蟲苯甲酰胺的空白茶葉樣品，置于50 mL聚四氟乙烯離心管中，加入5 mL超純水浸潤5～10min后，加入10 mL乙腈溶劑，混勻，超聲提取15～30 min，加入1 g氯化鈉和4 g無水硫酸鎂，渦旋2 min，以7000 r/min轉(zhuǎn)速離心4min，取上清液即為待凈化的空白基質(zhì)提取液；

（2）另取一支10 mL聚四氟乙烯離心管，加入0.08g 多壁碳納米管、0.15g PSA和0.3g無水硫酸鎂，加入4mL所述待凈化的空白基質(zhì)提取液，渦旋2min，以9000 r/min轉(zhuǎn)速離心5min；離心后移取2.0 mL上清液，在70℃水浴下氮?dú)饩徛抵两?，得到空白基質(zhì)樣品；

第二步，向所述第一步中得到的空白基質(zhì)樣品中分別加入1mL梯度質(zhì)量濃度的氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，振蕩混勻，過0.22μm有機(jī)濾膜，得到相應(yīng)質(zhì)量濃度的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，所述基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中氯蟲苯甲酰胺的質(zhì)量濃度分別為1 mg/kg、0.5 mg/ kg、0.2 mg/ kg、0.1 mg/ kg以及0.05 mg/ kg；

配制成的所述標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中氯蟲苯甲酰胺的梯度質(zhì)量濃度分別為1 mg/L、0.5 mg/L、0.2 mg/L、0.1 mg/L以及0.05 mg/L；在實(shí)際操作中，先配制標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，再由標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液配制成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；

標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的配制：將新購置的溶解在甲醇溶劑中的1mL 100mg/L氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，在氮吹儀下緩慢吹至近干，用丙酮-正己烷（體積比1:1）稀釋定容，此時(shí)使用丙酮-正己烷混合溶劑對甲醇進(jìn)行溶劑交換，配成質(zhì)量濃度為10 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，置于4℃冰箱中保存；

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：將上述標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液從冰箱中取出回復(fù)到室溫，以丙酮-正己烷（體積比1:1）為溶劑逐級稀釋，配制成質(zhì)量濃度為1 mg/L、0.5 mg/L、0.2 mg/L、0.1 mg/L、0.05 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；

第三步，用氣相色譜-電子捕獲法測定所述基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中氯蟲苯甲酰胺的色譜峰保留時(shí)間和色譜峰面積，以色譜峰保留時(shí)間定性，然后以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制出氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

其中，測定氯蟲苯甲酰胺的色譜條件為：

色譜柱：型號為HP-5的毛細(xì)管色譜柱，規(guī)格為30m×0.32mm×0.25μm；柱升溫程序：初始溫度80℃，保持1min，30℃/min升至180℃，保持5min，20℃/min升至260℃，保持18min；ECD溫度：300℃；進(jìn)樣口溫度：240℃，隔墊吹掃3mL/min；載氣：氮?dú)?，純度?9.999%，流速1mL/min；尾吹氣：高純氮?dú)猓?0mL/min；進(jìn)樣量：1.0μL，不分流進(jìn)樣；

第二部分，測定茶葉樣品中氯蟲苯甲酰胺殘留量，定量檢測方法包括以下步驟：

第一步，對茶葉樣品進(jìn)行提??；

準(zhǔn)確稱取5.0 g茶葉樣品于50 mL聚四氟乙烯離心管中，加入5 mL超純水浸潤5～10min后，加入10 mL乙腈溶劑，混勻，超聲提取15～30 min，加入1 g氯化鈉和4 g無水硫酸鎂，渦旋2min，以7000 r/min的轉(zhuǎn)速離心4min，取上清液即為待凈化的茶葉樣品提取液；

第二步，對所述待凈化的茶葉樣品提取液進(jìn)行凈化；

另取一支10 mL聚四氟乙烯離心管，加入0.08g多壁碳納米管、0.15g PSA以及0.3g無水硫酸鎂，加入4mL所述待凈化的提取液，渦旋2min，以9000 r/min轉(zhuǎn)速離心5min；離心后移取2.0 mL上清液至試管中，在70℃水浴下氮?dú)饩徛抵两?，用丙?正己烷混合溶劑定容至1.0 mL，丙酮-正己烷混合溶劑中丙酮與正己烷的體積比1:1，過0.22μm有機(jī)系濾膜，得到用于測定氯蟲苯甲酰胺殘留量的茶葉樣品提取凈化液；

