本發(fā)明涉及總膽固醇檢測的技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及總膽固醇的檢測試劑及總膽固醇的檢測試紙。

背景技術(shù)：

目前，用于檢測血液中是否存在某種成分或該成分的含量的方法包括液體試劑檢測和干化學(xué)試紙檢測。干化學(xué)試紙具有使用方便、操作簡單、快速出結(jié)果的特點。

根據(jù)檢測液體樣本在干化學(xué)試紙上的流動路程，可以將干化學(xué)試紙分為多種類型，縱向垂直檢測試紙是干化學(xué)試紙的一種?？v向垂直檢測試紙包括將帶有反應(yīng)試劑的載體相互疊加在一起，液體樣本自上而下的流經(jīng)各個反應(yīng)試劑層，最終顯示檢測結(jié)果。例如美國專利US4816224采用縱向垂直檢測試紙的方法。

縱向垂直檢測試紙其反應(yīng)試劑載體的面積都較小，因此只需要較少的液體樣本用量就可以完成檢測。因為個體差異，在指尖采血的過程中，采集的樣本量是很難控制的，例如，歐美人的指尖采血量往往會比亞洲人多。而反應(yīng)試劑載體對液體的吸收有一定的飽和度，當(dāng)?shù)渭釉谠嚰埳系难獦舆^多時，現(xiàn)有的干化學(xué)檢測試紙沒辦法及時處理多余的血樣。如現(xiàn)有技術(shù)中的縱向垂直檢測試紙，該試紙包括：底板粘附并支撐著反應(yīng)層，反應(yīng)層上 覆蓋有樣本分離層、玻纖層和網(wǎng)格層。當(dāng)液體滴加到網(wǎng)格層后垂直流經(jīng)玻纖和樣本分離層，最終達(dá)到反應(yīng)層發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。若加入的血液樣本量較多，達(dá)到液體飽和的反應(yīng)層不能再吸收多余的樣本時，這些多余的血樣就會溢出檢測試紙，污染環(huán)境或者接觸到檢測者。多余的血液還會聚集在反應(yīng)試劑層上形成液滴，不僅影響光學(xué)等檢測儀器對結(jié)果的判讀，還會嚴(yán)重的污染檢測儀器。

專利CN 102128918A采用了一種鎖液結(jié)構(gòu)，此結(jié)構(gòu)試紙包括：底板上粘附并支撐著反應(yīng)層，在反應(yīng)層相對于底板的另一側(cè)覆蓋有加樣層，加樣層上有一加樣口。反應(yīng)層沿著底板方向的至少一側(cè)搭接著鎖液部件，鎖液部件被固定在底板上。在底板相對于反應(yīng)層處有一用于讀取反應(yīng)結(jié)果的檢測窗。所有結(jié)構(gòu)通過粘合片更牢固的固定他們之間的位置。當(dāng)液體樣本加到加樣層時，先垂直流入反應(yīng)層并被反應(yīng)層所吸收。當(dāng)反應(yīng)層液體飽和時，液體通過橫向測流的方式擴(kuò)散到與反應(yīng)層搭接的鎖液部件中。由于鎖液部件吸收液體的速度小于或等于反應(yīng)層的吸收液體速度，所以當(dāng)多余液體擴(kuò)散到鎖液部件時，反應(yīng)層上的液體已經(jīng)足夠進(jìn)行相關(guān)的檢測反應(yīng)，從而并不影響檢測反應(yīng)所需的有效用量。當(dāng)加入過量的樣本時，多余的樣本被鎖液部件所吸收，因此多余的樣本不會形成液滴溢出試紙之外。

以上現(xiàn)有技術(shù)中，檢測準(zhǔn)確度有待提高，檢測不夠快速。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明一方面在于提供一種總膽固醇的檢測試劑，該檢測試劑檢測較為快速，檢測準(zhǔn)確度較高。

