本發(fā)明涉及細菌內毒素檢測，具體涉及一種磷酸三丁酯細菌內毒素檢測方法。

背景技術：

1、細菌內毒素是革蘭氏陰性菌的細胞壁成分，當細菌死亡或自溶后便會釋放出內毒素。當內毒素通過消化道進入人體時并不產生危害，但內毒素通過注射等方式進入血液時則會引起不同的疾病。內毒素小量入血后被肝臟枯否細胞滅活，不造成機體損害。內毒素大量進入血液就會引起發(fā)熱反應——“熱原反應”。因此，生物制品類、注射用藥劑、化學藥品類、放射性藥物、抗生素類、疫苗類、透析液等制劑以及醫(yī)療器材類（如一次性注射器，植入性生物材料）必須經過細菌內毒素檢測試驗合格后才能使用。

2、近年來，s/d法病毒滅活廣泛運用于生物制藥中，磷酸三丁酯作為s/d法病毒滅活的去污劑，是藥品生產的重要輔料，在制藥領域中運用越來越廣泛。因此，有必要嚴格控制磷酸三丁酯中的細菌內毒素含量?！吨袊幍洌?020年版）》1143細菌內毒素檢查法中，一般使用細菌內毒素檢查用水對供試品進行復溶、稀釋或在水性溶液中浸提，制成供試品溶液。由于磷酸三丁酯不溶于水，上述方法無法有效檢測出磷酸三丁酯中的細菌內毒素，易出現假陰性結果。目前，未見關于磷酸三丁酯中細菌內毒素檢測的相關報道。

技術實現思路

1、針對常規(guī)細菌內毒素檢查方法無法充分釋放磷酸三丁酯待測樣品中的細菌內毒素，進而無法有效檢測磷酸三丁酯中的細菌內毒素是否符合要求的技術問題，本發(fā)明提供一種磷酸三丁酯細菌內毒素檢測方法，能夠快速、準確地檢測出磷酸三丁酯中的細菌內毒素含量是否符合要求。

2、一種磷酸三丁酯細菌內毒素檢測方法，包括：

3、（1）確定磷酸三丁酯的細菌內毒素限值以及最小稀釋濃度；

4、（2）進行鱟試劑靈敏度復核試驗，確保鱟試劑符合規(guī)定；

5、（3）制備磷酸三丁酯供試品溶液，進行干擾試驗，確保供試品溶液不存在干擾；

6、（4）采用凝膠法檢測磷酸三丁酯供試品中細菌內毒素是否符合要求；

7、制備磷酸三丁酯供試品溶液時，將磷酸三丁酯待測樣品與聚山梨酯80按照質量比1:3.5~4.5混合，加入預加熱至60~90℃的細菌內毒素檢查用水將其溶解，并逐步稀釋至一定濃度，放冷至室溫。

8、通過添加一定質量的聚山梨酯80，使磷酸三丁酯待測樣品能夠有效溶解，使樣品內的細菌內毒素充分釋放，制成穩(wěn)定、均一的供試品溶液，而且不會對鱟試劑形成干擾。當細菌內毒素檢查用水的溫度過低時，會出現溶解不完全的現象；當細菌內毒素檢查用水的溫度過高時，會出現乳化現象。

9、進一步的，磷酸三丁酯待測樣品與聚山梨酯80的質量比為1:4。

10、進一步的，細菌內毒素檢查用水的預加熱溫度為70℃。

11、進一步的，聚山梨酯80為油酸山梨坦和環(huán)氧乙烷聚合而成的聚氧乙烯20油酸山梨坦。由于聚山梨酯80（ⅱ）與聚山梨酯80在生產工藝與原料上的不同，使得聚山梨酯80（ⅱ）對于鱟試劑的干擾大于聚山梨酯80，從而影響檢測結果。

12、進一步的，供試品溶液中磷酸三丁酯濃度為不高于12.25mg/ml。

13、進一步的，使用靈敏度為0.03eu/ml的鱟試劑進行試驗。

14、進一步的，凝膠法為采用凝膠限度試驗或凝膠半定量試驗檢測細菌內毒素。

15、進一步的，凝膠半定量試驗中，需要檢測聚山梨酯80中細菌內毒素的含量，磷酸三丁酯中細菌內毒素含量為磷酸三丁酯供試品溶液中細菌內毒素含量減去聚山梨酯80中細菌內毒素的含量。

16、本發(fā)明的有益效果在于：

17、本發(fā)明提供的一種磷酸三丁酯細菌內毒素檢測方法，通過向磷酸三丁酯待測樣品添加一定質量的聚山梨酯80，并加入預加熱的細菌內毒素檢查用水使其完全溶解，將磷酸三丁酯待測樣品內的細菌內毒素充分釋放，得到穩(wěn)定、均一的供試品溶液，而且不會對鱟試劑形成干擾，能夠方便、快捷、準確、有效地檢測出磷酸三丁酯中的細菌內毒素含量是否符合要求。

技術特征：

1.一種磷酸三丁酯細菌內毒素檢測方法，其特征在于，包括：

2.如權利要求1所述的一種磷酸三丁酯細菌內毒素檢測方法，其特征在于，磷酸三丁酯待測樣品與聚山梨酯80的質量比為1:4。

3.如權利要求1所述的一種磷酸三丁酯細菌內毒素檢測方法，其特征在于，細菌內毒素檢查用水的預加熱溫度為70℃。

4.如權利要求1所述的一種磷酸三丁酯細菌內毒素檢測方法，其特征在于，聚山梨酯80為油酸山梨坦和環(huán)氧乙烷聚合而成的聚氧乙烯20油酸山梨坦。

5.如權利要求1所述的一種磷酸三丁酯細菌內毒素檢測方法，其特征在于，供試品溶液中磷酸三丁酯濃度為不高于12.25mg/ml。

6.如權利要求1所述的一種磷酸三丁酯細菌內毒素檢測方法，其特征在于，使用靈敏度為0.03eu/ml的鱟試劑進行試驗。

7.如權利要求1所述的一種磷酸三丁酯細菌內毒素檢測方法，其特征在于，凝膠法為采用凝膠限度試驗或凝膠半定量試驗檢測細菌內毒素。

8.如權利要求7所述的一種磷酸三丁酯細菌內毒素檢測方法，其特征在于，凝膠半定量試驗中，檢測聚山梨酯80中細菌內毒素的含量，磷酸三丁酯中細菌內毒素含量為磷酸三丁酯供試品溶液中細菌內毒素含量減去聚山梨酯80中細菌內毒素的含量。

技術總結
本發(fā)明涉及細菌內毒素檢測技術領域，具體涉及一種磷酸三丁酯細菌內毒素檢測方法，包括：制備磷酸三丁酯供試品溶液時，將磷酸三丁酯待測樣品與聚山梨酯80按照質量比1:3.5~4.5混合，加入預加熱至60~90℃的細菌內毒素檢查用水將其溶解，并逐步稀釋至一定濃度，放冷至室溫。通過向磷酸三丁酯待測樣品添加一定質量的聚山梨酯80，并加入預加熱的細菌內毒素檢查用水使其完全溶解，將磷酸三丁酯待測樣品內的細菌內毒素充分釋放，得到穩(wěn)定、均一的供試品溶液，而且不會對鱟試劑形成干擾，能夠方便、快捷、準確、有效地檢測出磷酸三丁酯中的細菌內毒素含量是否符合要求。

技術研發(fā)人員：邵逸文,王海玲,王彬,曹大偉,趙明芬,戰(zhàn)玉向
受保護的技術使用者：山東泰邦生物制品有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/11/14