第三步，用氣相色譜-電子捕獲法測定所述茶葉樣品提取凈化液中的氯蟲苯甲酰胺殘留量，記錄色譜峰保留時(shí)間和色譜峰面積，通過色譜峰保留時(shí)間定性后，將所述茶葉樣品提取凈化液檢測出的色譜峰面積與所述第一部分得到的氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，得到所述茶葉樣品提取凈化液中含有的氯蟲苯甲酰胺的測定值；再將所述測定值帶入到定量計(jì)算公式中，最終得到待測茶葉樣品中氯蟲苯甲酰胺殘留量；

定量計(jì)算公式：ω=（ρ×v×f）/m，式中ω為待測茶葉樣品中氯蟲苯甲酰胺殘留量，單位為mg/kg，ρ為測定值，單位為mg/L，m為稱取的樣品量，單位為g，v為定容體積，單位為mL，f為稀釋倍數(shù)；

其中，測定所述茶葉樣品提取凈化液中的氯蟲苯甲酰胺殘留量的色譜條件與所述第一部分的第三步中的氯蟲苯甲酰胺的色譜條件相同。

以上實(shí)施例中，所用的儀器與設(shè)備有：7890A氣相色譜儀，配有電子捕獲檢測器（ECD）和7693自動(dòng)進(jìn)樣器和Chemstation色譜工作站（美國Agilent公司）；KQ-500DE超聲波清洗器（昆山超聲儀器公司）；TG16-WS臺式高速離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)儀器公司）；K600粉碎機(jī) （德國博朗公司）；HSC-24 B氮吹儀（天津恒奧科技公司）；VM-10渦旋振蕩器（韓國Daihan Scientific公司）；SX2-4-10馬弗爐（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械公司）；Direct-Q 5 UV型超純水機(jī)（美國Millipore公司）。

所用的藥品與試劑：氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度100 mg/L，購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所；多壁碳納米管（英文簡稱MWCNTS），外徑10～20nm，生產(chǎn)廠家為中國Agela Technologies公司；乙二胺-N-丙基硅烷（英文簡稱PSA），粒度40～60μm，生產(chǎn)廠家為中國Agela Technologies公司；正己烷，色譜純，生產(chǎn)廠家為瑞典Oceanpak公司；丙酮，色譜純，生產(chǎn)廠家為上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乙腈、氯化鈉、無水硫酸鎂（使用前620℃下灼燒4h，備用），均為分析純，生產(chǎn)廠家為上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；實(shí)驗(yàn)用水為超純水（18.4 MΩ）。

實(shí)施例1的試驗(yàn)結(jié)果：

1、GC-ECD色譜圖

氯蟲苯甲酰胺的溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液、基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液、茶葉空白樣品及茶葉空白加標(biāo)色譜圖分別見附圖1～4。從圖中可以看出，供試農(nóng)藥的色譜分離效果較好，峰形對稱，基線穩(wěn)定，在標(biāo)準(zhǔn)組分出峰處無明顯的干擾雜峰，說明本方法的儀器條件和前處理方法選擇合適。

2、基質(zhì)效應(yīng)

采用氣相色譜法檢測農(nóng)藥殘留時(shí)，待測農(nóng)藥極易受到樣品基質(zhì)效應(yīng)的影響，從而引起分析結(jié)果的偏差和對樣品分析過程回收率的錯(cuò)誤計(jì)算，所以對基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行考察評估并采取有效措施進(jìn)行消除或補(bǔ)償，是進(jìn)行農(nóng)藥殘留準(zhǔn)確分析的重要環(huán)節(jié)。有很多方法可以用來降低或補(bǔ)償基質(zhì)效應(yīng)，如標(biāo)準(zhǔn)加入法、同位素內(nèi)標(biāo)法、基質(zhì)凈化法、分析保護(hù)劑法、基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液法，其中以基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液法最常用?；|(zhì)效應(yīng)由農(nóng)藥結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和濃度以及基質(zhì)含量和種類等因素決定，并與檢測器、進(jìn)樣口溫度及類型等操作條件有關(guān)。本研究對溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液和基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行了對比檢測。結(jié)果（參見附圖 5所示）表明，在低濃濃度下（0.05～0.2mg/kg），氯蟲苯甲酰胺基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積高于純?nèi)軇?biāo)準(zhǔn)溶液峰面積，表明在檢測茶葉中氯蟲苯甲酰胺時(shí)存在基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，故在使用外標(biāo)法定量時(shí)，采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液建立校準(zhǔn)曲線，以消除基質(zhì)干擾，減少誤差。