一種總膽固醇的檢測試劑，其包含6～9KU/L的膽固醇酯酶、3～5KU/L的膽固醇氧化酶、15～20KU/L的辣根過氧化物酶、3～5KU/L的 抗壞血酸氧化酶、0.20～0.35g/L的4-氨基安替比林和0.20～0.30g/L顯色物質(zhì)。

進(jìn)一步地，其還包含0.15～0.25mmol/L pH為5.5～6.5的Tris-HCl緩沖液。

進(jìn)一步地，其還包含0.80～1.0g/L海藻糖；

優(yōu)選地，其還包含0.1～0.3g/L BSA；

優(yōu)選地，其還包含0.15～0.25g/L CHAPS。

進(jìn)一步地，所述顯色物質(zhì)選自TOOS、TODB、DAOS、MOAS、酚類、TMB中的一種或二種以上。

本發(fā)明另一方面在于提供一種總膽固醇的檢測試紙，該檢測試紙檢測較為快速，檢測準(zhǔn)確度較高。

一種總膽固醇的檢測試紙，包括反應(yīng)基層、設(shè)置于所述反應(yīng)基層一表面的反應(yīng)層、設(shè)置于反應(yīng)層的一表面的濾血層，和設(shè)置于所述濾血層一表面的親水層，所述反應(yīng)層的表面涂覆有如上述的檢測試劑。

進(jìn)一步地，所述反應(yīng)基層的材質(zhì)為聚氯乙烯、聚碳酸酯、聚酰胺酯或聚酯；

優(yōu)選地，所述反應(yīng)基層與反應(yīng)層之間設(shè)有一雙面膠。

進(jìn)一步地，所述親水層和濾血層之間設(shè)有一雙面膠。

進(jìn)一步地，所述親水層為親水膜或網(wǎng)紗。

進(jìn)一步地，所述親水層為親水膜或網(wǎng)紗。

進(jìn)一步地，所述反應(yīng)基層設(shè)有孔，所述反應(yīng)基層與反應(yīng)層之間的雙面膠設(shè)有孔。

本發(fā)明的檢測試劑，其含有多種特定酶進(jìn)行特定配比，能達(dá)到檢測快速和檢測較為準(zhǔn)確的目的。本發(fā)明的檢測試紙包括反應(yīng)基層、反應(yīng)層、濾 血層和親水層，這些層疊加構(gòu)成一個虹吸體系，進(jìn)一步保證了檢測快速和檢測較為準(zhǔn)確。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例檢測試紙的結(jié)構(gòu)示意圖。

主要元件符號說明：

100 檢測試紙

30 反應(yīng)基層

31,41 孔

40,70 雙面膠

50 反應(yīng)層

60 濾血層

80 親水層。

具體實施方式

除非另有限定，本文使用的所有技術(shù)以及科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的相同的含義。當(dāng)存在矛盾時，以本說明書中的定義為準(zhǔn)。

如本文所用之術(shù)語：

“由……制備”與“包含”同義。本文中所用的術(shù)語“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它變形，意在覆蓋非排它性的包括。例如，包含所列要素的組合物、步驟、方法、制品或裝置不必僅限于那些要素， 而是可以包括未明確列出的其它要素或此種組合物、步驟、方法、制品或裝置所固有的要素。

連接詞“由……組成”排除任何未指出的要素、步驟或組分。如果用于權(quán)利要求中，此短語將使權(quán)利要求為封閉式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但與其相關(guān)的常規(guī)雜質(zhì)除外。當(dāng)短語“由……組成”出現(xiàn)在權(quán)利要求主體的子句中而不是緊接在主題之后時，其僅限定在該子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作為整體的所述權(quán)利要求之外。

