本發(fā)明涉及一種可用于光譜分析的高速掃描共聚焦成像系統(tǒng),特別涉及用于樣品三維共聚焦成像的光譜分析。本發(fā)明主要應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)顯微成像領(lǐng)域,也可用于材料研究。
背景技術(shù):
隨著光譜分析在細胞生物學(xué)研究應(yīng)用的開展,科學(xué)家迫切需要在獲取高分辨率的共聚焦圖像時,同時獲得圖像中每一位點的光譜信息。但是,目前只有逐點掃描的單點掃描共聚焦成像系統(tǒng)能通過色散元件,一次獲取一個位點的光譜圖像,然后逐點掃描樣品以獲取完整的、帶有光譜信息的共聚焦圖像,成像非常耗時。因此,單點掃描共聚焦成像系統(tǒng)難以應(yīng)用于高速獲取成像。
而對于高速掃描的轉(zhuǎn)盤共聚焦成像系統(tǒng),由于數(shù)量巨大的針孔為平面排列的陣列,系統(tǒng)只能通過液晶濾光鏡等濾光元件逐次透過不同波長的光,然后通過計算機重組,以獲取完整的、帶有光譜信息的共聚焦圖像。因此,用于光譜分析的轉(zhuǎn)盤共聚焦成像系統(tǒng)會損失大量的光信號,光譜分辨率越高損失越大。
技術(shù)實現(xiàn)要素:
本發(fā)明的目的,是使用共聚焦狹縫和單軸掃描振鏡逐列掃描樣品,以實現(xiàn)三維共聚焦成像;同時通過色散元件在與共聚焦狹縫垂直的方向上將光束按波長分散,用面陣檢測器同時獲取每列共聚焦圖像的所有光譜圖像,然后通過計算機重組為完整的、可用于光譜分析的共聚焦圖像。
本發(fā)明的目的是通過以下的技術(shù)方案實現(xiàn)的:
如圖1所示,一種可用于光譜分析的高速掃描共聚焦成像系統(tǒng),包括:光源1,線性照明器,激發(fā)濾光鏡4,二色分光鏡5,共聚焦狹縫6,第一遠心成像透鏡組7,單軸掃描振鏡8,顯微鏡9,第二遠心成像透鏡組10,色散元件,聚焦補償元件12,面陣檢測器13,控制器14(未畫出)和計算機15(未畫出)。其特征在于:
光源1發(fā)射的光經(jīng)過線性照明器(包括第一凸柱面鏡2和第二凸柱面鏡3)后,被整形為在與共聚焦狹縫6垂直的方向上聚焦于共聚焦狹縫6,在與共聚焦狹縫6平行的方向上為平行的線性準直光;
激發(fā)濾光鏡4透過特定波段的所述線性準直光,截至其它波段的光;
二色分光鏡5透過所述特定波段的線性準直光,反射其它波段的光;
共聚焦狹縫6的方向與所述線性準直光的方向重合;
第一遠心成像透鏡7組為1倍倍率,物焦面位于共聚焦狹縫6,像焦面與顯微鏡9的成像焦面重合;
單軸掃描振鏡8位于第一遠心成像透鏡組7的中心,旋轉(zhuǎn)軸與共聚焦狹縫6的方向平行;
第二遠心成像透鏡組10為1倍倍率,物焦面位于共聚焦狹縫6,像焦面位于面陣檢測器13 ;
色散元件11將透過第二遠心成像透鏡組10的光在空間上按波長分散成為多條光束,其色散方向與共聚焦狹縫6的方向垂直,旋轉(zhuǎn)軸與共聚焦狹縫6平行;
聚焦補償元件12的橫切面為等厚圓弧,圓弧方向與所述色散元件的色散方向一致,圓弧中心位于色散起始點;聚焦補償元件12的折射率是常數(shù),或者沿色散元件11的色散方向漸變。
面陣檢測器13的像素排列分別與共聚焦狹縫6的方向和色散元件11的色散方向重合;
控制器14控制光源1的開關(guān)、單軸掃描振鏡6的擺動、面陣檢測器13的開關(guān);
計算機15作為控制器14的上位機,以及將面陣檢測13器檢測到的信號重組為包含光譜信息的共聚焦圖像。
其中,色散元件是光柵11或棱鏡22(圖2所示)。
所述線性照明器由聚焦方向相互垂直的第一凸柱面鏡2、第二凸柱面鏡3組成;或者如圖3和圖4所示由準直鏡17,焦點和聚焦方向重合的第一柱面鏡18、第二凸柱面鏡3,以及聚焦方向與共聚焦狹縫6垂直的第三凸柱面鏡組成組成,第一柱面鏡18為凹柱面鏡或凸柱面鏡;或者如圖5所示由準直鏡17、第一直角棱鏡19、第二直角棱鏡20,以及聚焦方向與共聚焦狹縫6垂直的第三凸柱面鏡組成組成。
本發(fā)明的優(yōu)點如下:
1、本發(fā)明通過共聚焦狹縫和單軸掃描振鏡的擺動掃描樣品,共聚焦成像速度快。
2、本發(fā)明通過色散元件在與共聚焦狹縫垂直的方向上對光束色散,可同時獲得單列共聚焦圖像的光譜信息。
3、本發(fā)明實現(xiàn)了多點掃描(狹縫掃描)的光譜掃描功能。
附圖說明
圖1:本發(fā)明的第一種實施例的示意圖
圖2:本發(fā)明的第二種實施例的示意圖
圖3:本發(fā)明的第三種實施例的示意圖
圖4:本發(fā)明的第四種實施例的示意圖
圖5:本發(fā)明的第五種實施例的示意圖
圖6:系統(tǒng)的掃描成像方式
圖7:系統(tǒng)的成像示意圖
圖面說明:
1——光源;2——第一凸柱面鏡;3——第二凸柱面鏡;4——激發(fā)濾光鏡;5——二色分光鏡;6——共聚焦狹縫;7——第一遠心成像透鏡組;8——單軸掃描振鏡;9——顯微鏡;10——第二遠心成像透鏡組;11——光柵;12——聚焦補償元件;13—— 面陣檢測器;16——樣品;17——準直鏡;18——第一柱面鏡;19——第一直角棱鏡;20——第二直角棱鏡;21——第三凸柱面鏡;22——棱鏡。
具體實施方式
下面結(jié)合附圖和實施例進一步描述本發(fā)明。
實施例1
圖1是與本發(fā)明相關(guān)的第一種共聚焦光學(xué)掃描儀的示意圖,工作模式如下:
計算機15(未畫出)發(fā)送信號給控制器14(未畫出),控制光源1發(fā)出發(fā)散光,同時控制檢測器13開始曝光。
第一凸柱面鏡2在與共聚焦狹縫6垂直的方向上將發(fā)散光聚焦與共聚焦狹縫6,然后第二凸柱面鏡2在與共聚焦狹縫6平行的方向上將發(fā)散光聚焦為平行光,得到與共聚焦狹縫6平行的線性準直光。線性準直光透過激發(fā)濾光鏡4、二色分光鏡5和共聚焦狹縫6后,由第一遠心成像透鏡組7、單軸掃描振鏡8和顯微鏡9投射照明位于顯微鏡9焦面上的樣品16。樣品16返回來的光經(jīng)過顯微鏡9、第一元遠心成像透鏡組7、單軸掃描振鏡8和共聚焦狹縫6后被二色分光鏡5反射,然后再由第二遠心成像透鏡組10成像與面陣檢測器13,并由放置在第二遠心成像透鏡組10后面的光柵11,將共聚焦狹縫6的圖像在與共聚焦狹縫6垂直的方向上按波長分散,然后由聚焦補償元件12將不同波長的光束聚焦于面陣檢測器13(如圖6所示)。
檢測器13結(jié)束曝光,并將第一位列圖像傳輸給計算機15(未畫出),控制器14(未畫出)控制光源1關(guān)閉,然后控制所述單軸掃描振鏡8擺動至下一位置,進行第二位列成像……直至完成所有位列成像。最后,計算機15(未畫出)將所有位列圖像重組為帶有光譜信息的共聚焦圖像,如圖7所示。
實施例2
圖2是與本發(fā)明相關(guān)的第二種高速掃描共聚焦成像系統(tǒng)的部分示意圖,其和實施例1的主 要區(qū)別如下:使用棱鏡22替代光柵11分光。
實施例3
圖3是與本發(fā)明相關(guān)的第二種高速掃描共聚焦成像系統(tǒng)的部分示意圖,其和實施例1的主要區(qū)別如下:光源1發(fā)射的光由準直鏡17準直,然后由短焦距的第一凸柱面鏡18和長焦距的第二凸柱面鏡3在與共聚焦狹縫6平行的方向上擴束,再由第三凸柱面鏡21在與共聚焦狹縫6垂直的方向上將發(fā)散光聚焦與共聚焦狹縫6。
實施例4
圖4是與本發(fā)明相關(guān)的第二種高速掃描共聚焦成像系統(tǒng)的部分示意圖,其和實施例1的主要區(qū)別如下:光源1發(fā)射的光有準直鏡17準直,然后由短焦距的第一凹柱面鏡18和長焦距的第二凸柱面鏡3在與共聚焦狹縫6平行的方向上擴束,再由第三凸柱面鏡21在與共聚焦狹縫6垂直的方向上將發(fā)散光聚焦與共聚焦狹縫6。
實施例5
圖5是與本發(fā)明相關(guān)的第二種高速掃描共聚焦成像系統(tǒng)的部分示意圖,其和實施例1的主要區(qū)別如下:光源1發(fā)射的光有準直鏡17準直,然后由第一直角棱鏡19和第二直角棱鏡20先后折射,在與共聚焦狹縫6平行的方向上擴束,再由第三凸柱面鏡21在與共聚焦狹縫6垂直的方向上將發(fā)散光聚焦與共聚焦狹縫6。