3、標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍

取配制好的質(zhì)量濃度為0.05～1mg/kg的氯蟲苯甲酰胺基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按所述第一部分的第三步中的氯蟲苯甲酰胺的色譜條件進(jìn)行GC-ECD測定，以質(zhì)量濃度（ρ，mg/kg）為橫坐標(biāo)，對應(yīng)峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。結(jié)果表明，氯蟲苯甲酰胺的質(zhì)量濃度（ρ）在0.05～1 mg/kg范圍內(nèi)與峰面積（y）呈良好的線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1436.4ρ+ 228.72，相關(guān)系數(shù)（r）為0.9987，參見附圖6所示。

4、添加回收率與精密度

稱取5.0g空白茶葉樣品若干份，準(zhǔn)確添加一定體積的氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，添加濃度分別為1 mg/kg、0.2mg/kg、0.05 mg/kg，渦旋混勻，靜置30min～60min，按照本方法樣品前處理?xiàng)l件進(jìn)行提取和凈化及色譜條件測定，對每個(gè)添加水平作5個(gè)平行，采用基質(zhì)外標(biāo)法定量，計(jì)算方法的回收率及其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

由表1可知，在0.05～1 mg/kg添加濃度下，氯蟲苯甲酰胺在茶葉中的平均回收率為93.1 %～106.1 %，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）為4.5%～6.1%，表明該方法具有很好的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，符合農(nóng)藥殘留檢測的要求。

表1 氯蟲苯甲酰胺在茶葉中的添加回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

5、方法檢出限與定量限

在本方法條件下，對氯蟲苯甲酰胺最低添加水平（0.05mg/kg）的茶葉樣品進(jìn)行測定，得到色譜圖。以色譜圖中信噪比的3倍為檢出限，以最小添加水平為實(shí)際定量限，得到氯蟲苯甲酰胺的檢出限和實(shí)際定量限分別為0.005mg/kg 、0.05mg/kg。

6、實(shí)際樣品的檢測

利用本研究建立的方法對采自蘇州東洞庭山茶園16個(gè)批次的茶葉樣品進(jìn)行檢測，結(jié)果均未檢出氯蟲苯甲酰胺殘留，原因可能是該茶園茶葉中殘留的氯蟲苯甲酰胺含量低于本方法檢出限，或該茶園未曾使用過氯蟲苯甲酰胺藥劑及其相關(guān)產(chǎn)品，因此檢測不到。

7、結(jié)論

結(jié)果表明，氯蟲苯甲酰胺在0.05～1mg/kg范圍內(nèi)，峰面積與相應(yīng)質(zhì)量濃度間呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9939，在0.05～1mg/kg添加水平下，平均回收率為92.1 %～100.7 %，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）為2.5%～7.5%，檢出限為0.005mg/kg，實(shí)際定量限為0.05mg/kg。

實(shí)施例2：一種土壤中氯蟲苯甲酰胺殘留量的定量檢測方法

土樣取自蘇州東洞庭山茶園，取樣深度為0～15cm，土壤類型為黃壤土（pH=4.1～4.7）。樣品在通風(fēng)避光處自然風(fēng)干，除去大顆粒砂、草根和其他碎屑，研磨，過0.25mm（60目）篩后，裝入自封袋保存。制備好的土樣盡快分析，否則置于-18℃～- 20℃溫度下冷凍保存。空白土樣也取自蘇州東洞庭山茶園，經(jīng)檢測不含待測農(nóng)藥。

所述定量檢測方法有兩部分組成：

第一部分，用氣相色譜-電子捕獲法建立已知梯度濃度的被測的氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線；所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立由以下步驟組成：

第一步，制備空白基質(zhì)樣品，制備方法由以下步驟組成：

（1）準(zhǔn)確稱取5.0 g經(jīng)測定不含被測的氯蟲苯甲酰胺的空白土樣，置于50 mL聚四氟乙烯離心管中，加入2 mL超純水浸潤5～10min后，加入10 mL乙腈溶劑，混勻，超聲提取15～30 min，加入1 g氯化鈉和3 g無水硫酸鎂，渦旋2 min，以7000 r/min轉(zhuǎn)速離心4min，取上清液即為待凈化的空白基質(zhì)提取液；

（2）另取一支10 mL聚四氟乙烯離心管，加入0.06g 多壁碳納米管、0.1g PSA和0.3g無水硫酸鎂，加入4mL所述待凈化的空白基質(zhì)提取液，渦旋2min，以9000 r/min轉(zhuǎn)速離心5min；離心后移取2.0 mL上清液，在70℃水浴下氮?dú)饩徛抵两?，得到空白基質(zhì)樣品；