當(dāng)量、濃度、或者其它值或參數(shù)以范圍、優(yōu)選范圍、或一系列上限優(yōu)選值和下限優(yōu)選值限定的范圍表示時，這應(yīng)當(dāng)被理解為具體公開了由任何范圍上限或優(yōu)選值與任何范圍下限或優(yōu)選值的任一配對所形成的所有范圍，而不論該范圍是否單獨公開了。例如，當(dāng)公開了范圍“1～5”時，所描述的范圍應(yīng)被解釋為包括范圍“1～4”、“1～3”、“1～2”、“1～2和4～5”、“1～3和5”等。當(dāng)數(shù)值范圍在本文中被描述時，除非另外說明，否則該范圍意圖包括其端值和在該范圍內(nèi)的所有整數(shù)和分?jǐn)?shù)。

“質(zhì)量份”指表示多個組分的質(zhì)量比例關(guān)系的基本計量單位，1份可表示任意的單位質(zhì)量，如可以表示為1g，也可表示2.689g等。假如我們說A組分的質(zhì)量份為a份，B組分的質(zhì)量份為b份，則表示A組分的質(zhì)量和B組分的質(zhì)量之比a：b。或者，表示A組分的質(zhì)量為aK，B組分的質(zhì)量為bK(K為任意數(shù)，表示倍數(shù)因子)。不可誤解的是，與質(zhì)量分?jǐn)?shù)不同的是，所有組分的質(zhì)量份之和并不受限于100份之限制。

“和/或”用于表示所說明的情況的一者或兩者均可能發(fā)生，例如，A和/或B包括(A和B)和(A或B)；

此外，本發(fā)明要素或組分前的不定冠詞“一種”和“一個”對要素或組分的數(shù)量要求(即出現(xiàn)次數(shù))無限制性。因此“一個”或“一種”應(yīng)被 解讀為包括一個或至少一個，并且單數(shù)形式的要素或組分也包括復(fù)數(shù)形式，除非所述數(shù)量明顯旨指單數(shù)形式。

本發(fā)明的總膽固醇的檢測試劑52，其包含6～9KU/L的膽固醇酯酶、3～5KU/L的膽固醇氧化酶、15～20KU/L的辣根過氧化物酶、3～5KU/L的抗壞血酸氧化酶、0.20～0.35g/L的4-氨基安替比林和0.20～0.30g/L顯色物質(zhì)。

具體地，膽固醇酯酶的含量可以為6KU/L、6.1KU/L、6.5KU/L、7KU/L、7.5KU/L、8.5KU/L或9KU/L等；膽固醇氧化酶的含量可以為3KU/L、3.5KU/L、4KU/L、4.5KU/L、5KU/L等；辣根過氧化物酶的含量可以為15KU/L、15.5KU/L、16KU/L、17.5KU/L、19KU/L、19.5KU/L或20KU/L等；抗壞血酸氧化酶的含量可以為3KU/L、3.5KU/L、4KU/L、4.5KU/L、5KU/L等；4-氨基安替比林的含量可以為0.20g/L、0.22g/L、0.25g/L、0.28g/L、0.32g/L、0.34g/L、0.35g/L等；顯色物質(zhì)的含量可以為0.20g/L、0.22g/L、0.25g/L、0.28g/L、0.29g/L、0.30g/L等。

此處，顯色物質(zhì)可以列舉出TOOS、TODB、DAOS、MOAS、酚類、TMB中的一種或二種以上。這里，TOOS即N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽，其CAS號為82692-93-1；TODB即N,N-雙(4-磺丁基)-3-甲基苯胺二鈉鹽，其CAS號為127544-88-1；DAOS即N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺鈉鹽，其CAS號為83777-30-4；TMB即3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺，其CAS號為54827-17-7；酚類即酚類顯色劑。

作為本發(fā)明的上述檢測試劑52，除了可以包含上述原料，還可以包含Tris-HCl緩沖液，以維持體系的pH穩(wěn)定性。Tris-HCl緩沖液的含量以0.15～0.25mmol/L為佳，如0.15mmol/L、0.18mmol/L、0.20mmol/L、0.22mmol/L、0.24mmol/L或0.25mmol/L等，優(yōu)選為0.20mmol/L等。

