本發(fā)明屬于pedv與porva制備，具體涉及同時檢測pedv與porva膠體金免疫層析試紙條及制備方法。

背景技術：

1、豬流行性腹瀉病毒(porcine?epidemic?diarrhea?virμs，pedv)和豬a群輪狀病毒(porcine?groμp?a?rotavirμs，porva)是造成豬只腹瀉的兩種主要病原，其感染可引起豬只出現以嘔吐、腹瀉和脫水為主要癥狀的高度接觸性腸道傳染病，具有發(fā)病率和死亡率俱高的特點。

2、目前對這兩種病原的主要診斷方法為血清學和分子生物學檢測。血清學檢測主要包括免疫層析法和酶聯免疫吸附試驗(enzyme-linked?immμnosorbent?assay，elisa)。分子生物學檢測通常包括病毒分離、聚合酶鏈式反應(polymerase?chain?reaction，pcr)、實時熒光定量pcr(qμantitative?real-time?pcr，rt-qpcr)和環(huán)介導等溫擴增(loop-mediated?isothermal?amplification，lamp)等方法。這些方法在預防和控制pedv與porva方面發(fā)揮著非常重要的作用。雖然這些方法檢測結果較為準確，但對設備和專業(yè)人員的依賴大，在基層養(yǎng)殖場的運用中需要一定時效性，而免疫層析技術可實現現場快速檢測，這使其對臨床樣品檢測的獨特優(yōu)勢愈發(fā)明顯。

3、近年來已出現單獨檢測pedv或porva的免疫層析技術，但由于pedv與porva感染豬只的發(fā)病癥狀相似，且在全國很多地區(qū)，pedv與porva常常發(fā)生混合感染，僅憑臨床經驗難以有效確定病原，很難制定有針對性的防治措施。而目前基于免疫層析原理的試紙條無法同時檢測pedv和porva，聯合檢測多種病原的試紙條常常出現相互感染造成假陽性的問題，仍未解決。

技術實現思路

1、為實現以上目的，本發(fā)明采用以下技術方案：

2、一種同時檢測pedv與porva膠體金免疫層析試紙條，包括：樣品墊；結合墊；硝酸纖維素膜；所述硝酸纖維素膜上設置有第一檢測線、第二檢測線和質控線；所述第一檢測線上包被有第一特異性抗體；所述第二檢測線上包被有第二特異性抗體；吸水材料；所述樣品墊、所述結合墊、所述硝酸纖維素膜和所述吸水材料依次排列連接，其中所述樣品墊與所述結合墊連接的一端位于所述結合墊的一端的正上方；所述結合墊與所述硝酸纖維素膜連接的一端位于所述硝酸纖維素膜一端的正上方；所述硝酸纖維素膜與所述吸水材料連接的一端位于所述吸水材料的正下方；所述質控線靠近所述吸水材料；所述第一檢測線和所述第二檢測線位于所述質控線和所述結合墊之間。

3、作為技術方案的進一步改進，所述結合墊還包括免疫探針；所述免疫探針設置于所述結合墊靠近所述硝酸纖維素膜的一端。

4、作為技術方案的進一步改進，所述免疫探針由aunps-mab制成。

5、作為技術方案的進一步改進，所述第一特異性抗體為pedv-mab。

6、作為技術方案的進一步改進，所述第二特異性抗體為porva-mab。

7、作為技術方案的進一步改進，所述質控線上包被有山羊抗小鼠igg多克隆抗體。

8、作為技術方案的進一步改進，本申請一種同時檢測pedv與porva膠體金免疫層析試紙條還包括底板；所述樣品墊、所述結合墊、所述硝酸纖維素膜和所述吸水材料均設置與所述底板的板面上。