第二步，向所述第一步中得到的空白基質(zhì)樣品中分別加入1mL梯度質(zhì)量濃度的氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，振蕩混勻，過0.22μm有機(jī)濾膜，得到相應(yīng)質(zhì)量濃度的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，所述基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中氯蟲苯甲酰胺的質(zhì)量濃度分別為1 mg/kg、0.5 mg/ kg、0.2 mg/ kg、0.1 mg/ kg以及0.05 mg/ kg；

配制成的所述標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中氯蟲苯甲酰胺的梯度質(zhì)量濃度分別為1 mg/L、0.5 mg/L、0.2 mg/L、0.1 mg/L以及0.05 mg/L；在實(shí)際操作中，先配制標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，再由標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液配制成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；

標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的配制：將新購置的溶解在甲醇溶劑中的1mL 100mg/L氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，在氮吹儀下緩慢吹至近干，用丙酮-正己烷（體積比1:1）稀釋定容，此時(shí)使用丙酮-正己烷混合溶劑對甲醇進(jìn)行溶劑交換，配成質(zhì)量濃度為10 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，置于4℃冰箱中保存；

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：將上述標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液從冰箱中取出回復(fù)到室溫，以丙酮-正己烷（體積比1:1）為溶劑逐級稀釋，配制成質(zhì)量濃度為1 mg/L、0.5 mg/L、0.2 mg/L、0.1 mg/L、0.05 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；

第三步，用氣相色譜-電子捕獲法測定所述基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中氯蟲苯甲酰胺的色譜峰保留時(shí)間和色譜峰面積，以色譜峰保留時(shí)間定性，然后以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制出氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

其中，測定氯蟲苯甲酰胺的色譜條件為：

色譜柱：型號為HP-5的毛細(xì)管色譜柱，規(guī)格為30m×0.32mm×0.25μm；柱升溫程序：初始溫度80℃，保持1min，30℃/min升至180℃，保持5min，20℃/min升至260℃，保持18min；ECD溫度：300℃；進(jìn)樣口溫度：240℃，隔墊吹掃3mL/min；載氣：氮?dú)?，純度?9.999%，流速1mL/min；尾吹氣：高純氮?dú)猓?0mL/min；進(jìn)樣量：1.0μL，不分流進(jìn)樣；

第二部分，測定土壤樣品中氯蟲苯甲酰胺殘留量，定量檢測方法包括以下步驟：

第一步，對土壤樣品進(jìn)行提??；

準(zhǔn)確稱取5.0 g土壤樣品于50 mL聚四氟乙烯離心管中，加入2 mL超純水浸潤5～10min后，加入乙腈溶劑，混勻，超聲提取15～30 min，加入1 g氯化鈉和3 g無水硫酸鎂，渦旋2min，以7000 r/min的轉(zhuǎn)速離心3~5min，取上清液即為待凈化的土壤樣品提取液；

第二步，對所述待凈化的土壤樣品提取液進(jìn)行凈化；

另取一支10 mL聚四氟乙烯離心管，加入0.06g MWCNTS、0.1g PSA和0.3g無水硫酸鎂，加入4mL所述待凈化的土壤樣品提取液，渦旋1~3min，以9000 r/min轉(zhuǎn)速離心5min；離心后移取2.0 mL上清液至試管中，在70℃水浴下氮?dú)饩徛抵两桑帽?正己烷混合溶劑定容至1.0 mL，所述丙酮-正己烷混合溶劑中丙酮與正己烷的體積比1:1，過0.22μm有機(jī)系濾膜，得到用于測定氯蟲苯甲酰胺殘留量的土壤樣品提取凈化液；

第三步，用氣相色譜-電子捕獲法測定所述土壤樣品提取凈化液中的氯蟲苯甲酰胺殘留量，記錄色譜峰保留時(shí)間和色譜峰面積，通過色譜峰保留時(shí)間定性后，將所述土壤樣品提取凈化液檢測出的色譜峰面積與所述第一部分得到的氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，得到所述土壤樣品提取凈化液中含有的氯蟲苯甲酰胺的測定值；再將所述測定值帶入到定量計(jì)算公式中，最終得到待測土壤樣品中氯蟲苯甲酰胺殘留量；

定量計(jì)算公式：ω=（ρ×v×f）/m，式中ω為待測土壤樣品中氯蟲苯甲酰胺殘留量，單位為mg/kg，ρ為測定值，單位為mg/L，m為稱取的樣品量，單位為g，v為定容體積，單位為mL，f為稀釋倍數(shù)；