Tris-HCl緩沖液的pH較好地為5.5～6.5，如5.5、5.6、5.8、6、6.2、6.5等。

作為本發(fā)明的上述檢測試劑52，還可進(jìn)一步地包含0.80～1.0g/L海藻糖，例如海藻糖的含量可以為0.8g/L、0.82g/L、0.85g/L、0.9g/L、0.95g/L、0.98g/L、1g/L等。

作為本發(fā)明的上述檢測試劑52，還可進(jìn)一步地包含0.1～0.3g/L BSA，例如其含量可以為0.1g/L、0.15g/L、0.2g/L、0.25g/L、0.3g/L等。此處，BSA即牛血清白蛋白(BSA)，其又稱第五組分，是牛血清中的一種白蛋白，包含583個氨基酸殘基，分子量為66.430kDa，等電點為4.7。

作為本發(fā)明的上述檢測試劑52，還可進(jìn)一步地包含0.15～0.25g/LCHAPS，例如0.15g/L、0.16g/L、0.20g/L、0.22g/L、0.24g/L、0.25g/L等。此處，CHAPS即[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽，其CAS號為75621-03-3。

反應(yīng)基層30的形式可以為薄膜或薄板，其可以設(shè)置有一孔31，以作為光反射檢測之用。

反應(yīng)層50的表面用來滴附檢測試劑，反應(yīng)層50的形式可以為薄膜。反應(yīng)層50與反應(yīng)基層30之間可設(shè)置一雙面膠40。該雙面膠40的面積可以小于反應(yīng)基層30，可大于反應(yīng)層50。

該雙面膠40可以設(shè)置一孔41，該孔41可以于反應(yīng)基層30的孔31對齊，在反應(yīng)層50通過雙面膠40貼覆于反應(yīng)基層30時。

作為本發(fā)明的檢測試紙100，濾血層60的形式可以為薄膜。濾血層60的面積可大于反應(yīng)層，這樣濾血層60覆蓋在反應(yīng)層50上時其兩端粘貼在雙面膠40。濾血層60的面積可小于粘合其的雙面膠40的大小。

親水層和濾血層之間可以設(shè)有一雙面膠70。該雙面膠可以為U型雙 面膠和方形雙面膠，并分別粘貼在濾血層60的上下兩端。需要說明的是，親水層80和雙面膠70的U型口構(gòu)建的虹吸槽到達(dá)濾血層。

上述親水層80可以為親水膜或網(wǎng)紗。

以上未述及之處適用于現(xiàn)有技術(shù)。

實施例1

步驟一、在一定的硬度的PET材質(zhì)的反應(yīng)基層30貼上雙面膠40，打孔后備用。

步驟二、撕掉反應(yīng)基層40上雙面膠，將反應(yīng)膜50粘貼在PET板的雙面膠40上，反應(yīng)膜50需要完全覆蓋住PET基板上的孔31。

步驟三、按照該配比配制檢測試劑：包含6KU/L的膽固醇酯酶、3KU/L的膽固醇氧化酶、15KU/L的辣根過氧化物酶、3KU/L的抗壞血酸氧化酶、0.20g/L的4-氨基安替比林、0.20g/L顯色物質(zhì)、0.15mmol/L(pH為5.5)的Tris-HCl緩沖液、0.80g/L海藻糖、0.1g/L BSA、0.15g/L CHAPS。將配制好的檢測試劑用點膠機(jī)滴加到反應(yīng)膜板的孔中，每孔重量為6mg，滴完液的膜板放入烘道干燥，干燥溫度：37℃，干燥時間20min，得反應(yīng)層50。

步驟四、貼上并將濾血層60完全覆蓋住反應(yīng)層50。

步驟五、圍繞反應(yīng)層50貼上U型雙面膠70，利用虹吸原理，用U型雙面膠70和親水層80(親水膜或網(wǎng)紗)作為組成一個微量吸樣裝置，可以固定吸樣的量。