9、本申請還提供一種同時檢測pedv與porva膠體金免疫層析試紙條的制備方法，包括以下步驟：

10、步驟一：將免疫探針噴涂在結合墊上；

11、步驟二：將第一特異性抗體、第二特異性抗體和山羊抗小鼠igg多克隆抗體噴涂在硝酸纖維素膜上，形成第一檢測線、第二檢測線和質控線；

12、步驟三：封閉硝酸纖維素膜其余蛋白結合位點，隨后干燥、備用；

13、步驟四：在底板的頂面上依次粘貼樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水材料，使所述樣品墊、所述結合墊、所述硝酸纖維素膜和所述吸水材料依次排列連接，其中所述樣品墊與所述結合墊連接的一端位于所述結合墊的一端的正上方；所述結合墊與所述硝酸纖維素膜連接的一端位于所述硝酸纖維素膜一端的正上方；所述硝酸纖維素膜與所述吸水材料連接的一端位于所述吸水材料的正下方，得到試紙條。

14、作為技術方案的進一步改進，在步驟四中，所述質控線靠近所述吸水材料，所述第一檢測線和所述第二檢測線位于所述質控線和所述結合墊之間。

15、作為技術方案的進一步改進，所述免疫探針位于所述結合墊靠近所述硝酸纖維素膜的一端。

16、與現有技術相比，本發(fā)明的有益效果如下：

17、1.本申請的試紙條特異性強，靈敏度高，可同時檢測pedv與porva病毒，避免檢測過程中因pedv與porva的混合感染出現pedv或porva假陽性的現象。

18、2.本申請的試紙條無需采用特殊容器或儀器，方便攜帶，隨時隨地檢測，操作簡單，檢測耗時短，檢測成本低。

技術特征：

1.一種同時檢測pedv與porva膠體金免疫層析試紙條，其特征在于，包括：

2.根據權利要求1所述的同時檢測pedv與porva膠體金免疫層析試紙條，其特征在于，所述結合墊(2)還包括免疫探針(21)；所述免疫探針(21)設置于所述結合墊(2)靠近所述硝酸纖維素膜(3)的一端。

3.根據權利要求2所述的同時檢測pedv與porva膠體金免疫層析試紙條，其特征在于，所述免疫探針(21)由aunps-mab制成。

4.根據權利要求1所述的同時檢測pedv與porva膠體金免疫層析試紙條，其特征在于，所述第一特異性抗體為pedv-mab。

5.根據權利要求1所述的同時檢測pedv與porva膠體金免疫層析試紙條，其特征在于，所述第二特異性抗體為porva-mab2。

6.根據權利要求1所述的同時檢測pedv與porva膠體金免疫層析試紙條，其特征在于，所述質控線(33)上包被有山羊抗小鼠igg多克隆抗體。

7.根據權利要求1所述的同時檢測pedv與porva膠體金免疫層析試紙條，其特征在于，還包括底板(5)；所述樣品墊(1)、所述結合墊(2)、所述硝酸纖維素膜(3)和所述吸水材料(4)均設置與所述底板(5)的板面上。

8.一種同時檢測pedv與porva膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

9.根據權利要求8所述的同時檢測pedv與porva膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，在步驟四中，所述質控線(33)靠近所述吸水材料(4)，所述第一檢測線(31)和所述第二檢測線(32)位于所述質控線(33)和所述結合墊(2)之間。

10.根據權利要求8所述的同時檢測pedv與porva膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，所述免疫探針(21)位于所述結合墊(2)靠近所述硝酸纖維素膜(3)的一端。

技術總結
本發(fā)明公開了一種同時檢測PEDV與PoRVA膠體金免疫層析試紙條及制備方法，屬于PEDV與PoRVA檢測技術領域。本申請包括樣品墊；結合墊；硝酸纖維素膜；硝酸纖維素膜上設置有第一檢測線、第二檢測線和質控線；第一檢測線上包被有第一特異性抗體；第二檢測線上包被有第二特異性抗體；吸水材料；樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水材料依次排列連接，其中樣品墊與結合墊連接的一端位于結合墊的一端的正上方；結合墊與硝酸纖維素膜連接的一端位于硝酸纖維素膜一端的正上方；硝酸纖維素膜與吸水材料連接的一端位于吸水材料的正下方。本申請可同時檢測PEDV與PoRVA病毒，避免檢測過程中因PEDV與PoRVA的混合感染出現PEDV或PoRVA假陽性的現象。

技術研發(fā)人員：陳海蘭,陳瀅鍇,王金子,陳秋英,賀兆源,尤暉,王秋華
受保護的技術使用者：廣西大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/5