其中，測定所述土壤樣品提取凈化液中的氯蟲苯甲酰胺殘留量的色譜條件與所述第一部分的第三步中的氯蟲苯甲酰胺的色譜條件相同。

以上實(shí)施例中，所用的儀器與設(shè)備有：7890A氣相色譜儀，配有電子捕獲檢測器（ECD）和7693自動(dòng)進(jìn)樣器和Chemstation色譜工作站（美國Agilent公司）；KQ-500DE超聲波清洗器（昆山超聲儀器公司）；TG16-WS臺式高速離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)儀器公司）；K600粉碎機(jī) （德國博朗公司）；HSC-24 B氮吹儀（天津恒奧科技公司）；VM-10渦旋振蕩器（韓國Daihan Scientific公司）；SX2-4-10馬弗爐（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械公司）；Direct-Q 5 UV型超純水機(jī)（美國Millipore公司）。

所用的藥品與試劑：氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度100 mg/L，購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所；多壁碳納米管（英文簡稱MWCNTS），外徑10～20nm，生產(chǎn)廠家為中國Agela Technologies公司；乙二胺-N-丙基硅烷（英文簡稱PSA），粒度40～60μm，生產(chǎn)廠家為中國Agela Technologies公司；正己烷，色譜純，生產(chǎn)廠家為瑞典Oceanpak公司；丙酮，色譜純，生產(chǎn)廠家為上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乙腈、氯化鈉、無水硫酸鎂（使用前620℃下灼燒4h，備用），均為分析純，生產(chǎn)廠家為上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；實(shí)驗(yàn)用水為超純水（18.4 MΩ）。

實(shí)施例2的試驗(yàn)結(jié)果：

1、GC-ECD色譜圖

氯蟲苯甲酰胺的溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液、基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液、土壤空白樣品及土壤空白加標(biāo)色譜圖分別見附圖7～10。從圖中可以看出，供試農(nóng)藥的色譜分離效果較好，峰形對稱，基線穩(wěn)定，在標(biāo)準(zhǔn)組分出峰處無明顯的干擾雜峰，說明本方法的儀器條件和前處理方法選擇合適。

2、基質(zhì)效應(yīng)

采用氣相色譜法檢測農(nóng)藥殘留時(shí)，待測農(nóng)藥極易受到樣品基質(zhì)效應(yīng)的影響，從而引起分析結(jié)果的偏差和對樣品分析過程回收率的錯(cuò)誤計(jì)算，所以對基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行考察評估并采取有效措施進(jìn)行消除或補(bǔ)償，是進(jìn)行農(nóng)藥殘留準(zhǔn)確分析的重要環(huán)節(jié)。有很多方法可以用來降低或補(bǔ)償基質(zhì)效應(yīng)，如標(biāo)準(zhǔn)加入法、同位素內(nèi)標(biāo)法、基質(zhì)凈化法、分析保護(hù)劑法、基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液法，其中以基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液法最常用。基質(zhì)效應(yīng)由農(nóng)藥結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和濃度以及基質(zhì)含量和種類等因素決定，并與檢測器、進(jìn)樣口溫度及類型等操作條件有關(guān)。本研究對溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液和基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行了對比檢測。結(jié)果（參見附圖 11）表明，在不同濃度下，氯蟲苯甲酰胺純?nèi)軇?biāo)準(zhǔn)溶液峰面積整體上均高于基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積，表明在檢測土壤中氯蟲苯甲酰胺時(shí)存在基質(zhì)減弱效應(yīng)，故在使用外標(biāo)法定量時(shí)，采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液建立校準(zhǔn)曲線，以消除基質(zhì)干擾，減少誤差。

3、標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍

取配制好的質(zhì)量濃度為0.05～1mg/kg的氯蟲苯甲酰胺基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按所述第一部分的第三步中的氯蟲苯甲酰胺的色譜條件進(jìn)行GC-ECD測定，以質(zhì)量濃度（ρ，mg/kg）為橫坐標(biāo)，對應(yīng)峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。結(jié)果表明，氯蟲苯甲酰胺的質(zhì)量濃度（ρ）在0.05～1 mg/kg范圍內(nèi)與峰面積（y）呈良好的線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1145.1ρ+ 439.57，相關(guān)系數(shù)（r）為0.9939，參見附圖12所示。

4、添加回收率與精密度

稱取5.0g空白土壤樣品若干份，準(zhǔn)確添加一定體積的氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，添加濃度分別為1 mg/kg、0.2mg/kg、0.05 mg/kg，渦旋混勻，靜置30min～60min，按照本方法樣品前處理?xiàng)l件進(jìn)行提取和凈化及色譜條件測定，對每個(gè)添加水平作5個(gè)平行，采用基質(zhì)外標(biāo)法定量，計(jì)算方法的回收率及其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

由表2可知，在0.05～1 mg/kg添加濃度下，氯蟲苯甲酰胺在土壤中的平均回收率為92.1 %～100.7 %，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）為2.5%～7.5%，表明該方法具有很好的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，符合農(nóng)藥殘留檢測的要求。