實施例2

本例中檢測試劑52包含9KU/L的膽固醇酯酶、5KU/L的膽固醇氧化酶、20KU/L的辣根過氧化物酶、5KU/L的抗壞血酸氧化酶、0.35g/L的4- 氨基安替比林、0.30g/L顯色物質(zhì)、0.25mmol/L(pH為5.5)的Tris-HCl緩沖液、1.0g/L海藻糖、0.3g/L BSA、0.25g/L CHAPS，其它均同實施例1。

實施例3

本例中檢測試劑52包含6KU/L的膽固醇酯酶、5KU/L的膽固醇氧化酶、15KU/L的辣根過氧化物酶、3KU/L的抗壞血酸氧化酶、0.20g/L的4-氨基安替比林、0.25g/L顯色物質(zhì)、0.20mmol/L(pH為6)的Tris-HCl緩沖液、1.0g/L海藻糖、0.3g/L BSA、0.25g/L CHAPS，其它均同實施例1。

實施例4

本例中檢測試劑52包含9KU/L的膽固醇酯酶、3KU/L的膽固醇氧化酶、20KU/L的辣根過氧化物酶、5KU/L的抗壞血酸氧化酶、0.35g/L的4-氨基安替比林、0.25g/L顯色物質(zhì)、0.20mmol/L(pH為6)的Tris-HCl緩沖液、0.9g/L海藻糖、0.2g/L BSA、0.20g/L CHAPS，其它均同實施例1。

實施例5

本例中檢測試劑52包含7.5KU/L的膽固醇酯酶、4KU/L的膽固醇氧化酶、18KU/L的辣根過氧化物酶、4KU/L的抗壞血酸氧化酶、0.27g/L的4-氨基安替比林、0.25g/L顯色物質(zhì)、0.20mmol/L(pH為6)的Tris-HCl緩沖液、0.9g/L海藻糖、0.2g/L BSA、0.20g/L CHAPS，其它均同實施例1。

對比例

某醫(yī)院測試樣本。

評價方法：

將實施例5的總膽固醇的檢測試紙100直接插入自制干式化學(xué)分析儀 中，6分鐘后結(jié)果在儀器上顯示出來。表1為自制干式化學(xué)分析儀的測試結(jié)果跟對比例測試結(jié)果對比表，其相關(guān)性達(dá)到0.997。可直接用于臨床上測試。

表1、醫(yī)院測試樣品的測試結(jié)果與本發(fā)明總膽固醇測試結(jié)果相比

本發(fā)明的檢測試紙100具有以下優(yōu)勢：抗干擾能力更強，有效的消除了紅細(xì)胞及內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，并且能在6分鐘內(nèi)能準(zhǔn)確的測試全血的總膽固醇的濃度，測試結(jié)果與傳統(tǒng)的方法相比測試結(jié)果更準(zhǔn)確。與公司自制的便攜式干式化學(xué)分析儀一起使用，更符合臨床旁邊的要求，適合醫(yī)院急診、病房、社區(qū)醫(yī)院、家庭用戶等使用。

由于本發(fā)明中所涉及的各工藝參數(shù)的數(shù)值范圍在上述實施例中不可能全部體現(xiàn)，但本領(lǐng)域的技術(shù)人員完全可以想象到只要落入上述該數(shù)值范圍內(nèi)的任何數(shù)值均可實施本發(fā)明，當(dāng)然也包括若干項數(shù)值范圍內(nèi)具體值的任意組合。此處，出于篇幅的考慮，省略了給出某一項或多項數(shù)值范圍內(nèi)具體值的實施例，此不應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明的技術(shù)方案的公開不充分。

申請人聲明，本發(fā)明通過上述實施例來說明本發(fā)明的詳細(xì)工藝設(shè)備和工藝流程，但本發(fā)明并不局限于上述詳細(xì)工藝設(shè)備和工藝流程，即不意味 著本發(fā)明必須依賴上述詳細(xì)工藝設(shè)備和工藝流程才能實施。所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該明了，對本發(fā)明的任何改進(jìn)，對本發(fā)明產(chǎn)品各原料的等效替換及輔料組分成分的添加、具體方式選擇等，落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。