表2 氯蟲苯甲酰胺在土壤中的添加回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

5、方法檢出限與定量限

在本方法條件下，對氯蟲苯甲酰胺最低添加水平(0.05mg/kg)的土壤樣品進(jìn)行測定，得到色譜圖。以色譜圖中信噪比的3倍為檢出限，以最小添加水平為實(shí)際定量限，得到氯蟲苯甲酰胺的檢出限和實(shí)際定量限分別為0.009mg/kg、0.05mg/kg。

6、實(shí)際樣品的檢測

利用本研究建立的方法對采自蘇州東洞庭山茶園16個(gè)批次的土壤樣品進(jìn)行檢測，結(jié)果均未檢出氯蟲苯甲酰胺殘留，原因可能是該茶園土壤中殘留的氯蟲苯甲酰胺含量低于本方法檢出限，或該茶園未曾使用過氯蟲苯甲酰胺藥劑及其相關(guān)產(chǎn)品，因此檢測不到。

7、結(jié)論

結(jié)果表明，氯蟲苯甲酰胺在0.05～1mg/kg范圍內(nèi)，峰面積與相應(yīng)質(zhì)量濃度間呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9939，在0.05～1mg/kg添加水平下，平均回收率為92.1 %～100.7 %，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）為2.5%～7.5%，檢出限為0.009mg/kg，實(shí)際定量限為0.05mg/kg。

實(shí)施例3：一種白菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的定量檢測方法

白菜購自蘇州市望亭鎮(zhèn)農(nóng)貿(mào)市場，用干凈紗布輕輕擦去其表面附著物，然后用粉碎機(jī)打碎，裝入PE袋中待測。空白白菜樣品為經(jīng)檢測不含待測農(nóng)藥的白菜。

所述定量檢測方法有兩部分組成：

第一部分，用氣相色譜-電子捕獲法分別建立已知梯度濃度的被測的氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線；所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立由以下步驟組成：

第一步，制備空白基質(zhì)樣品，制備方法由以下步驟組成：

（1）準(zhǔn)確稱取10.0g經(jīng)測定不含被測的氯蟲苯甲酰胺的空白白菜樣品，置于50 mL聚四氟乙烯離心管中，加入20 mL乙腈溶劑，混勻，超聲提取15～30 min，加入1 g氯化鈉和3 g無水硫酸鎂，渦旋2 min，以7000 r/min轉(zhuǎn)速離心4min，取上清液即為待凈化的空白基質(zhì)提取液；

（2）另取一支10 mL聚四氟乙烯離心管，加入0.07g 多壁碳納米管、0.12g PSA和0.3g無水硫酸鎂，加入4mL所述待凈化的空白基質(zhì)提取液，渦旋2min，以9000 r/min轉(zhuǎn)速離心5min；離心后移取2.0 mL上清液，在70℃水浴下氮?dú)饩徛抵两?，得到空白基質(zhì)樣品；

第二步，向所述第一步中得到的空白基質(zhì)樣品中分別加入1mL梯度質(zhì)量濃度的氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，振蕩混勻，過0.22μm有機(jī)濾膜，得到相應(yīng)質(zhì)量濃度的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，所述基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中氯蟲苯甲酰胺的質(zhì)量濃度分別為1 mg/kg、0.5 mg/ kg、0.2 mg/ kg、0.1 mg/ kg以及0.05 mg/ kg；

配制成的所述標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中氯蟲苯甲酰胺的梯度質(zhì)量濃度分別為1 mg/L、0.5 mg/L、0.2 mg/L、0.1 mg/L以及0.05 mg/L；在實(shí)際操作中，先配制標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，再由標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液配制成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；

標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的配制：將新購置的溶解在甲醇溶劑中的1mL 100mg/L氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，在氮吹儀下緩慢吹至近干，用丙酮-正己烷（體積比1:1）稀釋定容，此時(shí)使用丙酮-正己烷混合溶劑對甲醇進(jìn)行溶劑交換，配成質(zhì)量濃度為10 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，置于4℃冰箱中保存；

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：將上述標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液從冰箱中取出回復(fù)到室溫，以丙酮-正己烷（體積比1:1）為溶劑逐級稀釋，配制成質(zhì)量濃度為1 mg/L、0.5 mg/L、0.2 mg/L、0.1 mg/L、0.05 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；

第三步，用氣相色譜-電子捕獲法測定所述基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中氯蟲苯甲酰胺的色譜峰保留時(shí)間和色譜峰面積，以色譜峰保留時(shí)間定性，然后以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制出氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線；測定氯蟲苯甲酰胺的色譜條件與實(shí)施例1相同。

第二部分，測定白菜樣品中氯蟲苯甲酰胺殘留量，定量檢測方法包括以下步驟：

第一步，對白菜樣品進(jìn)行提?。?/p>

準(zhǔn)確稱取10.0 g白菜樣品于50 mL聚四氟乙烯離心管中，加入20 mL乙腈溶劑，混勻，超聲提取15～30 min，加入1 g氯化鈉和3 g無水硫酸鎂，渦旋2min，以7000 r/min的轉(zhuǎn)速離心3~5min，取上清液即為待凈化的白菜樣品提取液；

第二步，對所述待凈化的白菜樣品提取液進(jìn)行凈化；

另取一支10 mL聚四氟乙烯離心管，加入0.07g MWCNTS、0.12g PSA和0.3g無水硫酸鎂，加入4mL所述待凈化的白菜樣品提取液，渦旋2min，以9000 r/min轉(zhuǎn)速離心5min；離心后移取2.0 mL上清液至試管中，在70℃水浴下氮?dú)饩徛抵两?，用丙?正己烷混合溶劑定容至1.0 mL，丙酮-正己烷混合溶劑中丙酮與正己烷的體積比1:1，過0.22μm有機(jī)系濾膜，得到用于測定氯蟲苯甲酰胺殘留量的白菜樣品提取凈化液；

第三步，用氣相色譜-電子捕獲法測定所述白菜樣品提取凈化液中的氯蟲苯甲酰胺殘留量，記錄色譜峰保留時(shí)間和色譜峰面積，通過色譜峰保留時(shí)間定性后，將所述白菜樣品提取凈化液檢測出的色譜峰面積與所述第一部分得到的氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，得到所述白菜樣品提取凈化液中含有的氯蟲苯甲酰胺的測定值；再將所述測定值帶入到定量計(jì)算公式中，最終得到待測白菜樣品中氯蟲苯甲酰胺殘留量；

定量計(jì)算公式：ω=（ρ×v×f）/m，式中ω為待測白菜樣品中氯蟲苯甲酰胺殘留量，單位為mg/kg，ρ為測定值，單位為mg/L，m為稱取的樣品量，單位為g，v為定容體積，單位為mL，f為稀釋倍數(shù)；

其中，測定所述白菜樣品提取凈化液中的氯蟲苯甲酰胺殘留量的色譜條件與所述第一部分的第三步中的氯蟲苯甲酰胺的色譜條件相同。

實(shí)施例3的實(shí)驗(yàn)結(jié)果：氯蟲苯甲酰胺在0.05～1mg/kg范圍內(nèi)，峰面積與相應(yīng)質(zhì)量濃度間呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9963，在0.05～1mg/kg添加水平下，平均回收率為90.3%～101.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）為6.5%～9.8%，檢出限為0.006mg/kg，實(shí)際定量限為0.05mg/kg。

實(shí)施例4：一種莧菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的定量檢測方法

莧菜購自蘇州市望亭鎮(zhèn)農(nóng)貿(mào)市場，用干凈紗布輕輕擦去其表面附著物，然后用粉碎機(jī)打碎，裝入PE袋中待測?？瞻浊{菜樣品為經(jīng)檢測不含待測農(nóng)藥的莧菜。

所述定量檢測方法有兩部分組成：

第一部分，用氣相色譜-電子捕獲法分別建立已知梯度濃度的被測的氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線；所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立由以下步驟組成：

第一步，制備空白基質(zhì)樣品，制備方法由以下步驟組成：

（1）準(zhǔn)確稱取10.0g經(jīng)測定不含被測的氯蟲苯甲酰胺的空白莧菜樣品，置于50 mL聚四氟乙烯離心管中，加入20 mL乙腈溶劑，混勻，超聲提取15～30 min，加入1 g氯化鈉和3 g無水硫酸鎂，渦旋2 min，以7000 r/min轉(zhuǎn)速離心4min，取上清液即為待凈化的空白基質(zhì)提取液；

（2）另取一支10 mL聚四氟乙烯離心管，加入0.07g 多壁碳納米管、0.12g PSA和0.3g無水硫酸鎂，加入4mL所述待凈化的空白基質(zhì)提取液，渦旋2min，以9000 r/min轉(zhuǎn)速離心5min；離心后移取2.0 mL上清液，在70℃水浴下氮?dú)饩徛抵两桑玫娇瞻谆|(zhì)樣品；

第二步，向所述第一步中得到的空白基質(zhì)樣品中分別加入1mL梯度質(zhì)量濃度的氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，振蕩混勻，過0.22μm有機(jī)濾膜，得到相應(yīng)質(zhì)量濃度的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，所述基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中氯蟲苯甲酰胺的質(zhì)量濃度分別為1 mg/kg、0.5 mg/ kg、0.2 mg/ kg、0.1 mg/ kg以及0.05 mg/ kg；

配制成的所述標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中氯蟲苯甲酰胺的梯度質(zhì)量濃度分別為1 mg/L、0.5 mg/L、0.2 mg/L、0.1 mg/L以及0.05 mg/L；在實(shí)際操作中，先配制標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，再由標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液配制成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；

標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的配制：將新購置的溶解在甲醇溶劑中的1mL 100mg/L氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，在氮吹儀下緩慢吹至近干，用丙酮-正己烷（體積比1:1）稀釋定容，此時(shí)使用丙酮-正己烷混合溶劑對甲醇進(jìn)行溶劑交換，配成質(zhì)量濃度為10 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，置于4℃冰箱中保存；

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：將上述標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液從冰箱中取出回復(fù)到室溫，以丙酮-正己烷（體積比1:1）為溶劑逐級稀釋，配制成質(zhì)量濃度為1 mg/L、0.5 mg/L、0.2 mg/L、0.1 mg/L、0.05 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；

第三步，用氣相色譜-電子捕獲法測定所述基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中氯蟲苯甲酰胺的色譜峰保留時(shí)間和色譜峰面積，以色譜峰保留時(shí)間定性，然后以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制出氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線；測定氯蟲苯甲酰胺的色譜條件與實(shí)施例1相同。

第二部分，測定莧菜樣品中氯蟲苯甲酰胺殘留量，定量檢測方法包括以下步驟：

第一步，對莧菜樣品進(jìn)行提取；

準(zhǔn)確稱取10.0 g莧菜樣品于50 mL聚四氟乙烯離心管中，加入20 mL乙腈溶劑，混勻，超聲提取15～30 min，加入1 g氯化鈉和3 g無水硫酸鎂，渦旋2min，以8000 r/min的轉(zhuǎn)速離心3~5min，取上清液即為待凈化的莧菜樣品提取液；

第二步，對所述待凈化的莧菜樣品提取液進(jìn)行凈化；

另取一支10 mL聚四氟乙烯離心管，加入0.07g MWCNTS、0.12g PSA和0.3g無水硫酸鎂，加入4mL所述待凈化的莧菜樣品提取液，渦旋2min，以10000 r/min轉(zhuǎn)速離心5min；離心后移取2.0 mL上清液至試管中，在70℃水浴下氮?dú)饩徛抵两?，用丙?正己烷混合溶劑定容至1.0 mL，丙酮-正己烷混合溶劑中丙酮與正己烷的體積比1:1，過0.22μm有機(jī)系濾膜，得到用于測定氯蟲苯甲酰胺殘留量的莧菜樣品提取凈化液；

第三步，用氣相色譜-電子捕獲法測定所述莧菜樣品提取凈化液中的氯蟲苯甲酰胺殘留量，記錄色譜峰保留時(shí)間和色譜峰面積，通過色譜峰保留時(shí)間定性后，將所述莧菜樣品提取凈化液檢測出的色譜峰面積與所述第一部分得到的氯蟲苯甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，得到所述莧菜樣品提取凈化液中含有的氯蟲苯甲酰胺的測定值；再將所述測定值帶入到定量計(jì)算公式中，最終得到待測莧菜樣品中氯蟲苯甲酰胺殘留量；

定量計(jì)算公式：ω=（ρ×v×f）/m，式中ω為待測莧菜樣品中氯蟲苯甲酰胺殘留量，單位為mg/kg，ρ為測定值，單位為mg/L，m為稱取的樣品量，單位為g，v為定容體積，單位為mL，f為稀釋倍數(shù)；

其中，測定所述莧菜樣品提取凈化液中的氯蟲苯甲酰胺殘留量的色譜條件與所述第一部分的第三步中的氯蟲苯甲酰胺的色譜條件相同。

實(shí)施例4的實(shí)驗(yàn)結(jié)果：氯蟲苯甲酰胺在0.05～1mg/kg范圍內(nèi)，峰面積與相應(yīng)質(zhì)量濃度間呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9910，在0.05～1mg/kg添加水平下，平均回收率為89.9%～110.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）為7.4%～9.5%，檢出限為0.007mg/kg，實(shí)際定量限為0.05mg/kg。

上述實(shí)施例只為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點(diǎn)，其目的在于讓熟悉此項(xiàng)技術(shù)的人士能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實(shí)施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明精神實(shí)質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。